Nghiên cứu nấm stemphylium sp gây bệnh đốm nâu cà chua và đốm xám ớt tại hà nội và phụ cận

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐỖ THỊ THU TRANG NGHIÊN CỨU NẤM Stemphylium sp GÂY BỆNH ĐỐM NÂU CÀ CHUA VÀ ĐỐM XÁM ỚT TẠI HÀ NỘI VÀ PHỤ CẬN Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật Mã số: 60 62 01 12 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Đức Huy NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Đỗ Thị Thu Trang i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Đức Huy, người tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Bệnh cây, Khoa Nông học - Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Đỗ Thị Thu Trang ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục đồ thị ix Trích yếu luận văn x Thesis abstract xii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu .3 1.2.2 Phạm vi nghiên cứu Phần Tổng quan nghiên cứu .4 2.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất ớt, cà chua giới .4 2.1.1 Tình hình nghiên cứu, sản xuất cà chua Thế giới .4 2.1.2 Tình hình nghiên cứu, sản xuất ớt giới 2.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất cà chua, ớt Việt Nam 10 2.2.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ cà chua Việt Nam 10 2.3 Các bệnh ớt biện pháp phòng trừ 17 2.3.1 Bệnh thán thư (Colectochitrum sp.) 17 2.3.2 Bệnh đốm xám (Stemphylium sp.) 17 2.3.3 Bệnh khảm 17 2.3.4 Bệnh héo xanh (Ralstonia solanacearum) .18 2.4 Bệnh cà chua biện pháp phòng trừ .18 2.4.1 Bệnh đốm vòng cà chua 18 2.4.2 Bệnh đốm nâu 19 2.4.3 Bệnh khảm (xoăn lá) cà chua 20 2.4.4 Bệnh héo xanh cà chua (Ralstonia solanacearum) 20 iii 2.5 Các nghiên cứu nấm Stemphylium sp 22 2.5.1 Nghiên cứu nấm Stemphylium solani 27 2.5.2 Nghiên cứu nấm Stemphylium lycopersici 29 Phần Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu 30 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 30 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 30 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 30 3.1.3 Dụng cụ hóa chất nghiên cứu 30 3.2 Địa điểm nghiên cứu 30 3.3 Nội dung nghiên cứu 30 3.4 Phương pháp nghiên cứu 31 3.4.1 Phương pháp điều tra mức độ tính tỉ lệ bệnh 31 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu phịng thí nghiệm 32 3.4.3 Xác định nấm gây bệnh đốm xám kĩ thuật PCR giải trình tự vùng ITS nấm 34 3.4.4 Nghiên cứu đặc điểm hình thái nấm .35 3.4.5 Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm .36 3.4.6 Lây bệnh nhân tạo cà chua, ớt đánh giá phạm vi ký chủ nấm gây bệnh đốm nâu, đốm xám nhà lưới 36 3.4.7 Khảo sát hiệu lực ức chế số thuốc trừ nấm cà chua, ớt ( thuốc Score 250EC, Anvil 5SC nồng độ 0,001; 0,005; 0,01 ppm) phịng thí nghiệm ngồi ruộng sản xuất 37 3.5 Xử lý số liệu .38 Phần Kết nghiên cứu thảo luận 39 4.1 Kết điều tra thành phần bệnh hại, diễn biến bệnh đốm xám hại ớt đốm nâu hại cà chua Hà Nội .39 4.1.1 Kết điều tra thành phần bệnh hại ớt bệnh hại cà chua Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 39 4.1.2 Kết điều tra diễn biến bệnh đốm xám hại ớt đốm nâu cà chua Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 42 4.2 Kết phân lập xác định nấm gây bệnh đốm xám ớt đốm nâu cà chua 46 iv 4.2.1 Kết thu thập, phân lập nấm gây bệnh đốm nâu cà chua đốm xám ớt 46 4.2.2 Kết lây bệnh nhân tạo bệnh đốm xám ớt đốm nâu cà chua 48 4.2.3 Kết xác định nấm gây bệnh kỹ thuật PCR giải trình tự gene vùng ITS nấm gây bệnh 51 4.3 Đặc điểm hình thái, sinh học nấm Stemphylium lycopersici gây bệnh đốm xám ớt đốm nâu cà chua .55 4.3.1 Thử nghiệm tỷ lệ nảy mầm bào tử nấm Stemphylium lycopersici gây bệnh đốm xám ớt giọt nước .55 4.3.2 Thử nghiệm ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển nấm Stemphylium lycopersici gây bệnh đốm xám ớt 56 4.3.3 Thử nghiệm ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Stemphylium lycopersici gây bệnh đốm xám ớt .57 4.4 Kết thử nghiệm hiệu lực ức chế thuốc trừ nấm Stemphylium lycopersici 61 Phần Kết luận kiến nghị .67 5.1 Kết luận 67 5.2 Kiến nghị 68 Tài liệu tham khảo 69 Phụ lục 72 v DANH MỤC VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt WA Water agar PGA Potato Glucose agar PCA Potato carot agar FAO Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Bảng 2.2 Bảng 2.3 Bảng 2.4 Bảng 4.1 Tình hình sản xuất cà chua giới .6 Diện tích, sản lượng, suất cà chua châu lục năm 2012 Những nước có sản lượng cà chua cao giới năm 2012 Diện tích, suất sản lượng cà chua giai đoạn 2005-2012 10 Thành phần bệnh hại ớt Văn Đức, Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 .39 Bảng 4.2 Thành phần bệnh hại cà chua Văn Đức, Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 41 Bảng 4.3 Diễn biến bệnh đốm xám ớt thiên( Stemphylium sp.) Văn Đức, Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 .42 Bảng 4.4 Diễn biến bệnh đốm nâu hại cà chua Cổ Bi, Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 .44 Bảng 4.5 Các mẫu đốm xám ớt, đốm nâu cà chua thu thập phân lập nghiên cứu 46 Bảng 4.6 Kết lây bệnh nhân tạo nấm Stemphylium sp số giống ớt 49 Bảng 4.7 Kết lây bệnh nhân tạo nấm Stemphylium sp số giống cà chua .50 Bảng 4.8 Kết giải trình tự tìm kiếm chuỗi gần gũi ngân hàng gene (GenBank) mẫu nấm gây bệnh đốm xám ớt 52 Bảng 4.9 Các chủng nấm Stemphylium spp GenBank sử dụng nghiên cứu 53 Bảng 4.10 Khả nảy mầm bào tử nấm Stemphylium lycopersici .55 Bảng 4.11 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển nấm Stemphylium lycopersici môi trường PDA 56 Bảng 4.12 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Stemphylium lycopersici gây bệnh đốm xám ớt 58 Bảng 4.13 Ảnh hưởng pH môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Stemphylium lycopersici 60 Bảng 4.14 Kết khảo sát hiệu lực ức chế thuốc Score 250 EC nấm Stemphylium lycopersici môi trường PDA 62 Bảng 4.15 Kết khảo sát hiệu lực ức chế thuốc Anvil 5SC nấm Stemphylium lycopersici môi trường PDA 64 Bảng 4.16 Hiệu lực số thuốc trừ nấm bệnh đốm xám ớt nhà lưới phương pháp lây bệnh trước, phun thuốc sau 65 vii DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Thành phần bệnh hại ớt Văn Đức, Gia Lâm, Hà Nội 39 Hình 4.2 Thành phần bệnh hại cà chua Văn Đức, Gia Lâm, Hà Nội 41 Hình 4.3 Triệu chứng bệnh đốm xám (grey spot) giống ớt Chỉ thiên Văn Đức, Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 .43 Hình 4.4 Triệu chứng bệnh đốm nâu cà chua Cổ Bi, Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 45 Hình 4.5 Bào tử phân sinh nấm Stemphylium sp phân lập từ vết bệnh sử dụng kỹ thuật cấy đơn bào tử kim thủy tinh với hỗ trợ kính hiển vi 47 Hình 4.6 Lây bệnh nhân tạo nấm Stemphylium sp giống ớt 49 Hình 4.7 Lây bệnh nhân tạo nấm Stemphylium sp giống cà chua .51 Hình 4.8 Phân tích phả hệ dựa trình tự vùng ITS 03 mẫu nấm temphylium nghiên cứu 18 mẫu nấm Stemphylium sẵn có GenBank Phân tích thực theo phương pháp NeighborJoining với 1000 lần lặp (MEGA 7.0) Các mẫu Gia Lâm – Hà Nội thuộc nhóm Stemphylium lycopersici Thanh bar 0.20 54 Hình 4.9 Sự nảy mầm bào tử nấm Stemphylium lycopersici gây bệnh đốm xám ớt 56 Hình 4.10 Tản nấm môi trường nuôi cấy khác 59 viii DANH MỤC ĐỒ THỊ Đồ thị 4.1 Diễn biến bệnh đốm xám ớt thiên Văn Đức, Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 44 Đồ thị 4.2 Diễn biến bệnh đốm nâu hại cà chua Cổ Bi, Gia Lâm, Hà Nội vụ xuân hè 2017 45 Đồ thị 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển nấm Stemphylium lycopersici môi trường PDA 57 Đồ thị 4.4 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Stemphylium lycopersici gây bệnh đốm xám ớt 58 Đồ thị 4.5 Ảnh hưởng pH môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Stemphylium lycopersici 61 Đồ thị 4.6 Kết khảo sát hiệu lực ức chế thuốc Score 250 EC nấm Stemphylium lycopersici môi trường PDA 63 Đồ thị 4.7 Kết khảo sát hiệu lực ức chế thuốc Anvil 5SC nấm Stemphylium lycopersici môi trường PDA 65 Đồ thị 4.8 Hiệu lực số thuốc trừ nấm bệnh đốm xám ớt nhà lưới phương pháp lây bệnh trước, phun thuốc sau 66 ix PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Thành phần bệnh nấm hại cà chua, ớt vụ xuân - hè năm 2017 Hà Nội vùng phụ cận gồm bệnh: Đốm nâu, đốm vòng, thán thư, héo xanh, khảm lá, đốm xám Trong bệnh đốm nâu, đốm xám gây hại nặng Văn Đức, Hà Nội tỷ lệ bệnh lên đến 50% Còn bệnh héo xanh, khảm chiến tỉ lệ 10-25% Diễn biến bệnh đốm nâu cà chua đốm xám ớt diễn phức tạp Bệnh gây hại từ giai đoạn lá, đến hoa hình thành Bệnh gây hại nặng điều kiện nhiệt độ, ẩm độ cao, mật độ trồng dày lây lan mạnh giai đoạn Vì thế, gây hại làm ảnh hưởng đến mẫu mã, suất Đã thu thập làm 03 mẫu nấm Stemphylium gây bệnh đốm xám ớt đốm nâu cà chua Các mẫu nấm phân lập làm theo phương pháp cấy đơn bào tử Đã xác định nấm gây bệnh đốm xám ớt đốm nâu cà chua Stemphylium lycopersici dựa vào đặc điểm hình thái trình tự vùng ITS 03 nấm thu thập Đã thực lây nhiễm nhân tạo với mẫu nấm S lycopersici số giống ớt cà chua, thời gian tiềm dục bệnh ớt ngày cà chua 5-6 ngày Nấm S lycopersici phát triển môi trường WA, PDA, V8 juice, V8 juice + khoai tây Tuy nhiên, môi trường V8 juice V8 juice + khoai tây, nấm phát triển nhanh Sau ngày nuôi cấy, đường kính tản nấm phát triển 75 – 80 mm Thử nghiệm nảy mầm bào tử nấm S lycopersici nước cất điều kiện 25oC cho thấy bào tử nấm S lycopersici nảy mầm sau 15 phút (tỷ lệ nảy mầm 30%) sau 30 phút, tỷ lệ nảy mầm 100% Các thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ pH môi trường ni cấy cho thấy, nấm S lycopersici phát triển 20-35oC, pH4-8 tốt 20-25oC pH6-7 Đường kính tản nấm 90 mm sau ngày nuôi cấy Thử nghiệm hiệu lực ức chế thuốc trừ nấm đến phát triển nấm S 67 lycopersici điều kiện in vitro cho thấy thuốc Score 250EC nồng độ 0.01 ức chế nấm S lycopersici tốt thuốc Anvil 5SC nồng độ sau 10 ngày 10 Thử nghiệm phòng trừ bệnh đốm xám ớt nhà lưới cho kết tương ự phịng thí nghiệm Thuốc Score 250EC (hiệu lực 79,9%) cho hiệu lực phòng trừ bệnh tốt thuốc Anvil 5SC (hiệu lực 71,5%) 5.2 KIẾN NGHỊ Thử nghiệm phòng trừ bệnh số thuốc hóa học thuốc sinh học bán rộng rãi thị trường để có khuyến cáo thích hợp cho người nơng dân Tiếp tục khảo sát khả phòng trừ bệnh chế phẩm sinh học điều kiện nhà lưới đồng ruộng Tìm điều kiện thích hợp thuận lợi cho nấm tạo bào tử môi trường nuôi cấy 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2005) Khoa học công nghệ nông nghiệp phát triển nông thôn 20 năm đổi Nhà xuất Chính trị Quốc Gia, Hà Nội tr 40-56 Lê Thị Thanh Long (2015) Điều tra bệnh nấm hại cà chua biện pháp phịng trừ vụ Đơng năm 2014 Hà Nội tr 59 - 60 Nguyễn Hồng Minh (1999) Giống cà chua chịu nhiệt MV1 Báo cáo công nhận giống Nguyễn Hồng Minh (2007) Các giống cà chua lai thương hiệu HT Những tiến kỹ thuật giai đoạn 2001-2006 Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội tr.5-9 Nguyễn Hồng Minh (2007) Phát triển sản xuất cà chua lai F1 trồng trái vụ chất lượng cao góp phần thay giống nhập Báo cáo tổng kết dự án sản xuất thử nghiệm cấp Nguyễn Văn Luật (2008) Rau gia vị, kỹ thuật trồng, làm thuốc nam nấu nướng Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Văn Tuất (2016) Hướng dẫn kỹ thuật sản xuất cà chua an toàn theo Vietgap Nguyễn Văn Viên, Đỗ Tấn Dũng (2005) Bệnh hại cà chua nấm, vi khuẩn biện pháp phòng chống Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Phạm Hồng Quảng, Lê Quý Tường, Nguyễn Quốc Lý (2005) Kết điều tra giống trồng nước năm 2003-2004 Khoa học công nghệ nông nghiệp phát triển nông thôn 20 năm đổi Trồng trọt Bảo vệ thực vật Nhà xuất Chính trị quốc gia, Hà Nội 10 Phan Hải Nam (2014) Nghiên cứu bệnh đốm vòng Alternaria solani đốm nâu Stemphylium solani hại cà chua vụ đông 2014 Vĩnh Phúc tr 45-47 11 Tạ Thu Cúc (1985) Khảo sát số giống cà chua nhập nội trồng vụ xuân hè đất Gia Lâm - Hà Nội Khoa học kỹ thuật nông nghiệp Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 12 Tạ Thu Cúc (2002) Kỹ thuật trồng cà chua Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội tr 12 13 Tạ Thu Cúc, Hồ Hữu An, Nghiêm Thị Bích Hà (2000) Giáo trình rau Nhà xuất Nơng nghiệp, Hà Nội tr 117-145 69 14 Tạ Thu Cúc, Nguyễn Thành Quỳnh (1983) Kỹ thuật trồng cà chua Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội tr 29, 41-58 15 Trần Thế Tục, Nguyễn Ngọc Kính (2015) Kỹ thuật trồng số rau giàu Vitamin Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Tài liệu nước ngoài: CABI (2017) Stemphylium solani (gray leaf spot) basic datasheet Crop Protection Compendium http://www.cabi.org/cpc/datasheet/51531 28/09/2017 Cedeño L and C Carrero (1997) First report of tomato gray leaf spot caused by Stemphylium solani in the Andes region of Venezuela Plant Dis 81 pp.1332-1332 Cerkauskas R (2005) Tomato diseases, Gray leaf spot, Stemphylium solani, S lycopersici found worldwide in warm climates AVRDC - The World Vegetable Center Fact Sheet AVRDC Publication 05-634 Ellis M B (1971) Dematiaceous hyphomycetes Kew: Common wealth Mycological Institute pp 608 Ellis M B., I A S Gibson (1975a) Stemphylium lycopersici CMI Descriptions of Pathogenic Fungi and Bacteria No 471 Ellis M B., I A S Gibson (1975b) Stemphylium solani CMI Descriptions of Pathogenic Fungi and Bacteria No 472 Enjoji S (1931) Two diseases of tomato i n Japanese J Plant Port 18 pp 48-53 FAO (1990) Soiless culture for horticultural crops production FAO Plant production and protection pepper FA Rome pp 101- 188 Jone D A., M J Dickkinson., P Balint –Kurti., M Dixson, and J D G Jone (1993) Two complex restance loci revealed in tomato by Jones J P., K L Pernezny., J B Jones , T A Zitter , T M Momol , S A Miller , and APS Press (2014) Gray Leaf Spot In Compendium of Tomato Disease and Pests Second Edition The American Phytopathological Society pp 29-30 10 Kim B.S., S H Yu.,H J Cho and H.S Hwang (2004) Gray leaf spot in peppers caused by Stephylium solani and Stephylium lycopersici Plant Pathol J 20 pp 85-91 11 Koike S T., P Gladders, and A O Paulus (2007) Stemphylium solani, S lycopersici - gray leaf spot In Vegetables diseases a color handbook Academic Press, an imprint of Elsevier, Burlington, San Diego pp 211-212 70 12 Min J Y., B S Kim, K W Cho and S H Yu (1995) Grey leaf spot caused by Stephylium lycopersici on tomato plants Plant Pathol J 11 pp 282-284 13 Nasehi A., J B Kadir, M Nasr Esfahani, F Abed Ashtiani, M Y Wong, S K Rambe and E Golkhandan (2014a) Analysis of genetic and virulence variability of Stemphylium lycopersici asscociated with leaf spot of vegetable crops Eur J Plant Pathol 140 pp.261-273 14 Nasehi A., J B Kadir, M.A Zainal, M Y Wong and Mahmodi (2012) First report of tomato gray leaf spot disease caused by Stemphylium solani in Malaysia department of Plant protection Faculty of Agriculture University Putra Malaysia 15 Nasehi A., J.B Kadir, M Nasr Esfahani, F Mahmodi, E Golkhandan, S Akter and H Ghadirian (2014b) Cultural and physiological characteristics of Stemphylium lycopersici causing leaf blight disease on vegetable crops Arch Phytopathology Plant Protect 47 pp.1658-1665 16 Tomioka K and T Sato (2011) Fruit rot of sweet pepper caused by Stemphylium lycopersici in Japan J General Plant Pathol 77 pp 342 – 344 17 Wang Y., Y Geng, Y F Pei and X G Zhang (2010) Molecular and morphological description of two new species of Stemphylium from China and France Mycologia 102 pp 708-717 Wang Y and X G Zhang (2009) Two new species of stemphylium from Northwest China Mycological Progress 8(4) pp 301-304 18 Weber G F (1930) Gray leaf spot of tomato caused by Stemphylium solani Phytopathology 205 pp 13-518 19 Yang H H., X Y Xu., T T Zhao., J B Jiang., G Liu, and J F Li College of Horticulture, Northeast Agricultural University, Xiangfang District, Harbin 150030, Chi na Number pp 834 20 Zheng L., J B Huang and T Hsiang (2008) First report of leaf blight of garlic (Allium Sativum) caused by Stemphylium solani in China Plant Pathology 57 pp 380 71 PHỤ LỤC BALANCED ANOVA FOR VARIATE 1NSC FILE TRAGND 27/9/17 11:14 :PAGE ANH HUONG CUA NHIET DO DEN STEM VARIATE V003 1NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.375000.187500 0.57 0.594 CT$ 144.167 48.0556 147.24 0.000 * RESIDUAL 1.95832.326387 * TOTAL (CORRECTED) 11 146.500 13.3182 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 3NSC FILE TRAGND 27/9/17 11:14 :PAGE ANH HUONG CUA NHIET DO DEN STEM VARIATE V004 3NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.291667.145833 0.32 0.738 CT$ 966.729 322.243 713.88 0.000 * RESIDUAL 2.70837.451395 * TOTAL (CORRECTED) 11 969.729 88.1572 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 5NSC FILE TRAGND 27/9/17 11:14 :PAGE ANH HUONG CUA NHIET DO DEN STEM VARIATE V005 5NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== 72 NL 2.62500 1.31250 2.45 0.166 CT$ 2595.73 865.243 ****** 0.000 * RESIDUAL 3.20795.534659 * TOTAL (CORRECTED) 11 2601.56 236.506 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 7NSC FILE TRAGND 27/9/17 11:14 :PAGE ANH HUONG CUA NHIET DO DEN STEM VARIATE V006 7NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.499999.249999 1.00 0.424 CT$ 5324.06 1774.69 ****** 0.000 * RESIDUAL 1.49999.249998 * TOTAL (CORRECTED) 11 5326.06 484.188 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 9NSC FILE TRAGND 27/9/17 11:14 :PAGE ANH HUONG CUA NHIET DO DEN STEM VARIATE V007 9NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.291666.145833 2.34 0.177 CT$ 6413.56 2137.85 ****** 0.000 * RESIDUAL 6.374179.623632E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 6414.23 583.112 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TRAGND 27/9/17 11:14 :PAGE ANH HUONG CUA NHIET DO DEN STEM MEANS FOR EFFECT NL - 73 NL NOS 1NSC 3NSC 5NSC 7NSC 16.3750 32.1250 46.7500 63.1250 16.3750 32.2500 47.8750 63.6250 16.7500 32.5000 47.5000 63.3750 SE(N= 4) 0.285651 0.335930 0.365602 0.249999 5%LSD 6DF 0.988113 1.16203 1.26468 0.864787 NL NOS 9NSC 75.5000 75.2500 75.6250 SE(N= 4) 0.124863 5%LSD 6DF 0.431922 - MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS 1NSC 3NSC 5NSC 7NSC 20.1667 41.0000 60.6667 82.0000 18.0000 36.6667 54.3333 76.0000 3 17.0000 34.1667 52.0000 67.5000 10.8333 17.3333 22.5000 28.0000 SE(N= 3) 0.329842 0.387898 0.422161 0.288674 5%LSD 6DF 1.14097 1.34180 1.46032 0.998570 CT$ NOS 9NSC 90.0000 90.0000 3 86.3333 35.5000 SE(N= 3) 0.144180 5%LSD 6DF 0.498740 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TRAGND 27/9/17 11:14 :PAGE 74 ANH HUONG CUA NHIET DO DEN STEM F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL |CT$ | (N= 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | 1NSC 12 16.500 3.6494 0.57130 3.5 0.5945 0.0000 3NSC 12 32.292 9.3892 0.67186 2.1 0.7380 0.0000 5NSC 12 47.375 15.379 0.73120 1.5 0.1658 0.0000 7NSC 12 63.375 22.004 0.50000 0.8 0.4237 0.0000 9NSC 12 75.458 24.148 0.24973 0.3 0.1770 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 1NSC FILE TMTR 27/9/17 11: :PAGE ANH HUONG CUA MOI TRUONG DEN STEM VARIATE V003 1NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.400000.200000 1.45 0.289 CT$ 225.600 56.4000 410.18 0.000 * RESIDUAL 1.10002.137502 * TOTAL (CORRECTED) 14 227.100 16.2214 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 3NSC FILE TMTR 27/9/17 11: :PAGE ANH HUONG CUA MOI TRUONG DEN STEM VARIATE V004 3NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.633333.316667 1.36 0.311 CT$ 1960.43 490.108 ****** 0.000 75 * RESIDUAL 1.86677.233346 * TOTAL (CORRECTED) 14 1962.93 140.210 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 5NSC FILE TMTR 27/9/17 11: :PAGE ANH HUONG CUA MOI TRUONG DEN STEM VARIATE V005 5NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 1.60000.799999 1.88 0.213 CT$ 4289.50 1072.37 ****** 0.000 * RESIDUAL 3.40030.425038 * TOTAL (CORRECTED) 14 4294.50 306.750 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 7NSC FILE TMTR 27/9/17 11: :PAGE ANH HUONG CUA MOI TRUONG DEN STEM VARIATE V006 7NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.700000.350000 1.71 0.240 CT$ 7101.77 1775.44 ****** 0.000 * RESIDUAL 1.63388.204236 * TOTAL (CORRECTED) 14 7104.10 507.436 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 9NSC FILE TMTR 27/9/17 11: :PAGE ANH HUONG CUA MOI TRUONG DEN STEM VARIATE V007 9NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN 76 =========================================================== NL 2.333333E-01.166667E-01 1.00 0.412 CT$ 4788.27 1197.07 ****** 0.000 * RESIDUAL 8.133687.167109E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 4788.43 342.031 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TMTR 27/9/17 11: :PAGE ANH HUONG CUA MOI TRUONG DEN STEM MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS 1NSC 3NSC 5NSC 7NSC 13.7000 34.8000 52.4000 65.7000 13.9000 34.5000 51.6000 65.2000 14.1000 35.0000 52.0000 65.3000 SE(N= 5) 0.165832 0.216031 0.291561 0.202107 5%LSD 8DF 0.540763 0.704454 0.950750 0.659049 NL NOS 9NSC 71.0000 71.1000 71.1000 SE(N= 5) 0.578115E-01 5%LSD 8DF 0.188518 - MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS 1NSC 3NSC 5NSC 7NSC 8.16667 14.3333 19.0000 22.1667 16.5000 42.8333 61.5000 77.3333 3 11.1667 32.5000 54.3333 72.5000 14.5000 36.6667 59.3333 75.0000 19.1667 47.5000 65.8333 80.0000 SE(N= 3) 0.214089 0.278895 0.376403 0.260919 77 5%LSD 8DF 0.698122 0.909447 1.22741 0.850829 CT$ NOS 9NSC 35.3333 80.0000 3 80.0000 80.0000 80.0000 SE(N= 3) 0.746344E-01 5%LSD 8DF 0.243375 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TMTR 27/9/17 11: :PAGE ANH HUONG CUA MOI TRUONG DEN STEM F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | 1NSC 15 13.900 4.0276 0.37081 2.7 0.2894 0.0000 3NSC 15 34.767 11.841 0.48306 1.4 0.3113 0.0000 5NSC 15 52.000 17.514 0.65195 1.3 0.2133 0.0000 7NSC 15 65.400 22.526 0.45192 0.7 0.2398 0.0000 9NSC 15 71.067 18.494 0.12927 0.2 0.4124 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 2NSC FILE TRAGPH 27/9/17 10:57 :PAGE ANH HUONG PH DEN STEM VARIATE V003 2NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.400000.200000 1.26 0.334 CT$ 108.733 27.1833 171.68 0.000 78 * RESIDUAL 1.26667.158334 * TOTAL (CORRECTED) 14 110.400 7.88571 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 4NSC FILE TRAGPH 27/9/17 10:57 :PAGE ANH HUONG PH DEN STEM VARIATE V004 4NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 1.63333.816666 4.26 0.055 CT$ 903.067 225.767 ****** 0.000 * RESIDUAL 1.53337.191671 * TOTAL (CORRECTED) 14 906.233 64.7310 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 6NSC FILE TRAGPH 27/9/17 10:57 :PAGE ANH HUONG PH DEN STEM VARIATE V005 6NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.42800 1.21400 4.39 0.051 CT$ 3318.28 829.569 ****** 0.000 * RESIDUAL 2.21193.276491 * TOTAL (CORRECTED) 14 3322.92 237.351 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 8NSC FILE TRAGPH 27/9/17 10:57 :PAGE ANH HUONG PH DEN STEM VARIATE V006 8NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN 79 =========================================================== NL 1.30000.649999 1.81 0.223 CT$ 4404.33 1101.08 ****** 0.000 * RESIDUAL 2.86600.358250 * TOTAL (CORRECTED) 14 4408.50 314.893 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 10NSC FILE TRAGPH 27/9/17 10:57 :PAGE ANH HUONG PH DEN STEM VARIATE V007 10NSC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN =========================================================== NL 2.900000.450000 2.25 0.167 CT$ 4530.10 1132.53 ****** 0.000 * RESIDUAL 1.59963.199954 * TOTAL (CORRECTED) 14 4532.60 323.757 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TRAGPH 27/9/17 10:57 :PAGE ANH HUONG PH DEN STEM MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 2NSC 4NSC 6NSC 8NSC 10.0000 25.5000 43.6200 48.7000 10.2000 26.2000 44.2000 48.9000 10.4000 26.2000 44.6000 49.4000 SE(N= 5) 0.177952 0.195791 0.235156 0.267675 5%LSD 8DF 0.580282 0.638455 0.766819 0.872862 NL NOS 10NSC 58.8000 59.1000 59.4000 SE(N= 5) 0.199977 80 5%LSD 8DF 0.652105 - MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 2NSC 4NSC 6NSC 8NSC 5.16667 10.8333 17.3333 31.5000 11.1667 27.5000 51.0333 30.8333 3 12.5000 30.5000 60.0000 65.6667 12.3333 32.5000 52.5000 72.1667 9.83333 28.5000 39.8333 44.8333 SE(N= 3) 0.229735 0.252765 0.303585 0.345567 5%LSD 8DF 0.749141 0.824242 0.989960 1.12686 CT$ NOS 10NSC 42.1667 42.1667 3 80.0000 80.0000 51.1667 SE(N= 3) 0.258169 5%LSD 8DF 0.841864 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TRAGPH 27/9/17 10:57 :PAGE ANH HUONG PH DEN STEM F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | 2NSC 15 10.200 2.8082 0.39791 3.9 0.3344 0.0000 4NSC 15 25.967 8.0456 0.43780 1.7 0.0546 0.0000 6NSC 15 44.140 15.406 0.52582 1.2 0.0513 0.0000 8NSC 15 49.000 17.745 0.59854 1.2 0.2235 0.0000 10NSC 15 59.100 17.993 0.44716 0.8 0.1669 0.0000 81 ... LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu - Bệnh đốm nâu cà chua - Bệnh đốm xám ớt 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu - Mẫu bệnh đốm nâu cà chua. .. nấm Stemphylium sp gây bệnh đốm nâu cà chua đốm xám ớt Hà Nội phụ cận? ?? 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.2.1 Mục tiêu Xác định, nghiên cứu đặc điểm sinh học, phân tử, đánh giá tính gây bệnh nấm Stemphylium. .. Kết thu thập, phân lập nấm gây bệnh đốm nâu cà chua đốm xám ớt 46 4.2.2 Kết lây bệnh nhân tạo bệnh đốm xám ớt đốm nâu cà chua 48 4.2.3 Kết xác định nấm gây bệnh kỹ thuật PCR giải