Tính an toàn của vacxin được xác định qua các biểu hiện bất thường ở cá thí nghiệm; hiệu lực của vacxin được xác định bằng cách so sánh tỷ lệ cá chết tích lũy cuối [r]
(1)AN TOÀN VÀ HIỆU LỰC CỦA VACXIN HAN-STREPTILA TRÊN CÁ RÔ PHI NUÔI THƯƠNG PHẨM Hồ Thu Thủy1*, Nguyễn Hữu Vũ1, Trần Thị Khánh Chi1,
Vũ Đức Hạnh3, Nguyễn Bá Tiếp3, Nguyễn Viết Không2, Lại Thị Lan Hương3
1Trung tâm nghiên cứu sản xuất sinh phẩm Công ty cổ phần dược vật tư thú y (Hanvet) 2Viện Thú y Quốc gia, 3Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam
*Tác giả liên hệ: hothuthuy74@gmail.com
Ngày nhận bài: 01.10.2018 Ngày chấp nhận đăng: 14.04.2019 TÓM TẮT
Mục tiêu nghiên cứu đánh giá an toàn hiệu lực vacxin Han-Streptila cá rô phi nuôi thương phẩm phương pháp tiêm Hậu Giang, Tiền Giang Đồng Tháp phương pháp cho ăn An Giang, Vĩnh Long Đồng Tháp Mỗi khu vực thực 03 lơ thí nghiệm gồm lô đối chứng, lô miễn dịch lô an tồn Tính an tồn vacxin xác định qua biểu bất thường cá thí nghiệm; hiệu lực vacxin xác định cách so sánh tỷ lệ cá chết tích lũy cuối nhóm vắc xin, nhóm đối chứng khảo nghiệm sau công cường độc đánh giá thông qua tỉ lệ sống tương đối (RPS-Relative Percentage Survival) Kết cho thấy, vacxin an tồn khơng gây chết hay ảnh hưởng tới tốc độ tăng trưởng cá Về hiệu lực, vacxin dùng phương pháp tiêm cá rô phi có trọng lượng từ 10 g/con trở lên đạt tỷ lệ bảo hộ 66,9%sau 24 tuần; phương pháp cho ăn cá có khối lượng từ 2,5 g/con trở lên đạt tỷ lệ bảo hộ 63,9% sau 24 tuần Như vậy, vacxin Han-Streptila sản xuất quy mô công nghiệp từ chủng Streptococcus agalactiae điều kiện nuôi
thương phẩm năm tỉnh phía Nam an tồn có hiệu lực tốt
Từ khóa: Cá rô phi, vacxin Han-Streptila, chủng S agalactiae trên cá rô phi
Safety and Efficacy of Vaccine Han-Streptila in Commercial Tilapia ABSTRACT
The objective of the present study was to determine the safety and efficacy of vaccine Han-Streptila incommercial tilapia by injection (in Hau Giang, Tien Giang and Dong Thap provinces) and by oral route (in An Giang, Vinh Long and Dong Thap provinces) The control, immune and safe groups were set up in each province The safety of the vaccine was determined by observing the abnormalities of experimental fish; the efficacy of the vaccine was determined by comparing the final cumulative mortality between the vaccinated group and the control group during the trial or after challenge test This also was evaluated throughrelative percentage survival (RPS) The results showed that the vaccine had no effect on mortality and growth of fish The vaccine efficacy through injection with tilapia of 10 g/p achieved 66.9% and oral route for fish 2.5 g/p achieved 63.9% protection after 24 weeks Therefore, HAN-STREPTILA vaccine tested in the South of Vietnam was safe and highly effective
Keywords: Tilapia, Han-Streptila vaccine, S agalactiae sp
1 T VN
Ngnh thỵy sõn cú tøc đû phát triển nhanh hćn so vĉi ngành nơng nghiệp truyền thøng khác nhā ngành tr÷ng trõt chởn nuửi Trong nhng nởm va qua, ngnh thỵy sõn cú tức ỷ phỏt trin nhanh nhỗt cỏc lùnh vc sõn
xuỗt thc phốm cho ngi (Khan et al.,
(2)khöng đýng cách gồy hin tng khỏng khỏng sinh cỵa vi khuốn gõy bnh trờn ỷng vờt thỵy sõn, dộn n hiu quõ iu tr bnh
khụng cú hoc rỗt thỗp (Sarter et al., 2007)
Ngoài ra, việc düng kháng sinh khöng đýng cách gây ânh hāĊng tĉi möi trng, chỗt lng sõn phốm v sc khúe ngi Bên cänh đị, hình thăc ni cơng nghiêp, kể câ ni đćn hay ghép, đāợc ni Ċ mêt đû cao, mæm bệnh dễ dàng lan truyền tĂ cá thể sang cá thể khác Do đò, việc tìm giâi pháp an tồn nhā thâo dāợc hay vacxin phũng bnh cho ỷng vờt thỵy sõn l rỗt cỉn thiết
Trên giĉi có 30 lội vacxin phịng bệnh vi khn, lội vacxin phịng bệnh virus đāợc sĄ dĀng nhiều đøi tāợng nuụi thỵy sõn gúp phổn giõm ỏng k lng khỏng sinh iu tr bnh thỵy sõn, mỷt sứ qùc gia hỉu nhā khưng cđn düng đến kháng sinh (Sommerset et al., 2005; Brudeseth et al., 2013) Nhąng vacxin đỉu tiên đāợc thāćng mäi hịa vacxin phđng bnh xuỗt huyt v vibriosis M Tọi Vit Nam, cÿng cò nhiều đề tài nghiên cău vacxin phòng bệnh cho cá (Nguyễn Mänh Thíng cs., 2009) Tuy nhiên chāa cò vacxin đāợc ăng dĀng thĆc tiễn (Nguyễn Hąu Dÿng & Trỉn Vï Hích, 2013)
Vi khuèn S agalactiae gây bệnh cá rô
phi cú tổn suỗt xuỗt hin t 95-100% tháng có nhiệt đû cao vĉi tỷ lệ gây chết cûng d÷n lên đến 42-100% đàn cá ni, làm thiệt häi nghiêm trõng cho nghề nuôi cá rô phi nuôi thāćng phèm täi Việt Nam, việc dùng kháng sinh khöng đýng cách, vi khuèn bð kháng kháng sinh nên điều trð bệnh bìng kháng sinh khơng hiệu q (Phọm Hững Quõn v cs., 2013)
Vic sõn xuỗt đāợc víc xin để phịng bệnh S agalactiae trên cá rö phi nuöi thāćng phèm dùng câ phāćng pháp cho ởn v phng phỏp tiờm l yờu cổu cỗp thit tình hình dðch bệnh cá rơ phi Vớc xin sõn xuỗt c s giýp ngi nuụi cú mỷt phng phỏp phũng bnh hiu quõ nhỗt nhỡm họn ch vic s dng khỏng sinh, giõm rỵi ro dðch bệnh hāĉng tĉi mĀc tiêu giâm kháng kháng sinh nuụi trững thỵy sõn
2 VT LIU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu nghiên cứu
- Vacxin Han-Streptila cỵa cụng ty Hanvet sõn xuỗt, dọng vơ hột keo phèn (mêt đû vi
khn mût liều vacxin 2×108 CFU/ml)
- Cá rơ phi (vìn) giøng khóe mänh, säch bệnh, có trõng lāợng trung bình 10 g/con, cá rơ phi (diêu h÷ng) giøng khóe mänh, säch bệnh có trõng lāợng trung bình 2,5 g/con Trāĉc làm thí nghiệm đāợc ni cho thích nghi vĉi mơi trāĈng ngày
- Phỉn mm ừc cỏc c tớnh sinh hừc cỵa vi khuốn dùng Kit API20Strep (Biomérieux, Pháp), möi trāĈng thäch máu, Brain Heart Infusion (BHI) agar…
- Ao (có diện tích không 2.000 m2 ngën làm
3 ơ, đị mût làm lư đøi chăng, mût lơ miễn dðch mût lơ an tồn), l÷ng (g÷m mût l÷ng đøi chăng, mût l÷ng miễn dðch mût l÷ng an toàn), bể (düng để làm vacxinphāćng pháp cho ën trāĉc thâ vào l÷ng)
2.2 Phương pháp nghiên cứu
Thí nghiệm đánh giá an tồn hiệu lĆc đāợc thĆc bìng đāĈng düng phāćng pháp cho ën phāćng pháp tiêm
- Phāćng pháp tiêm: Thí nghiệm đāợc thĆc Ċ ba tỵnh Hờu Giang, Tin Giang v ững Thỏp, mỳi tợnh bứ trí mût ao ngéu nhiên an
tồn sinh hõc có diện tích không 2.000 m2 ngën
làm (mût làm lư đøi chăng, mût lơ miễn dðch mût lơ an tồn) Cá Ċ múi lơ thí nghiệm 1.200 cá rơ phi (vìn) đāợc kiểm nghiệm säch bệnh (10 g/con), tiêm xoang bĀng, cho cá ën læn/ngày quan sát vòng 10 ngày
- Phāćng pháp cho ën: Thí nghiệm đāợc thĆc khu bè ni Ċ ba tợnh An Giang, ững Thỏp v Vùnh Long, mỳi khu bè đāợc thĆc l÷ng (mût l÷ng đøi chăng, mût l÷ng miễn dðch mût l÷ng an tồn) Cá Ċ múi l÷ng thí nghiệm 15.000 cá rơ phi (diêu h÷ng) 2,5 g/con kiểm nghiệm säch bệnh, trûn liều vacxin /con (mêt đû vi khuèn mût liều
vacxin 2×108 CFU/ml) vào lāợng cám cá ën
(3)Hình Sơ đồ phân lập vi khuẩn Streptococcus agalactiae Lö đøi khơng dùng vacxin, lơ an tồn
dùng vacxin gỗp lổn quy nh, lụ dch dựng mỷt liều vacxin theo quy đðnh
2.3 Các chỉtiêu ỏnh giỏ * ỏnh giỏ an ton cỵa vacxin
Tớnh an ton cỵa vacxin c ghi nhờn qua cỏc biu hin bỗt thng cỏ thớ nghim (cỏ cht hoc cú biu hin bỗt thng)
- Cỏ chết: Trong 21 ngày sau tiêm vacxin có cỏ cht cỗp s c giõi phộu xỏc nh tác nhân gây chết Tỷ lệ cá chết tích lÿy Ċ nhóm tiêm vacxin đāợc so sánh vĉi nhịm khưng đāợc tiêm vacxin để đánh giá tính an tồn
- Cỏ cú biu hin bỗt thng: Trong 21 ngày sau tiêm vacxin cá có biểu bỗt thng nh sng, viờm, hoọi t, xung huyt, xuỗt huyt tọi gan, tim, thờn, ruỷt, tin hnh lỗy mộu xỏc nh biu hin bỗt thng cỵa c th cỏ ỏnh giỏ sinh trng cỵa cỏ thụng qua vic ghi nhên chiều dài trõng lāợng cć thể cá
2.4 Xử lý thống kê
Dą liệu thí nghiệm đāợc tính tốn xĄ lý theo phæn mềm Microsoft Excel 2010
*Đánh giá hiệu lĆc cỵa vacxin
Cửng cng ỷc: Hiu lc cỵa vacxin đāợc xác đðnh bìng cách so sánh tỷ lệ cá cht tớch ly
cuứi cựng S agalactiae cỵa nhóm vacxin
nhịm đøi khâo nghiệm sau cöng cāĈng đûc Phāćng pháp cöng cāĈng đûc: Cá bø trí cơng cāĈng đûc Ċ lơ khâo nghiệm bìng phāćng pháp cho ën 300 con/nghiệm thăc lơ khâo nghiệm bìng phāćng pháp tiêm 90 con/nghiệm thăc Múi nghiệm thăc lặp läi læn Sau 16 tuæn, 24 tuæn sĄ dĀng vacxin cá đāợc th thỏch bỡng chỵng vi khuốn S agalactiae cng ỷc vĉi liều có mêt đû
vi khuèn søng 0,2 ml × 109 CFU/ml/con cá Sø
cá cưng cāĈng đûc Ċ lơ dùng vacxin bìng đāĈng tiêm 90 con/lơ, bìng phāćng pháp cho ën 300 con/lơ Vð trí tiêm Ċ xoang bĀng Đāợc theo dơi vđng 10 ngy sau cửng cng ỷc
*Nuụi cỗy phân lêp vi khuèn Streptococcus agalactiae gây bệnh cá rơ phi bìng phāćng pháp nghiên cău vi khn (Frerich, 1993), thĄ đặc tính sinh hõc bìng test API20Strep: Méu thu thêp tĂ cá rô phi bð bnh vi cỏc dỗu hiu bnh lý nh bi l , mỗt nh hng, chngbng, xuỗt huyt, lữi mớt, sng ruût; cć quan nûi täng nhā gan, thên, lách sng to, xuỗt huyt, bọc mu Mộu cỏ sau
Mẫu cá bệnh
Thu mẫu bệnh phẩm
Nuôi cấy phân lập
Nhuộm Gram Thử phản ứng sinh hóa
(4)khi đāợc vĉt khói mặt nāĉc đāợc tiến hành phân tích chỵ nhąng méu bệnh phèm søng mĉi đāợc sĄ dĀng để phân lêp vi khuèn Trāĉc phân lêp vi khuèn, mặt ngồi cć thể cá đāợc khĄ trùng bìng c÷n 70°C lau säch
Sau đò, tiến hành mù cỏ bỡng dao mự v kộo tit trựng Dỗu hiu bệnh lý bên cá đāợc ghi nhên Kế đến, dùng dao mù tiệt trùng räch mût đāợc gan, thờn v ty tọng t que cỗy vo chỳ va rọch, xoay nh v cỗy trờn mụi trng thọch Phõn lờp vi khuốn trờn mụi trng nuụi cỗy Brain Heart Infusion có bù sung 1,5% NaCl mưi trāĈng thọch mỏu ùa cỗy c ỵ 30C 24-48 h Các
khuèn läc phát triển möi trāĈng BHI đāợc chõn để xác đðnh đặc điểm hình thỏi, sinh lý v sinh húa Cỏc chỵng vi khuốn phân lêp đāợc
trą Ċ -80°C môi trāĈng Brain Heart
Infusion broth (BHIB, Merck) có 25% glycerol để gią giøng Các thí nghiệm đāợc tiến hành täi Ban vi khuèn - Trung tåm nghiên cău sân xuỗt sinh phốm Cửng ty cự phổn Dc v vờt tā thú y (Hanvet) Viện Thý y Quøc gia
Xỏc nh giỏ tr RPS: Hiu lc cỵa vacxin đāợc đánh giá thưng qua tỵ lệ søng tāćng đøi (RPS-Relative Percentage Survival):
RPS = -
% Tỷ lệ chết lơ sĄ dĀng vacxin
× 100 (%)
% Tỷ lệ chết lö đøi
Vacxin đāợc đánh giá cò hiệu lĆc chợ
sứ bõo hỷ (RPS) cỵa nhúm tiờm vacxin ≥60%
(Amend, 1981)
3 KẾT QUÂ VÀ THÂO LUẬN
3.1 Đánh giá an toàn vacxin Han-Streptila
3.1.1 Tỷ lệ cá chết tích lũy 21 ngày sau sử dụng vacxin
Tỷ lệ cá chết tích lÿy 21 ngày sau dùng vacxin Ċ lơ thí nghiệm bìng phāćng pháp cho ën đāĈng tiêm đāợc thể hiển bâng 1, hình
Thí nghiệm cho ăn vacxin: Vĉi n = 15.000 tỷ lệ cá chết Ċ nhóm khơng cho ën vacxin trung bình
~ 2,43% khơng có sĆ khác biệt so vĉi ~ 2,42% Ċ nhóm an tồn ~ 2,43% Ċ nhóm dùng víc xin Sø cá chết đāợc kiểm tra mù khám kết quâ xác đðnh không phâi vi khuèn S agalactiae
Thí nghiệm tiêm vacxin: TĂ sø lāợng cá chết
Ċ lụ thớ nghim vi n = 1.200 ta thỗy t lệ cá
chết Ċ nhòm đāợc tiêm vacxin trung bình ~ 2,50%, nhịm đøi trung bình ~ 2,47% Ċ nhóm an tồn trung bình ~ 2,42%, nhā vêy sø cá chết Ċ nhóm có sĆ khác biệt
Nhā vêy, tiêm vacxin vĉi liều gỗp hai lổn liu chợ nh khửng lm tởng ỷt biến tỷ lệ cá chết tích lÿy so vĉi đøi
Quan sát ngồi: Việc dùng vacxin khơng täo cỏc phõn ng ph, khụng õnh hng xỗu n tức ỷ sinh trng cỵa cỏ, mu sớc vốy, bớt m÷i nhanh… Cá trāĉc sĄ dĀng vacxin Ċ lơ thí nghiệm bìng phāćng pháp tiêm cị trõng lāợng trung bình 10 ± 2,5 g/con, chiều dài trung
bình ± 0,4 cm/con, cá Ċ ô khâo nghiệm
đāĈng ën cò trõng lāợng trung bình 2,5 ± 0,5
g/con chiều dài trung bình ± 0,2 cm/con
Kết thúc thí nghiệm: Đøi vĉi lơ khâo nghiệm bìng phāćng pháp tiêm, cá Ċ lơ tiêm
vacxin cị lāợng trung bình 83,83 ± 8,5 g/con,
chiều dài trung bình 11,2 ± 0,7 cm/con, cá Ċ
lö đøi cị lāợng trung bình 83,25 ± 8,3
g/con chiều dài trung bình 11,2 ± 0,7 cm/con
Đøi vĉi lơ khâo nghiệm bìng phāćng pháp cho ën, cá Ċ cho ën vacxin cị trõng lāợng trung
bình 13,37 ± 4,5 g/con chiều dài trung bình
6,3 ± 0,2 cm/con cá Ċ đøi có trõng
lāợng trung bình 12,63 ± 4,0 g/con chiều dài
trung bình ± 0,2 cm/con
Kết quâ cho thỗy vacxin an ton, cỏ t 2,5 g/con s dng vacxin đāĈng ën, 10 g/con sĄ dĀng vacxin đāĈng tiêm vi liu gỗp lổn liu s dng, khụng õnh hāĊng tĉi tỷ lệ søng, tøc đû tëng trāĊng khụng gõy bỗt thng cho cỏ
3.2 Kt quõ bâo hộ vacxin Han-Streptila 3.2.1 Tỷ lệ bâo hộ
(5)chết dao đûng tĂ 31,7 đến 32,2%, sau 24 tuæn dùng vacxin tỷ lệ chết dao đûng tĂ 36 đến 36,3% Ở lơ dùng vacxin bìng phāćng pháp
tiêm sau 16 tuæn tỷ lệ cá chết dao đûng tĂ 23,3 đến 26,7%, sau 24 tuæn tỷ lệ cá chết dao đûng tĂ 32,2 đến 33,3%
Bâng Số cá chết cộng dồn sau 21 ngày cho ăn vacxin Han-Streptila (con)
Địa điểm An toàn Ăn vacxin Đối chứng
An Giang 365 364 367
Vĩnh Long 364 366 363
Đồng Tháp 362 363 365
Tỷ lệ chết trung bình (%) 2,42 2,43 2,43
Bâng Số cá chết cộng dồn sau 21 ngày tiêm vacxin Han-Streptila (con)
Địa điểm An toàn Tiêm vacxin Đối chứng
Hậu Giang 28 29 30
Tiền Giang 30 30 29
Đồng Tháp 29 31 30
Tỷ lệ chết trung bình (%) 2,42 2,50 2,47
Hình Số cá chết lơ thí nghiệm ăn tiêm điểm trong thời gian theo dõi an toàn
Bâng Tỷ lệ cá chết sau công cường độc (%)
Thời gian dùng vacxin trước công cường
độc (tuần)
Tỷ lệ cá chết lơ thí nghiệm phương pháp cho ăn (n = 300)
Tỷ lệ cá chết lơ thí nghiệm phương pháp tiêm (n = 90)
An Giang Vĩnh Long Đồng Tháp Hậu Giang Tiền Giang Đồng Tháp
ĐC1 MD1 ĐC2 MD2 ĐC3 MD3 ĐC4 MD4 ĐC5 MD5 ĐC6 MD6
16 100 32 100 31.7 100 32.2 100 26.7 100 23.3 100 26.7
24 100 36,0 100 36,3 100 36,0 100 32,2 100 33,3 98,9 33,3
Ghi chú: ĐC: Đối chứng; MD: Miễn dịch 359
360 361 362 363 364 365 366 367 368
An toàn Ăn vacxin Đối chứng
Số cá chết cộng dồn sau 21 ngày cho ăn vacxin Han-Streptila (con)
An Giang Vĩnh Long Đồng Tháp
26,5 27 27,5 28 28,5 29 29,5 30 30,5 31 31,5
An toàn Tiêm vacxin Đối chứng
Số cá chết cộng dồn sau 21 ngày tiêm vacxin Han-Streptila (con)
(6)Hình Tỷ lệ bâo hộ vacxin lơ thí nghiệm thời điểm
A B
Ghi chú: A- Xuất huyết mắt, B - Lồi mắt
Hình Cá thí nghiệm sau cơng cường độc
A B
Ghi chú: A - Nuôi cấy môi trường Brain Heart Infusion Agar, B - Nhuộm Gram soi kính hiển vi
Hình Hình thái vi khuẩn S agalactiae phân lập từ cá nhiễm bệnh sau cơng cường độc
Hình cho thỗy t l bõo hỷ cỵa vacxin (RPS) Ċ lơ khâo nghiệm bìng đāĈng ën sau 16 tn dao đûng tĂ 67,8-68,9% trung bình ~ 68,3%; sau 24 tn dao đûng tĂ 63,7-64%, trung bình
~ 63,9% Tỷ lệ bâo hû Ċ lơ khâo nghiệm bìng đāĈng tiêm sau 16 tuæn dao đûng tĂ 73,3-76,7% trung bình 74,4%; sau 24 tn dao đûng tĂ 66,3-67,3% trung bình ~ 66,8% Trên lý thuyết,
60 65 70 75 80
Hậu Giang Tiền Giang Đồng Tháp
Tỷ lệ bảo hộ vacxin phương pháp tiêm thời điểm rps (%)
16 tuần 24 tuần
60 62 64 66 68 70
An Giang Vĩnh Long Đồng Tháp
Tỷ lệ bảo hộ vacxin dùng phương pháp cho ăn thời điểm rps (%)
(7)sĄ dĀng vacxin bìng phāćng pháp phøi trûn thăc ën mût biện pháp tøi āu cho đāĈng đāa vacxin cho cá, giýp giâm stress, nhån lĆc tùn thāćng cho cá so vi ng tiờm Tuy nhiờn, mỷt nhc im cỵa phng phỏp ny l vic khửng ững nhỗt v hiu q đāợc nhiều nghiên cău chỵ khỏng nguyờn s b giõm i õnh hng cỵa enzyme tiêu hịa rủt cá (Hart et al., 1988; Nakanishi & Ototake, 1997) Các câi tiến mĉi nhỡm mc ớch bõo v cỏc khỏng nguyờn cỵa vacxin nhā sĄ
dĀng phāćng thăc bao bõc bìng dỉu liposomes
hoặc hät alginate (Irie et al., 2005; Maurice
et al., 2004), trung hña dðch tiêu hịa q trình sĄ dĀng vacxin sĄ dĀng biofilm
vacxin (Azad et al., 2000) minh đāợc
hiệu quâ Tuy nhiên, vén cñn mût sø nhāợc điểm t÷n täi nhā sø lāợng kháng nguyên vacxin phâi cao, khâ nëng bâo hû cñn yếu hiệu lĆc vacxin vén cđn ngín Tỷ lệ bâo hû Ċ lơ khâo nghiệm bìng đāĈng tiêm cao hćn bìng đāĈng ën
Bâng Kết quâgiám định định danh vi khuẩn Streptococcusspp theo đặc tính sinh hóa
Chỉ tiêu Kết kiểm tra (n = 360)
Đặc tính Số chủng (+) Tỷ lệ (%)
Nhuộm Gram Gram (+) 360 100
Hình dạng Cầu khuẩn 360 100
Di động - 360 100
Sinh catalaza - 360 100
Sinh oxidaza - 360 100
Phản ứng lên men yếm khí - 360 100
Phản ứng lên men hiếu khí - 360 100
Mọc mơi trường máu + 360 100
Gây tan huyết Dạng β 18 5.00
Dạng 342 95.0
Phản ứng Voges-Proskauer + 360 100
Hippurate hydrolysis + 360 100
Bile-esculin tolerance - 360 100
Pyrrolidonyl arylamidase - 360 100
Sinh α-galactosidase - 360 100
Sinh β-glucuronidase - 360 100
Sinh β-galactosidase - 360 100
Alkaline phosphatase + 360 100
Leucine AminoPeptidase + 360 100
Arginine Dihydrolase + 360 100
Đặc tính lên men đường
Ribose - 360 100
Arabinose - 360 100
Manitol - 360 100
Sorbitol - 360 100
Lactose - 360 100
Trehalose + 360 100
Inulin - 360 100
Raffinose - 360 100
Amidon - 360 100
Glycogen - 360 100
Kiểu huyết Ib 360 100