HỘI nghị Khoa học Cống nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dược lần II Hà Nội-2015 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SÓ HỢP CHÁT PHENOLIC TỪ LÁ CÂY GÓI HẠC {Leea rubra Blume ex Spreng.) Pham Giang Nam ^ Hoàng Văn Hùng * Giáo viên hướng dẫn: Vũ Đức Lọi ỉ ' Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội TÓM TẮT Từ cắn chiết ethanol 96% gối hạc {Leea rubra Blume ex Spreng) thu hái huyện Lạng Giang, tỉnh Bắc Giang, năm hợp chất (1-5) phân lập phương pháp sắc ký Các hợp chất xác định acid gallic (1), acid protocatechuic (2), acid 4-hydroxybenzoic (3), arctiin (4), kaempferol-3-0-a-L-rhamnopyranosyl(l-^2)-a-L- arabinoílưanosid (5) dựa liệu phổ thực nghiệm so sánh với liệu phổ công bố trước Tất hợp chất lần phân lập từ gối hạc Ba hợp chất 2, 4, lần phân lập từ lồi Leea nibra Trong đó, hai hợp chất 4, lần tim thấy lồi thuộc chi Leea T khóa: Gối hạc, acid gallic, acid protocatechuic, acid 4-hydroxybenzoic, arctiin, kaempferol-3-0-a-L-rhamnopyranosyl(l—>2)-a-L-arabinofuranosid EXTRACT AND ISOLATED PHENOLIC COMPOUNDS FROM THE LEAF OF LEEA RUBRA BLUME EX SPRENG SUMMARY From the ethanol 96% extract of the leaf of Leea rubra Blume ex spreng collected in Lang Giang (Bac Giang, Vietnam), five compounds (1-5) were isolated by chromatographic methods These isolates were identiííed as gallic acid (1), protocatechuic acid (2), 4hydroxybenzoic acid (3), arctiin (4), kaempferol-3-0-a-L-rhamnopyranosyl(l—»2)-a-Larabinoíuranoside (5) by spectroscopic analyses and comparison with literature data The presence of compounds 2, 4, in this species was firstly reported Among them, compounds and were isolated the first time from genus o f Leea Key words: Leea rubra Blume ex spreng, gallic acid, protocatechuic acid, 4-hydroxybenzoic acid, arctiin, kaempferol-3-0-a-L-rhamnopyranosyI( 1—»2)-a-L-arabinofuranoside ĐẶT VẤN ĐÈ Cây gối hạc tía, có tên khoa học Leea rubra Blume ex Spreng, vị thuốc sử dụng phổ biến để điều ữị bệnh đau nhức xương khớp, tê thấp, đau bụng, rong kinh, yếu Hội nghị Khoa học Công nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dược lần II Hà Nội - 2015 mệt mỏi sau đẻ [1] Mặc dù sử dụng rộng rãi y học cổ truyền, dược liệu gối hạc chưa nghiên cứu đầy đủ tác dụng dược lý thành phần hóa học, dẫn đến việc chưa có tiêu chuẩn kiểm nghiệm Chính thế, việc nghiên cứu phân lập hoạt chất, chứng minh hoạt tính sinh học, đề xuất tiêu chí đánh giá chất lượng dược liệu, phát triển sàn phẩm tìr dược liệu gối hạc ữở thành yêu cầu cần thiết cấp bách Cho đến nay, có báo cáo cơng bố có mặt Aavonoid triterpenoid frong lồi L.rubra [2], [3] Nhằm cung cấp thêm thơng tin hướng tới mục tiêu xác định hoạt chất tiêu chuẩn hóa dược liệu gối hạc, phát triển sản phẩm tìr gối hạc, đề tài chiết xuất phân lập xác định cấu trúc 05 hợp chất phenolic Đây nhóm họrp chất quan trọng gối hạc có tác dụng sinh học ứng dụng phòng điều trị bệnh ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.Ỉ Nguyên liệu Nguyên liệu dùng nghiên cửu phận gối hạc thu hái huyện Lạng Giang, tỉnh Bắc Giang vào tháng 12 năm 2012 Mầu xác định tên khoa học Leea rubra Blume ex Spreng TS Đỗ Thị Xuyến, Bộ môn Thực vật, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội Mầu nghiên cửu luii giữ Khoa Y Dược, ĐHQGHN 2.2 Hóa chất, dung mơi Hóa chất: mỏng tráng sẵn pha thường silica gel p 254 (Merck), pha đảo RPis F254s (Merck), chất hấp phụ silica gel pha thường (cỡ hạt 63-200 ^m, Merck), pha đảo RP-18 (3050 |am, Merck), acid sulíuric 10%/ethanol Dung mơi cơng nghiệp «-hexan, ethyl acetat, nbutanol, dicloromethan (CH 2CI2), methanol (MeOH), nước cất (H 2O) 2.3 Thiết bị, dụng cụ - Các loại cột sắc ký, đèn tử ngoại Viện Dược liệu - Máy đo phổ hồng ngoại (IR) FT-IR Spectrophotometer (Perkin Elmer, Mỹ) Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Máy đo phổ khối Agilent 1100 LC/MSD Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân (*H-NMR, '^C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC) Bruker AM500 PT-NMR Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Hội nghị Khoa học Cống nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dược lăn II Hà Nội - 2015 2.4 Phương pháp nghiên cứu Chiết xuất, phân lập hợp chất Chiết xuất hợp chất từ dược liệu ethanol 96% theo phương pháp ngâm nhiệt độ phòng Phân đoạn dịch chiết dung mơi có độ phân cực tăng dần rt-hexan, ethyl acetat n-butanol Phân lập chất sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường, pha đảo RP-18, Sephadex sắc ký lớp mỏng dùng để theo dõi vết chất từ dịch chiết phân đoạn kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập Xác định cẩu trúc chất phân lập Xác định cấu trúc chất phân lập dựa frên phân tích kết phổ hồng ngoại (IR), phổ khối (MS), phổ cộng hưởng tìr hạt nhân (‘H-NMR, ’^C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC) sử dụng chất nội chuẩn TMS (tetramethyl silan) so sánh liệu thu từ thực nghiệm với liệu cơng bó 2.5 Chiết xuất, phân lập Lá gối hạc phơi khô (3,0 kg) cắt nhỏ, ngâm chiết với ethanol 96% nhiệt độ phòng (chiết lần, lần ngày) Dịch chiết gộp lại cất loại cồn nước áp suất giảm thu cắn chiết cồn cô khô (103 g) cắ n chiết hịa tan vào nước cất (0,5 lít) thành hỗn dịch lắc, chiết phân đoạn với «-hexan (0,5 lít X lần), ethyl acetat (0,5 lít X lần), n-butanol (0,5 lít X lần) Các dịch chiết «-hexan, ethyl acetat «-butanol tách riêng, cất loại dung môi áp suất giảm thu phần cắn tương ứng: cắn phân đoạn «-hexan (20 g), cắn phân đoạn ethyl acetat (35 g) cắn phân đoạn «-butanol (34 g) Căn phân đoạn EtOAc (35 g) chạy qua cột sắc ký silica gel pha thường, rửa giải hệ dung môi CH 2CI2 - MeOH với tỷ lệ methanol tăng dần từ đến 100 % thu phân đoạn: PĐ l (4,4 g); PĐ2 (5,6 g); PĐ3 (7,1 g); PĐ4 (4,8 g) PĐ5 (3,9 g) Phân đoạn PĐ3 (7,1 g) tiếp tục phân tách cột silica gel pha thưịng với hệ dung mơi rửa giải CH CI2 MeOH (10/1; 8:1; 5/1) thu phân đoạn (PĐ3.1 đến PĐ3.4) Phân đoạn PĐ3.2 đưa lên cột silica gel pha đảo RP-18 rửa giải gradient với hệ dung môi M e0H/H20 (0/1; 1/8; 1/6) thu chất số (34 mg) chất số (8 mg) Phân đoạn PĐ3.1 phân tách cột silica gel pha đảo RP-18 rửa giải đẳng dòng với hệ dung môi MeOH/HiO (1/5) thu chất sổ (11 mg) Phân đoạn PĐ3.4 đưa lên cột Sephadex LH-20 sử dụng dung môi rửa giải methanol Kiểm tra thành phần dịch rửa giải sắc ký lớp mỏng, thu phân đoạn PĐ3.4.1 đến PĐ3.4.4, Phân đoạn PĐ3.4.3 tinh chế ừên cột silica gel pha đảo RP18 rửa giải gradient với hệ dung môi methanol/HaO (1/2; 1/1) thu chất số (15 mg) chất số (18 m g ) Hội nghị Khoa học Công nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dược lần II Hà Nội - 2015 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN D ữ liệu phổ hợp c h ấ t: C h ất số 1: Bột màu trắng Phổ IR (cm-1): 3496; 1667; 1318; 1610; 1541; 1425; 1218 Phổ ESI-MS (/n/z)=169 [M-H]- Phổ 'H-NMR (C 5D 5N; 500 MHz) '^C-NMR (C5D 5N; 125 MHz): xem bảng 3.1 C h ất số 2: Bột màu nâu Phổ IR (cm *): 3369; 2937; 2859; 1678; 1469; 1417; 1241; 1101 Phổ ESI-MS (m/z) =153 [M-H]- Phổ 'H-NMR (DMSO; 500MH z) '^C-NMR (DMSO; 125 MHz): xem bảng 3.1 C h ất số 3: Bột màu nâu Phổ IR (cm-*): 3494; 1658; 1266; 1173 Phổ ESI-MS (m/z)=137 [MH]- Phổ 'H-NMR (CD 3OD; 500MHz) '^C-NMR (CD 3OD; 125 MHz): xem Bảng 3.1 Chất sổ 4: Bột vơ định hình màu trắng Phổ IR (cm '): 3409; 2924; 1760; 1598; 1457; 1266; 1030 Phổ ESI-MS (ffi/z) = 557 [M+Na]^ Phổ ’H-NMR (C 5D 5N; 500 MHz): 6,73 (IH , d, J=l,5 Hz, H-2), 6,88 (IH, d, J=8 Hz, H-5), 6,69 (IH, dd, J=2,0; 8,0 Hz, H-6), 6,98 (IH, d, J= 2.0 Hz, H-2’), 7,52 (IH, d, J= 8,5 Hz, H-5’), 6,83 (IH, dd, 2,0; 8,0, H-6’), 5,61 (IH, d, J= 7.0 Hz, H-1” ), 4,15 - 4,50 (5H, H-2” ; H-3” ; H-4” ; H-5” ; H-6” ), 3,90 - 4,06 (2H, m, H-9), 3,03 (2H, m, H-7’), 2,69 - 2,80 (2H, m, H-7), 2,57 (IH, m, H-8’), 2,53 (IH, m, H-8) Phổ '^CNMR (C 5D5N; 125 MHz): 132,6 (C-1), 112,7 (C-2), 150,3 (C-3), 148,7 (C-4), 114,3 (C-5), 121,2 (C-6 ), 37,9 (C-7), 41,6 (C-8 ), 71,3 (C-9), 131,6 (C -r), 113,2 (C-2’X 150,1 (C-3’), 146,9 (C-4’), 116,4 (C-5’), 122,3 (C-6 ’), 34,6 (C-7’), 46,6 (C-8 ’), 178,9 (C-9’X 102,5 (C-1” ), 74,8 (C-2” ), 78,5 (C-3” ), 71,4 (C-4” ), 78,8 (C-5” ), 62,3 (C-6 ” ), 60,0 (3 -OCH3), 60,0 (3’0 CH 3), 55,9 (4’-0CH3) C hất số 5; Bột vô định hình màu vàng Phổ IR (cm '): 3402; 2924; 1659; 1614; 1512; 1183; 1090 Phổ ESI-MS {m/z) = 587 [M+Na]^ Phổ ‘H-NMR (CD 3OD; 500 MHz): 6,21 (IH, d, J=2 Hz, H-6), 6,41 (IH, br s, H-8), 7,98 (2H, dd, J=2,0; 6,5 Hz, H-2’; H-6’), 6,95 (2H, dd, J=2,0; 7.0 Hz, H-3’; H-5’), 5,70 (IH, br s, H-1” ), 4,44 (IH, dd, 1,0; 2,5 Hz, H-2” ), 3,61 (2H, m, H5” ), 4,97 (IH, d, J=l,5 Hz, 1,25 (3H, d, J=6,0 Hz, Phổ '^C-NMR (CD 3OD; 125 MHz): 158,6 (C-2), 134,8 (C-3), 179,8 (C-4), 161,6 (C-5), 100,1 (C-6), 166,5 (C-7), 94,9 (C-8), 159,0 (C-9), 105,2 (C-10), 107,9 (C-1” ), 88,4 (C-2” ), 77,2 (C-3” ), 87,9 (C-4” ), 62,5 (C-5” ), 101,3 (C-1’” ), 72,3 (C-2’” ), 72,2 (C-3’” ), 73,9 (C-4” ’), 70,5 (C-5’” ), 17,9 (C-6’” ) Hội nghị Khoa học Công nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dược lăn II Hà Nội - 2015 Bảng 3.1 SỐ Uệu phổ »H ‘^C-NMR (125 MHz) hợp chất (1-3) 2“ 1“ Vị trí ƠH 6c ƠH ơc Ơh ôc (số H, độ bội, (ppm) ( số H, độ bội, (ppm) ( số H, độ bội, (ppm) /=H z) ppm 7=Hz) ppm 122,8 3' 8,07 (IH , s) 110,5 121,9 140,4 147,5 122,7 7,90 (IH, dd, 7,33 (lH ,d , 2,0) 116,6 1,5; 7,0) 133,0 6,84 (IH, dd, 147,5 J=Hz) ppm 144,9 1,5; 7,0) 150,0 116,0 163,3 6,84 (IH, dd, 6,78 (IH, d, 8,0) 115,9 116,0 1,5; 7,0) 8,07 (IH, s) 7,28 (IH , dd, 2,0; 110,5 8,0) COOH 169,6 7,90 (IH, dd, 121,7 133,0 1,5; 7,0) 167,4 170,1 Các ký hiệu độ bội: s (singlet), d (doublet), dd (double o f doublet) Đo C5 D 5N; Đo D M S O ;Đ o CD 3OD Xác định cấu trúc hợp chất: Chất số thu dạng bột màu trắng Phổ IR cho biết phân tử có nhóm chức: nhóm OH (dải hấp thụ có đỉnh 3496 cm‘‘), nhóm cacbonyl; c= (1667 cm '), liên kết c = c nhân thơm (1610; 1541; 1425 cm '), liên kết C -0 (1218; 1014 cm ') Phổ khối ESI-MS có đinh ion m/z: 169 [M-H] (negative) cho biết khối lượng phân tử M=170 Phổ 'H-NMR Ơh=8,07 có tín hiệu 02 proton nhân thơm xuất dạng pic đơn độ chuyển dịch ppm Phổ '^C-NMR xuất tín hiệu 05 cacbon 04 cacbon có độ chuyển dịch nằm độ chuyển dịch cacbon nhân thơm liên kết đôi c= c, cacbon nhóm cacbonyl Các tín hiệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân phổ khối cho biết, chất số hợp chất phenolic đơn giản có vịng benzen với bốn nhóm cấu trúc [5] Hai proton nhân thơm nằm hai vị trí đối xứng Nhóm thứ xác định nhóm cacboxyl (C=0; 5h = 169,6 ppm), ba nhóm cịn lại xác định nhóm hydroxy thơng qua phổ khối Dựa vào tất liệu phổ, tham khảo tài liệu [4], [5] Hội nghị Khoa học Công nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dưực lần II Hà Nội - 2015 nhận danh hợp chất acid 3,4,5-trihydroxybenzoic, tên thường gọi acid gallic Chất số thu dạng bột màu nâu Các phổ ‘H-NMR; *^C-NMR phổ khối cho biết chất số acid phenolic đơn giản Tuy nhiên, khác với hợp chất 1, chất số có ba nhóm vịng benzen ữong có nhóm cacboxyl hai nhóm hydroxy Ba tín hiệu proton xuất dạng ABX độ chuyển dịch 7,33 (IH , d, 2,0 Hz; H-2); 6,78 (IH, d, 8,0 Hz; H-5); 7,28 (IH , dd, 2,0; 8,0 Hz; H-6) Tham khảo tài liệu [5], xác định chất số hợp chất acid 3,4-dihydroxybenzoic, tên thường gọi acid protocatechuic Giống chất số chất số 2, chất sổ dẫn xuất acid benzoic Chất số có hai nhóm tín hiệu proton nhân thơm (mỗi nhóm có proton đối xứng) Hai nhóm proton xác định proton H-2; H-6 H-3; H-5 vòng benzen Dựa vào phổ NMR, phổ khối cho biết công thức phân tử C 7H 6O (phổ khối ESI-MS có đinh ion m/z: 137 [M-H]) Hợp chất xác định acid 4-hydroxybenzoic sau phân tích kiện phổ nghiệm tham khảo tài liệu công bố [5] Chất số thu dạng chất rắn màu trắng Phổ IR cho biết phân tử có nhóm chức sau; nhóm OH (dải hấp thụ có đỉnh 3409 cm '); nhóm c = (đỉnh 1760 cm '); liên kết đôi c = c (đỉnh 1598; 1457 cm '); liên kết C -0 (đinh 1266, 1030 cm ') Phổ 'H-NMR xuất tín hiệu proton vịng thơm có độ chuyển dịch từ ỖH 6,69 đến 7,52 ppm, tín hiệu singiet của nhóm methoxy đính vào vịng thơm độ chuyển dịch ỖH=3,78 ppm, ôh=3,75 ppm ôh=3,73, proton methylen độ chuyển dịch tìr 2,69 ppm đến 3,03 ppm Phổ *^C-NMR có 12 tín hiệu cacbon nằm vùng liên kết đơi hay vịng thơm có độ dịch chuyển tìr 112,7 ppm đến 150,1 ppm khẳng định chất số có vịng thơm phân tử Một tm hiệu cacbon nhóm cacbonyl xuất ơc=178,9 ppm, tín hiệu kết hợp với liệu phổ hồng ngoại cỏ đỉnh hấp thụ 1760 cm ' cho phép xác định có vịng lacton Các liệu phân tích giống với liệu phổ hợp chất arctigenin [6], [7] dự đốn cấu trúc có phần aglycon arctigenin Phần đường xác định đường glucose, cấu hình p với tín hiệu đặc trưng proton anomer ỖH= 5,61 (d, J=7,0 Hz), tín hiệu CH với h = 4,35-4,49 ppm, ôc=62,3 ppm Phổ khối có pic ion (m/z) = 557 [M+Na]^ cho biết chất số có khối lượng phân tử M=534 Kết hợp tính chất vật lý, kiện phổ tham khảo tài liệu [6], [7], [8] nhận danh chất số arctiin Hội nghị Khoa học Công nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dưọ-C lăn II Hà Nội - 2015 COOH COOH COOH OH Hình 3.1 Cơng thức cấu tạo họp chất (1-5) phân lập từ gối hạc Chất số thu dạng bột màu vàng Phổ IR cho biết phân tử hợp chất có nhóm OH (3402 cm '), nhóm c = (1659 cm'*), nhỏm c= c nhân thơm (1614; 1512 cm ‘), nhóm C-O (1183, 1090 cm ') Phổ 'H-NMR xuất tín hiệu proton vòng thơm độ chuyển dịch ÔH 6,21-7,98 ppm Trong số proton có proton ghép cặp meta Ôh6,21 (1H, d, J=2 Hz); 6,41 (IH , br s ), tín hiệu cặp doublet kép proton thơm: ỖH 6,95 (2H, dd, J=2,0; 7,0 Hz) ÔH 7,98 (2H, dd, J=2,0; 6,5 Hz) Quan sát vùng trường cao thấy tín hiệu hai nhóm CH với ƠH 5,70 (IH , br s) 4,97 (IH, d, J=l,5) nhóm tín hiệu độ chuyển dịch tị ƠH 1,25 đến 4,41 ppm nhận định tín hiệu phần đường Khảo sát phổ '^C-NMR có mặt 26 ngun tử cacbon, tín hiệu nhóm c= xuất ơc 179,8 ppm Tất liệu cho biết chất số ílavonoid diglycosid, phù hợp với phổ ESI-MS pic ion m/z 587 [M+Na]^ cho biết công thức phân tử C26H28O 14 (M=564) [2], [9] Xét riêng phần aglycon, việc có tín hiệu proton carbon thơm (hoặc thuộc liên kết đôi) chứng tỏ hợp chất ílavonoid với phần aglycon có nhóm hydroxy Các tín hiệu proton thuộc vị trí meta cho biết chúng thuộc vị trí vịng A, tín hiệu cặp doublet kép proton thơm xác định hai cặp proton vị trí ortho đối xứng vịng B Do phần aglycon xác định kaempferol [2] Hai phần đường phân tử đường có cấu hình a proton anomer xuất ÔH 5,70 (IH, br s) 4,97 (IH , d, J=l,5) Hai phần đường xác định arabinoũiranose rhamnopyranose (một đường có cacbon đường có cacbon) Đưcmg arabinose đính vào phần aglycon vị trí C-3 xuất tương tác H-1” (Ỗ H 5,70, br s) C-3 (ôc Hội nghị Khoa học Công nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dược lần II Hà Nội - 2015 134,8 ppm) quan sát ữên phổ HMBC Các tín hiệu cacbon cịn lại đưịmg arabinuranose xác định 88,4 (C-2” ), 77,2 (C-3” ), 87,9 (C-4” ), 62,5 (C-5” ) sau phân tích phổ HSQC, HMBC tham khảo tài liệu công bố [2], [9] Đường rhamnopyranose xác định đính vào vị trí C-2 đưịfng arabinose xuất tương tác H - r ” (ỖH 4,97, d) C-2’” (ôc 88,4 ppm) tương tác H-2” (ỖH 4,44, dd) C-1’” (ôc 101,3 ppm) frên phổ HMBC Tổng hợp kiện phổ phân tích, tham khảo tài liệu [2], [9], [10] xác định chất số hợp chất kaempferol-3-0-a-L- rhamnopyranosyI(1^2)-a-L-arabinofuranosid Hợp chất lần phân lập tìr loài Artabotrys hexapetalus thu hái Trung Quốc [10] Cho đến nay, chưa có nghiên cứu cơng bố có mặt hợp chất kaempferol-3-0-a-L- rhanmopyranosyl(l—»2)-a-L-arabinofìiranosid lồi thuộc chi Leea KẾT LUẬN Từ cắn chiết ethanol phận gối hạc {Leea rubra Blume ex Spreng) thu hái Bắc Giang (Việt Nam), phương pháp sắc ký, nhóm nghiên cứu phân lập xác định cấu trúc 05 hgrp chất phenolic Phân tích kiện phổ so sánh với tài liệu công bố, hợp chất xác định acid gallic (1), acid protocatechuic (2), acid 4-hydroxybenzoic (3), arctiin (4), kaempferol-3-0-a-L-rhamnopyranosyl(l—>2)-a-Larabinoủiranosid (5) Ba hợp chất 2, 4, lần phân lập từ loài gối hạc L rubra, ữong hai hợp chất (4-5) lần tìm thấy lồi thuộc chi Leea Đây đóng góp nghiên cứu nhằm làm phong phú thêm tri thức hóa thực vật học chi Leea nói chung lồi L rubra nói riêng Các kết mở hướng nghiên cứu sâu nhắm tới mục tiêu tìm hoạt chất có khả ứng dụng làm chất chuẩn kiểm nghiệm, cần tiếp tục thực nghiên cứu bổ sung hàm lượng tác dụng sinh học hợp chất phân lập được, nhằm minh chứng cho cơng dụng góp phần xây dựng hệ thống tiêu chí, phương pháp định tính, định lượng phục vụ cho công tác quản lý chất lượng dược liệu gối hạc TÀI LIỆU THAM KHẢO Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tập 1, 874-875 Nguyễn Thị Phưong cộng (2014), Plavonoid phân lập tò gối hạc, Tạp chi Dược liệu, 19(2), 110-115 Hội nghị Khoa học Công nghệ Tuổi trẻ Khoa Y Dược lần II Hà Nội - 2015 Phuong NT et al (2014), Triterpenes from the leaves of Leea rubra Blume ex Spreng, Vietnam dournal ofMedicinal Materials, 19(5), 307-310 Gangadhar M et al (2011), Isolation and characterisation of gallic acid from Terminalia bellerica and its effect on carbohydrate regulatory system in vitro, International Journal o f Research in Ayurveda and Pharmacy, 2(2), 559-562 Yu Y, Gao H, Tang z et al (2006), Several phenolic acids from the íhiit o f Capparis spinosa, Asian Journal ofTraditional Medicines, 1, 1-4 Xie L.H et al (2003), Transformation of arctiin to estrogenic and antiestrogenic substances by human intestinal bacteria, Chem Pharm B ull, 51(4) 378—384 Saknali A et al (2011), Sausurea heteromalla (D Don) Hand.-Mazz.: A new source o f arctiin, arctigenin, and chlorojanerin, Indian Journal o f Chemistìy, 50, 624-626 Chaturvedula VSP et al (2012), Chemical constituents from the polar fraction o f Rubus suavissimus, Organic Chem Current Res,\{\), 1-6 Zhong J, Yang Y, Xiao z (2009), Separation and puriíĩcation of three ílavonoids from the petal of Rosa Rugosa Thunb by HSCCC, Asian Journal o f Tradỉtional Medìcines, 4(6), 220227 10 Li T, Yu J (1998), Studies on the chemical constituents o f the leaves from Artabotrys hexapetalus, Yao Xue Xue Bao, 33(8), 591-596 ... nghiên cứu Chiết xuất, phân lập hợp chất Chiết xuất hợp chất từ dược liệu ethanol 96% theo phương pháp ngâm nhiệt độ phòng Phân đoạn dịch chiết dung mơi có độ phân cực tăng dần rt-hexan, ethyl... n-butanol Phân lập chất sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường, pha đảo RP-18, Sephadex sắc ký lớp mỏng dùng để theo dõi vết chất từ dịch chiết phân đoạn kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập. .. khảo tài liệu [5], xác định chất số hợp chất acid 3,4-dihydroxybenzoic, tên thường gọi acid protocatechuic Giống chất số chất số 2, chất sổ dẫn xuất acid benzoic Chất số có hai nhóm tín hiệu proton