Xử lí lá mía làm phân bón hữu cơ và giải quyết ô nhiễm môi trường nông thôn bằng biện pháp vi sinh vật

PHẦN I THÔNG TIN CHUNG 1.1 Tên đề tài: Nghiên (γ-aryl)pyridinoazacrao ete cứu tổng hợp hoạt tính sinh học 1.2 Mã số: QG.16.05 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài TT Chức danh, học vị, họ tên Đơn vị công tác Vai trị thực đề tài Khoa Hóa-Trường ĐHKHTN, ĐHQGHN Chủ nhiệm đề tài TS Đào Thị Nhung nt Thành viên NCS Nguyễn Thị Thanh Phượng nt Thành viên CN Bùi Thị Vân nt Thành viên PGS TS Lê Tuấn Anh nt Thành viên TS Trần Thị Thanh Vân 1.4 Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Khoa học Tự nhiên 1.5 Thời gian thực hiện: 1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 01 năm 2016 đến tháng 01 năm 2018 1.5.2 Thực thực tế: từ tháng 01 năm 2016 đến tháng 01 năm 2018 1.6 Tổng kinh phí phê duyệt đề tài: 300 triệu đồng PHẦN II TỔNG QUAN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 2.1 Đặt vấn đề Hóa học hợp chất pyridine hình thành phát triển gần 200 năm số gần 2000 loại thuốc hóa dược sử dụng rộng dãi thực tiễn điều trị, loại thuốc chứa nhân pyridine chiếm 5% [1] Hiện nay, nhà khoa học khơng ngừng tìm kiếm tạo loại thuốc dựa tảng nhân pyridine nhằm ứng dụng hoạt tính sinh học hữu ích điều trị, đặc biệt liệu pháp hóa trị liệu chống ung thư Các dẫn xuất đa nhóm pyridine, đặc biệt dẫn xuất γ-arylpyridine phân nhóm dị vịng với ứng dụng quan trọng (được sử dụng làm thuốc điều trị bệnh sốt rét, chống động kinh, thuốc giảm đau, giãn mạch, chống ung thư; sử dụng nông nghiệp với vai trò thuốc diệt nấm, trừ sâu, diệt cỏ, …) [2-6] Vì vậy, nghiên cứu phát triển phương pháp tổng hợp nghiên cứu ứng dụng dẫn xuất thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học, nghiên cứu lĩnh vực hóa dược, tổng hợp hợp chất có hoạt tính sinh học, Dẫn xuất pyridine đa nhóm thường tổng hợp từ hợp chất ban đầu chứa nhóm chức xeton, aldehyde amin (có thể ammoni acetat, ure, thioure, guanidine, ) điều kiện phản ứng xúc tác khác Kể từ những năm 1980, với sự phát triể n của hoá ho ̣c tổ hơ ̣p , ngành tổng hợp hữu đã có đươ ̣c những tiế n bô ̣ rõ rê ̣t , góp phầ n bở sung và hoàn thiê ̣n những thư viê ̣n chấ t nhằm phục vụ cho nghiên cứu phát triển hợp chất có hoạt tính sinh học cao , sở đó tim ̀ các hoa ̣t chấ t dẫn đường phu ̣c vu ̣ nghiên cứu và phát triể n thuố c… Bên ca ̣nh viê ̣c áp du ̣ ng kỹ thuật phân tích, kiể m tra hoa ̣t tính nhanh thì mô ̣t công cu ̣ quan tro ̣ng đươ ̣c áp du ̣ng và thu hút quan tâm nhà hố học phương pháp tổng hợp dựa phản ứng ngưng tụ đa tác nhân Phản ứng ngưng tụ đa tác nhân đánh giá tiết kiệm thời gian, lượng hóa chất, dung mơi, qua bước, với phương pháp tiến hành đơn giản, không cần thiết tách loại chất trung gian, thu hợp chất mong muốn Cách 50 năm, Pedersen đặt móng cho hóa học crown ether, hướng nghiên cứu phát triển mạnh mẽ có nhiều ứng dụng kỹ thuật, công nghệ đời sống Những ứng dụng rộng rãi crown ether kể đến lĩnh vực nghiên cứu phức chất, xúc tác chuyển pha, vai trò chất “vận chuyển” ion Cho đến nay, người ta tổng hợp nhiều đại dị vịng crown ether, có xuất dị tố khác ngồi ngun tử oxy ví dụ nitơ, lưu huỳnh … Với có mặt vài nguyên tử nitơ, azacrown ether thu với nhiều tính chất đặc biệt tăng khả tạo phức, độ bền độ chọn lọc với ion kim loại [7-9] Với ưu điểm phản ứng ngưng tụ đa tác nhân, hoạt tính đáng quý dẫn xuất đa nhóm pyridine, đặc biệt dẫn xuất γ-arylpyridine nhóm nghiên cứu ứng dụng phương pháp tổng hợp để tổng hợp nên hợp chất crown ether có chứa nhân γ-arylpyridine với mong muốn chúng có hoạt tính sinh học cao, sử dụng nghiên cứu ứng dụng làm thuốc chống số loại ung thư 2.2 Mục tiêu Các nghiên cứu tích hợp đồng thời vòng crown ether dị vòng tập trung phát triển Trên sở kết đạt được, áp dụng kỹ thuật phản ứng ngưng tụ đa tác nhân, đặt mục tiêu tổng hợp dẫn xuất azacrown ether có chứa nhân γ-arylpyridine vòng crown ether Căn tương đồng cấu trúc với hợp chất crown ether có hoạt tính sinh học cao nghiên cứu, azacrown ether có khả thể hoạt tính gây độc tế bào cao Nghiên cứu sử dụng phương pháp chiếu xạ vi sóng nhằm thu sản phẩm với hiệu suất cao thân thiện với môi trường Cụ thể mục tiêu đặt sau:  Xây dựng phương pháp tổng hợp đa tác nhân dẫn xuất chứa nhân γ- arylpyridine Tổng hợp xác định cấu tạo tiền chất 1,5-bis(2acetylphenoxy)-3-oxapentan 1,8-bis-(2-acetophenoxy)-3,6-dioxaoctane Tổng hợp 10 dẫn xuất tinh khiết chứa nhân γ- arylpyridine vòng azacrown ether  Nghiên cứu thử nghiệm hoạt tính sinh học sản phẩm thu 2.3 Phương pháp nghiên cứu a) Phương pháp tổng hợp tiến tiến, thân thiện với môi trường - Sử dụng kỹ thuật tổng hợp dựa phản ứng ngưng tụ đa tác nhân - Kết hợp với phương pháp chiếu xạ vi sóng [11], khơng sử dụng dung mơi (solvent free) Các chuyển hóa định hướng tổng hợp trình bày sơ đồ sau Sơ đồ 1: Tổng hợp tiền chất diketon Ký hiệu K3 Ký hiệu K4 Sơ đồ 2: Tổng hợp dẫn xuất γ-(2-R-phenyl)pyridineazacrown ether γ-(4-R-phenyl)pyridineazacrown ether Sơ đồ 3: Tổng hợp dẫn xuất γ-heteropyridineazacrown ether Het O O CHO Me Me O Het + NH4OAc O AcOH, 1120C, 6-12h O N O O O n n b) Xác định cấu trúc độ sản phẩm tổng hợp được: - Sử dụng phương pháp phân tách đại: sắc kí lớp mỏng, sắc kí cột để tách, kết tinh lại nhằm tinh chế sản phẩm - Sử dụng phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao, sắc khí lỏng ghép nối khối phổ (LC/MS) để kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm - Xác định cấu trúc sản phẩm phương pháp phổ đại như: phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, số chất xác định cấu trúc phương pháp X-ray đơn tinh thể [10] Các phương pháp phân tích tinh chế sử dụng thiết bị khoa Hóa học, trường ĐHKHTN, ĐHQGHN c) Các phương pháp thử hoạt tính sinh học - Thử hoạt tính gây độc tế bào thử dòng tế bào ung thư (ung thư gan người Hep-G2, tế bào ung thư biểu mô RD, ung thư phổi Lu ung thư vú MCF-7, ) kết xác định phương pháp ELISA bước sóng 515 nm - Những chất có hoạt tính tốt nghiên cứu sâu qua việc xác định số IC50 2.4 Tổng kết kết nghiên cứu 2.4.1 Kết tổng hợp chất 2.4.1.1 Kết tổng hợp tiền chất điketon - Tiền chất 1,5-bis(2-acetylphenoxy)-3-oxapentan (K3) 1,8-bis-(2-acetylphenoxy)-3,6dioxaoctane (K4) tổng hợp theo sơ đồ sau: Ký hiệu K3 Ký hiệu K4 Quy trình: Cho 20g KI 20g K2CO3 vào bình nón thể tích 250ml có lắp sinh hàn hồi lưu nhiệt kế, sau thêm 100ml DMF, khuấy đều, giữ nhiệt độ hệ 30 0C 20 phút Thêm từ từ 14ml (120mmol) 2’-hydroxyl acetophenon, dung dịch chuyển sang màu vàng chanh, tăng nhiệt độ lên 800C Nhiệt độ hệ phản ứng giữ 800C Sau đó, nhỏ từ từ 8ml dichlordiethyl ether (60mmol) 1,2-bis(2-chloroethoxy) (60mmol) vào dung dịch tiếp tục nhiệt lên 1150 giữ khoảng 15 Sau kiểm tra sắc ký mỏng để chắn phản ứng xảy hoàn toàn, hỗn hợp phản ứng đưa nhiệt độ phòng đổ vào 1000ml nước lạnh Lọc hút kết tủa tạo thành phễu lọc Busner Sản phẩm kết tinh lại ethanol thu tinh thể - Hiệu suất phản ứng tổng hợp K3 đạt 53%, giá trị Rf= 0,67 (n-hexan/ethyl acetat 1/1 v/v), nhiệt độ nóng chảy tnc= 66-670C Cấu tạo K3 khẳng định phương pháp phổ hồng ngoại (IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân1H-NMR phổ khối lượng MS - Hiệu suất phản ứng đạt 60%, giá trị Rf= 0,60 (n-hexan/ ethyl acetat 1/1 v/v), nhiệt độ nóng chảy tnc= 79-800C Bảng 1: Bảng kết tổng hợp tiền chất điketon STT Số liệu Chất 1,5-bis(2-acetylphenoxy)- Chất 1,8-bis-(2-acetylphenoxy)- 3-oxapentan (K3) 3,6-dioxaoctane (K4) Hiệu suất T0nc Rf IR NMR 53%, 60% 66-670C 79-800C Rf= 0,67 (n-hexan/ethyl acetat 1/1 0,60 (n-hexan/ethyl acetat 1/1 v/v), v/v) C=O 1668 cm-1 với cường độ C=O 1670 cm-1, dao động hóa trị mạnh nhóm C=C aryl 1595cm-1 1487cm-1 δ= 3,95 ppm (t; 4H; δ = 2,64 ppm (s, 6H, -CH2CH2O) ; δ= 4,24 ppm (t; 4H; - -COCH3); OCH2CH2-); δ= 2,62 ppm hai nhóm δ = 3,72 (s, 4H, -OCH2CH2- ); -CO-CH3 tương ứng với 6H; δ = 3,72 3,89 (t, 4H, -OCH2CH2-); δ= 6,94-7,73 ppm tín hiệu cộng δ = 3,72 4,21 (t, 4H hưởng Hthơm OCH2CH2-); δ = 6,93 (d, 2H, H-benzen ); δ = 6,99 (t, 2H, H-benzen); δ = 7,43 (d-t, 2H, H-benzen); δ = 7,73 (d-d, 2H, H-benzen) 2.4.1.2 Kết tổng hợp dẫn xuất dẫn xuất [γ-(2-R-phenyl)pyridino]azacrown ether, [γ-(3-R-phenyl)pyridino]azacrown ether [γ-(4-R-phenyl)pyridino]azacrown ether a) Tổng hợp dẫn xuất [γ-(2-R-phenyl)pyridino]azacrown ether (3 chất ký hiệu Ia, Ib, Ic) - Sơ đồ chung: - Quy trình: Dung dịch gồm hỗn hợp mmol (1,71 g) dixeton (K3), mmol o-cloro benzaldehyde o-hydroxyl benzaldehyde hay o-metoxyl benzaldehyde 0,13 mol (10,0 g) amoni acetat ml acid acetic băng đun sơi hồi lưu tiếng bình tam giác máy khuấy từ gia nhiệt Hỗn hợp phản ứng sau làm lạnh trung hịa dung dịch xô đa (30%) đến pH= 7- Sản phẩm phản ứng tách chiết dung môi ethyl acetat (4*30 ml) Dịch chiết sau thu gom, làm khô Mg2SO4 cho bay áp xuất thấp Sản phẩm phân tách phương pháp sắc ký cột silica gel (dung môi rửa giải ethyl acetat) kết tinh lại ethanol Kết tổng hợp cho bảng 2, thông số phổ cho bảng Bảng 2: Đặc tính hóa lý liệu phổ sản phẩm Ia, Ib Ic Ký hiệu chất Ia (2-Cl) Cơng thức phân tử Nhiệt độ nóng chảy(oC) Rf C27H22ClNO3 172- 174 0,42 Hiệu Dữ liệu phổ Dữ liệu phổ suất (H%) khối lượng, MS (m/z) hồng ngoại, IR (cm-1) 43% 444 (M+H) 466 (M+23) [M=443 (Cl35); 445 (Cl37)] 1249 (C-O-C); 1596 (C=Caryl) 1255 (C-O-C); Ib (2-OH) Ic (2-OMe) C27H23NO4 C30H29O5N 225- 226 0,63 179,2181,7 0,48 37% 22% 424 (M-H) 1593 (C=Caryl); 426 (M+H) 3060, 3481 (OH) 1295 (C-O-C) 484 (M+H) 1573( C=Caryl) Bảng 3: Các liệu đặc trưng phổ 1H-NMR Dữ liệu đặc trưng 1H-NMR Ký hiệu (dung môi)* Ia (2-Cl) H4-aryl Hpyridine NHdibenzo Hether (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) 7,52 (1H, m, H30); 7,47 (1H, m, H29); 7,33– 7,38 (2H, m, 6,95 (2H, d, J3= 8,5 7,46 (2H, s, H22,24) Hz, H6,16); 7,00 (2H, t, J3= 7,5 Hz;H4,18); 7,33– 7,38 (4H, m, H3,19; H5,17); H30,28) Ib (2-OH) 6,68 (1H, d, J3= 8,0 Hz, H31); 6,83 (1H, t, J3= 7,5 Hz, H29); 7,04 (1H, t, J3= 7,0 Hz, H28); 7,22– 7,48 (2H, s, H22,24) 6,80 (2H, d, J3= 8,0 Hz, H6,16); 6,91 (2H, t, J3= 7,5 Hz; H4,18); 7,22 – 7,30 (4H, m, H3,19; H5,17); Các H khác (ppm) 3,88 (4H, m, H9,13); 4,16 (4H, m, H10,12) 3,70 (4H, m, H9,13); 4,02 (4H, m, H10,12) 7,30 (1H, H30); 7.67-7.65 (2H, d-d) 7.48-7.46 Ic (2-OMe) (1H, d-d) 7.40739 (1H, m) 7.1 (2H, s, H25,27) 7.37-7.34 (2H, m) 7.13-7.09 (3H, m) 7.04-7.02 (1H, d) 7.0-6.98 (2H, d) 4.12 (4H, t, J= 8Hz) 3.65 (4H, t, J= 8Hz) 3.25 (4H, s) 3.85 (3H, s, HOMe) b) Tổng hợp dẫn xuất [γ-(3-R-phenyl)pyridino]azacrown ether (3 chất ký hiệu (IIa, IIb, IIc) - Sơ đồ chung: - Quy trình tổng hợp: Dung dịch gồm hỗn hợp mmol (1,71 g) diketon K3, mmol m-chloro benzaldehyde m-bromo benzaldehyde hay m-nitro benzaldehyde 0,13 mol (10,0 g) ammonium acetate ml acid acetic băng đun sôi hồi lưu tiếng bình tam giác máy khuấy từ gia nhiệt Hỗn hợp phản ứng sau làm lạnh trung hòa dung dịch sodium carbonate (30%) đến pH= 7- Sản phẩm phản ứng tách chiết dung môi ethyl acetate (4*30 ml) Dịch chiết sau thu gom, làm khô MgSO4 cho bay áp suất thấp Sản phẩm phân tách phương pháp sắc ký cột silica gel (dung môi rửa giải ethyl acetate) kết tinh lại ethanol Kết tổng hợp cho bảng 4, thông số phổ cho bảng Bảng 4: Các liệu đặc trưng chất IIa, IIb, IIc Ký hiệu chất Cơng thức phân tử Nhiệt độ nóng chảy (oC) Rf* Hiệu suất (H%) IIa (3-Cl) C27H22ClNO3 180-181 0,71 45% IIb (3-Br) C27H22BrNO3 193-194 0,57 40% IIc (3-NO2) C27H22N2O5 232-233 0,44 49% Dữ liệu phổ khối lượng, MS (m/z) Dữ liệu phổ hồng ngoại, IR (cm-1) 444, 446 (M+H) 1250 (C-O-C), [M= 443 (Cl35), 1590 445 (C=Caryl) (Cl 37)] 488, 490 (M+H) 1223 (C-O-C), [M= 488 (Br79), 1562 490 (C=Caryl) (Br81)] 1252 (C-O-C), 455 (M+H) 1594 (C=Caryl) Bảng 5: Các liệu đặc trưng phổ 1H-NMR IIa, IIb, IIc Dữ liệu đặc trưng 1H-NMR Ký hiệu (nhóm thế)* H4-aryl (ppm) IIa (3-Cl) 7,33-7,41 (2H, m); 7,61 (1H, m); 7,72 (1H, m) IIb (3-Br) 7,32-7,36 (1H, m); 7,55 (1H, d.t, J=1,0 Hz, J=2,0 Hz); 7,66 (1H, d.d, J=1,0 Hz, J= 1,5 Hz); 7,87 (1H, m) IIc (3-NO2) 7,68 (1H, t, J=8 Hz); 8,06 (1H, d, J=7,5 Hz); 8,29 (1H, d.d, J=2,0 Hz, J=8.0 Hz); 8,59 (1H, m) Hpyridine (ppm) NHdibenzo (ppm) Hether (ppm) 7,50 (2H, s, H22, 24) 7,33-7,41 (4H, m); 6,95 (2H, d, J=8,0 Hz); 7,01 (2H, t, J=7,5 Hz) 3,83 (4H, m); 4,14 (4H, m) 7,49 (2H, s, H22, 24) 6,95 (2H, d, J=8,5 Hz); 7,01 (2H, t, J=7.5 Hz); 7,32-7,36 (4H, m) 3,83 (4H, m); 4,14 (4H, m) 7,56 (2H, s, H22, 24) 6,96 (2H, d, J=8,5 Hz); 7,02 (2H, t, J=7,5 Hz); 7,34-7,38 (4H, m) 3,83 (4H, m); 4,15 (4H, m) c) Tổng hợp dẫn xuất [γ-(4-R-phenyl)pyridino]azacrown ether (3 chất ký hiệu IIIa, IIIb IIIc) - Sơ đồ chung: - Quy trình tổng hợp: Dung dịch gồm hỗn hợp 1,3 mmol (0,5 g) diketon K4, 1,3 mmol p-hydroxyl benzaldehyde p-metoxyl benzaldehyde hay p-methyl benzaldehyde 0,13 mol (10,0 g) ammonium acetate ml acid acetic băng đun sôi hồi lưu 19 tiếng bình tam giác máy khuấy từ gia nhiệt Hỗn hợp phản ứng sau làm lạnh trung hòa dung dịch sodium carbonate (30%) đến pH= 7- Sản phẩm phản ứng tách chiết dung môi ethyl acetate (4*30 ml) Dịch chiết sau thu gom, làm khô MgSO4 cho bay áp suất thấp Sản phẩm phân tách phương pháp sắc ký cột silica gel (dung môi rửa giải ethyl acetate) kết tinh lại ethanol Kết tổng hợp cho bảng 6, thông số phổ cho bảng Bảng 6: Đặc tính hóa lý liệu phổ sản phẩm IIIa IIIb IIIc Cơng thức phân tử Nhiệt độ nóng chảy(oC) IIIa (4-OH) C27H23NO4 139,5141,2 IIIb (4-OMe) C30H29O6N IIIc (2-Me) C30H29O5N Ký hiệu chất Hiệu suất (H%) Dữ liệu phổ khối lượng, MS (m/z) Dữ liệu phổ hồng ngoại, IR (cm-1) Rf= 0,4 17% 424 (M-H) 426 (M+H) 1255 (C-O-C); 1593 (C=Caryl); 3060, 3481 (OH) 198,8199,5 0,43 30% 155.6156.3 0,62 40% Rf 517 (M+H) 484 (M+H) 1249 (C-O-C); 1596 (C=Caryl) 1295 (C-O-C) 1573( C=Caryl) Bảng 7: Các liệu đặc trưng phổ 1H-NMR IIIa, IIIb, IIIc Ký hiệu IIIa (4-OH) IIIb (4OMe) IIIc (4-Me) Dữ liệu đặc trưng 1H-NMR Haromatic (ppm) Hpyridine (ppm) Hether (ppm) 7,33-7,41 (2H, m); 7,61 (1H, m); 7,72 (1H, m) 7.71 (2H, s, H25,27) 4.10 (4H, t, J= 8Hz) 3.62 (4H, t, J= 8Hz) 3.19 (4H, s) 7.68-7.64 (4H, m) 7.37-7.33 (2H, m) 7.13-7.10 (2H, q) 7.02-6.98 (4H, m) 7.72 (2H, s, H25,27) 4.10 (4H, t, J= 8Hz) 3.62 (4H, t, J= 8Hz) 3.186 (4H, s) 4.09 (3H, s, HOMe) 4.11 (4H, t, J= 8Hz) 3.62(4H, q, J= 8Hz) 3.18 (4H, s) 2,42 (3H, s, HMe) 7.66-7.62 (4H, m) 7.37-7.34 (2H, m) 7.30-7.29 (2H, d) 7.13-7.1 (2H, m) 7.0-6.98 (2H, d) 7.75 (2H, s, H25, 27) Hkhác (ppm) 2.4.1.3 Kết tổng hợp dẫn xuất dẫn xuất γ-hetherropyridineazacrown ether Xuất phát từ diketon K4, dựa phản ứng ngưng tụ đa tác nhân Hantzsch, nhóm nghiên cứu lần tổng hợp dẫn xuất azacrown ether với dị vòng 10 Na2SO4 cho bay áp suất thấp Cặn chiết tinh chế phương pháp sắc ký cột silica gel (dung môi rửa giải: 100% ethyl acetat, Rf= 0,31) kết tinh lại lần dung môi ethanol thu 0,269 g chất rắn màu trắng (44,9%), T0nc= 198- 1990C c) Tổng hợp (γ-thienylpyridino)dibenzoaza-17-crown-5-ether (IV) acid acetic sử dụng chiếu xạ vi sóng Hỗn hợp 0,5g dixeton (K4), 0,12ml thiophene-2-carbaldehyde 3g amoni acetat 3.5ml acid acetic băng chiếu xạ vi sóng 20 phút, cơng suất 300W Sau kết thúc phản ứng (theo dõi TLC), hỗn hợp làm lạnh trung hòa dung dịch K2CO3 (30%) đến pH= 7- Thêm ethyl acetat chiết (4x30 ml) Dịch chiết sau thu gom, làm khô Na2SO4 cho bay áp suất thấp Cặn chiết tinh chế phương pháp sắc ký cột silica gel (dung môi rửa giải: 100% ethyl acetat, Rf= 0,31) kết tinh lại lần dung môi ethanol thu 0,271g chất rắn màu trắng (Dạng đơn tinh thể) (45,3%), T0nc= 198- 1990C Bằng phản ứng ngưng tụ đa tác nhân, hợp chất (γ-thienylpyridino)dibenzoaza-17crown-5-ether (IV) tổng hợp từ 1,8-bis(2-acetylphenoxy)-3,6-oxahexane (K4), thiophene-2-carbaldehyde amoni acetat điều kiện có nhiệt độ (gia nhiệt theo phương pháp truyền thống sử dụng chiếu xạ vi sóng) dung mơi acid acetic hỗn hợp acid acetic ethanol Khi hỗn hợp tác nhân gia nhiệt phương pháp đun hồi lưu truyền thống, thời gian phản ứng kéo dài từ 6h đến 15h Sự có mặt acid acetic đóng vai trị chất xúc tác để thúc đẩy phản ứng xảy thuận lợi, nên dùng 100% acid acetic vừa dung môi phản ứng, vừa chất xúc tác, thời gian phản ứng rút ngắn so với việc dùng hỗn hợp acid acetic ethanol làm dung môi Tuy nhiên nhược điểm điều chế lượng lớn chất mong muốn, phải dùng nhiều kiềm để trung hòa lượng acid sử dụng Hơn acid acetic đậm đặc có mùi khó chịu Do đó, nghiên cứu tối ưu điều kiện phản ứng lị vi sóng Kết thể bảng Căn vào kết khảo sát phản ứng sử dụng chiếu xạ vi sóng cho thấy: điều kiện thích hợp để điều chế (γ-thienylpyridino)dibenzoaza-17-crown-5-ether nhiệt độ 1000C, thời gian 20 phút, thể tích acid acetic 3,5ml Rõ ràng so với phương pháp hồi lưu truyền thống, thời gian phản ứng giảm từ 18-45 lần, lượng xúc tác giảm 2, lần Như nói việc ứng dụng vi sóng tổng hợp hữu giúp tiết kiệm chi phí, thời gian, dung mơi mà cịn tăng hiệu suất phản ứng Sau tinh chế sản phẩm sắc ký cột kết tinh lại lần ethanol, hợp chất (γ-thienylpyridino)dibenzoaza-17-crown-5-ether tạo thành dạng đơn tinh thể hình kim, màu trắng Cấu trúc hợp chất xác định phương pháp Hóa lý đại 12 Bảng 8: Khảo sát điều kiện vi sóng Thứ Vacid tự (ml) Nhiệt độ Thời gian Hiệu suất (0C) (phút) (%) 100 10 30,6 100 15 38,4 100 20 45,6 100 25 45,7 100 30 44,2 100 20 45,3 3,5 100 20 45,0 100 20 42,2 d) Cấu trúc (γ-thienylpyridino)-dibenzoaza-17-crown-5-ether Trên phổ 1H-NMR sản phẩm, thấy tín hiệu cộng hưởng đặc trưng proton nhóm polyether xuất 3,22 ppm (dạng singlet) 3,63 4,10 ppm (đều có dạng triplet) Hai β-proton nhân pyridine (H25, H27) cho tín hiệu cộng hưởng dạng singlet 7,73ppm Tám (8) proton hai nhân phenyl tham gia vịng crown ether cho bốn tín hiệu cộng hưởng tương ứng với hệ ABCD (mỗi tín hiệu tương ứng với 2H) khoảng 6,98; 7,09; 7,34 7,62ppm Các proton nhân γ-thienyl cho tín hiệu (tương ứng với 1H) với 7,12; 7,39 7,54 ppm Phổ khối lượng phân giải cao tìm thấy số khối 460.1608 tương ứng với pic ion giả phân tử [M+H]+, phù hợp với công thức [C27H25NO4S+H]+ Phương pháp nhiễu xạ tia X xác định xác cơng thức cấu tạo chất Hình 1: Cấu tạo phân tử chất (IV) liệu phân tích nhiễu xạ tia X đơn tinh thể 13 Cấu tạo phân tử (IV) có cấu tạo hình bát với nhóm γ-thienyl vịng pyridine với ngun tử nitơ lai hóa sp2 vịng 17-crown-5-ether bao gồm ngun tử oxy Vịng 17-crown-5-ether có bán kính trung bình 2,956 Å Vịng γ-thienyl vịng pyridine tương đối đồng phẳng với độ lệch lớn so với mặt phẳng trung bình 0,181(2)Å Mặt phẳng trung bình tạo hai vòng γ-thienyl vòng pyridine nằm gần vng góc với mặt trung bình vịng 17-crown-5-ether Các liệu tinh thể thể bảng Bảng 9: Thông số cấu trúc mạng γ-(thien-2-yl)pyridinoaza-17-crown-5-ether (IV) Cơng thức phân tử C27H25NO4S Thể tích/Å3 Khối lượng mol 459.57 Số phân tử 2255.40 mạng (Z) ρcalc g/cm3 1.3533 Kiểu mạng không P21/c gian μ/mm-1 0.179 a/Å 9.8943(3) Bước sóng tia X Mo Kα (λ = 0.71073) b/Å 11.9508(4) Số phản xạ đo 75679 c/Å 19.1581(6) Số phản xạ độc 5603 [Rint = 0.0476, Hệ tinh thể Đơn tà lập Rsigma = 0.0223] α/deg 90 Độ sai lệch [tính R1 = 0.0569, phản xạ wR2 = 0.1484 có I>=2σ (I)] β/deg 95.3710(12) Độ sai lệch [tính R1 = 0.0724, tất wR2 = 0.1617 phản xạ đo được] γ/deg 90 2.4.2 Kết thử nghiệm hoat tính gây độc tế bào Các dẫn xuất azacrown ether thu với nhóm chức đa da ̣ng , có khả tham gia vào chuyển hóa hóa học thể hoạt tính sinh học hữu ích Chúng tơi tiến hành khảo h oạt tính sinh học số azacrown ether tổng hợp xác định được: Các hợp chất IIc, IIIa, IIIc thể hoạt tính gây độc tế bào cao dịng Rhabdosarcoma (RD) có hoạt tính dịng Hepatocellular carcinoma (HepG2), Human breast adenocarcinoma (MCF7), Lung (FL), hợp chất Ia, Ic thể hoạt tính dịng RD FL (bảng 10) Hợp chất IV khơng thể hoạt tính gây độc dòng tế bào thử nghiệm 14 Bảng 10 Hoạt tính độc tế bào số chất (γ-arylpyridino)-dibenzoaza-17-crown-5 ether (μg/ml) TT Chất (ký hiệu báo cáo) Dòng tế bào thử nghiệm (Cell survival - %) Nồng độ (μg/ml) Kết luận DMSO Chứng (+) M28.1 (IV) 10 Hep-G2 100 1,340,8 67,611,4 LU-1 100 3,660,9 64,441,5 RD 100 0,680,3 83,271,2 FL 100 3,871,1 59,32,3 M28.2 (Ia) 10 58,450,8 72,892,8 44,831,1 13,461,6 M28.3 (Ib) 10 60,851,4 69,472,6 50,092,8 41,713,1 M28.4 (IIc) 10 34,242,7 22,591,1 8,130,8 M28.5 (IIIa) 10 0 0 M28.6 (IIIc) 10 0 0 Dương tính Âm tính Dương tính dịng: RD, FL Dương tính dịng: RD, FL Dương tính dịng Dương tính dịng Dương tính dịng Bảng 11 Hoạt tính độc tế bào (IC50)của số chất (γ-arylpyridino)-dibenzoaza-17crown-5 ether (μg/ml) TT Mẫu (ký hiệu báo cáo) Dòng tế bào thử nghiệm IC50 (μg/ml) LU-1 RD 0,31 0,25 Kết luận Chứng (+) Hep-G2 0,29 FL 0,33 M28.2 (Ia) - - 8,881 8,346 M28.3 (Ib) - - 10,0 9,505 M28.4 (IIc) 9,216 8,019 2,623 8,157 M28.5 (IIIa) 2,607 2,664 2,56 1,392 M28.6 (IIIc) 7,957 6,946 6,887 6,742 Dương tính dịng: RD, FL Dương tính dịng: RD, FL Dương tính dịng tế bào Dương tính dịng tế bào Dương tính dịng tế bào 2.4.3 Kết công bố đào tạo - Trong q trình thực đề tài, nhóm nghiên cứu cơng bố cơng trình hệ thống SCEI, Scopus năm 2016 báo nhận đăng Tạp chí Hóa học số 56 năm 2018 - Đã đào tạo cử nhân (Bùi Thị Vân) năm 2016 hỗ trợ đào tạo NCS (Nguyễn Thị Thanh Phượng) bảo vệ sở tháng năm 2018 15 Đánh giá kết đạt kết luận Sau năm thực đề tài, tất mục tiêu nhóm nghiên cứu đặt hồn thành (về cơng bố đào tạo), tất nội dung nghiên cứu thực tiến độ Đề tài tổng hợp thành cơng 10 hợp chất (γ-aryl)pyridinocrown ether mới, có hợp chất nghiên cứu hoạt tính sinh học Bằng phản ứng ngưng tụ đa tác nhân kết hợp chiếu xạ vi sóng, rút ngắn thời gian điều chế hợp chất (γ-thienylpyridino)dibenzoaza-17-crown-5-ether từ 18-45 lần so với phương pháp gia nhiệt truyền thống, hàm lượng xúc tác giảm 2,3 lần, hiệu suất phản ứng đồng thời tăng lên Đây sở để nhóm nghiên cứu tiếp tục phát triển việc nghiên cứu, tổng hợp hợp chất hữu tiết kiệm thời gian, chi phí phù hợp với xu tổng hợp hữu cơ, tổng hợp hóa dược đại Trong hợp chất thử hoạt tính gây độc tế bào, có hợp chất âm tính, hợp chất dương tính dịng tế bào, hợp chất dương tính dịng tế bào ung thư nghiên cứu (Hep-G2, RD, Lu, FL) Những kết khả quan hoạt tính kháng tế bào ung thư mở hướng nghiên cứu mới, sâu hoạt tính hợp chất tổng hợp 2.6 Tóm tắt kết (tiếng Việt tiếng Anh) 2.6.1 Tóm tắt kết - Đã tổng hợp xác định cấu trúc 10 hợp chất (γ-aryl)pyridinocrown ether phương pháp sử dụng phản ứng ngưng tụ đa tác nhân - Đã nghiên cứu cải tiến phương pháp tiến hành việc thay đổi dung mơi sử dụng lị vi sóng thay cho phương pháp đun hồi lưu truyền thống để tổng hợp hợp chất γ-(thien-2yl)pyridinoaza-17-crown-5-ether - Đã thử hoạt tính gây độc tế bào số dòng tế bào ung thư hợp chất (γ-aryl)pyridinocrown ether - Kết nghiên cứu công bố báo khoa học nước - Đã đào tạo cử nhân hỗ trợ đào tạo NCS (đang làm thủ tục bảo vệ sở vào tháng 3/2018) 2.6.2 Summary  10 novel (γ-aryl)pyridinocrown ethers have been synthesized by multicomponent condensation reaction method  The method was modified by changing the solvent and using the microwave instead of the traditional healing method to synthesize the γ-(thien-2-yl)pyridinoaza-17-crown-5ether  A cytotoxic activity was tested on several cancer cell lines of the new (γ-aryl) pyridinocrown ether compounds  The results of the study were published in two local and international papers 16  The reaserching project has contributed to the graduations of one bachelor and supported training PhD (in procedures to protect the facility in 3/2018) TÀI LIỆU THAM KHẢO Cơ sở hóa học hữu thuốc hóa dược (A T Soldatenkov, N M Kolyadiana, I V Shendrik), NXB Đại học Quốc Gia, Hà Nội, tr.118-125 Lê Tuấn Anh (dịch năm 2010) Kim, B Y.; Ahn, J B.; Lee, H W.; Kang, S K.; Lee, J H.; Shin, J S.; Ahn, S K.; Hong, C I.; Yoon, S S Eur J Med Chem 2004, 39, 433-447; Enyedy, I J.; Sakamuri, S.; Zaman, W A.; Johnson, K M.; Wang, S Bioorg Med Chem Lett 2003, 13, 513-517; Pillai, A D.; Rathod, P D.; Franklin, P X.; Patel, M.; Nivsarkar, M.; Vasu, K K.; Padh, H.; Sudarsanam, V Biochem Biophys Res Commun 2003, 301, 183-186; Lowe, G.; Droz, A S.; Vilaivan, T.; Weaver, G W.; Park, J J.; Pratt, J M.; Tweedale, L.; Kelland, L R J Med Chem 1999, 42, 3167-3174; Karki, R.; Thapa, P.; Kang, M J.; Jeong, T C.; Nam, J M.; Kim, H L.; Na, Y.; Cho, W J.; Kwon, Y.; Lee, E S Bioorg Med Chem 2010, 18, 3066-3077; J Chen, W Chen, H Ni, Y Yu, G Zhang (2013), "A new strategy for facile synthesis of tetrasubstituted pyridine derivatives", Tetrahedron, 69, 8069-8073 Yamada, S.; Misono, T.; Ichikawa, M.; Morita, C Tetrahedron 2001, 57, 8939-8949; Yamada, S.; Morita, C J Am Chem Soc 2002, 124, 8184-8185; 10 T Thanh Van Tran, Tuan Anh Le, Hung Huy Nguyen, Hong Hieu Truong and Anatoly T Soldatenkovc , Crystal structure 26-(4-methyl-phenyl)- 8,11,14,17-tetraoxa-28azatetracyclo-[22.3.1.02,7.018,23]hexacosa-2,4,6,18(23),19,21,24(1),25,27-nona-ene, ActaCrysta E Crystallographic Communications [doi:10.1107/S2056989016005752], (SCEI, Scopus) E72, 2016, p.663-666, 11 Nguyễn Thị Thanh Phượng, Đào Thị Nhung, Trương Hồng Hiếu, Trần Thị Thanh Vân, Tô Hải Tùng, Lê Tuấn Anh, Ứng dụng phản ứng tổng hợp đa tác nhân kết hợp chiếu xạ vi sóng điều chế hợp chất (γ-thienylpyridino)dibenzoaza-17-crown-5-ether, chấp nhận đăng Tạp chí Hóa học, tập 56, năm 2018 17 PHẦN III SẢN PHẨM, CÔNG BỐ VÀ KẾT QUẢ ĐÀO TẠO CỦA ĐỀ TÀI 3.1 Kết nghiên cứu TT Tên sản phẩm Tổng hợp 10 hợp chất (γaryl) pyridinoazacrown ether (100mg chất) Đăng ký Đạt Tổng hợp 10 hợp chất (γ-aryl) pyridinoazacrown ether (100mg chất) Đã tổng hợp đủ 10 hợp chữa ung thư pyridinoazacrown ether tiền chất để tổng hợp thuốc có bảng liệt kê kèm theo chữa ung thư Bảng kết thử nghiệm hoạt tính độc tế bào–kháng tế bào ung thư dịng RD, Thử nghiệm hoạt tính độc tế bào – kháng tế bào ung thư dòng RD, Lu, Hep Đã thử nghiệm hoạt tính tiền chất để tổng hợp thuốc Yêu cầu khoa học hoặc/và tiêu kinh tế - kỹ thuật Lu, Hep chất (γ-aryl) độc tế bào – kháng tế bào ung thư dòng RD, Lu, Hep, FL số chất tổng hợp được, có bảng kết thử nghiệm kèm theo 3.2 Hình thức, cấp độ công bố kết TT Ghi địa Tình trạng cảm ơn (Đã in/ chấp nhận in/ nộp tài trợ đơn/ chấp nhận đơn hợp lệ/ cấp giấy xác ĐHQGHN nhận SHTT/ xác nhận sử quy dụng sản phẩm) định Sản phẩm Đánh giá chung (Đạt, không đạt) Công trình cơng bớ tạp chí khoa học quốc tế theo hệ thống ISI /Scopus 1.1 T Thanh Van Tran, Tuan Anh Le, Hung Đã in Huy Nguyen, Hong Hieu Truong and Anatoly T Soldatenkovc , Crystal structure 26-(4-methyl-phenyl)8,11,14,17-tetraoxa-28azatetracyclo-[22.3.1.02,7.018,23]hexacosa2,4,6,18(23),19,21,24(1),25,27nona-ene, ActaCrysta E Crystallographic Communications E72, 2016, p.663-666, [doi:10.1107/S2056989016005752], 18 Có Đạt (SCEI, Scopus) 1.2 Sách chuyên khảo xuất ký hợp đồng xuất 2.1 2.2 Đăng ký sở hữu trí tuệ 3.1 3.1 Bài báo quốc tế không thuộc hệ thống ISI/Scopus 4.1 4.2 Bài báo tạp chí khoa học ĐHQGHN, tạp chí khoa học chuyên ngành quốc gia báo cáo khoa học đăng kỷ yếu hội nghị quốc tế 5.1 Nguyễn Thị Thanh Phượng, Đào Thị Đã chấp nhận in Nhung, Trương Hồng Hiếu, Trần Thị Tạp chí Hóa học, tập Thanh Vân, Tơ Hải Tùng, Lê Tuấn Anh 56, năm 2018 Ứng dụng phản ứng tổng hợp đa tác nhân kết hợp chiếu xạ vi sóng điều chế hợp Có Đạt chất (γ-thienylpyridino)dibenzoaza-17crown-5-ether 5.2 Báo cáo khoa học kiến nghị, tư vấn sách theo đặt hàng đơn vị sử dụng Kết dự kiến ứng dụng quan hoạch định sách sở ứng dụng KH&CN Ghi chú: - Cột sản phẩm khoa học công nghệ: Liệt kê thông tin sản phẩm KHCN theo thứ tự - Các ấn phẩm khoa học (bài báo, báo cáo KH, sách chuyên khảo…) chấp nhận có ghi nhận địa cảm ơn tài trợ ĐHQGHN theo quy định 19 - Bản phơ tơ tồn văn ấn phẩm phải đưa vào phụ lục minh chứng báo cáo Riêng sách chuyên khảo cần có phơ tơ bìa, trang đầu trang cuối có ghi thông tin mã số xuất 3.3 Kết đào tạo TT Họ tên Thời gian kinh Công trình cơng bố liên quan phí tham gia đề tài (Sản phẩm KHCN, luận án, Đã bảo vệ (số tháng/số tiền) luận văn) Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Thanh Phượng 3,64 tháng/29,9 triệu đồng Nguyễn Thị Thanh Phượng, Đào Thị Nhung, Trương Hồng Hiếu, Trần Thị Thanh Sắp bảo vệ cấp sở tháng Vân, Tô Hải Tùng, Lê Tuấn Anh, Ứng dụng phản ứng năm 2018 tổng hợp đa tác nhân kết hợp chiếu xạ vi sóng điều chế hợp chất (γthienylpyridino)dibenzoaza17-crown-5-ether, nhận đăng Tạp chí Hóa học Học viên cao học Ghi chú: - Gửi kèm photo trang bìa luận án/ luận văn/ khóa luận giấy chứng nhận nghiên cứu sinh/thạc sỹ học viên bảo vệ thành công luận án/ luận văn; - Cột cơng trình cơng bố ghi mục III.1 20 PHẦN IV TỔNG HỢP KẾT QUẢ CÁC SẢN PHẨM KH&CN VÀ ĐÀO TẠO CỦA ĐỀ TÀI TT Sản phẩm Bài báo cơng bớ tạp chí khoa học quốc tế theo hệ thống ISI/Scopus Sách chuyên khảo xuất ký hợp đồng Số Số lượng lượng đăng ký hoàn thành 01 01 01 01 xuất Đăng ký sở hữu trí tuệ Bài báo quốc tế không thuộc hệ thống ISI/Scopus Số lượng báo tạp chí khoa học ĐHQGHN, tạp chí khoa học chuyên ngành quốc gia báo cáo khoa học đăng kỷ yếu hội nghị quốc tế Báo cáo khoa học kiến nghị, tư vấn sách theo đặt hàng đơn vị sử dụng Kết dự kiến ứng dụng quan hoạch định sách sở ứng dụng KH&CN Đào tạo/hỗ trợ đào tạo NCS 01 PHẦN V TÌNH HÌNH SỬ DỤNG KINH PHÍ TT Nội dung chi Kinh phí Kinh phí duyệt thực (triệu đồng) (triệu đồng) Ghi A Chi phí trực tiếp Th khốn chun mơn 149,83 149,83 Đã toán Nguyên, nhiên vật liệu, 125,17 125,17 Đã tốn Thiết bị, dụng cụ Cơng tác phí Dịch vụ th ngồi Hội nghị, Hội thảo, kiểm tra tiến độ, nghiệm thu 8,0 8,0 Đã tốn In ấn, Văn phịng phẩm 2,0 2,0 Đã tốn Chi phí khác B Chi phí gián tiếp 21 Quản lý phí Chi phí điện, nước Tổng số 15,0 15,0 Đã tốn 300,0 300,0 Đã toán PHẦN V KIẾN NGHỊ (về phát triển kết nghiên cứu đề tài; quản lý, tổ chức thực cấp) Trên sở kết khả quan đề tài, nhóm nghiên cứu mạnh dạn đề nghị với Đại học Quốc gia sau: - Tiếp tục cấp kinh phí để nhóm nghiên cứu đề tài tiến hành tổng hợp crown ether mới, nghiên cứu cải tiến phương pháp thay đổi điều kiện phản ứng - để thu sản phẩm với hiệu suất cao Tiếp tục cấp kinh phí để nhóm nghiên cứu đề tài kết hợp với quan nghiên cứu sâu hoạt tính sinh học hợp chất tổng hợp hợp chất khác, nghiên cứu hoạt tính chống oxi hóa, hoạt tính kháng vi sinh vật, hoạt tính kháng lao… Hà Nội, ngày 02 tháng 03 năm 2018 Đơn vị chủ trì đề tài (Thủ trưởng đơn vị ký tên, đóng dấu) Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Trần Thị Thanh Vân 22 PHẦN VI PHỤ LỤC (minh chứng sản phẩm nêu Phần III) 6.1 Các chất tổng hợp STT Ký hiệu Cơng thức hóa học Ia Hiệu suất (%) 43 Cl N O O O Ib 37 OH N O O O Ic 22 OMe N O O O IIa Cl 45 N O O O IIb Br 40 N O O O 23 IIc NO2 49 N O O IIIa O OH 17 N O O O O OMe IIIb 30 N O O O IIIc O Me 40 N O O O 10 IV O 45 S N O O O O 24 6.2 Bảng kết thử hoạt tính sinh học Bảng thử hoạt tính gây độc tế bào TT Chất (ký hiệu báo cáo) Dòng tế bào thử nghiệm (Cell survival - %) Nồng độ (μg/ml) Kết luận DMSO Chứng (+) M28.1 (IV) 10 Hep-G2 100 1,340,8 67,611,4 LU-1 100 3,660,9 64,441,5 RD 100 0,680,3 83,271,2 FL 100 3,871,1 59,32,3 M28.2 (Ia) 10 58,450,8 72,892,8 44,831,1 13,461,6 M28.3 (Ib) 10 60,851,4 69,472,6 50,092,8 41,713,1 M28.4 (IIc) 10 34,242,7 22,591,1 8,130,8 M28.5 (IIIa) 10 0 0 M28.6 (IIIc) 10 0 0 Dương tính Âm tính Dương tính dịng: RD, FL Dương tính dịng: RD, FL Dương tính dịng Dương tính dịng Dương tính dịng Bảng tính giá trị IC50 TT Mẫu (ký hiệu báo cáo) Kết luận Dòng tế bào thử nghiệm IC50 (μg/ml) Chứng (+) Hep-G2 0,29 LU-1 0,31 RD 0,25 FL 0,33 M28.2 (Ia) - - 8,881 8,346 M28.3 (Ib) - - 10,0 9,505 M28.4 (IIc) 9,216 8,019 2,623 8,157 M28.5 (IIIa) 2,607 2,664 2,56 1,392 M28.6 (IIIc) 7,957 6,946 6,887 6,742 Dương tính dịng: RD, FL Dương tính dịng: RD, FL Dương tính dịng tế bào Dương tính dịng tế bào Dương tính dịng tế bào 6.3 Các minh chứng phổ IR, NMR, MS chất tổng hợp 6.4 Minh chứng kết công bố: - T Thanh Van Tran, Tuan Anh Le, Hung Huy Nguyen, Hong Hieu Truong and Anatoly T Soldatenkovc , Crystal structure 26-(4-methyl-phenyl)- 8,11,14,17-tetraoxa-28azatetracyclo-[22.3.1.02,7.018,23]hexacosa-2,4,6,18(23),19,21,24(1),25,27-nona-ene, ActaCrysta E Crystallographic Communications [doi:10.1107/S2056989016005752], (SCEI, Scopus) 25 E72, 2016, p.663-666, - Nguyễn Thị Thanh Phượng, Đào Thị Nhung, Trương Hồng Hiếu, Trần Thị Thanh Vân, Tô Hải Tùng, Lê Tuấn Anh, Ứng dụng phản ứng tổng hợp đa tác nhân kết hợp chiếu xạ vi sóng điều chế hợp chất (γ-thienylpyridino)dibenzoaza-17-crown-5-ether, chấp nhận đăng Tạp chí Hóa học, tập 56, năm 2018 6.5 Minh chứng kết đào tạo: Quyết định công nhận tên đề tài người hướng dẫn NCS: NCS Nguyễn Thị Thanh Phượng, khóa 2014-2017, bảo vệ cấp sở tháng năm 2018 26 ... sau thu gom, làm khô Mg2SO4 cho bay áp xuất thấp Sản phẩm phân tách phương pháp sắc ký cột silica gel (dung môi rửa giải ethyl acetat) kết tinh lại ethanol Kết tổng hợp cho bảng 2, thông số phổ... sau thu gom, làm khô 11 Na2SO4 cho bay áp suất thấp Cặn chiết tinh chế phương pháp sắc ký cột silica gel (dung môi rửa giải: 100% ethyl acetat, Rf= 0,31) kết tinh lại lần dung môi ethanol thu... MgSO4 cho bay áp suất thấp Sản phẩm phân tách phương pháp sắc ký cột silica gel (dung môi rửa giải ethyl acetate) kết tinh lại ethanol Kết tổng hợp cho bảng 6, thông số phổ cho bảng Bảng 6: Đặc tính