Phát triển chế phẩm diệt sâu từ dịch nuôi cấy serratia marcescens SH1 phân lập từ tuyến trùng heterorhabditis indica CP16

i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu tuyến trùng EPN 1.1.1 Đặc điểm EPN 1.1.2 Ƣu tuyến trùng phòng trừ sinh học 1.1.3 Quan hệ tuyến trùng vi khuẩn cộng sinh 1.1.4 Quan hệ hội sinh Serratia marcescens tuyến trùng ký sinh côn trùng (EPN) 1.2 Giới thiệu vi khuẩn Serratia marcescens 1.2.1 Phân loại Serratia marcescens 1.2.2 Đặc điểm Serratia marcescens 1.2.3 Đặc điểm sinh lí 1.2.4 Đặc điểm sinh hóa 1.2.5 Đặc điểm phân bố 1.3 Một số hợp chất đƣợc tổng hợp từ Serratia marcescens 1.3.1 Sắc tố 1.3.2 Biosurfactants 10 1.3.3 Acid béo 10 1.3.4 Enzyme 10 1.3.5 Yếu tố độc lực Serratia marcescens lên côn trùng 11 1.4 Giới thiệu Prodigiosin 11 1.4.1 Khái niệm prodigiosin 11 1.4.2 Cấu trúc đặc điểm prodigiosin 11 1.4.3 Cơ chế sinh tổng hợp prodigiosin vi khuẩn 14 ii 1.4.4 Hoạt tính sinh học prodigiosin 16 1.5 Tiềm tạo chế phẩm trừ sâu từ prodigiosin từ vi khuẩn Serratia marcescens 17 1.6Giới thiệu thuốc trừ sâu sinh học 18 1.6.1 Khái niệm thuốc trừ sâu sinh học 18 1.6.2 Những sản phẩm thuốc trừ sâu sinh học 18 1.6.3 Những mặt ƣu điểm hạn chế thuốc trừ sâu sinh học 19 1.7 Khái quát sâu khoang Spodoptera litura 20 1.7.1 Đặc điểm hình thái 20 1.7.2 Đặc điểm sinh học sinh thái 21 1.7.3 Thiên địch 22 1.7.4 Biện pháp phòng trừ 22 1.8 Khái quát sâu xanh da láng 22 1.8.1 Đặc điểm hình thái 23 1.8.2 Đặc điểm sinh học 23 1.8.3.Thiên địch 24 1.8.4 Biện pháp phòng trừ 24 Chƣơng MỤC TIÊU VÀ PHƢƠNG PHÁP 25 2.1 Mục tiêu đề tài, nội dung nghiên cứu 25 2.1.1 Mục tiêu 25 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 25 2.2 Đối tƣợng 25 2.3 Bố trí thí nghiệm 25 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phƣơng pháp phân lập định danh vi khuẩn từ tuyến trùng Heterohabditis indica CP 16 27 2.4.2 Phƣơng pháp tách chiết phân tích sắc tố 28 2.4.3 Khảo sát hiệu lực diệt sâu vi khuẩn phân lập ,hợp chất thứ cấp màu 31 2.4.4 Các yếu tố ảnh hƣởng lên trình lên men thu nhận hợp chất thứ cấp màu 31 iii 2.4.4.1 Khảo sát trình tổng hợp sắc tố chủng vi khuẩn 31 2.4.4.2 Khảo sát ảnh hƣởng oxy lên trình tổng hợp sắc tố 32 2.4.4.3 Khảo sát pH mơi trƣờng ảnh hƣởng đến q trình tổng hợp sắc tố 32 2.4.5 Phƣơng pháp diệt tế bào vi khuẩn Serratia marcescens 33 2.4.6 Khảo sát hoạt tính sinh học hợp chất thứ cấp màu, dịch lên men 34 2.4.7 Hiệu lực diệt sâu dịch nuôi cấy 35 2.4.8 Hiệu lực diệt sâu dịch nuôi cấy xử lí có bổ sung phụ gia 35 Chƣơng KẾT QUẢ THẢO LUẬN 37 3.1 Phân lập, định danh vi khuẩn từ tuyến trùng Heterorhabditis indica CP 16 37 3.1.1 Hình thái khuẩn lạc, sinh lý, sinh hóa 37 3.1.2 Kết định danh KIT API20E (Biomerieux) 38 3.1.3 Giải trình tự gene 16S rRNA 40 3.2 Thu nhận hợp chất prodigiosin từ dịch ni cấy Serratia marcescens 41 3.2.1 Quy trình trích ly sắc tố 42 3.2.2 Phổ hấp thụ sắc tố 42 3.2.3 Sắc ký mỏng TLC 44 3.2.4 Khẳng định sắc tố đỏ thu đƣợc prodigiosin phân tích khối phổ (mass spectroscopy) 45 3.3 Hiệu lực diệt sâu khoang Spodoptera litura Serratia marcescens SH1 hợp chất thứ cấp prodigiosin 46 3.3.1 Tiêm trực tiếp vi khuẩn vào xoang máu sâu 46 3.3.2 Cho sâu ăn vi khuẩn phƣơng pháp nhỏ giọt bề mặt (Droplet method on foliage) 48 3.3.3 Khảo sát hiệu lực diệt sâu khoang S.litura sâu xanh da láng S exigua phƣơng pháp nhỏ giọt bề mặt (cho ăn) 50 3.4 Nghiên cứu phát triển chế phẩm diệt sâu từ dịch nuôi cấy Serratia marcescens SH1 51 3.4.1 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình tổng hợp sắc tố từ vi khuẩn Serratia marcescens SH1 51 3.4.1.1 Động học trình tổng hợp sắc tố 51 iv 3.4.1.2 Ảnh hƣởng oxy lên trình tổng hợp sắc tố 52 3.4.1.3 Ảnh hƣởng pH môi trƣờng lên trình tổng hợp sắc tố 53 3.4.1.4 Ảnh hƣởng môi trƣờng lên trình tổng hợp sắc tố 54 3.4.2 Phƣơng pháp xử lý dịch nuôi cấy S marcescens SH1 để phát triển chế phẩm diệt sâu 55 3.4.2.1 Khảo sát khả sử dụng acid để diệt tế bào (ảnh hƣởng chế độ xử lý acid lên tế bào, prodigiosin enzyme dịch nuôi cấy) 55 3.4.2.2 Khảo sát khả xử lí nhiệt để diệt tế bào vi khuẩn 57 3.5 So sánh ảnh hƣởng phƣơng pháp xử lý dịch nuôi cấy lên hoạt tính enzyme dịch ni cấy 58 3.6 Hiệu lực diệt sâu dịch nuôi cấy xử lý acid HCl 1N pH2 60 3.7 Hiệu lực diệt sâu dịch nuôi cấy S marcescens SH1 xử lý acid bổ sung phụ gia 62 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số đặc điểm sinh hóa Serratia marcescens Bảng 1.2 Xác định cấu trúc số chất đại diện prodigiosin (Williams, 1973) 13 Bảng 2.1: Tóm tắt nội dung phƣơng pháp thí nghiệm 26 Bảng 3.1 Bảng tóm tắt đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa chủng phân lập 37 Bảng 3.2 Khả phân giải Tween 20, gelatine, casein chitin chủng SH1 môi trƣờng tƣơng ứng 38 Bảng 3.3 Kết định danh KIT API20E chủng SH1 39 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng phƣơng pháp xử lý acid pH2 xử lý nhiệt 85oC, 15 phút lên hoạt tính enzyme ngoại bào dịch ni cấy S marcescens SH1 59 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơ chế gây bệnh trùng EPN nhờ vi khuẩn cộng sinh với tuyến trùng gây bệnh côn trùng (Goodrich-Blair, 2007) Hình 1.2 Vi khuẩn Serratia marcescens quan sát đƣợc dƣới kính hiển vi (Gillen Gibbs, 2011) Hình 1.3 Hình dáng màu sắc khuẩn lạc vi khuẩn Serratia mercescens Hình 1.4 Cấu trúc hình học phẳng hợp chất Prodigiosin (Krishna, 2008) 12 Hình 1.5 Các chất đại diện prodigiosin (Furstner, 2003) 12 Hình 1.6 So sánh cụm sinh tổng hợp prodigiosin (cụm pig) từ Serratia ATCC 39.006, Sma 274 cụm sinh tổng hợp undecylprodigiosin (cụm màu đỏ) từ Streptomyces coelicolor A3 (2) (Cerdenor cộng sự, 2001) 15 Hình 1.7 Quá trình sinh tổng hợp prodigiosin (Caspi R, 2014) 16 Hình 1.8 Hoạt tính kháng khuẩn prodigiosin (Ramina Samira, 2009) 17 Hình 1.9 Vịng đời sâu khoang Spodoptera 21 Hình 1.10 Vịng đời sâu xanh da láng 23 Hình 2.1 Quy trình phân lập định danh vi khuẩn từ tuyến trùng H.indica CP16 27 Hình 2.2 Quy trình tách chiết thu nhận sắc tố từ vi khuẩn Serattia marcescens SH1 29 Hình 2.3 Quy trình khảo sát hiệu lực diệt sâu vi khuẩn nội sinh, hợp chất thứ cấp sâu khoang (S.litura) sâu xanh da láng (S.exigua) 31 Hình 2.4 Quy trình thử nghiệm khảo sát thời gian tiêu diệt tế bào vi khuẩn S.mercescens 33 Hình 2.5 Quy trình khảo sát hoạt tính sinh học dịch lên men xử lí acid HCl 1N, pH2 34 Hình 2.6 Quy trình khảo sát hiệu lực diệt sâu dịch lên men vi khuẩn xử lí acid HCl 1N, pH 35 Hình 2.7 Quy trình khảo sát hiệu lực diệt sâu chế phẩm prodi 36 vii Hình 3.1 Cây phát sinh lồi đƣợc thiết lập theo giải thuật NJ (neighbor joining) xác định mối quan hệ chủng phân lập SH1 với chủng Serratia spp vi khuẩn cộng sinh tuyến trùng truyền thống theo Suzuki cộng sự, 1996 41 Hình 3.2 Thu hồi prodigiosin từ dịch ni cấy 42 Hình 3.3 Quang phổ hấp thụ sắc tố dung môi khác 43 Hình 3.4 Giá trị OD bƣớc sóng λmax sắc tố dung mơi 44 Hình 3.5 Đƣờng chuẩn sắc tố 44 Hình 3.6 Kết sắc ký mỏng TLC 45 Hình 3.7 Khối phổ ESI sắc tố 46 Hình 3.8 Thí nghiệm tiêm trực tiếp tế bào chủng phân lập vào sâu khoang Spodoptera litura 47 Hình 3.9 Tỷ lệ chết sâu khoang Spodoptera litura (tuổi 4) tiêm Serratia marcescens SH1 48 Hình 3.10 Tỷ lệ chết sâu khoang Spodoptera litura (tuổi 3) cho ăn Serratia marcescens SH1 49 Hình 3.11 Tỷ lệ chết sâu khoang Spodoptera litura cho ăn thầu dầu tẩm prodigiosin trích ly 50 Hình 3.12 Tỷ lệ chết sâu xanh da láng Spodoptera exigua cho ăn thầu dầu tẩm prodigiosin trích ly 51 Hình 3.13 Đƣờng cong tăng trƣờng tổng hợp săc tố SH1 52 Hình 3.14 Ảnh hƣởng oxy đến trình tổng hợp sắc tố 53 Hình 3.15 Ảnh hƣởng pH mơi trƣờng lên q trình tổng hợp sắc tố 54 Hình 3.16 Ảnh hƣởng mơi trƣờng lên q trình tổng hợp sắc tố prodigiosin 55 Hình 3.17 Khả tiêu diệt tế bào vi khuẩn Serratia marcescens SH1 thời điểm giờ, 24 pH (A) pH (B) 56 Hình 3.18 Ảnh hƣởng chế độ xử lý acid lên nồng độ prodigiosin dịch nuôi cấy 57 viii Hình 3.19 Ảnh hƣởng chế độ xử lý nhiệt lên nồng độ prodigiosin dịch nuôi cấy 58 Hình 3.20 Enzyme ngoại bào dịch nuôi cấy sau xử lý acid pH2 đƣợc xác định phƣơng pháp khuếch tán giếng thạch 59 Hình 3.21 Khả diệt sâu khoang tuổi từ dịch nuôi cấy vi khuẩn S marcescens SH1 xử lí acid HCl 1N pH2 61 Hình 3.22 Khả diệt sâu khoang tuổi dịch nuôi cấy S.marcescens SH1 xử lý acid bổ sung phụ gia 62 Hình 3.23 So sánh hiệu lực diệt sâu sau 96 cho ăn phƣơng pháp nhỏ giọt bề mặt 65 Hình 3.24 Quy trình sản xuất chế phẩm sinh học diệt sâu Prodi 65 TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Chủng vi khuẩn SH1 đƣợc phân lập từ tuyến trùng gây bệnh côn trùng (EPN) Heterorhabditis indica CP16 đƣợc định danh Serratia marcescens nhờ thử nghiệm sinh hố giải trình tự gene 16S rRNA có khả diệt sâu với hiệu lực cao sâu khoang Spodoptera litura Sắc tố màu đỏ vi khuẩn tổng hợp đƣợc thu nhận phƣơng pháp trích ly lỏng - lỏng hợp chất tan ethanol có bƣớc sóng hấp thụ cực đại 535 nm, khối lƣợng phân tử 323,8 Da prodigiosin, hợp chất thứ cấp Serratia marcescens cho ăn nồng độ 27,66 ng/cm2 gây chết 90 % sâu sau 120 Sử dụng trực tiếp vi khuẩn Serratia marcescens chế phẩm diệt sâu khó đƣợc chấp nhận lý an tồn sinh học sinh thái Mặt khác nuôi cấy tách chiết hợp chất thứ cấp đắt tiền khó ứng dụng thực tế Sau lên men S marcescens SH1 mơi trƣờng peptone glycerol pH 7,5 nhiệt độ phịng, lắc 150-180 vịng phút, dịch ni cấy chứa > 10 mg/ml prodigiosin đƣợc xử lý HCl 1N pH để tiêu diệt toàn vi khuẩn mà không ảnh hƣởng lên nồng độ prodigiosin hoạt tính enzyme protease, lipase Hiệu lực diệt sâu dịch nuôi cấy vi khuẩn S.marcescens xử lý acid diệt sâu tốt nồng độ prodigiosin 16,5 ng/cm2 Với dịch ni cấy vi khuẩn qua xử lí acid, vòng 72 tỉ lệ sâu chết 50% đến hết ngày thứ tỉ lệ sâu chết đạt 95,6% Khi bổ sung phụ gia tạo chế phẩm, tỉ lệ sâu chết 56,67% vòng 48 100% sau 96 giờ, tƣơng đƣơng với thuốc trừ sâu sinh học REASGANT 1.8EC (abamectin) Từ khóa: Hiệu lực diệt sâu, prodigiosin, Serratia marcescens, tuyến trùng gây bệnh côn trùng (EPN), vi khuẩn nội sinh ĐẶT VẤN ĐỀ Các sản phẩm xuất mặt hàng nơng nghiệp Việt Nam dần có chỗ đứng thị trƣờng quốc tế, nhƣ: Trung Quốc, Nhật Bản, Hàn Quốc Tuy nhiên, việc sản xuất thu hoạch loại nơng sản thiếu tính chun nghiệp khoa học, lạm dụng chất bảo vệ thực vật hóa học gây tồn đọng dƣ lƣợng thuốc sản phẩm lí làm sản phẩm Việt khó tạo đƣợc niềm tin uy tín thị trƣờng Âu – Mỹ Thêm vào tình hình thời tiết năm trở lại có chuyển biến phức tạp tƣợng thời tiết El Niño làm ảnh hƣởng đến phát triển trồng xuất lồi trùng gây hại Để hạn chế công côn trùng lên rau màu, ngƣời nơng dân dùng thuốc hóa học với liều lƣợng q mức cho phép, vơ tình tạo cho trùng khả kháng thuốc, làm cho tình hình sâu hại trở nên nghiêm trọng hơn, diễn biến phức tạp Vì vậy, xu hƣớng sử dụng biện pháp phòng trừ sinh học trở nên hữu ích tiết kiệm chi phí, có tác dụng phịng trừ lâu dài, an tồn cho sức khỏe ngƣời, đồng thời không gây ô nhiễm môi trƣờng Trong biện pháp sinh học đƣợc sử dụng tuyến trùng gây bệnh trùng EPN đƣợc biết đến giới nhƣng chƣa phổ biến Việt Nam nhân ni in vitro địi hỏi kỹ thuật cao thiết bị đắt tiền, nhân nuôi in vivo suất thấp Bảo quản chế phẩm tuyến trùng gặp khơng khó khăn Vì nhóm nghiên cứu muốn phát triển chế phẩm sinh ọc từ vi khuẩn cộng sinh hay nội sinh tuyến trùng có độc lực sâu Việc sử dụng trực tiếp vi khuẩn làm chế phẩm diệt sâu khó đƣợc chấp nhận lí an tồn sinh học Từ đó, nhóm nghiên cứu quan tâm đến hợp chất thứ cấp từ vi khuẩn cộng sinh (nội sinh) tuyến trùng EPN phát triển chế phẩm diệt sâu từ dịch nuôi cấy vi khuẩn chứa hợp chất thứ cấp enzyme vi khuẩn Xuất phát từ lý nhóm chúng tơi chọn hƣớng cho đề tài nghiên cứu là: “Phát triển chế phẩm diệt sâu từ dịch nuôi cấy Serratia marcescens SH1 phân lập từ tuyến trùng Heterorhabditis indica CP16.” 101 B B B A 9.7800 8.4933 3 ?C_24 pH2_24 OD_499 15:52 Monday, November 1, 2004 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Nthuc pH2_2h pH2_4h Values DC_24h DC_2h DC_4h pH1_24h pH1_2h pH1_4h pH2_24h Number of observations OD_499 27 15:52 Monday, November 1, 2004 The ANOVA Procedure Dependent Variable: OD Sum of Squares Source DF Model 41.61096296 5.20137037 18 17.85813333 0.99211852 Error Corrected Total 26 Mean Square Coeff Var Root MSE 0.699707 5.561541 0.996051 DF Nthuc Pr > F 5.24 0.0017 59.46909630 R-Square Source F Value Anova SS 41.61096296 OD_499 OD Mean 17.90963 Mean Square 5.20137037 F Value 5.24 Pr > F 0.0017 15:52 Monday, November 1, 2004 102 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for OD NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 18 Error Mean Square 0.992119 Critical Value of t 2.10092 Least Significant Difference 1.7086 Means with the same letter are not significantly different t Grouping C C C C C C C Mean N Nthuc A A A 19.9933 pH1_24h 19.9333 DC_24h B B B B B B B B B B B 18.0533 pH2_24h 18.0000 pH2_4h 17.9267 pH1_2h 17.2467 pH1_4h 17.0933 DC_4h 16.7467 DC_2h 16.1933 prodi unit/cell pH2_2h 15:52 Monday, November 1, 2004 The ANOVA Procedure Class Level Information 103 Class Levels Nthuc pH2_2h pH2_4h Values DC_24h DC_2h DC_4h pH1_24h pH1_2h pH1_4h pH2_24h - Thí nghiệm hoạt tính diệt sâu cho ăn hợp chất màu - Hoạt tính diệt sâu Spodoptera litura cho ăn hợp chất màu Summary Statistics for Ty le chet o nong 27666 ng Time Count Average Standard deviation Coeff of Minimum Maximum variation 24 0.0 0.0 % 0.0 0.0 36 0.0 0.0 % 0.0 0.0 48 2.22222 3.849 173.205% 0.0 6.66667 72 22.2222 1.9245 8.66025% 20.0 23.3333 96 42.2222 6.93889 16.4342% 36.6667 50.0 110 66.6667 3.33333 5.0% 63.3333 70.0 134 86.6667 3.33333 3.84615% 83.3333 90.0 31.4286 33.2761 105.879% 0.0 90.0 Total 21 ANOVA Table for Ty le chet o nong 27666 ng by Time Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 21968.3 3661.38 0.0000 Within groups 177.778 14 12.6984 Total (Corr.) 22146.0 20 288.33 Multiple Range Tests for Ty le chet o nong 27666 ng by Time Method: 95.0 percent LSD Time Count Mean Homogeneous Groups 36 0.0 X 24 0.0 X 104 48 2.22222 X 72 22.2222 X 96 42.2222 X 110 66.6667 X 134 86.6667 X Summary Statistics for Ty le chet o nong 2766 ng Time Count Average Standard deviation Coeff of Minimum variation Maximu m 24 1.11111 1.9245 173.205% 0.0 3.33333 36 2.22222 1.9245 86.6025% 0.0 3.33333 48 5.55556 1.9245 34.641% 3.33333 6.66667 72 25.5556 5.09175 19.9242% 20.0 30.0 96 47.7778 1.9245 4.02803% 46.6667 50.0 110 70.0 3.33333 4.7619% 66.6667 73.3333 134 88.8889 1.9245 2.16506% 86.6667 90.0 34.4444 33.5548 97.4172% 0.0 90.0 Total 21 ANOVA Table for Ty le chet o nong 2766 ng by Time Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 22407.4 3734.57 0.0000 Within groups 111.111 14 7.93651 Total (Corr.) 22518.5 20 470.56 Multiple Range Tests for Ty le chet o nong 2766 ng by Time Method: 95.0 percent LSD Time Count Mean Homogeneous Groups 24 1.11111 X 36 2.22222 X 48 5.55556 X 105 72 25.5556 X 96 47.7778 X 110 70.0 X 134 88.8889 X Summary Statistics for Ty le chet o nong 276 ng Time Count Average Standard deviation Coeff of Minimum Maximum variation 24 1.11111 1.9245 173.205% 0.0 3.33333 36 5.55556 1.9245 34.641% 3.33333 6.66667 48 10.0 3.33333 33.3333% 6.66667 13.3333 72 31.1111 1.9245 6.1859% 30.0 33.3333 96 61.1111 5.09175 8.33196% 56.6667 66.6667 110 75.5556 5.09175 6.73908% 70.0 80.0 134 88.8889 1.9245 2.16506% 86.6667 90.0 39.0476 34.2563 87.7295% 0.0 90.0 Total 21 ANOVA Table for Ty le chet o nong 276 ng by Time Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 23314.3 3885.71 0.0000 Within groups 155.556 14 11.1111 Total (Corr.) 23469.8 20 349.71 Multiple Range Tests for Ty le chet o nong 276 ng by Time Method: 95.0 percent LSD Time Count Mean Homogeneous Groups 24 1.11111 X 36 5.55556 XX 48 10.0 X 72 31.1111 X 106 96 61.1111 X 110 75.5556 X 134 88.8889 X Summary Statistics for Ty le chet o nong 27 ng Time Count Average Standard deviation Coeff of Minimum Maximum variation 24 3.33333 3.33333 100.0% 0.0 6.66667 36 8.88889 1.9245 21.6506% 6.66667 10.0 48 21.1111 1.9245 9.11606% 20.0 23.3333 72 45.5556 5.09175 11.177% 40.0 50.0 96 66.6667 6.66667 10.0% 60.0 73.3333 110 85.5556 1.9245 2.24942% 83.3333 86.6667 134 97.7778 3.849 3.93648% 93.3333 100.0 46.9841 35.8222 76.2431% 0.0 100.0 Total 21 ANOVA Table for Ty le chet o nong 27 ng by Time Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 25449.7 4241.62 0.0000 Within groups 214.815 14 15.3439 Total (Corr.) 25664.6 20 276.44 Multiple Range Tests for Ty le chet o nong 27 ng by Time Method: 95.0 percent LSD Time Count Mean Homogeneous Groups 24 3.33333 X 36 8.88889 X 48 21.1111 X 72 45.5556 X 96 66.6667 X 107 110 85.5556 X 134 97.7778 X Summary Statistics for Ty le chet o nong ng Time Count Average Standard deviation Coeff of Minimum Maximum variation 24 0.0 0.0 % 0.0 0.0 36 5.55556 1.9245 34.641% 3.33333 6.66667 48 15.5556 1.9245 12.3718% 13.3333 16.6667 72 36.6667 3.33333 9.09091% 33.3333 40.0 96 57.7778 5.09175 8.81265% 53.3333 63.3333 110 71.1111 1.9245 2.70633% 70.0 73.3333 134 94.4444 1.9245 2.03771% 93.3333 96.6667 40.1587 33.9358 84.5042% 0.0 96.6667 Total 21 ANOVA Table for Ty le chet o nong ng by Time Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 22929.1 3821.52 0.0000 Within groups 103.704 14 7.40741 Total (Corr.) 23032.8 20 515.90 Multiple Range Tests for Ty le chet o nong ng by Time Method: 95.0 percent LSD Time Count Mean Homogeneous Groups 24 0.0 X 36 5.55556 X 48 15.5556 X 72 36.6667 X 96 57.7778 X 110 71.1111 X 108 134 94.4444 X Summary Statistics for Ty le chet o nong 02 ng Time Count Average Standard deviation Coeff of Minimum variation Maximu m 24 0.0 0.0 % 0.0 0.0 36 3.33333 3.33333 100.0% 0.0 6.66667 48 11.1111 3.849 34.641% 6.66667 13.3333 72 28.8889 1.9245 6.66173% 26.6667 30.0 96 46.6667 3.33333 7.14286% 43.3333 50.0 110 63.3333 3.33333 5.26316% 60.0 66.6667 134 91.1111 3.849 4.22451% 86.6667 93.3333 34.9206 32.3285 92.5771% 0.0 93.3333 Total 21 ANOVA Table for Ty le chet o nong 02 ng by Time Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 20769.3 3461.55 0.0000 Within groups 133.333 14 9.52381 Total (Corr.) 20902.6 20 363.46 Multiple Range Tests for Ty le chet o nong 02 ng by Time Method: 95.0 percent LSD Time Count Mean Homogeneous Groups 24 0.0 X 36 3.33333 X 48 11.1111 X 72 28.8889 X 96 46.6667 X 110 63.3333 X 134 91.1111 X 109 Summary Statistics for Ty le sau chet Time va nong Count Average Standard deviation Coeff of variation 110 - 0.27 ng/cm2 63.3333 3.33333 5.26316% 110 - 2.76 ng/cm2 71.1111 1.9245 2.70633% 110 - 27.66 ng/cm2 85.5556 1.9245 2.24942% 110 - 276.6 ng/cm2 75.5556 5.09175 6.73908% 110 - 2766.6 ng/cm2 70.0 3.33333 4.7619% 110 - 27666.4 ng/cm2 66.6667 3.33333 5.0% 134 - 0.27 ng/cm2 91.1111 3.849 4.22451% 134 - 2.76 ng/cm2 94.4444 1.9245 2.03771% 134 - 27.66 ng/cm2 97.7778 3.849 3.93648% 134 - 276.6 ng/cm2 88.8889 1.9245 2.16506% 134 - 2766.6 ng/cm2 88.8889 1.9245 2.16506% 134 - 27666.4 ng/cm2 86.6667 3.33333 3.84615% 24 - 0.27 ng/cm2 0.0 0.0 % 24 - 2.76 ng/cm2 0.0 0.0 % 24 - 27.66 ng/cm2 3.33333 3.33333 100.0% 24 - 276.6 ng/cm2 1.11111 1.9245 173.205% 24 - 2766.6 ng/cm2 1.11111 1.9245 173.205% 24 - 27666.4 ng/cm2 0.0 0.0 % 36 - 0.27 ng/cm2 3.33333 3.33333 100.0% 36 - 2.76 ng/cm2 5.55556 1.9245 34.641% 36 - 27.66 ng/cm2 8.88889 1.9245 21.6506% 36 - 276.6 ng/cm2 5.55556 1.9245 34.641% 36 - 2766.6 ng/cm2 2.22222 1.9245 86.6025% 36 - 27666.4 ng/cm2 0.0 0.0 % 48 - 0.27 ng/cm2 11.1111 3.849 34.641% 48 - 2.76 ng/cm2 15.5556 1.9245 12.3718% 110 48 - 27.66 ng/cm2 21.1111 1.9245 9.11606% 48 - 276.6 ng/cm2 10.0 3.33333 33.3333% 48 - 2766.6 ng/cm2 5.55556 1.9245 34.641% 48 - 27666.4 ng/cm2 2.22222 3.849 173.205% 72 - 0.27 ng/cm2 28.8889 1.9245 6.66173% 72 - 2.76 ng/cm2 36.6667 3.33333 9.09091% 72 - 27.66 ng/cm2 45.5556 5.09175 11.177% 72 - 276.6 ng/cm2 31.1111 1.9245 6.1859% 72 - 2766.6 ng/cm2 25.5556 5.09175 19.9242% 72 - 27666.4 ng/cm2 22.2222 1.9245 8.66025% 96 - 0.27 ng/cm2 46.6667 3.33333 7.14286% 96 - 2.76 ng/cm2 57.7778 5.09175 8.81265% 96 - 27.66 ng/cm2 66.6667 6.66667 10.0% 96 - 276.6 ng/cm2 61.1111 5.09175 8.33196% 96 - 2766.6 ng/cm2 47.7778 1.9245 4.02803% 96 - 27666.4 ng/cm2 42.2222 6.93889 16.4342% Total 126 37.8307 33.576 88.7532% ANOVA Table for Ty le sau chet by Time va nong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 140022 41 3415.17 0.0000 Within groups 896.296 84 10.6702 Total (Corr.) 140918 125 320.07 Multiple Range Tests for Ty le sau chet by Time va nong Method: 95.0 percent LSD Time va nong Count Mean Homogeneous Groups 24 - 0.27 ng/cm2 0.0 X 24 - 2.76 ng/cm2 0.0 X 111 24 - 27666.4 ng/cm2 0.0 X 36 - 27666.4 ng/cm2 0.0 X 24 - 276.6 ng/cm2 1.11111 XX 24 - 2766.6 ng/cm2 1.11111 XX 36 - 2766.6 ng/cm2 2.22222 XX 48 - 27666.4 ng/cm2 2.22222 XX 36 - 0.27 ng/cm2 3.33333 XX 24 - 27.66 ng/cm2 3.33333 XX 36 - 276.6 ng/cm2 5.55556 XX 48 - 2766.6 ng/cm2 5.55556 XX 36 - 2.76 ng/cm2 5.55556 XX 36 - 27.66 ng/cm2 8.88889 XX 48 - 276.6 ng/cm2 10.0 XX 48 - 0.27 ng/cm2 11.1111 XX 48 - 2.76 ng/cm2 15.5556 X 48 - 27.66 ng/cm2 21.1111 X 72 - 27666.4 ng/cm2 22.2222 X 72 - 2766.6 ng/cm2 25.5556 XX 72 - 0.27 ng/cm2 28.8889 XX 72 - 276.6 ng/cm2 31.1111 X 72 - 2.76 ng/cm2 36.6667 X 96 - 27666.4 ng/cm2 42.2222 X 72 - 27.66 ng/cm2 45.5556 XX 96 - 0.27 ng/cm2 46.6667 XX 96 - 2766.6 ng/cm2 47.7778 X 96 - 2.76 ng/cm2 57.7778 X 96 - 276.6 ng/cm2 61.1111 XX 110 - 0.27 ng/cm2 63.3333 XX 112 110 - 27666.4 ng/cm2 66.6667 XX 96 - 27.66 ng/cm2 66.6667 XX 110 - 2766.6 ng/cm2 70.0 X 110 - 2.76 ng/cm2 71.1111 XX 110 - 276.6 ng/cm2 75.5556 X 110 - 27.66 ng/cm2 85.5556 X 134 - 27666.4 ng/cm2 86.6667 XX 134 - 2766.6 ng/cm2 88.8889 XX 134 - 276.6 ng/cm2 88.8889 XX 134 - 0.27 ng/cm2 91.1111 XX 134 - 2.76 ng/cm2 94.4444 XX 134 - 27.66 ng/cm2 97.7778 X - Hoạt tính diệt sâu Spodoptera exigua cho ăn hợp chất màu - Summary Statistics for TyLe%SauChet NongDoSauTri Coun Average Standard Coeff chLy t variation um um ge 2,439202 27 63.1983% 3.33 80.0 76.6 2.6825 deviation 28.8889 18.2573 of Minim Maxim Ran Stnd skewness 24,39202 27 46.7907 17.3074 36.9889% 16.67 86.67 70.0 0.964417 243,9202 27 28.1485 18.5434 65.877% 0.0 73.33 73.3 2.09611 2439,202 27 25.0626 19.5764 78.11% 0.0 80.0 80.0 2.17201 24392,02 27 21.4826 17.2052 80.0891% 3.33 66.67 63.3 2.71714 Total 135 30.0747 19.9645 66.3831% 0.0 86.67 86.6 3.61626 - 113 NongDoSauTric Stnd hLy kurtosis 2,439202 1.95457 24,39202 0.219759 243,9202 0.933352 2439,202 1.0163 24392,02 0.941781 Total 0.066423 ANOVA Table for TyLe%SauChet by NongDoSauTrichLy Source Sum of Df Squares Between Mean F-Ratio P-Value 7.82 0.0000 Square 10354.2 2588.54 43055.6 130 331.197 groups Within groups Total (Corr.) 53409.8 134 Table of Means for TyLe%SauChet by NongDoSauTrichLy with 95.0 percent LSD intervals Stnd error NongDoSauTric Count Mean (pooled Lower Upper hLy s) limit limit 2,439202 27 28.888 3.50237 23.9893 33.7884 24,39202 27 46.790 3.50237 41.8912 51.6903 243,9202 27 28.148 3.50237 23.249 33.0481 2439,202 27 25.062 3.50237 20.163 29.9622 114 24392,02 27 21.482 3.50237 16.583 26.3822 Total 135 30.074 Multiple Range Tests for TyLe%SauChet by NongDoSauTrichLy Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups 24392,0 27 21.482 X 2439,20 27 25.062 X 243,920 27 28.148 X 2,43920 27 28.888 X 24,3920 27 46.790 Contrast X Sig Differenc +/e 2,439202 Limits - * -17.9019 9.79912 - 0.74037 9.79912 - 3.8263 24,39202 2,439202 243,9202 2,439202 2439,202 9.79912 115 2,439202 - 7.4063 9.79912 - * 18.6422 9.79912 - * 21.7281 9.79912 - * 25.3081 9.79912 - 3.08593 9.79912 - 6.66593 9.79912 - 3.58 24392,02 24,39202 243,9202 24,39202 2439,202 24,39202 24392,02 243,9202 2439,202 243,9202 24392,02 2439,202 9.79912 24392,02 * denotes a statistically significant difference ... nghiên cứu là: ? ?Phát triển chế phẩm diệt sâu từ dịch nuôi cấy Serratia marcescens SH1 phân lập từ tuyến trùng Heterorhabditis indica CP16. ” Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu tuyến trùng EPN... Sản xuất chế phẩm diệt sâu từ dịch nuôi cấy chứa hợp chất thứ cấp prodigiosin từ vi khuẩn Serratia marcescens SH1 phân lập từ tuyến trùng diệt sâu EPN 2.1.2 Nội dung nghiên cứu i) Phân lập định... Nghiên cứu phát triển chế phẩm diệt sâu từ dịch nuôi cấy Serratia marcescens SH1 51 3.4.1 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình tổng hợp sắc tố từ vi khuẩn Serratia marcescens SH1