nghiên cứu phương pháp hiệu chỉnh nồng độ hba1c dùng trong ngoại kiểm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - ĐINH ĐỨC TRIẾT NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP HIỆU CHỈNH NỒNG ĐỘ HbA1c DÙNG TRONG NGOẠI KIỂM LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - ĐINH ĐỨC TRIẾT NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP HIỆU CHỈNH NỒNG ĐỘ HbA1c DÙNG TRONG NGOẠI KIỂM Chuyên ngành: Kỹ thuật Xét nghiệm Y học Mã số: 8720601 Luận văn Thạc sĩ Y học Kỹ Thuật Xét Nghiệm Y Học NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS.BS.Vũ Quang Huy THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2020 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn nghiên cứu riêng tơi Các tài liệu trích dẫn, số liệu luận văn hoàn toàn trung thực tuân theo yêu cầu luận văn nghiên cứu Luận văn chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn ĐINH ĐỨC TRIẾT ii MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CÂU HỎI NGHIÊN CỨU MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan ngoại kiểm 1.1.1 Các phương thức kiểm tra 1.1.2 Quá trình thực ngoại kiểm 1.1.3 Quá trình thực mẫu ngoại kiểm phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm 1.1.4 Lợi ích việc tham gia ngoại kiểm .8 1.1.5 Các tiêu chuẩn mẫu ngoại kiểm 1.2 Tổng quan chương trình ngoại kiểm HbA1c giới 1.3 Tổng quan ngoại kiểm nước .11 1.4 Tổng quan Glycated Hemoglobin 12 1.4.1 Cấu trúc Hemoglobin 13 1.4.2 Sự hình thành HbA1c 14 1.4.3 Mối tương quan HbA1c nồng độ glucose huyết .16 1.5 Phương pháp miễn dịch đo độ đục 17 1.5.1 Nguyên lý chung .17 1.5.2 Phản ứng miễn dịch tạo độ đục .17 1.5.3 Cách xác định kết .18 1.5.4 Các nghiên cứu phương pháp miễn dịch đo độ đục xét nghiệm HbA1c 18 1.6 Phương pháp đông khô 19 1.6.1 Giai đoạn tiền xử lý 19 1.6.2 Giai đoạn đóng băng .19 1.6.3 Giai đoạn sấy sơ cấp 20 1.6.4 Sấy thứ cấp 21 1.6.5 Ứng dụng đông khô 21 1.6.6 Ưu điểm nhược điểm đông khô 21 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 2.1 Thiết kế nghiên cứu 23 2.2 Đối tượng nghiên cứu 23 2.3 Cỡ mẫu nghiên cứu 23 iii 2.4 Kỹ thuật nghiên cứu 25 2.5 Tiêu chuẩn chọn mẫu 26 2.5.1 Tiêu chí đưa vào 26 2.5.2 Tiêu chí loại 26 2.6 Các giai đoạn đánh giá: 26 2.7 Phương pháp chọn mẫu 27 2.8 Phương pháp thống kê 27 2.9 Công cụ thu thập xử lý số liệu .28 2.10 Điều chế dung dịch tăng %HbA1c .28 2.11 Q trình tăng %HbA1c mẫu máu tồn phần 32 2.11.1 Chuẩn bị nguyên liệu 32 2.11.2 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hình thành HbA1c 33 2.11.3 Tiến hành tăng %HbA1c 35 2.11.4 Đánh giá tính đồng lô mẫu sau tăng %HbA1c .36 2.12 Sản xuất mẫu HbA1c đông khô 36 2.12.1 Sự ảnh hưởng thể tích hồn ngun lên %HbA1c 37 2.12.2 Xác định thể tích hồn ngun cho mẫu HbA1c đông khô .37 2.12.3 Đánh giá tính đồng trước sau đông khô mẫu HbA1c 38 2.12.4 Khảo sát độ ẩm mẫu HbA1c đông khô 38 2.13 Đánh giá chất lượng mẫu sản xuất .39 2.13.1 Đánh giá tính đồng 39 2.13.2 Đánh giá độ ổn định 40 2.14 Dụng cụ thiết bị 43 2.15 Y đức tính ứng dụng nghiên cứu 45 2.15.1 Y đức: 45 2.15.2 Tính ứng dụng nghiên cứu: .45 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ .46 3.1 Điều chế dung dịch tăng nồng độ HbA1c .46 3.1.1 Dung dịch Ringer 46 3.1.2 Dung dịch BAGP-M .47 3.1.3 Dung dịch Saline .48 3.1.4 Dung dịch PBS 49 iv 3.2 Sự ảnh hưởng lên trình hình thành HbA1c .50 3.2.1 Nhiệt độ: 50 3.2.2 Nồng độ glucose 52 3.3 Sản xuất mẫu HbA1c có nồng độ trung gian mẫu HbA1c có nồng độ cao đông khô dùng ngoại kiểm 56 3.3.1 Hiệu chỉnh nồng độ 56 3.3.3 Đánh giá tính đồng mẫu HbA1c trước sau đông khô .59 3.3.4 Khảo sát độ ẩm mẫu HbA1c đông khô .60 3.4 Đánh giá tính đồng mẫu HbA1c đông khô dùng ngoại kiểm Việt Nam .61 3.5 Đánh giá tính độ ổn định mẫu HbA1c đông khô dùng ngoại kiểm Việt Nam 62 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 66 4.1 Điều chế dung dịch tăng %HbA1c hồng cầu 66 4.2 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ nồng độ glucose lên HbA1c .70 4.2.1 Nhiệt độ 70 4.2.2 Nồng độ glucose 74 4.3 Tăng %HbA1c mẫu hồng cầu 79 4.3.1 Nồng độ trung gian 81 4.3.2 Nồng độ cao 81 4.4 Đông khô mẫu HbA1c 82 4.5 Hồn ngun mẫu HbA1c đơng khơ .83 4.6 Đánh giá độ ẩm mẫu đông khô 84 4.7 Đánh giá tính đồng mẫu HbA1c đơng khơ 84 4.8 Đánh giá độ ổn định mẫu HbA1c đông khô .86 KẾT LUẬN 89 KIẾN NGHỊ 90 TÀI LIỆU THAM KHẢO .i PHỤ LỤC viii v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TÊN VIẾT TẮT TÊN ĐẦY ĐỦ Tiếng Việt NĐ Nghị Định NQ Nghị Quyết PXN Phòng xét nghiệm TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TT-BYT Thông Tư – Bộ Y Tế Tiếng Anh ADA American Diabetes Association BAGP-M Bicarbonate buffer system CAP College of American Pathologists CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute CV Coefficient of Variation DCCT Diabetes Control and Complications Trial EQA External Quality Assessment EQA External Quality Assessment GHb Glucose-Hemoglobin Hb Hemoglobin HbA1c Glycated Hemoglobin HBsAg Hepatitis B surface- Antigen HCV Hepatitis C Virus IFCC International Federation of Clinical Chemistry IQC Internal Quality Control ISO The International Organization for Standardization LA1c Labile Glycated Hemoglobin vi NGSP PBS National Glycohemoglobin Standardization Program Phosphate buffer saline PT Proficiency Testing SA1c Stable Glycated Hemoglobin SD Standard Deviation WHO World Health Organization vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Sự hình thành HbA1c 14 Hình 2.1: Hồng cầu ủ với dung dịch tăng %HbA1c tủ ấm 37 độ C 32 Hình 2.2: Khảo sát %HbA1c ủ hồng cầu 2-8 độ C 34 Hình 2.3: Khảo sát %HbA1c ủ hồng cầu 20-24 độ C 34 Hình 2.4: Khảo sát %HbA1c mức nồng độ glucose 35 Hình 2.5:Đánh giá độ ổn định ngắn hạn mẫu HbA1c đông khô 42 Hình 2.6: Đánh giá độ ổn định dài hạn mẫu HbA1c đông khô 43 Hình 4.1: Sự thay đổi %HbA1c nhiệt độ độ C 15 độ C theo nghiên cứu Mortensen cộng sự[68]…………………………………………………………… 71 Hình 4.2: Sự thay đổi %HbA1c mức nhiệt độ khác nghiên cứu Kenneth M Spicer[86] 74 Hình 4.3: Sự thay đổi %HbA1c mức nhiệt độ khác nghiên cứu 74 Hình 4.4: Biểu đồ thay đổi %HbA1c ủ dung dịch Hb dung dịch BAGP-M với nồng độ glucose[86] 76 Hình 4.5: Biểu đồ thay đổi %HbA1c ủ hồng cầu dung dịch Saline với nồng độ glucose[85] 77 Hình 4.6: Biểu đồ thay đổi %HbA1c ủ hồng cầu dung dịch Ringer với nồng độ glucose[44] 78 Hình 4.7: Biểu đồ thay đổi %HbA1c ủ hồng cầu với nồng độ glucose nghiên cứu 79 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1:Sơ đồ đánh giá tính đồng 40 Sơ đồ 2.2: Sơ đồ đánh giá độ ổn định 41 Sơ đồ 2.3: Sơ đồ tóm tắt q trình nghiên cứu sản xuất mẫu HbA1c đông khô 42 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Hóa chất điều chế dung dịch Ringer 29 Bảng 2.2: Hóa chất điều chế dung dịch BAGP-M 30 Bảng 2.3: Hóa chất điều chế dung dịch Saline 30 Bảng 2.4: Bảng hóa chất điều chế dung dịch PBS 31 Bảng 2.5: Hóa chất pha dung dịch Ringer 33 Bảng 2.6: Ký hiệu bình chứa mẫu 35 Bảng 2.7: Danh sách thiết bị sử dụng 43 Bảng 2.8: Vật tư tiêu hao 44 Bảng 2.9:Hóa chất thuốc thử 44 Bảng 3.1: Kết %HbA1c mẫu hồng cầu ủ với dung dịch Ringer……………46 viii Bảng 3.2: Kết %HbA1c mẫu hồng cầu ủ với dung dịch BAGP-M 47 Bảng 3.3: Kết %HbA1c mẫu hồng cầu ủ với dung dịch Saline 48 Bảng 3.4: Kết %HbA1c mẫu hồng cầu ủ với dung dịch PBS 49 Bảng 3.5: Kết HbA1c thay đổi điều kiện nhiệt độ 2- 8ºC 50 Bảng 3.6: Kết HbA1c thay đổi điều kiện nhiệt độ 20- 24ºC 51 Bảng 3.7: Kết HbA1c thay đổi điều kiện nhiệt độ 37ºC 52 Bảng 3.8: Kết HbA1c thay đổi dung dịch chứa 100mM glucose 53 Bảng 3.9: Kết HbA1c thay đổi trong dung dịch chứa 305mM glucose 54 Bảng 3.10: Kết HbA1c thay đổi dung dịch chứa 500mM glucose 55 Bảng 3.11: Giá trị sau hiệu chỉnh 56 Bảng 3.12: Giá trị sau hiệu chỉnh 57 Bảng 3.13: Kết hoàn ngun mẫu đơng khơ HbA1c với thể tích khác 58 Bảng 3.14: Thể tích nước hồn ngun mẫu HbA1c đông khô 59 Bảng 3.15: Kết trước sau đông khô 59 Bảng 3.16: Kết trước sau đông khô 60 Bảng 3.17: Kết % độ ẩm lại mẫu đông khô 61 Bảng 3.18: Kết tính đồng 61 Bảng 3.19: Kết tính đồng 62 Bảng 3.20: Kết độ ổn định ngắn hạn 63 Bảng 3.21: Kết độ ổn định ngắn hạn 63 Bảng 3.22: Kết độ ổn định dài hạn 64 Bảng 3.23: Kết độ ổn định dài hạn 65 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1:Sự thay đổi %HbA1c hồng cầu ủ dung dịch Ringer 46 Biểu đồ 3.2: Sự thay đổi %HbA1c hồng cầu ủ dung dịch BAGP-M 47 Biểu đồ 3.3: Sự thay đổi %HbA1c hồng cầu ủ dung dịch Saline 48 Biểu đồ 3.4: Sự thay đổi %HbA1c hồng cầu ủ dung dịch PBS 49 Biểu đồ 3.5: Sự thay đổi %HbA1c hồng cầu ủ -8 độ C với 100mg Glucose 50 Biểu đồ 3.7: Sự thay đổi %HbA1c ủ 37 độ C với 100mM glucose 52 Biểu đồ 3.6: Sự thay đổi %HbA1c Khi ủ 20-24 độ C với 100mM glucose 52 Biểu đồ 3.8: Sự thay đổi %HbA1c ủ 37 độ C với 100mM glucose 53 Biểu đồ 3.9: Sự thay đổi %HbA1c ủ 37 độ C với 305mM glucose 54 Biểu đồ 3.10: Sự thay đổi %HbA1c ủ 37 độ C với 500mM glucose 55 Biểu đồ 3.11: Theo dõi độ ổn định ngắn hạn 64 Biểu đồ 3.12: Theo dõi độ ổn định dài hạn 65 iii 32 Delost MD, Miller WG, Chang GA, Korzun W, et al, (2009), "Influence of credentials of clinical laboratory professionals on proficiency testing performance", Am J Clin Pathol, 132 pp 550-554 33 Desmons A, Jaisson S, Leroy N, Gillery P, et al, (2017), "Labile glycated haemoglobin and carbamylated haemoglobin are still critical points for HbA1c measurement", Biochem Med (Zagreb), 27 (2), pp 378-386 34 DeVenuto F, (1978), "Storagetability of hemoglobin solution during extended ", J Lab Clin Med, 92 (6), pp 946-952 35 Eur, Trial Group, (2018), "EurA1c: The European HbA1c Trial to Investigate the Performance of HbA1c Assays in 2166 Laboratories across 17 Countries and 24 Manufacturers by Use of the IFCC Model for Quality Targets", Clin Chem, 64 (8), pp 1183-1192 36 Gallagher E J, Le Roith D, Bloomgarden Z, (2009), "Review of hemoglobin A(1c) in the management of diabetes", J Diabetes, (1), pp 9-17 37 Gatlin L A, Nail S L, (1994), "Protein purification process engineering Freeze drying: A practical overview", Bioprocess Technol, 18 pp 317-367 38 Geneva: World Health Organization, (2018), " Use of Glycated Haemoglobin (HbA1C) in the Diagnosis of Diabetes Mellitus: Abbreviated Report of a WHO Consultation", Glycated haemoglobin (HbA1c) for the diagnosis of diabetes 39 Gikas A, Sotiropoulos A, Pastromas V, Papazafiropoulou A, et al, (2009), "Seasonal variation in fasting glucose and HbA1c in patients with type diabetes", Prim Care Diabetes, (2), pp 111-114 40 Hamwi A, Schweiger C R, Veitl M, Schmid R, (1995), "Quantitative measurement of HbA1c by an immunoturbidimetric assay compared to a standard HPLC method", Am J Clin Pathol, 104 (1), pp 89-95 41 Han Y, Quan G B, Liu X Z, Ma E P, et al, (2005), "Improved preservation of human red blood cells by lyophilization", Cryobiology, 51 (2), pp 152-164 42 Haney D N, Bunn H F, (1976), "Glycosylation of hemoglobin in vitro: affinity labeling of hemoglobin by glucose-6-phosphate", Proc Natl Acad Sci U S A, 73 (10), pp 3534-3538 43 Hess J R, (2010), "Red cell storage", J Proteomics, 73 (3), pp 368-373 44 Higgins P J, Bunn H F, (1981), "Kinetic analysis of the nonenzymatic glycosylation of hemoglobin", J Biol Chem, 256 (10), pp 5204-5208 45 Hugo Scheer, Bernhard Grimm, Robert J Porra, Wolfhart Rüdiger, (2006), An Overview of Chlorophylls and Bacteriochlorophylls: Biochemistry, Biophysics, Functions and Applications, pp 1-26 46 I Jennings, D P Kitchen, T A L Woods, S Kitchen, et al, (2015), "Stability of coagulation proteins in lyophilized plasma", International Journal of Laboratory Hematology, 34 (4), pp 495-502 iv 47 ISO 13528, (2015), "Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons", International Organization for Standardization, (2) 48 J Jeff Schwegman, (2009), "BASIC CYCLE DEVELOPMENT TECHNIQUES FOR LYOPHILIZED PRODUCTS", SP Scientific pp -7 49 James Thomson, (1873), "A Quantitative Investigation of Certain Relations between the Gaseous, the Liquid, and the Solid States of Water-Substance", A Quantitative Investigation of Certain Relations between the Gaseous, the Liquid, and the Solid States of Water-Substance, 22 pp 27-36 50 James Westgard, CLIA, (2019), "Proposed Acceptance Limits for Proficiency Testing" 51 Jiang Qixing, Ma Zhengran, Wang Shuoshuo, Xu Yanshun, et al, (2014), "Effect of Temperature on Protein Compositional Changes of Big Head Carp (Aristichthys nobilis) Muscle and Exudates", Food Science and Technology Research 52 Judy Chang M, Carolyn Hoke P, Bruce Ettinger M, Germaine Penerian M, (1998), "Evaluation and Interference Study of Hemoglobin A1c Measured by Turbidimetric Inhibition Immunoassay ", American Journal of Clinical Pathology, 109 (3), pp 274–278 53 Kaiser P, Spannagl M, van Campenhout C, Lenga Y, et al, (2016), "HbA1c: EQA in Germany, Belgium and the Netherlands using fresh whole blood samples with target values assigned with the IFCC reference system", Clin Chem Lab Med, 54 (11), pp 1769-1775 54 Kalpana Singh, Bhawna Mahajan, Shweta Singh, Mahdi A A, (2017), "Labile hemoglobin A1c: A factor affecting the estimation of glycated hemoglobin", JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL INVESTIGATIONS, pp 124-126 55 Khan H A, Ola M S, Alhomida A S, Sobki S H, et al, (2014), "Evaluation of HbA1c criteria for diagnosis of diabetes mellitus: a retrospective study of 12 785 type Saudi male patients", Endocr Res, 39 (2), pp 61-65 56 Kohne E, (2011), "Hemoglobinopathies: clinical manifestations, diagnosis, and treatment", Dtsch Arztebl Int, 108 (31-32), pp 532-540 57 Kucherenko Y V, Bhavsar S K, Grischenko V I, Fischer U R, et al, (2010), "Increased cation conductance in human erythrocytes artificially aged by glycation", J Membr Biol, 235 (3), pp 177-189 58 Labrude P, Vigneron C, (1980), "Lyophilization of hemoglobin and the stability of the lyophilysates", Clin Chem, 26 (13), pp 1926-1927 59 Labrude P, Vigneron C, (1983), "Stability and functional properties of haemoglobin freeze-dried in the presence of four protective substances after prolonged storage: dose-effect relationships", J Pharm Pharmacol, 35 (1), pp 23-27 v 60 Makris K, Spanou L, (2011), "Is there a relationship between mean blood glucose and glycated hemoglobin?", J Diabetes Sci Technol, (6), pp 1572-1583 61 Manno S, Mohandas N, Takakuwa Y, (2010), "ATP-dependent mechanism protects spectrin against glycation in human erythrocytes", J Biol Chem, 285 (44), pp 33923-33929 62 MarlienPieters, Johann CJerling, WWeisel J, (2002), "Effect of freeze-drying, freezing and frozen storage of blood plasma on fibrin network characteristics", Thrombosis Research, 107 (5), pp 263-269 63 Matteucci, Cinapri V, Rossi L, Lucchetti A, et al, (2001), "Glycated hemoglobin measurement: intermethod comparison", Diabetes Nutr Metab, 14 (4), pp 217219 64 Matteucci E, Cinapri V, Rossi L, Lucchetti A, et al, (2001), "Glycated hemoglobin measurement: intermethod comparison", Diabetes Nutr Metab, 14 (4), pp 217219 65 Metus, Ruzzante N, Bonvicini P, Meneghetti M, et al, (1999), "Immunoturbidimetric assay of glycated hemoglobin", J Clin Lab Anal, 13 (1), pp 5-8 66 Miedema K, (2005), "Standardization of HbA1c and Optimal Range of Monitoring", Scand J Clin Lab Invest Suppl, 240 pp 61-72 67 Mortensen H B, Christophersen C, (1982), "Glycosylation of human hemoglobin A Kinetics and mechanisms studied by isoelectric focusing", Biochim Biophys Acta, 707 (1), pp 154-163 68 Mortensen H B, Christophersen C, (1983), "Glucosylation of human haemoglobin a in red blood cells studied in vitro Kinetics of the formation and dissociation of haemoglobin A1c", Clin Chim Acta, 134 (3), pp 317-326 69 Mosca A, R P, A C, C W, et al, (2015), "Performance of glycated hemoglobin (HbA1c) methods evaluated with EQAS studies using fresh blood samples: Still space for improvements", Clinica chimica Acta, pp 305-309 70 Murata G H, Hoffman R M, Duckworth W C, Wendel C S, et al, (2004), "Contributions of weekly mean blood glucose values to hemoglobin A1c in insulin-treated type diabetes: the Diabetes Outcomes in Veterans Study (DOVES)", Am J Med Sci, 327 (6), pp 319-323 71 Nail, Jiang S, Chongprasert S, Knopp S A, (2002), "Fundamentals of freezedrying", Pharm Biotechnol, 14 pp 281-360 72 Nathan D M, Singer D E, Hurxthal K, Goodson J D, (1984), "The clinical information value of the glycosylated hemoglobin assay", N Engl J Med, 310 (6), pp 341-346 73 Ohtsubo K, Chen M Z, Olefsky J M, Marth J D, (2011), "Pathway to diabetes through attenuation of pancreatic beta cell glycosylation and glucose transport", Nat Med, 17 (9), pp 1067-1075 vi 74 Peters R, (2017), Freeze drying and freeze concentration 75 Peterson K P, Pavlovich J G, Goldstein D, Little R, et al, (1998), "What is hemoglobin A1c? An analysis of glycated hemoglobins by electrospray ionization mass spectrometry", Clin Chem, 44 (9), pp 1951-1958 76 Plebani M, Sanzari MC, L Z, (2008), "Quality control in coagulation testing", Semin Thromb Hemost, 34 pp 642-646 77 Quan G B, Han Y, Liu X Z, Ma E P, et al, (2004), "[Effect of pre-freezing temperature and lyophilizer shelf temperature on recovery of red blood cells after lyophilization]", Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 12 (3), pp 368-371 78 Rahbar S, (1980), "Glycosylated hemoglobins", Tex Rep Biol Med, 40 pp 373-385 79 Rey, Louis., May, Joan C, (2010), "Freeze drying/lyophilization of pharmaceutical and biological products.", New York: Informa Healthcare 80 Sacks D B, (2007), "Correlation between hemoglobin A1c (HbA1c) and average blood glucose: can HbA1c be reported as estimated blood glucose concentration?", J Diabetes Sci Technol, (6), pp 801-803 81 Selvaraj N, Bobby Z, Sathiyapriya V, (2006), "Effect of lipid peroxides and antioxidants on glycation of hemoglobin: an in vitro study on human erythrocytes", Clin Chim Acta, 366 (1-2), pp 190-195 82 Shapiro R, McManus M, Garrick L, McDonald M J, et al, (1979), "Nonenzymatic glycosylation of human hemoglobin at multiple sites", Metabolism, 28 (4 Suppl 1), pp 427-430 83 Shapiro R, McManus M J, Zalut C, Bunn H F, (1980), "Sites of nonenzymatic glycosylation of human hemoglobin A", J Biol Chem, 255 (7), pp 3120-3127 84 Sherwani S I, Khan H A, Ekhzaimy A, Masood A, et al, (2016), "Significance of HbA1c Test in Diagnosis and Prognosis of Diabetic Patients", Biomark Insights, 11 pp 95-104 85 Siméon Bourdoux, Dan Li, Andreja Rajkovic, Frank Devlieghere, et al, (2016), "Performance of Drying Technologies to Ensure Microbial Safety of Dried Fruits and Vegetables", Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 15 (6), pp 1056-1066 86 Simpson R J, (2010), "Stabilization of proteins for storage", Cold Spring Harb Protoc, 2010 (5), pp 79 87 Smith R J, Koenig R J, Binnerts A, Soeldner J S, et al, (1982), "Regulation of hemoglobin AIc formation in human erythrocytes in vitro Effects of physiologic factors other than glucose", J Clin Invest, 69 (5), pp 1164-1168 88 Spicer K M, Allen R C, Hallett D, Buse M G, (1979), "Synthesis of hemoglobin Aic and related minor hemoglobin by erythrocytes In vitro study of regulation", J Clin Invest, 64 (1), pp 40-48 89 Stevens V J, Fantl W J, Newman C B, Sims R V, et al, (1981), "Acetaldehyde adducts with hemoglobin", J Clin Invest, 67 (2), pp 361-369 vii 90 Svendsen P A, Lauritzen T, Soegaard U, Nerup J, (1982), "Glycosylated haemoglobin and steady-state mean blood glucose concentration in Type (insulin-dependent) diabetes", Diabetologia, 23 (5), pp 403-405 91 Thom C S, Dickson C F, Gell D A, Weiss M J, (2013), "Hemoglobin variants: biochemical properties and clinical correlates", Cold Spring Harb Perspect Med, (3), pp 11858 92 Thomas A Jennings, (2002), Lyophilization: Introduction and Basic Principles 93 Viskupicova J, Blaskovic D, Galiniak S, Soszynski M, et al, (2015), "Effect of high glucose concentrations on human erythrocytes in vitro", Redox Biol, pp 381387 94 Watala C, (1988), "In vitro glycation of red blood cell proteins: high levels of glucose lower lipid fluidity of erythrocyte membranes", Exp Pathol, 33 (4), pp 233-238 95 Witczak O, Haugen T B, (2014), "[Glycated or glycosylated?]", Tidsskr Nor Laegeforen, 134 (22), pp 2179 96 World Health Organization, (2016), "manual for the preparation of secondary reference material for in vitro diagnostic assays designed for infertious disase nucleic acid or antigen detection: calibration to who international standards" 97 World Health Organization (WHO), "Overview of External Quality Assessment " 98 Zhao L, Li S, Li F, Wang J, et al, (2013), "[Effects of freeze-drying process on polymerized human placenta hemoglobin]", Sheng Wu Yi Xue Gong Cheng Xue Za Zhi, 30 (5), pp 1052-1057 99 Zhao L, Zhou W, Wang J, Li S, et al, (2014), "The properties research of polymerized human placenta hemoglobin before and after lyophilization", Artif Cells Nanomed Biotechnol, 42 (2), pp 78-82 viii PHỤ LỤC Phụ lục 01: Giá trị sau tăng %HbA1c mẫu %HbA1c sau tăng %HbA1c Mẫu ban đầu L.1 L.2 Lần Lần Lần Lần 5,8 6,5 6,3 6,2 6,1 5,7 5,9 6,1 5,9 6,2 5,5 6,0 5,9 5,8 5,7 5,4 6,1 6,0 6,0 5,9 5,6 6,3 6,4 6,4 6,4 5,5 5,9 5,7 6,1 6,2 5,4 6,1 6,2 6,2 6,0 5,7 6,2 6,0 6,0 6,1 5,6 5,9 6,1 6,3 6,3 10 5,9 6,3 6,3 6,2 6,0 Phụ lục 02: Giá trị sau tăng %HbA1c mẫu %HbA1c sau tăng %HbA1c Mẫu ban đầu L.1 L.2 Lần Lần Lần Lần 5,8 9,3 9,2 8,8 8,9 5,7 9,0 8,9 9,2 9,3 5,5 8,9 8,7 8,8 8,7 5,4 9,2 9,0 9,1 9,2 5,6 8,8 9,0 9,0 8,8 ix %HbA1c sau tăng %HbA1c Mẫu ban đầu L.1 L.2 Lần Lần Lần Lần 5,5 8,7 8,8 8,8 8,9 5,4 9,2 9,1 9,1 9,3 5,7 9,3 9,3 9,3 9,3 5,6 8,9 8,8 9,1 9,0 10 5,9 9,2 9,3 9,3 9,1 Phụ lục 03: kết hồn ngun mẫu đơng khơ HbA1c mẫu với thể tích khác Mẫu Sau hồn nguyên Thể tích nước ( mL) Lần Lần HbA1c THb %HbA1c HbA1c THb %HbA1c 0,2 0,647 16,18 6,2 0,613 15,84 6,0 0,4 0,568 14,92 5,9 0,574 15,34 5,8 0,6 0,491 12,48 6,1 0,488 12,82 5,9 0,8 0,398 10,28 6,0 0,401 9,87 6,3 1,0 0,283 7,19 6,1 0,315 7,88 6,2 1,2 0,208 5,56 5,8 0,216 5,67 5,9 1,4 0,157 3,86 6,3 0,152 3,86 6,1 1,6 0,108 2,84 5,9 0,112 2,94 5,9 1,8 0,092 2,38 6,0 0,089 2,19 6,3 10 2,0 0,076 1,93 6,1 0,071 1,78 6,2 x Phụ lục 04: Kết hồn ngun mẫu đơng khơ HbA1c mẫu với thể tích khác Mẫu Giá trị HbA1c sau hồn ngun Thể tích Lần nước ( mL) Lần HbA1c THb %HbA1c HbA1c THb %HbA1c 0,2 1,193 15,39 9,3 1,204 15,88 9,1 0,4 1,081 14,10 9,2 1,092 14,09 9,3 0,6 1,024 13,65 9,0 1,019 14,06 8,7 0,8 0,863 11,26 9,2 0,887 11,96 8,9 1,0 0,772 10,18 9,1 0,753 9,82 9,2 1,2 0,594 7,66 9,3 0,601 8,20 8,8 1,4 0,427 5,89 8,7 0,419 5,78 8,7 1,6 0,249 3,40 8,8 0,241 3,21 9,0 1,8 0,152 2,03 9,0 0,163 2,13 9,2 10 2,0 0,091 1,16 9,4 0,102 1,32 9,3 Phụ lục 05: Bảng giá trị khối lượng trước sau đông khô mẫu HbA1c Khối lượng lọ Khối lượng Khối lượng Thể tích nước đơng khơ ( g) trước đông khô ( g) sau đông khô ( g) ( mL) 10,029 11,0347 10,1774 0,8573 10,033 11,0649 10,1957 0,8692 10,025 11,0303 10,1756 0,8547 10,031 11,0766 10,2131 0,8635 10,024 11,0689 10,2155 0,8534 10,029 11,0877 10,2488 0,8389 10,025 11,0665 10,1872 0,8793 Mẫu xi Khối lượng lọ Khối lượng Khối lượng Thể tích nước đơng khơ ( g) trước đông khô ( g) sau đông khô ( g) ( mL) 10,024 11,1191 10,1575 0,8316 10,030 11,0957 10,2095 0,8862 10 10,032 11,1252 10,1847 0,8403 Mẫu Phụ lục 05: Bảng giá trị %HbA1c trước sau đông khô mẫu Mẫu %HbA1c trước đông khô %HbA1c sau đông khô Lần Lần Lần Lần 6,5 6,4 6,2 6,3 5,9 6,2 5,9 6,2 6,0 5,9 5,7 5,8 6,1 6,0 6,0 6,1 6,3 6,3 6,4 6,2 5,9 6,1 6,1 5,8 6,1 5,8 6,2 5,9 6,2 6,3 6,0 5,9 5,9 5,8 6,3 6,1 10 6,3 6,2 6,2 5,8 Phụ lục 06: Bảng giá trị %HbA1c trước sau đông khô mẫu Mẫu %HbA1c trước đông khô %HbA1c sau đông khô Lần Lần Lần Lần 9,3 9,1 8,8 8,9 9,0 8,9 9,2 9,1 8,9 9,0 8,8 8,9 xii Mẫu %HbA1c trước đông khô %HbA1c sau đông khô Lần Lần Lần Lần 9,2 9,3 9,1 9,0 8,8 8,7 9,0 8,8 8,7 8,9 8,8 8,7 9,2 9,1 9,1 9,1 9,3 9,4 9,3 9,2 8,9 8,8 9,1 9,3 10 9,2 9,0 9,3 9,2 Phụ lục 07: Bảng giá trị đánh giá độ ẩm lại mẫu HbA1c đông khô Mẫu Khối lượng ( g ) Độ ẩm Lọ Trước sấy Sau sấy (%) 10,0240 10,1810 10,1778 2,1 10,0310 10,2040 10,2000 2,3 10,0210 10,1880 10,1845 2,1 10,0270 10,2010 10,1977 2,1 10,0260 10,1930 10,1895 2,1 10,0320 10,2320 10,2276 2,2 10,0290 10,1820 10,1788 2,1 10,0260 10,1670 10,1640 2,1 10,0280 10,1990 10,1954 2,1 10 10,0310 10,1720 10,1690 2,1 xiii Phụ lục 08: Bảng kết đánh giá độ đồng mẫu Giá trị %HbA1c ĐK.NĐTG.L1 Mẫu ĐK.NĐTG.L2 Lần Lần Lần Lần 6,1 5,9 6,2 6,0 5,7 5,9 5,9 5,8 5,7 6,0 5,8 5,7 6,2 6,1 5,7 5,9 6,1 6,3 5,9 6,2 5,7 5,6 6,1 6,2 5,9 6,1 6,2 5,8 5,9 6,2 6,0 5,7 5,9 5,8 6,2 5,8 10 6,0 5,9 5,7 5,6 Phụ lục 09: Bảng kết đánh giá độ đồng mẫu Giá trị %HbA1c ĐK.NĐC.L1 Mẫu ĐK.NĐC.L1 Lần Lần Lần Lần 9,5 9,3 9,2 9,4 9,2 9,1 8,9 9,3 8,7 8,9 8,9 8,8 9,4 9,0 9,3 9,1 8,8 8,6 8,7 8,9 8,7 8,5 8,8 9,0 9,1 9,2 9,1 9,3 xiv Giá trị %HbA1c ĐK.NĐC.L1 Mẫu ĐK.NĐC.L2 Lần Lần Lần Lần 9,0 8,9 8,9 8,8 8,7 9,1 9,0 9,2 10 9,2 9,0 9,2 8,9 Phụ lục 10: Bảng kết đánh giá độ ổn định ngắn hạn mẫu Nhiệt độ −5ºC 19ºC 23ºC 26ºC 27ºC 29ºC Ngày Ngày %HbA1c Mẫu Ngày Ngày Ngày Ngày L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 6,2 5,8 5,7 5,8 6,0 5,7 5,9 6,3 6,1 6,1 5,9 6,0 5,9 6,2 6,0 6,1 5,8 5,9 6,3 6,1 6,3 5,8 6,3 5,9 6,1 5,9 6,1 6,2 5,6 6,2 5,9 5,9 6,2 6,3 6,1 6,3 Phụ lục 11: Bảng kết đánh giá độ ổn định ngắn hạn mẫu Nhiệt độ −5ºC 19ºC 23ºC 26ºC 27ºC 29ºC Ngày Ngày %HbA1c Mẫu Ngày Ngày Ngày Ngày L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 8,9 8,7 9,4 9,2 8,9 9,5 9,5 9,4 9,1 8,7 9,5 9,5 8,7 9,1 9,0 9,1 8,7 8,7 8,8 8,7 9,5 9,3 9,1 8,9 9,2 9,2 9,0 8,9 8,8 8,9 9,1 9,0 9,2 8,8 9,3 9,2 xv Phụ lục 12: Bảng kết đánh giá độ ổn định dài hạn mẫu %HbA1c Mẫu Ngày Tuần Tuần Tuần Tuần Tuần 11 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 6,2 5,8 5,7 5,8 5,7 6,1 5,9 6,3 5,7 6,3 5,9 6,2 5,9 6,2 6,1 6,3 5,9 6,4 6,3 5,8 6,2 5,8 5,7 5,8 6,1 5,9 5,9 5,7 5,6 6,3 6,2 6,1 5,9 6,2 6,1 5,9 Phụ lục 13: Bảng kết đánh giá độ ổn định dài hạn mẫu %HbA1c Mẫu Ngày Tuần Tuần Tuần Tuần Tuần 11 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 L.1 L.2 8,9 8,7 9,4 9,2 9,3 9,5 8,8 8,9 8,3 9,5 8,8 8,9 8,7 9,1 9,5 9,0 9,1 8,9 9,2 9,4 8,8 9,1 8,6 9,3 9,2 9,2 9,1 9,4 9,2 9,3 9,1 9,2 9,0 8,8 9,0 9,4 Phụ lục 14: Hình ảnh mẫu máu thu thập xvi Phụ lục 15: Khối lượng mẫu HbA1c trước đông khô Phụ lục 16: Khối lượng mẫu HbA1c sau đông khô xvii Phụ lục 17: Khối lượng lọ đông khô ... chúng tơi thực đề tài: ? ?Nghiên cứu phương pháp hiệu chỉnh nồng độ HbA1c bảo quản mẫu HbA1c kỹ thuật đông khô dùng ngoại kiểm? ?? CÂU HỎI NGHIÊN CỨU Chúng làm nghiên cứu để trả lời cho câu hỏi... TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thực nghiệm, thử nghiệm phương pháp tăng %HbA1c mẫu hồng - cầu để ứng dụng ngoại kiểm chất lượng xét nghiệm HbA1c Nghiên cứu đánh... học bệnh viện Chợ Rẫy dùng làm nguyên liệu để sản xuất mẫu HbA1c có nồng độ trung gian nồng độ cao kiểm tra nồng độ HbA1c phương pháp miễn dịch đo độ đục máy AU480 Trung Tâm Kiểm Chuẩn Chất Lượng