Mơc lơc Trang Lêi cam ®oan i Lêi cảm ơn ii Môc lôc iv Danh mục ký hiệu chữ viết tắt vii Danh môc bảng ix Danh mục hình xi mở đầu Ch−¬ng Tỉng quan 1.1 Tình hình nghiên cứu bảo tồn thuốc giới số vấn đề có liªn quan 1.2 Tình hình nghiên cứu bảo tồn thuốc Việt Nam năm gần 1.2.1 Vài nét trạng nguồn tài nguyên thuốc 1.2.2 Tình hình nghiên cứu bảo tồn thuốc 1.3 Tình hình nghiên cứu Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp, Tam thất hoang giới Việt Nam 12 1.3.1 Tình hình nghiên cứu Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 12 1.3.1.1 Trªn thÕ giíi 12 1.3.1.2 ë ViÖt Nam 18 1.3.2 T×nh h×nh nghiên cứu Sâm vũ diệp Tam thất hoang 22 1.3.2.1 Trªn thÕ giíi 22 1.3.2.2 ë ViÖt Nam 29 Chơng Đối tợng, nội dung phơng pháp Nghiên cứu 36 2.1 Đối tợng nghiên cứu 36 2.2 Néi dung nghiªn cøu 36 2.2.1 Nghiªn cøu vỊ thùc vËt 36 2.2.2 Nghiªn cứu sơ thành phần hóa học 37 2.2.3 Nghiên cứu bảo tồn 37 2.3 Phơng pháp nghiên cứu 38 2.3.1 Phơng pháp nghiªn cøu thùc vËt 2.3.2 Phơng pháp khảo sát sơ thành phần hoá học 2.3.3 Phơng pháp nhân giống phục vụ cho mục đích bảo tồn 2.3.4 Phơng pháp xử lý số liệu 38 2.3.5 Trang thiết bị dung môi hóa chất 41 2.4 Địa điểm nghiên cứu 41 Chơng kết bàn luận 42 3.1 Nghiªn cøu vÒ thùc vËt häc 42 3.1.1 Xác định tên khoa học đặc điểm hình thái loài 42 3.1.1.1 Ngũ gia bì hơng 43 3.1.1.2 Ngị gia b× gai 44 3.1.1.3 S©m vị diƯp 47 3.1.1.4 Tam thÊt hoang 48 3.1.2 Sö dụng thị ADN (RAPD-PCR) để đánh giá đa dạng di truyền góp phần phân biệt loài Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diƯp vµ Tam thÊt hoang 49 3.1.2.1 Kết tách chiết ADN 49 3.1.2.2 Sử dụng thị RAPD-PCR để đánh giá đa dạng di truyền 53 3.1.2.3 Bớc đầu xác định tập hợp số thị RAPD-PCR đặc trng góp phần phân biệt loài Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang……………………………………… 66 3.1.3 Ph©n bè trạng 69 3.1.3.1 Ngũ gia bì hơng 69 3.1.3.2 Ngị gia b× gai 71 3.1.3.3 S©m vị diƯp vµ Tam thÊt hoang 76 3.1.4 Đặc điểm sinh thái, sinh trởng - phát triển tái sinh tự nhiên 3.1.4.1 Ngũ gia bì hơng 79 3.1.4.2 Ngị gia b× gai 82 3.1.4.3 Sâm vũ diệp Tam thất hoang 87 3.2 Nghiên cứu sơ thành phần hoá học 93 3.2.1 Phân tích sơ thành phần hóa học 3.2.1.1 Ngũ gia bì hơng Ngũ gia b× gai 93 38 39 40 79 93 3.2.1.2 Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang 94 3.2.2 Phân tích tinh dầu đối tợng nghiên cứu 95 3.2.2.1 Định lợng tinh dầu 96 3.2.2.2 Phân tích thành phần hóa học tinh dầu dợc liệu nghiên cứu phơng pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS) 96 3.2.3 Bớc đầu xây dựng dấu vân tay hóa học sắc ký lỏng cao ¸p (SKLCA) cđa c¸c d−ỵc liƯu 100 3.2.3.1 Ngị gia b× h−¬ng 101 3.2.3.2 Ngị gia b× gai 102 3.2.3.3 Sâm vũ diệp Tam thất hoang 103 3.3 Nghiên cứu bảo tồn khả nhân trồng, phát triển 105 3.3.1 Nghiên cứu bảo tồn chỗ 105 3.3.1.1 Ngũ gia bì hơng 105 3.3.1.2 Ngị gia b× gai 107 3.3.1.3 Sâm vũ diệp Tam thất hoang 109 3.3.2 Nghiên cứu bảo tồn chuyển chỗ 3.3.2.1 Nghiên cứu khả nhân giống 111 111 3.3.2.2 Sự sinh trởng phát triển loài đợc bảo tồn chuyển chỗ 121 3.3.2.3 Kết bớc đầu nghiên cứu bảo tồn chuyển chỗ trồng thêm 134 3.3.2.4 Triển vọng nhân trồng phát triển chỗ Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thất hoang 141 3.3.2.5 Xây dựng liệu phục vụ bảo tồn loài Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang 146 KÕt luËn 147 đề nghị 149 Danh mục công trình khoa học tác giả liên quan đến luận án 150 Tµi liƯu tham kh¶o 152 C¸c phơ lơc 165 Danh mục ký hiệu chữ viết tắt ADN Axit deoxyribonucleic AFLP Đa hình độ dài phân đoạn ADN đợc khuếch đại (Amplified Fragment Length Polymorphism) BTTN Bảo tồn thiên nhiên CE Điện di mao quản (Capillary Electrophoresis) Cites Công ớc thơng mại quốc tế loài đông thực vật hoang dà bị nguy hiểm (Convention on Internationnal Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora) DAD Xác định phổ kỹ thuật diode array (diode array detector) DĐVN Dợc điển Việt Nam ĐDSH Đa dạng sinh học FAO Tổ chức lơng thực nông nghiệp Liªn hiƯp qc (The Food and Agriculture Orgnization of the United Nations) G MÉu Ngị gia b× gai sư dơng phân tích ADN GC/MS Phơng pháp sắc ký khí khèi phỉ (Gas Chromatography / Mass Spectrophotometry) H MÉu Ngị gia bì hơng sử dụng phân tích ADN HN Bảo tàng thực vật (thuộc Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Khoa học Việt Nam) HNPM Bảo tàng Dợc liệu (thuộc Khoa Tài nguyên dợc liệu, Viện Dợc liệu, Bộ Y Tế) HNU Bảo tàng thực vật (thuộc Khoa Sinh học, Trờng Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội) HPLC Sắc ký lỏng cao áp (High Perfomance Liquid Chromatography, gọi Sắc ký lỏng hiệu cao) IUCN Tổ chức bảo tån thiªn nhiªn quèc tÕ (The International Union for Conservation of Nature and Natural Resouses) KHKT Khoa häc kü thuËt NGBG Ngị gia b× gai NGBGL Ngị gia b× gai lông NGBH Ngũ gia bì hơng NXB Nhà xuất PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp ADN (Polymerase Chain Reaction) RAPD-PCR Đa hình phân đoạn ADN khuếch đại ngẫu nhiên (Random Amplified Polymorphic DNA) RFLP Đa hình độ dài đoạn giới hạn (Restricted Fragment Length Polymorphism) RP-HPLC Sắc ký lỏng cao áp đảo pha RTQ Rừng tự nhiên có trồng Thảo SKLM Sắc ký lớp mỏng SSC ủy ban sống sót loài (The Species Survial Commission) SSR Đa hình trình tự lập lại đơn giản (Simple Sequence Repeats) SVD Sâm vũ diệp T MÉu Tam thÊt hoang sư dơng ph©n tÝch ADN To / to Nhiệt độ TB Trung bình tR / TR Thêi gian l−u cña mÉu kü thuËt HPLC (Retention time) TTH Tam thÊt hoang V MÉu S©m vị diệp sử dụng phân tích ADN VMC Vờn mái che VT Mẫu Panax xẻ nông (1 lần) phân tích ADN VQG Vờn Quốc gia WWF Quĩ bảo vƯ ®éng vËt hoang d· thÕ giíi (The World Wildlife Fund) Danh Mục bảng Trang Bảng 3.1 Danh sách kí hiệu mẫu thực vật sử dụng nghiên cứu phân tích ADN (chỉ thị RAPD-PCR) 50 Bảng 3.2 Kết đo quang phổ hấp thụ dịch chiết ADN tổng số mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) 51 Bảng 3.3 Kết đo mật độ quang phổ hấp thụ dịch chiết ADN tổng số mẫu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) 52 Bảng 3.4 Số băng RAPD-PCR đa hình mẫu thuộc hai loài Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai phân tích với 16 mồi ngẫu nhiên 53 Bảng 3.5 Hệ số tơng đồng di truyền mẫu nghiên cứu hai loài Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) 58 B¶ng 3.6 Số băng RAPD-PCR đa hình mẫu thuộc hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang phân tích víi 13 måi ngÉu nhiªn 60 Bảng 3.7 Hệ số tơng đồng di truyền mẫu nghiên cứu hai loài Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) 64 Bảng 3.8 Các thị RAPD-PCR đồng hình đa hình sử dụng góp phần phân biệt hai loài Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 66 Bảng 3.9 Các thị RAPD-PCR đồng hình đa hình sử dụng góp phần phân biệt hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang 68 Bảng 3.10 Các địa phơng Việt Nam đà phát thấy Ngũ gia bì gai 74 Bảng 3.11 Kết định tính mét sè nhãm chÊt chÝnh vá rƠ Ngị gia bì hơng Ngũ gia bì gai 94 B¶ng 3.12 Kết định tính số nhóm chất thân rễ Sâm vũ diệp Tam thất hoang 95 Bảng 3.13 Kết định lợng hàm lợng tinh dầu Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thất hoang 96 B¶ng 3.14 KÕt phân tích thành phần hóa học tinh dầu Ngũ gia bì hơng 97 B¶ng 3.15 Kết phân tích thành phần hóa học tinh dầu Ngũ gia bì gai 98 Bảng 3.16 Kết phân tích thành phần hóa học tinh dầu Sâm vũ diệp Tam thất hoang 99 Bảng 3.17 Tỷ lệ nảy mầm hạt Ngị gia b× gai 112 Bảng 3.18 Mối tơng quan đờng kính hom khả chồi rễ Ngũ gia bình hơng Ngũ gia bì gai 114 B¶ng 3.19 KÕt qu¶ nhân giống Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai hom (thân) năm 2004 - 2006 116 Bảng 3.20 Tỷ lệ nảy mầm hạt Sâm vũ diệp Tam thất hoang 117 Bảng 3.21 Kết thu thập giống Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang 118 B¶ng 3.22 KÕt nhân giống Sâm vũ diệp Tam thất hoang (b»ng th©n rƠ) 119 B¶ng 3.23 Khả chồi Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai sau tháng trồng vờn −¬m 121 Bảng 3.24 Sự phát triển Ngũ gia bình hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trồng vờn ơm 122 B¶ng 3.25 Sự tăng trởng chiều cao chồi Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trång ë v−ên −¬m 122 Bảng 3.26 Sự tăng trởng đờng kính thân Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trồng vờn ơm 124 Bảng 3.27 Sự tăng tr−ëng chiỊu cao vµ chåi míi cđa Ngị gia bì hơng Ngũ gia bì gai sau giai đoạn v−ên −¬m 126 B¶ng 3.28 Tû lƯ hoa, kÕt qu¶ cđa Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai theo dõi qua năm 127 B¶ng 3.29 Sù tăng trởng chiều cao (cm) Sâm vũ diệp trồng từ thân rễ (củ) dới vờn mái che dới tán rừng trồng Thảo 129 Bảng 3.30 Sự tăng trởng chiều cao (cm) cđa Tam thÊt hoang trång tõ th©n rƠ (cđ) d−íi vờn mái che dới tán rừng tự nhiên có trång Th¶o qu¶ 130 B¶ng 3.31 Tû lƯ hoa Sâm vũ diệp Tam thất hoang trồng từ thân rễ (củ) dới vờn mái che dới tán rừng tự nhiên có trồngThảo 131 Bảng 3.32 Tỷ lệ kết Sâm vũ diệp Tam thất hoang trồng từ thân rễ (củ) dới vờn mái che dới tán rừng tự nhiên có trångTh¶o qu¶ 132 B¶ng 3.33 Tû lƯ sèng gieo từ hạt 136 B¶ng 3.34 Tû lƯ sèng nhân giống từ hom thân thân rễ 136 Danh Mục hình Trang Hình 3.1 Ngũ gia bì hơng (cành mang nụ hoa) 44 H×nh 3.2 Ngị gia bì gai lông 46 H×nh 3.3 Ngị gia b× gai (cµnh mang hoa) 46 Hình 3.4 Sâm vũ diệp (cây có qu¶ chÝn) 47 Hình 3.5 Tam thất hoang (cây có chín) 49 H×nh 3.6 ảnh điện di ADN tổng số mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) 51 ảnh điện di ADN tổng số mẫu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) 52 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gai bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPC9 54 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA5 55 Sơ đồ hình quan hệ di truyền mẫu nghiên cứu hai loài Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) 59 Băng đồng hình mẫu Sâm vũ diệp (V) dạng xẻ nông (VT) tơng ứng với mồi OPC1 61 H×nh 3.12 Băng đồng hình mẫu Tam thất hoang (T) tơng ứng với mồi OPA7 61 Hình 3.13 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Sâm vũ diệp (V), dạng xẻ nông (VT) Tam thất hoang (T) đợc khuếch đại mồi OPA8 62 Sơ đồ hình quan hệ di truyền mẫu nghiên cứu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) 65 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA10 67 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA15 68 Hình 3.17 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia bì hơng Việt Nam 70 Hình 3.18 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia b× gai ë ViƯt Nam 71 Hình 3.19 Bản đồ điểm phân bố Sâm vũ diệp Tam thất hoang Việt Nam 77 Hình 3.20 Chồi ngắn Ngũ gia bì hơng 83 H×nh 3.21 Ngị gia bì hơng rụng 83 H×nh 3.7 H×nh 3.8 H×nh 3.9 H×nh 3.10 H×nh 3.11 H×nh 3.14 H×nh 3.15 H×nh 3.16 Hình 3.22 Hoa Ngũ gia bì hơng mọc tõ chåi ng¾n 83 Hình 3.23 Ngũ gia bì hơng có cành mang non 83 H×nh 3.24 Chåi gèc Ngị gia b× gai 86 H×nh 3.25 Ngị gia bì gai rụng 86 H×nh 3.26 Ngị gia b× gai hoa 86 H×nh 3.27 Ngị gia b× gai cã qu¶ chÝn 86 Hình 3.28 Chồi thân Sâm vị diƯp 91 Hình 3.29 Sâm vũ diệp hoa 91 Hình 3.30 Sâm vũ diệp có chín 91 H×nh 3.31 Sâm vũ diệp có thân mang vàng úa tàn lụi 91 Hình 3.32 Chåi th©n cđa Tam thÊt hoang 92 H×nh 3.33 Tam thÊt hoang hoa 92 Hình 3.34 Tam thất hoang có chÝn 92 Hình 3.35 Tam thất hoang có thân mang vµng óa vµ tµn lơi 92 Hình 3.36 Sắc ký đồ SKLCA dịch chiết toàn phần vỏ rễ Ngũ gia bì hơng 101 Hình 3.37 Phỉ UV-VIS cđa pic cã thêi gian l−u tR = 26.83 cđa dÞch chiÕt vá rƠ Ngị gia bì hơng syringin chuẩn 101 Hình 3.38 Sắc ký đồ SKLCA dịch chiết toàn phần vỏ rễ Ngũ gia bì gai 102 Hình 3.39 Sắc ký đồ SKLCA dịch chiết toàn phần Sâm vũ diệp phổ UVVIS pic có tR tơng ứng 38,82 phút 40,69 phút 104 Sắc ký đồ SKLCA dịch chiết toàn phần Tam thất hoang phổ UV-VIS pic có tR tơng ứng 38,02 phút 39,70 phút 104 Ngũ gia bì hơng điểm bảo tồn chỗ (Phó Bảng - Đồng Văn - Hà Giang) 110 Ngò gia bì gai điểm bảo tồn chỗ (Đức Xuân - Thạch An - Cao Bằng) 110 Tam thất hoang điểm bảo tồn chỗ (Bản Khoang - Sa Pa - Lào Cai) 110 Hình 3.44 Hạt Ngũ gia bì gai 112 Hình 3.45 Cây Ngũ gia bì gai mọc tõ h¹t 112 Hình 3.46 Hom giống Ngũ gia bì hơng 115 H×nh 3.47 Hom gièng Ngị gia b× gai 115 H×nh 3.48 Hom gièng Ngị gia bì hơng chồi 115 H×nh 3.40 H×nh 3.41 H×nh 3.42 H×nh 3.43 H×nh 3.49 Hom gièng Ngị gia b× gai chåi 115 Hình 3.50 Hạt Sâm vũ diệp 120 H×nh 3.51 H¹t Tam thÊt hoang 120 Hình 3.52 Cây Sâm vũ diệp mọc từ hạt 120 Hình 3.53 Cây Tam thÊt hoang mäc tõ h¹t 120 Hình 3.54 Thân rễ (củ) Sâm vị diƯp vµ Tam thÊt hoang 120 Hình 3.55 Thân rễ (củ) Sâm vũ diƯp vµ Tam thÊt hoang chåi (sau đ gièng) 120 Sự tăng trởng chiều cao chồi Ngũ gia bình hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trồng vờn ơm 123 Sự tăng trởng đờng kính thân Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trồng vờn ơm 124 Tû lÖ hoa Sâm vũ diệp trồng vờn mái che (VMC) dới tán rừng tự nhiên có trồng Thảo qu¶ (RTQ) 131 Tû lƯ hoa cđa Tam thÊt hoang trång ë v−ên mái che (VMC) dới tán rừng tự nhiên có trång Th¶o qu¶ (RTQ) 131 Tỷ lệ kết Sâm vũ diệp trồng vờn mái che (VMC) dới tán rừng tự nhiên cã trång Th¶o qu¶ (RTQ) 133 Tû lƯ kÕt qu¶ cđa Tam thÊt hoang trång vờn mái che (VMC) dới tán rừng tự nhiên có trồng Thảo (RTQ) 133 Vờn bảo tồn Ngũ gia bì hơng Trạm nghiên cứu trồng thuốc Sa Pa (Viện Dợc Liệu) 137 Ngũ gia bì hơng đợc trồng thêm để bảo tồn Trung tâm KHKT giống trồng gia súc Phó Bảng (Hà Giang) 137 Trồng bảo tồn Ngũ gia bì hơng vờn gia đình ngời dân (Phó Bảng - Đồng Văn - Hµ Giang) 138 Vờn bảo tồn Ngũ gia bì gai Trạm nghiên cứu trồng thuốc Sa Pa (Viện Dợc LiÖu) 138 Hình 3.66 Ngũ gia bì gai đợc trồng vờn gia đình ngời dân (Sa Pa - Lào Cai) 139 Hình 3.67 Ngũ gia bì gai đợc trồng vờn gia đình ngời dân (xà Bản Khoang Sa Pa - Lµo Cai) 139 Sâm vũ diệp Tam thất hoang đợc trồng bảo tồn vờn có mái che Trạm nghiên cứu trồng thuốc Sa Pa (Viện Dợc Liệu) 140 Sâm vũ diệp Tam thất hoang đợc trồng bảo tồn dới tán rừng tự nhiên có trồng Thảo xà Bản Khoang - Sa Pa - Lµo Cai 140 H×nh 3.56 H×nh 3.57 H×nh 3.58 H×nh 3.59 H×nh 3.60 H×nh 3.61 H×nh 3.62 H×nh 3.63 H×nh 3.64 H×nh 3.65 Hình 3.68 Hình 3.69 Kết phân tích cho thấy, hai loài thuốc Ngũ gia bì gai Ngũ gia bì hơng nớc ta có phạm vi phân bố không rộng lắm, nhng tính đa hình di truyền nhóm cá thể có tơng đối đa dạng Vì vậy, vấn đề bảo tồn đợc tính đa dạng di truyền hai loài thuốc quý thực cần thiết Tuy nhiên, để có đợc sở liệu đầy đủ hoàn thiện hai loài thuốc này, cần tiếp tục mở rộng quy mô nghiên cứu lớn địa điểm thu mẫu số lợng mẫu phân tích * Sâm vị diƯp vµ Tam thÊt hoang Tỉng céng 13 måi ngẫu nhiên đà đợc sử đụng để phân tích cấu trúc di truyền 20 mẫu Sâm vũ diệp Tam thất hoang Danh sách mồi, trình tự, tổng số băng đợc khuếch đại số băng đa hình loài đợc trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6 Số băng RAPD-PCR đa hình mẫu thuộc hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang phân tích với 13 mồi ngẫu nhiên Số băng đa hình/Tổng số băng Mồi Trình tự mồi OPA1 OPA2 OPA3 OPA7 OPA8 OPA12 OPA14 OPC1 OPC6 OPC12 OPC15 OPC16 OPC17 5-CAGGCCCTTC-3’ 5’-TGCCCAGCTG-3’ 5’-AGTCAGCCAC-3’ 5’-GAAACGGGTC-3’ 5’-GTGACGTAGG-3’ 5’-TCGGCGATAG-3’ 5’-TCTGTGCTGG-3’ 5’-TTCGAGCCAG-3’ 5’-GAACGGACTC-3’ 5’-TGTCATCCCC-3’ 5’-GACGGATCAG-3’ 5’-CACACTCCAG-3’ 5-TTCCCCCCAG-3 Tổng số Trung bình Tổng số băng tính loµi SVD TTH 1/7 0/6 0/2 2/4 0/4 1/9 2/8 0/4 4/6 4/7 1/3 0/7 4/6 3/7 1/6 2/4 0/3 3/7 0/9 1/6 0/4 5/5 0/6 1/2 1/8 3/6 9 9 10 13 11 19/73 (26,0%) 1,5/5,6 20/73 (27,4%) 1,5/5,6 101 60 Kết thu đợc cho thấy có 101 băng khuếch đại, tổng số băng khuếch đại Sâm vũ diệp Tam thất hoang 73 băng Trung bình mồi khuếch đại đợc 5,6 băng Phân tích 12 mẫu thuộc loài Sâm vũ diệp xuất 19 băng đa hình tổng số 73 băng khuếch đại, chiếm 26,0% Đối với mẫu Tam thất hoang, thu đợc 20 băng đa hình tổng số 73 băng khuếch đại, chiếm 27,4% tổng số băng Nh vậy, tập hợp cá thể hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang Việt nam có mức độ đa hình di truyền không cao Cả hai loài có đặc điểm chung tính đồng hình thể rõ (hình 3.11 hình 3.12) bp M VT1 VT2 V1 V2 V3 V4 V5 1000 750 600 250 200 OPC1 Hình 3.11 Băng đồng hình mẫu Sâm vũ diệp (V) dạng xẻ nông (VT) tơng ứng với mồi OPC1 Các chữ số (1 - 5) địa điểm thu mÉu kh¸c bp M T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 750 600 250 OPA7 Hình 3.12 Băng đồng hình mẫu Tam thất hoang (T) tơng ứng với mồi OPA7 Các chữ số (1 - 8) địa điểm thu mẫu khác 61 Kết phân tích phổ băng điện di RAPD-PCR mẫu dạng xẻ nông có tơng đồng đáng kể với mẫu Sâm vũ diệp (hình 3.13) Kết góp phần xác định cá thể có kiểu hình xẻ nông thuộc loài Sâm vũ diệp loài Tam thất hoang Hình 3.13 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Sâm vũ diệp (V), dạng xẻ nông (VT) Tam thất hoang (T) đợc khuếch đại mồi OPA8 Các chữ số (1 - 8) địa điểm thu mẫu khác Phổ băng điện di thu đợc cho thấy cấu trúc di truyền hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang có tơng đồng lớn, thể quan hệ gần gũi hai loài Sử dụng phần mềm NTSYSpc 2.02h, đà xây dựng đợc bảng hệ số tơng đồng di truyền (bảng 3.7) quan hệ di truyền 12 mẫu Sâm vũ diệp mẫu Tam thất hoang (hình 3.14) Với mẫu Sâm vũ diệp (bao gồm dạng xẻ nông), hệ số tơng đồng di truyền dao ®éng tõ 0,89 ®Õn 1,00, ®ã mÉu V2 cã cÊu tróc di trun hoµn toµn gièng mÉu V3, tơng tự với hai mẫu V5 V6 Cấu trúc di truyền khác mẫu V2, V3 ,V4 với V7 mẫu VT1 với mẫu VT3 trờng hợp mẫu Tam thất hoang, hệ số tơng đồng di truyền thấp thu đợc mẫu T8 với T1 T2 (0,89) hệ số tơng đồng di truyền cao T1 T2 (1,00) Có thể nhận thấy, hai loài thuốc này, hệ số tơng đồng di 62 truyền mẫu loài cao, thể tính đồng hình tơng đối cao quần thể loài Kết phù hợp với thực tế tự nhiên hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang có vùng phân bố hẹp kích thớc quần thể nhỏ Việc quần thĨ cđa hai loµi nµy ë n−íc ta tù nhiên tình trạng khai thác møc mét thêi gian dµi cịng cã thĨ lµ nguyên nhân dẫn đến tính đa dạng di truyền thấp hai loài Một kết lý thú hệ số tơng đồng di truyền mẫu có kiểu hình xẻ nông so với mẫu Sâm vũ diệp dao động từ 0,90 đến 0,97, so với mẫu Tam thất hoang từ 0,65 đến 0,73 Kết thể cấu trúc di truyền dạng xẻ nông giống với Sâm vũ diệp rõ rệt so với Tam thất hoang Hay nãi c¸ch kh¸c, cã thĨ thÊy cÊu tróc ADN hai dạng xẻ (nông sâu) không phân biệt rõ rệt, dạng không xẻ thể cấu trúc di truyền khác biệt Kết thể quan hệ di truyền (hình 3.14) cho thấy, tất mẫu kết nhóm với thành cụm riêng biệt ứng với hai loài Tất mẫu có kiểu hình xẻ nông kết cụm với mẫu Sâm vũ diệp, phân tách với mẫu Tam thất hoang Điều cho thấy gần gũi cấu trúc di truyền dạng có xẻ nông với Sâm vũ diệp với Tam thất hoang Các mẫu Tam thất hoang nghiên cứu tách thành hai nhãm nhá, nhãm thø nhÊt gåm T1 ®Õn T5, nhãm lại đợc hợp T6, T7 T8 Nh nói cách khác, thị RAPD-PCR không cho thấy cã sù kh¸c biƯt râ rƯt vỊ cÊu tróc di truyền dạng xẻ sâu (Sâm vũ diệp) dạng xẻ nông Những dẫn liệu thu đợc chứng tỏ cá thể có xẻ nông thuộc loài Sâm vũ diệp 63 Bảng 3.7 Hệ số tơng đồng di truyền mẫu nghiên cứu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ n«ng (VT) V1 V2 V3 V4 V5 V6 V7 V8 VT1 VT2 VT3 VT4 T1 T2 V1 1,00 V2 0,98 1,00 V3 0,98 1,00 1,00 V4 0,92 0,94 0,94 1,00 V5 0,90 0,92 0,92 0,95 1,00 V6 0,90 0,92 0,92 0,95 1,00 1,00 V7 0,80 0,78 0,78 0,78 0,83 0,83 1,00 V8 0,81 0,79 0,79 0,80 0,85 0,85 0,98 1,00 VT1 0,91 0,92 0,92 0,89 0,88 0,88 0,86 0,87 1,00 VT2 0,92 0,94 0,94 0,90 0,92 0,92 0,85 0,83 0,86 1,00 VT3 0,87 0,86 0,86 0,83 0,81 0,81 0,79 0,81 0,78 0,86 1,00 VT4 0,86 0,88 0,88 0,82 0,83 0,83 0,87 0,89 0,92 0,85 0,86 1,00 T1 0,33 0,32 0,32 0,25 0,30 0,30 0,45 0,43 0,37 0,35 0,33 0,42 1,00 T2 0,33 0,32 0,32 0,25 0,30 0,30 0,45 0,43 0,37 0,35 0,33 0,42 1,00 1,00 T3 0,35 0,33 0,33 0,27 0,31 0,31 0,46 0,44 0,38 0,36 0,35 0,43 0,95 0,95 64 T3 1,00 T4 T5 T6 T7 T8 ... cấp (CR), Ngũ gia bì gai đợc xếp mức bị nguy cấp (EN) Việt Nam [61] Để góp phần bảo tồn có hiệu loài thuốc bị đe dọa kể trên, đà tiến hành đề tài Nghiên cứu số đặc điểm sinh học bốn loài thuốc quÝ... mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA15 68 Hình 3.17 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia bì hơng Việt Nam 70 Hình 3.18 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia bì gai ë ViƯt Nam. .. bố, đặc điểm sinh học hai loài thứ loài * Về giá trị sử dơng Theo y häc cỉ trun: ë ViƯt Nam, theo kinh nghiệm dân gian loài Ngũ gia bì đợc sử dụng nhiều để làm thuốc Vỏ rễ vỏ thân Ngũ gia bì hơng