luận án tiến sĩ nghiên cứu một số đặc điểm của bệnh care ở chó nuôi tại hà nội và chế kháng thể phòng trị bệnh

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ NGUYỄN THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA BỆNH CARE Ở CHĨ NI TẠI HÀ NỘI VÀ CHẾ KHÁNG THỂ PHỊNG TRỊ BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ NGUYỄN THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA BỆNH CARE Ở CHĨ NI TẠI HÀ NỘI VÀ CHẾ KHÁNG THỂ PHÒNG TRỊ BỆNH Ngành : Bệnh lý học và chữa bệnh vật nuôi Ma sô : 64 01 02 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Hữu Nam PGS.TS Phạm Ngọc Thạch HÀ NỘI - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi, cơng ty Hanvet Các kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án cám ơn, thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Tác giả luận án Nguyễn Thị Huyền i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận án, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, động viên đồng nghiệp bạn bè; giúp đỡ vật chất lẫn tinh thần quan gia đình Nhân dịp này, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn đến Cha, Mẹ người sinh thành dưỡng dục Biết ơn PGS.TS Nguyễn Hữu Nam, PGS.TS Phạm Ngọc Thạch hết lòng hướng dẫn, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, thực hoàn thành luận án Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ông Nguyễn Hữu Vũ, Chủ Tịch Hội Đồng Quản Trị - Tổng Giám đốc Công ty Cổ phần Dược thú y Hanvet toàn thể Ban Lãnh Đạo Công ty, giúp đỡ vật chất, tinh thần tạo điều kiện cho thời gian, địa điểm nghiên cứu suốt trình thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc Học viện, Ban Quản lý đào tạo Các thầy cô giáo Bộ môn Bệnh lý; Các thầy cô giáo Khoa Thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam: tận tình hướng dẫn bảo, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài Cảm ơn Anh Trần Văn Khánh, PTGĐ Công ty Hanvet; Ban Lãnh đạo Trung tâm Nghiên cứu sinh phẩm công ty Hanvet đặc biệt toàn cán nhân viên Bệnh viện Thú Cảnh Hanvet: Chị Lê Thị My, anh Lê Phạm Trịnh Công, chị Lê Thị Nụ giúp đỡ hỗ trợ tơi suốt q trình nghiên cứu Xin gửi lời cảm ơn lời u thương đến đại gia đình tơi: Bố, Mẹ, Chồng , anh chị em tôi, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận án./ Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Huyền ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng .vii Danh mục hình ix Trích yếu luận án .x Thesis abstract .xii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu .2 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.3 Phạm vi nghiên cứu .3 1.4 Những đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .3 1.5.1 Ý nghĩa khoa học 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu .5 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Care 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Care giới .5 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Care Việt Nam 2.2 Đặc tính sinh học virus gây bệnh Care 10 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc, phân loại .10 2.2.2 Đặc tính sinh học virus 13 2.2.3 Đặc tính sinh học phân tử virus 15 2.3 Bệnh Care chó 18 2.3.1 Dịch tễ học 18 2.3.2 Cơ chế sinh bệnh 19 2.3.3 Đặc điểm bệnh lý .20 2.3.4 Chẩn đoán bệnh 23 iii 2.3.5 Phòng điều trị bệnh .26 2.4 Một số nghiên cứu áp dụng điều trị bệnh Care kháng huyết .29 Phần Nội dung Phương pháp nghiên cứu 33 3.1 Nội dung nghiên cứu 33 3.1.1 Nghiên cứu số đặc điểm bệnh Care chó Hà Nội 33 3.1.2 Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng virus Care .33 3.1.3 Nghiên cứu gây bệnh thực nghiệm điều trị thử nghiệm bệnh Care kháng thể kháng virus Care .33 3.2 Vật liệu nghiên cứu 33 3.2.1 Trang thiết bị dụng cụ 33 3.2.2 Phạm vi nghiên cứu 34 3.3 Phương pháp nghiên cứu 35 3.3.1 Phương pháp nghiên cứu số đặc điểm bệnh Care 35 3.3.2 Phương pháp nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng virus Care 38 3.3.3 Phương pháp gây bệnh thực nghiệm điều trị thực nghiệm 42 3.3.4 Phương pháp điều trị thử nghiệm kháng thể kháng virus Care 45 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 47 Phần Kết Thảo luận .48 4.1 Kết xác định số đặc điểm bệnh Care .48 4.1.1 Kết xác định tỷ lệ mắc bệnh Care chó đến khám phòng khám thú y địa bàn Hà Nội 48 4.1.2 Kết kiểm tra chó mắc Care test chẩn đoán nhanh CDV-Ag .49 4.1.3 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo địa bàn điều tra 52 4.1.4 Tỷ lệ mắc bệnh Care theo giống chó 53 4.1.5 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo lứa tuổi 55 4.1.6 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo mùa 57 4.1.7 Tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo tính biệt .58 4.1.8 Một số hình ảnh triệu chứng điển hình chó mắc bệnh Care 59 4.1.9 Kết nghiên cứu bệnh tích đại thể vi thể chó mắc bệnh Care 61 4.2 Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng virus Care .64 4.2.1 Nghiên cứu quy trình chế tạo kháng thể kháng virus Care 64 4.2.2 Chế tạo thử nghiệm kháng thể kháng virus Care quy mô Pilot 71 iv 4.3 Kết gây bệnh thực nghiệm điều trị thử nghiệm 74 4.3.1 Kết gây bệnh thực nghiệm 74 4.3.2 Kết nghiên cứu thử nghiệm kháng thể kháng virus Care phòng trị bệnh 93 Phần Kết luận Kiến nghị 102 5.1 Kết luận 102 5.2 Kiến nghị 103 Danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án .104 Tài liệu tham khảo .105 Phụ lục 114 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt ADN ARN C cDNA CDV CDVag CEF CPE DMEM FBS FCS IgA IgD IgE IgG IgM KKT KN KT T TCID50 Vero-DST TCVN 86846:2001 vi DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang 2.1 Các loại vaccine kháng thể kháng virus Care dùng Việt Nam 31 4.1 Kết xác định tỷ lệ mắc bệnh Care chó đến khám phòng khám địa bàn Hà Nội 48 4.2 Kết kiểm tra chó mắc Care test chẩn đoán nhanh CDV Ag .51 4.3 Tỷ lệ mắc bệnh Care chó theo địa bàn điều tra Hà Nội 52 4.4 Kết xác định tỷ lệ mắc bệnh Care theo giống chó 53 4.5 Kết xác định tỷ lệ mắc Care theo lứa tuổi 55 4.6 Kết xác định tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo mùa vụ 57 4.7 Kết xác định tỷ lệ chó mắc bệnh Care theo tính biệt 58 4.8 Kết cô đặc huyết hệ thống lọc TFF 73 4.9 Kết thử nghiệm chế tạo kháng thể Care quy mô Pilot 74 4.10 Kết chai kiểm nghiệm 03 lô sản phẩm kháng thể Care .74 4.11a Kết xét nghiệm virus Care phương pháp RT - PCR 75 4.11b Kết xét nghiệm virus Care phương pháp RT - PCR 76 4.12 Biến động thân nhiệt chó sau gây bệnh với chủng CDV-HV điều trị thực nghiệm chế phẩm kháng huyết Care .79 4.13 Biến động tần số hô hấp chó sau gây bệnh với chủng CDVHV điều trị thực nghiệm chế phẩm kháng huyết Care 81 4.14 Biến động tần số tim chó sau gây bệnh với chủng CDV-HV điều trị thực nghiệm chế phẩm kháng huyết Care .83 4.15 Triệu chứng lâm sàng chó gây nhiễm CDV-HV thực nghiệm 85 4.16 Kết khảo sát số tiêu huyết học chủ yếu chó gây bệnh với chủng CDV-HV thực nghiệm 87 4.17 Bệnh tích vi thể chủ yếu chó gây nhiễm CDV-HV thực nghiệm .89 4.18 Kết nhuộm hóa mơ miễn dịch quan 92 4.19 Kết bước đầu điều trị thử nghiệm chó gây nhiễm virus Care .93 4.20 Kết thử nghiệm kháng thể kháng virus Care phòng bệnh Care 94 4.21 Kết thử nghiệm kháng thể điều trị bệnh Care 95 4.22 Hiệu điều trị kháng kháng virus Care phòng khám (liều tiêm 0,5 ml/2-5kg thể trọng) .97 vii 4.23 Hiệu điều trị kháng thể kháng virus Care phòng khám (liều tiêm ml-1,5/2-5kg thể trọng) 98 4.24 So sánh phác đồ điều trị kháng thể chống bệnh Care theo lứa tuổi .99 4.25 So sánh phác đồ điều trị kháng thể chống bệnh Care theo giống chó 100 viii BỆNH VIỆN THÚ CẢNH HANV Trụ sở - PK1: 86 - 88 Trường Chinh - Đốn Điện thoại: 024.38687201 - Hotline: 0913.367.27 Website: hanvetpetclinic.com.vn BỆNH ÁN Hà Nội, Ngày …… tháng…… năm 20 Số bệnh án:……….………… Họ tên chủ vật nuôi: Địa chỉ:………………………………………………… ĐT:……………… Loại vật nuôi: …… Giống:….… Tuổi:…… Màu lơng:…….Trọng lượng:………… Loại vaccine tiêm phịng: Tiền sử bệnh: - Thời gian mắc bệnh : - Triệu chứng chủ yếu: - Thuốc phương pháp điều trị: Kết khám bệnh: -Thân nhiệt:………………………… -Hệ tiết niệu: -Hệ tuần hồn:……………………… -Da, lơng: -Hệ hơ hấp:………………………… -Niêm mạc: -Hệ tiêu hóa: Kết sơ chẩn: Q trình theo dõi điều trị: Ngày: CHỦ VẬT NUÔI BÁC SĨ ĐIỀU TRỊ 116 Phụ Lục 2: K ết điều tra tỷ lệ mắc bệnh Care chó khu vực Hà Nội Tỷ lệ (%) 3.29 Quận Tây Hồ Hình 2.1 Tỷ lệ mắc Care theo địa bàn điều tra Hà Nội Tỷ lệ mắc Care theo giống chó 3.81 Hình 2.2 Tỷ lệ mắc Care theo giống chó Bắc Hà Phú Quốc Tỷ lệ (%) 117 Chó tháng tuổi Chó từ - tháng tuổi Chó từ - 12 tháng tuổi Chó 12 tháng tuổi Hình 2.3 Tỷ lệ mắc Care theo lứa tuổi Tỷ lệ mắc (%) Tỷ lệ (%) Mùa Xn Đơng Mùa Hè Mùa Thu Hình 2.4 Tỷ lệ mắc Care theo mùa vụ 118 Mùa Phụ Lục 3: Kết xác định khả đáp ứng miễn dịch chó Ngày kiểm tra Ngày Ngày 14 Ngày 28 Ngày 42 Ngày 56 119 Phụ Lục 4: Kết xác định khả đáp ứng miễn dịch Thỏ Ngày kiểm tra Ngày Ngày 14 Ngày 28 Ngày 42 Ngày 56 120 Phụ Lục 5: Kết xác định độ tuổi thỏ dùng để chế kháng thể Ngày 0: Tiêm Vaccine Care cho thỏ giai đoạn 2, tháng tuổi Ngày 14: Tiêm Vaccine cho thỏ lần Ngày 28: Tiêm Vaccine cho thỏ lần Ngày 56: Lấy máu kiểm tra hàm lượng kháng thể Nhóm thí nghiệm Thỏ tháng tuổi Thỏ tháng tuổi Thỏ tháng tuổi 121 Phụ lục 6: Kết nghiên cứu quy trình gây tối miễn dịch để sản xuất kháng thể Quy trình 01: Tiêm lần vào ngày 0, 14, 28, 42, 56 Kiểm tra kháng thể vào ngày 98, 112, 126 Quy trình 02: Tiêm lần vào ngày 0, 14, 28, 42, 56, 70 Kiểm tra kháng thể vào ngày 98, 112, 126 Quy trình 03: Tiêm lần vào ngày 0, 14, 28, 42, 56, 70, 84 Kiểm tra kháng thể vào ngày 98, 112, 126 Nhóm thí nghiệm Quy trình 01 Động vật số Thỏ 01 Thỏ 02 Thỏ 03 Thỏ 04 Thỏ 05 Trung bình Thỏ 06 Thỏ 07 Thỏ 08 Quy trình 02 Thỏ 09 Thỏ 10 Trung bình Thỏ 11 Thỏ 12 Thỏ 13 Quy trình 03 Thỏ 14 Thỏ 15 Trung bình 122 Phụ Lục 7: Kết xác định độ tuổi thỏ dùng để chế kháng thể Ngày 0: Tiêm Vaccine Care cho thỏ giai đoạn 2, tháng tuổi Ngày 14: Tiêm Vaccine cho thỏ lần Ngày 28: Tiêm Vaccine cho thỏ lần Ngày 56: Lấy máu kiểm tra hàm lượng kháng thể Nhóm thí nghiệm Thỏ tháng tuổi Thỏ tháng tuổi Thỏ tháng tuổi 123 Phụ Lục 8: Kết chai kiểm nghiệm 03 lô sản phẩm kháng thể Care Lô sản xuất KT.Care 01 KT.Care 02 KT.Care 03 Ghi chú: * Kiểm tra tạp nhiễm virus xuất huyết truyền nhiễm thỏ Phụ lục 9: Kết điện di xuất huyết thỏ âm tính Kết điện di sản phẩm PCR phát Rabbit Calicivirus gây bệnh xuất huyết thỏ (Rabbit haemorrhagic disease – RHD) từ mẫu máu thỏ nghiên cứu cặp mồi chẩn đoán RCV-F – RCV-R Ghi chú: M: thị phân tử DNA thực khuẩn thể Lambda cắt HindIII 1: mẫu máu thỏ sử dụng nghiên cứu (-): mẫu đối chứng âm Kết quả: Phản ứng PCR cho kết âm tính với cặp mồi chẩn đốn RCV-F – RCV-R Điều chứng tỏ thỏ sử dụng nghiên cứu không bị nhiễm Calicivirus gây bệnh xuất huyết 124 ... bệnh Care 3.1.2 Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng virus Care - Nghiên cứu quy trình chế tạo kháng thể kháng virus Care; + Nghiên cứu lựa chọn động vật sử dụng cho chế tạo kháng thể; + Nghiên cứu. .. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 3.1.1 Nghiên cứu số đặc điểm bệnh Care chó Hà Nội - Đánh giá tình hình nhiễm bệnh Care chó ni khu vực Hà Nội; - Xác định tỷ lệ mắc bệnh. .. 61 4.2 Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng virus Care .64 4.2.1 Nghiên cứu quy trình chế tạo kháng thể kháng virus Care 64 4.2.2 Chế tạo thử nghiệm kháng thể kháng virus Care quy mô Pilot