Luận án tiến sĩ phân lập và tuyển chọn vi khuẩn chịu mặn có khả năng cố định đạm, tổng hợp INDOLE ACETIC ACID

LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm ơn thầy PGS TS Nguyễn Hữu Hiệp, thầy tận tình hướng dẫn khoa học, tư vấn thiết kế thí nghiệm, hướng dẫn cách tiếp cận kiến thức khoa học lĩnh vực nghiên cứu, từ giúp tơi hồn thành luận án Xin Chân thành cảm ơn tri ân sâu sắc đến thầy Chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Cần Thơ, Ban Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Phát triển Công Nghệ Sinh học, Khoa Sau đại học tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành nhiệm vụ học tập nghiên cứu Chân thành cảm ơn quý thầy cô Viện Nghiên Cứu Phát triển Công Nghệ Sinh học, trường Đại Học Cần Thơ tận tình dạy dỗ, giúp đỡ, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành nhiệm vụ học tập nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo Sở Giáo Dục Đào Tạo tỉnh Sóc Trăng, Lãnh đạo trường THPT Hồng Diệu hỗ trợ giúp đỡ suốt trình học tập nghiên cứu Chân thành cảm ơn em Nguyễn Thị Thúy Duy em sinh viên hỗ trợ tơi hồn thành nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo cán Trung tâm giống trồng tỉnh Sóc Trăng hỗ trợ tơi khảo nghiệm dịng vi khuẩn điều kiện đồng Sau xin cảm ơn người thân gia đình đồng nghiệp hết lịng giúp đỡ tạo điều kiện tốt để hồn thành q trình học tập nghiên cứu i TÓM TẮT Đề tài “Phân lập tuyển chọn vi khuẩn chịu mặn có khả cố định đạm, tổng hợp IAA mơ hình canh tác lúa – tơm Bạc Liêu, Sóc Trăng Kiên Giang” thực từ tháng 12 năm 2014 đến tháng năm 2018 Những nội dung nghiên cứu đề tài thực nhằm đạt đến mục tiêu tuyển chọn số dịng vi khuẩn địa, chịu mặn có khả cố định đạm tổng hợp IAA hiệu lên lúa chịu mặn, sản xuất theo mô hình canh tác lúa – tơm Kết nghiên cứu đề tài đạt sau: Hai trăm mười sáu dòng vi khuẩn phân lập từ 65 mẫu đất vùng rễ lúa chịu mặn tỉnh Bạc Liêu, Sóc Trăng Kiên Giang mơi trường Burk khơng đạm có bổ sung muối 10‰ Tất dịng vi khuẩn phân lập có khả cố định đạm tổng hợp IAA Ba mươi lăm dịng vi khuẩn vừa có khả tổng hợp NH4+ với hàm lượng ≥ 1,0 µg/mL vừa tổng hợp IAA với hàm lượng ≥ 15,0 µg/mL chọn để định danh khảo nghiệm khả cố định đạm tổng hợp IAA hữu hiệu lên lúa LP5 Hai mươi dòng vi khuẩn thuộc chi Bacillus, dòng thuộc chi Burkholderia, dòng thuộc chi Enterobacter, dòng thuộc chi Geobacillus dòng thuộc chi Paracocus Đánh giá hiệu 35 dòng vi khuẩn tuyển chọn lên chiều cao trọng lượng khô lên lúa LP5 trồng dung dịch khoáng Yoshida giai đoạn 20 ngày, dòng vi khuẩn: Bacillus sp PL2, Burkholderia sp PL9, Enterobacter sp LĐ1 Acinetobacter sp GH1-1 có độ hữu hiệu cao để tiến hành khảo nghiệm lúa LP5 điều kiện nhà lưới Hai dòng vi khuẩn Burkholderia sp PL9 Acinetobacter sp GH1-1 có khả cung cấp từ 25 – 50% nhu cầu đạm cho sinh trưởng phát triển lúa điều kiện nhà lưới Kết thí nghiệm ngồi đồng cho thấy dịng vi khuẩn Burkholderia sp PL9 Acinetobacter sp GH1-1 có ảnh hưởng tốt đến tăng trưởng suất giống lúa LP5 trồng đất nhiễm mặn sản xuất lúa theo mơ hình lúa – tơm xã Gia Hịa 2, huyện Mỹ Xun, tỉnh Sóc Trăng Chủng dịng vi khuẩn Burkholderia sp PL9 Acinetobacter sp GH1-1 kết hợp với bón 50% phân đạm cho suất lúa khác biệt không ý nghĩa so với lúa không chủng vi khuẩn có bón 100%N hóa học Như vậy, trồng lúa LP5 đất nhiễm mặn mơ hình lúa – tơm có chủng vi khuẩn bón bổ sung 50%N giúp tiết kiệm 50% phân bón đạm hóa học Từ khóa: Cố định đạm sinh học, xuất, sản xuất lúa – tôm, tổng hợp IAA, vi khuẩn chịu mặn ii ABSTRACT Thesis “Isolation and identification of salinity tolerant bacteria which can fix nitrogen and synthesize IAA in rice production system rice-shrimp in Bac Lieu, Soc Trang and Kien Giang provinces″ was carried out from December 2014 to March 2018 The purpose of this thesis was to select good indigenous bacteria which can fix nitrogen and synthesize IAA in rice production system rice-shrimp The results of the thesis were as lested below Two hundred and sixteen bacterial isolates were isolated from 65 rhizosphere soil samples collected from provinces Bac Lieu, Soc trang and Kien Giang on nitrogen free Burk medium containing sodium chloride (10‰) These isolates could fix nitrogen and synthesise IAA Thirty five isolates had the capacity of nitrogen fixing (NH4+ ) ≥ 1,0 µg/mL and synthesizing IAA ≥ 15,0 µg/mL as well These strains were chosen for identifying and testing of their effectiveness on nitrogen fixing and IAA synthesizing capacity on rive variety LP15 Twenty bacterial isolates were identified as Bacillus genus, isolates belonged to Burkholderia genus, isolates belonged to Burkholderia genus, isolates belonged to Geobacillus and one isolate belonged to Paracoccus genus Based on the effectiveness of thirty five strains on the height and dry weight of rice seedlings grown in Yoshida medium after 20 days, strains Bacillus sp PL2, Burkholderia sp PL9, Enterobacter sp LĐ1 and Acinetobacter sp GH1-1 which had high capacity of fixing nitrogen and synthsizing IAA were chosen to test their effectiveness on rice grown in the nethouse Two strains Burkholderia sp PL9 and Acinetobacter sp GH1-1 had high effectiveness on rice growth could support 25 – 50% of nitrogen for rice growth in nethouse condition In the field experiment, strains Burkholderia sp PL9 and Acinetobacter sp GH1-1 had good effects on rice growth and yield of rice variety LP5 Rice LP5 inoculated with either strain Burkholderia sp PL9 or strain Acinetobacter sp GH1-1 and supplied 50% nitrogen had the same yield as uninoculated rice applied 100% nitrogen So, inoculated rice grown in rice production system rice-shrimp could save up to 50% of nitrogen fertilizer Keywords: Biological nitrogen fixation, IAA synthesis, production system rice-shrimp, salanity tolerant bacteria, yield iii CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc CAM KẾT KẾT QUẢ Tôi xin cam kết luận án “Phân lập tuyển chọn vi khuẩn chịu mặn có khả cố định đạm, tổng hợp IAA mơ hình canh tác lúa – tơm Bạc Liêu, Sóc Trăng Kiên Giang” hoàn thành dựa kết nghiên cứu kết chưa dùng cho luận án cấp khác Cán hướng dẫn Tác giả luận án PGS TS NGUYỄN HỮU HIỆP NGUYỄN ANH HUY iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN………………………………………………………………… i TÓM TẮT ii ABSTRACT iii MỤC LỤC v DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.2 Nội dung nghiên cứu 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Thời gian địa điểm nghiên cứu 1.4.1 Thời gian nghiên cứu 1.4.2 Địa điểm nghiên cứu 1.5 Những đóng góp luận án 1.6 Cơ sở lý luận giả thuyết khoa học 1.6.1 Ý nghĩa khoa học 1.6.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đất nhiễm mặn mô hình sản xuất lúa – tơm đồng sơng Cửu Long 2.1.1 Đất nhiễm mặn 2.1.2 Tính chống chịu mặn lúa 2.1.3 Hiện trạng sản xuất lúa – tôm đồng sông Cửu Long 2.2 Vi khuẩn có khả tổng hợp NH4+ tổng hợp IAA 10 2.2.1 Bacillus 10 2.2.2 Burkholderia 11 2.2.3 Enterobacter 11 2.2.4 Rhizobium 12 2.3 Khả cố định đạm tổng hợp IAA vi khuẩn vùng rễ lúa 12 2.4 Khả chịu mặn vi khuẩn cố định đạm tổng hợp IAA 14 2.5 Cơ chế nhân tố ảnh hưởng đến khả cố định đạm vi khuẩn 15 2.6 Tổng hợp IAA vi khuẩn 23 2.6.1 Lược sử phát IAA 23 2.6.2 Chức IAA 24 2.6.3 Cơ chế tổng hợp IAA vi khuẩn 24 2.7 Tương tác vi khuẩn vùng rễ thực vật 26 2.7.1 Vùng rễ 26 2.7.2 Xâm nhập vi khuẩn vào rễ lúa 26 CHƯƠNG III PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚU 29 v 3.1 Nội dung nghiên cứu 29 3.2 Phương tiện nghiên cứu 29 3.2.1 Vật liệu 29 3.2.2 Dụng cụ 29 3.2.3 Thiết bị thí nghiệm 29 3.2.4 Hóa chất mơi trường ni cấy 30 3.3 Phương pháp nghiên cứu 30 3.3.1 Thu mẫu đất 30 3.3.2 Phân lập 30 3.3.3 Khảo sát đặc điểm khuẩn lạc vi khuẩn 32 3.3.4 Xác định khả tổng hợp NH4+ dòng vi khuẩn 33 3.3.5 Định lượng khả tổng hợp IAA vi khuẩn 36 3.3.6 Định danh dịng vi khuẩn có khả tổng hợp NH4+ IAA với hàm lượng cao phương pháp giải trình tự vùng gen 16S rDNA 38 3.3.7 Khảo nghiệm dịng vi khuẩn có khả tổng hợp NH4+ IAA hàm lượng cao 40 3.3.8 Cách lấy tiêu nông học lúa 44 3.4 Tóm tắt nội dung thí nghiệm 46 CHƯƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 4.1 Phân lập vi khuẩn chịu mặn sống tự từ đất sản xuất lúa – tơm có khả tổng hợp NH4+ IAA 47 4.1.1 Kết thu mẫu từ đất sản xuất lúa-tôm 47 4.1.2 Kết phân lập vi khuẩn chịu mặn sống tự đất sản xuất lúa – tơm, có khả cố định đạm NH4+ tổng hợp IAA 47 4.2 Khả tổng hợp NH4+ tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập 50 4.2.1 Khả tổng hợp NH4+ dòng vi khuẩn phân lập 50 4.2.2 Khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập 52 4.3 Khả cố định đạm dịng vi khuẩn có hiệu cao với lúa giai đoạn mạ, độ mặn 0‰, 5‰ 10‰ 54 4.4 Định danh dòng vi khuẩn có khả tổng hợp tổng hợp IAA với hàm lượng cao kỹ thuật sinh học phân tử 55 4.5 Tuyển chọn dịng vi khuẩn có khả tổng hợp NH4+ IAA với hàm lượng cao cho canh tác lúa 58 4.5.1 Tuyển chọn dịng vi khuẩn có khả cố định đạm hữu hiệu lúa trồng điều kiện phịng thí nghiệm 58 4.5.2 Tuyển chọn dịng vi khuẩn có khả cố định đạm hữu hiệu lúa trồng chậu điều kiện nhà lưới 60 4.5.3 Tuyển chọn dòng vi khuẩn có khả cố định đạm lúa trồng điều kiện đồng 82 CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 93 5.1 Kết luận 93 5.2 Đề xuất 93 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ 94 TÀI LIỆU THAM KHẢO 95 PHỤ LỤC 102 vi DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1: Phân loại đất mặn dựa vào tiêu pH, EC, SAR, ESP Bảng 2.2: Thang đánh giá mức độ chống chịu mặn giai đoạn tăng trưởng lúa Bảng 2.3: Khả cố định đạm tổng hợp IAA vi khuẩn vùng rễ lúa đươc phân lập 12 Bảng 2.4: Thành phần cấu tạo nitrogenase 17 Bảng 3.1: Bố trí thí nghiệm xây dựng đường chuẩn NH4+ 35 Bảng 3.2: Giá trị đường chuẩn NH4+ 35 Bảng 3.3: Thành phần phản ứng PCR 38 Bảng 3.4: Các nghiệm thức thí nghiệm 40 Bảng 3.5: Đặc tính đất thí nghiệm trồng lúa chậu thu Mỹ Xuyên, Sóc Trăng 41 Bảng 3.6: Các nghiệm thức bố trí thí nghiệm 42 Bảng 3.7: Đặc tính đất thí nghiệm trồng lúa ngồi đồng Mỹ Xun, Sóc Trăng 43 Bảng 3.8: Các nghiệm thức bố trí thí nghiệm 44 Bảng 4.1: Tổng hợp mẫu đất thu để phân lập 47 Bảng 4.2: Các dòng vi khuẩn phân lập từ đất vùng rễ lúa nhiễm mặn Bạc Liêu, Sóc Trăng Kiên Giang 48 Bảng 4.3: Tổng hợp đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn 49 Bảng 4.4: Tổng hợp đặc điểm tế bào vi khuẩn 50 Bảng 4.5: Hàm lượng NH4+ IAA 35 dòng vi khuẩn tuyển chọn 54 Bảng 4.6: Đặc điểm 35 dòng vi khuẩn tuyển chọn định danh theo độ tương đồng đoạn gen 16S rDNA 56 Bảng 4.7: Ảnh hưởng 35 dòng vi khuẩn chịu mặn lên sinh trưởng phát triển lúa LP5 giai đoạn 20 ngày tuổi 59 Bảng 4.8: Chiều cao lúa (cm) giai đoạn sinh trưởng ảnh hưởng nồng độ đạm vi khuẩn nhà lưới 61 Bảng 4.9: Số chồi/bụi giai đoạn sinh trưởng ảnh hưởng nồng độ đạm vi khuẩn nhà lưới 63 Bảng 4.10: Ảnh hưởng mức phân đạm dòng vi khuẩn đến thành phần suất suất thực tế lúa LP5 82 Bảng 4.11: Chiều cao lúa giai đoạn sinh trưởng nghiệm thức thí nghiệm huyện Mỹ Xun, tỉnh Sóc Trăng, vụ Đơng Xn 2017-2018 86 Bảng 4.12: Số chồi lúa/m2 giai đoạn sinh trưởng nghiệm thức thí nghiệm huyện Mỹ Xuyên, tỉnh Sóc Trăng, vụ Đơng Xn 2017-2018 87 vii DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1: Sơ đồ mặt cắt ngang ruộng tơm sú – lúa truyền thống…………… …9 Hình 2.2: Sơ đồ mặt cắt ngang ruộng tôm sú – lúa cải tiến…………………….9 Hình 2.3: Cấu trúc ruộng sản xuất theo mơ hình lúa tơm…………………… Hình 2.4: Lịch thời vụ sản xuất ln canh tơm – lúa………………………….10 Hình 2.5: Bản đồ hệ thống gen nif P stutzeri A1501 (Desnoues, 2003)….16 Hình 2.6: Hệ thống gen nif số dịng vi khuẩn (Yan et al., 2008)…… 16 Hình 2.7: Cấu trúc không gian phân tử MoFe-protein (trái) Fe-protein (phải) (Ibrahim et al., 1999) 17 Hình 2.8: Sơ đồ cấu trúc hóa học nhân tố Fe Mo (Mayer et al., 2002)…18 Hình 2.9: Cấu trúc khơng gian nitrogenase (Burges et al, 1996) 18 Hình 2.10: Chu trình Fe-Protein 19 Hình 2.11: Sơ đồ trình khử N2 thành NH3 (Moore et al., 1998) 20 Hình 2.12: Sơ đồ chế cố định đạm sinh học (Moore et al., 1998) …….21 Hình 2.13: Nồng độ oxy ảnh hưởng đến hoạt tính nitrogenase P Stutzeri A1501 ……………………………………………………………………….22 Hình 2.14: Sơ đồ cấu tạo hóa học IAA (Baca and Elmerich,2007) 24 Hình 2.15: Sơ đồ lộ trình tổng hợp IAA vi khuẩn (Patten et al., 2013) 25 Hình 2.16: Sơ đồ phản ứng chuyển hóa indole-3-glycerol phosphate thành tryptophan …………………………………………………………………….26 Hình 2.17: Sơ đồ vi khuẩn Gluconacetobacter diazotrophicus tiết enzyme cellulase phá hủy màng tế bào, xâm nhập vào bên nhu mô rễ (Edward and Cocking, 2012)……………………………………………………………….27 Hình 2.18: Cấu trúc nốt rễ lúa (Li et al., 1991) ……… 27 Hình 2.19: Vi khuẩn nội sinh rễ lúa (Li et al., 1991) 28 Hình 3.1: Sơ đồ thu mẫu đất vùng rễ lúa 30 Hình 3.2: Sơ đồ pha loãng vi khuẩn 31 Hình 3.3: Sơ đồ phân lập vi khuẩn từ mẫu đất vùng rễ lúa trữ mẫu.32 Hình 3.4: Sơ đồ chủng vi khuẩn 34 Hình 3.5: Phản ứng màu ống nghiệm xây đường chuẩn đo NH4+ 35 Hình 3.6: Đồ thị đường chuẩn NH4+ 36 Hình 3.7: Phản ứng màu ống nghiệm xây đường chuẩn đo IAA 37 Hình 3.8: Đồ thị đường chuẩn NH4+ …………………………………………37 Hình 3.9: Chu kỳ gia nhiệt phản ứng PCR với cặp mồi tổng .39 Hình 3.10: Phổ điện di sản phẩm PCR nhân lên từ DNA dòng vi khuẩn phân lập 39 Hình 3.11: Sơ đồ tóm tắt nội dung thí nghiệm 46 i Hình 4.1: Khuẩn lạc vi khuẩn Burkholderia sp PL9 (A) Acinetobacter sp GH1-1(B) môi trường Burk không đạm bổ sung muối 10‰ .49 Hình 4.2: Hàm lượng tổng hợp NH4+ 216 dòng vi khuẩn qua 2, 4, ngày khảo sát 51 Hình 4.3: Khả tổng hợp NH4+ thay đổi qua ngày 2, ngày ngày 52 Hình 4.4: Hàm lượng tổng hợp IAA 216 dòng vi khuẩn qua 2, 4, ngày khảo sát 53 Hình 4.5: Khả tổng hợp IAA thay đổi qua ngày 2, ngày ngày .53 Hình 4.6: Hàm lượng NH4+ tổng hợp dòng vi khuẩn nồng độ muối (NaCl) 0‰, 5‰ 10‰ 55 Hình 4.7: Cây phả hệ (phylogenetic tree) trình bày mối quan hệ di truyền dựa vùng gen 16S rDNA dòng vi khuẩn vùng rễ lúa chịu mặn phân lập (theo Neighbor-joining), số bootstrap 1000…………………… 57 Hình 4.8: Cây lúa giai đoạn 20 ngày điều kiện phịng thí nghiệm 58 Hình 4.9: Chiều cao lúa LP5 giai đoạn 20 ngày tuổi .58 Hình 4.10: Giống lúa LP5 chủng vi khuẩn với mức phân đạm 60 Hình 4.11: Chiều cao lúa trồng chậu 61 Hình 4.12: Số chồi/bụi giai đoạn sinh trưởng lúa trồng chậu ảnh hưởng mức độ 25%N vi khuẩn 64 Hình 4.13: Số chồi/bụi giai đoạn sinh trưởng lúa trồng chậu ảnh hưởng mức độ 50% đạm vi khuẩn.………………………… 64 Hình 4.14: Số chồi/bụi giai đoạn sinh trưởng lúa trồng chậu ảnh hưởng mức độ 75% đạm vi khuẩn…………………………….65 Hình 4.15: Số chồi/bụi giai đoạn sinh trưởng lúa trồng chậu ảnh hưởng mức độ 75% đạm vi khuẩn.………………………… 66 Hình 4.16: Chỉ số màu giai đoạn sinh trưởng lúa trồng chậu ảnh hưởng mức độ 25% đạm vi khuẩn……………………… 67 Hình 4.17: Chỉ số màu giai đoạn sinh trưởng lúa trồng chậu ảnh hưởng mức độ 50% đạm vi khuẩn……………………… 67 Hình 4.18: Chỉ số màu giai đoạn sinh trưởng lúa trồng chậu ảnh hưởng mức độ 75% đạm vi khuẩn……………………… 68 Hình 4.19: Chỉ số màu giai đoạn sinh trưởng lúa trồng chậu ảnh hưởng mức độ 100% đạm vi khuẩn 68 Hình 4.20: Số bơng/bụi giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 25% phân đạm vi khuẩn 69 Hình 4.21: Số bơng/bụi giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 50% phân đạm vi khuẩn………………………………………70 Hình 4.22: Số bơng/bụi giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 75% phân đạm vi khuẩn 70 ii Hình 4.23: Số bơng/bụi giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 75% phân đạm vi khuẩn 71 Hình 4.24: Chiều dài lúa (cm) giai đoạn thu hoạch 71 Hình 4.25: Chiều dài bơng lúa (cm) giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 25% phân đạm vi khuẩn 72 Hình 4.26: Chiều dài lúa (cm) giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 50% phân đạm vi khuẩn 72 Hình 4.27: Chiều dài lúa (cm) giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 75% phân đạm vi khuẩn 73 Hình 4.28: Chiều dài bơng lúa (cm) giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ 100% đạm vi khuẩn 73 Hình 4.29: Số hạt chắc/bơng giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 25% phân đạm vi khuẩn .74 Hình 4.30: Số hạt chắc/bông giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 50% phân đạm vi khuẩn .74 Hình 4.31: Số hạt chắc/bơng giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 75% phân đạm vi khuẩn .75 Hình 4.32: Số hạt chắc/bơng giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 100% phân đạm vi khuẩn .75 Hình 4.33: Số hạt chắc/bông giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 25% phân đạm vi khuẩn .76 Hình 4.34: Số hạt chắc/bơng giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 50% phân đạm vi khuẩn .76 Hình 4.35: Số hạt chắc/bơng giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 75% phân đạm vi khuẩn .77 Hình 4.36: Số hạt chắc/bông giai đoạn thu hoạch lúa trồng chậu mức độ bón 100% phân đạm vi khuẩn .77 Hình 4.37: Trọng lượng khô 1000 hạt (g) lúa trồng chậu mức độ bón 25% phân đạm vi khuẩn 78 Hình 4.38: Trọng lượng khơ 1000 hạt (g) lúa trồng chậu mức độ bón 50% phân đạm vi khuẩn 78 Hình 4.39: Trọng lượng khơ 1000 hạt (g) lúa trồng chậu mức độ bón 75% phân đạm vi khuẩn 79 Hình 4.40: Trọng lượng khô 1000 hạt (g) lúa trồng chậu mức độ bón 100% phân đạm vi khuẩn 79 Hình 4.41: Năng suất lúa trồng chậu (g/chậu) mức độ bón 25% phân đạm vi khuẩn 80 Hình 4.42: Năng suất lúa trồng chậu (g/chậu) mức độ bón 50% phân đạm vi khuẩn 80 iii Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 93980.7 3457.3 97438.0 MS 5528.3 96.0 F 57.56 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-GH1-1 100N-PL9 100N-LĐ1 100N-PL2 75N-GH1-1 100N - OVK 75N-LĐ1 75N-PL9 75N-PL2 50N-LĐ1 50N-PL9 50N-GH1-1 50N-PL2 25N-PL2 25N-PL9 ON-0VK 25N-LĐ1 25N-GH1-1 N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 187.67 166.00 166.00 164.33 156.67 155.67 149.67 141.67 129.33 110.33 104.33 104.33 93.00 70.00 67.33 64.33 63.67 59.67 Grouping A B B B C B C D B C D C D D E E F F G F G G H H H H H Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: màu 19 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 25.500 14.000 39.500 MS 1.500 0.389 F 3.86 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-LĐ1 100N-GH1-1 100N-PL9 75N-LĐ1 75N-GH1-1 100N-PL2 75N-PL2 100N - OVK 75N-PL9 50N-LĐ1 50N-PL9 50N-PL2 50N-GH1-1 25N-PL9 25N-PL2 ON-0VK 25N-LĐ1 N 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 5.3333 5.0000 4.6667 4.3333 4.3333 4.3333 4.0000 4.0000 3.6667 3.6667 3.3333 3.3333 3.3333 3.3333 3.3333 3.0000 3.0000 Grouping A A B A B C A B C D A B C D A B C D B C D E B C D E C D E C D E D E D E D E D E D E E E 25N-GH1-1 3.0000 E Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: màu 44 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 22.833 8.000 30.833 MS 1.343 0.222 F 6.04 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-LĐ1 100N-GH1-1 100N-PL9 100N-PL2 75N-LĐ1 75N-GH1-1 100N - OVK 75N-PL2 75N-PL9 50N-PL9 50N-LĐ1 50N-GH1-1 50N-PL2 25N-PL9 25N-PL2 25N-LĐ1 25N-GH1-1 ON-0VK N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 5.0000 4.6667 4.3333 4.3333 4.0000 4.0000 4.0000 3.6667 3.3333 3.3333 3.3333 3.3333 3.0000 3.0000 3.0000 3.0000 3.0000 2.6667 Grouping A A B A B C A B C B C D B C D B C D C D E D E D E D E D E E E E E E F F F F F F F F F F Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: màu 65 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 20.815 8.667 29.481 MS 1.224 0.241 F 5.09 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-LĐ1 100N-PL9 100N-GH1-1 75N-LĐ1 75N-GH1-1 100N - OVK 100N-PL2 75N-PL2 75N-PL9 50N-PL9 50N-LĐ1 N 3 3 3 3 3 Mean 4.6667 4.3333 4.3333 4.0000 4.0000 4.0000 4.0000 3.6667 3.3333 3.3333 3.3333 Grouping A A B A B A B C A B C A B C A B C B C D C D E C D E C D E 50N-GH1-1 50N-PL2 25N-PL9 25N-LĐ1 25N-GH1-1 25N-PL2 ON-0VK 3 3 3 3.3333 3.0000 3.0000 3.0000 3.0000 2.6667 2.3333 C D D D D D E E E E E E F F F F F F Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Năng suất g/chậu versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 2176.31 42.44 2218.76 MS 128.02 1.18 F 108.58 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-GH1-1 100N-PL9 100N-LĐ1 75N-GH1-1 100N - OVK 100N-PL2 75N-LĐ1 75N-PL2 75N-PL9 50N-PL9 50N-GH1-1 50N-LĐ1 50N-PL2 25N-LĐ1 25N-PL9 25N-GH1-1 25N-PL2 ON-0VK N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 32.444 30.444 29.444 27.778 27.778 27.444 25.889 24.556 23.444 22.333 21.333 20.444 17.667 15.111 15.111 14.556 14.444 10.111 Grouping A B B C C D C D D E E F F G G H H I I J J K L L L L M Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Số chồi/buội 19 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 54.815 22.000 76.815 MS 3.224 0.611 F 5.28 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 100N-PL2 75N-PL2 75N-LĐ1 100N-LĐ1 N 3 3 Mean 6.0000 5.6667 4.6667 4.6667 4.6667 Grouping A A B B C B C B C 75N-PL9 50N-PL2 100N - OVK 100N-GH1-1 50N-LĐ1 25N-PL2 75N-GH1-1 50N-PL9 50N-GH1-1 25N-GH1-1 ON-0VK 25N-PL9 25N-LĐ1 3 3 3 3 3 3 4.3333 4.3333 4.3333 4.0000 3.3333 3.3333 3.0000 3.0000 3.0000 3.0000 2.6667 2.6667 2.6667 C C C C D D D D E D E F D E F E F E F E F E F F F F Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Số chồi/buội 44 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 72.815 30.000 102.815 MS 4.283 0.833 F 5.14 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 100N-PL2 75N-PL2 75N-LĐ1 100N-LĐ1 100N - OVK 75N-PL9 50N-PL2 100N-GH1-1 50N-LĐ1 75N-GH1-1 25N-PL2 50N-PL9 50N-GH1-1 25N-PL9 25N-GH1-1 25N-LĐ1 ON-0VK N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 6.6667 6.6667 6.3333 6.3333 6.3333 6.0000 5.6667 5.6667 5.6667 5.3333 4.6667 4.6667 4.3333 4.3333 4.0000 4.0000 3.3333 2.6667 Grouping A A A A A A B A B C A B C A B C A B C D B C D E B C D E C D E C D E D E F D E F E F F Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Số chồi/buội 65 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 71.648 18.000 89.648 MS 4.215 0.500 F 8.43 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 100N-PL2 100N-LĐ1 75N-LĐ1 75N-PL2 50N-PL2 100N - OVK 75N-PL9 50N-LĐ1 100N-GH1-1 25N-PL2 75N-GH1-1 50N-PL9 50N-GH1-1 25N-PL9 25N-GH1-1 25N-LĐ1 ON-0VK N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 7.3333 7.0000 6.6667 6.3333 6.0000 6.0000 6.0000 5.6667 5.3333 5.3333 5.0000 4.6667 4.6667 4.6667 4.3333 4.3333 3.3333 3.0000 Grouping A A B A B C A B C D B C D E B C D E B C D E C D E D E D E E F F F F F F F G G G G G G G H G H H I I Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Tỉ lệ hạt (%) versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 17 36 53 SS 785.0 697.2 1482.2 MS 46.2 19.4 F 2.38 P 0.014 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL2 100N-LĐ1 100N-GH1-1 100N-PL9 100N - OVK 75N-LĐ1 75N-PL2 75N-GH1-1 75N-PL9 50N-GH1-1 50N-LĐ1 50N-PL9 50N-PL2 25N-GH1-1 25N-LĐ1 25N-PL9 25N-PL2 ON-0VK N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 89.239 86.152 85.866 85.530 81.937 81.522 81.243 80.116 79.795 79.768 79.594 79.485 79.250 79.057 79.000 78.676 78.676 71.390 Grouping A A B A B C A B C B C B C B C B C B C B C B C B C B C B C B C C D C D D Means that not share a letter are significantly different Phụ lục 32: Kết phân tích thống kê đặc tính nơng học suất lúa trồng điều kiện ngồi đồng One-way ANOVA: Số bơng versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 42222 21112 63334 MS 4691 704 F 6.67 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 75N-PL9 100N-GH1-1 50N-PL9 75N-GH1-1 ĐC+ 50N-GH1-1 25N-PL9 25N-GH1-1 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 273.00 257.00 242.00 224.00 221.00 218.00 215.00 194.00 189.00 155.00 Grouping A A B A B C B C D B C D C D C D D D E E Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Chiều cao 19 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 201.23 117.75 318.98 MS 22.36 3.93 F 5.70 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-GH1-1 100N-PL9 ĐC+ 75N-GH1-1 50N-PL9 50N-GH1-1 75N-PL9 25N-GH1-1 25N-PL9 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 42.000 41.000 38.500 38.500 37.750 37.250 36.750 36.000 35.750 34.250 Grouping A A B B C B C C C C D C D C D D Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Chiều cao 44 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 689.5 304.0 993.5 MS 76.6 10.1 F 7.56 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 100N-GH1-1 75N-PL9 ĐC+ 75N-GH1-1 50N-PL9 50N-GH1-1 25N-GH1-1 25N-PL9 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 77.500 77.250 75.000 74.750 74.500 73.250 72.500 71.000 69.000 62.750 Grouping A A A B A B A B A B C B C B C C D Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Chiều cao 65 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 980.0 400.8 1380.8 MS 108.9 13.4 F 8.15 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 100N-GH1-1 ĐC+ 75N-PL9 75N-GH1-1 50N-GH1-1 50N-PL9 25N-GH1-1 25N-PL9 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 91.750 88.000 87.250 87.000 85.000 84.250 81.250 79.500 78.000 74.750 Grouping A A B A B A B B C B C D C D E D E F E F F Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Chiều cao thu hoạch versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 1997.5 509.3 2506.8 MS 221.9 17.0 F 13.07 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 75N-GH1-1 100N-GH1-1 100N-PL9 75N-PL9 ĐC+ 50N-PL9 50N-GH1-1 N 4 4 4 Mean 98.250 98.250 97.250 96.500 96.000 94.750 93.500 Grouping A A A A A A A 25N-GH1-1 25N-PL9 ĐC- 4 83.750 83.250 77.750 B B C C Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Chiều dài versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 42.011 15.265 57.276 MS 4.668 0.509 F 9.17 P 0.000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 100N-GH1-1 ĐC+ 75N-PL9 75N-GH1-1 50N-GH1-1 50N-PL9 25N-PL9 25N-GH1-1 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 22.7250 22.6750 22.6750 22.1250 22.1000 21.9500 21.8750 20.2000 20.1500 20.1250 Grouping A A A A A A A B B B Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: KL rơm khô (T/ha) versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 0,73564 0,11878 0,85443 MS 0,08174 0,00396 F 20,64 P 0,000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 75N-GH1-1 100N-GH1-1 75N-PL9 100N-PL9 50N-PL9 ĐC+ 50N-GH1-1 25N-GH1-1 25N-PL9 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 1,81600 1,81600 1,79200 1,79200 1,77600 1,76000 1,70400 1,61600 1,58400 1,36800 Grouping A A A B A B A B A B B C C D D E Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: NSTT (T/ha) versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 16,662 7,386 24,048 MS 1,851 0,246 F 7,52 P 0,000 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-GH1-1 75N-PL9 75N-GH1-1 100N-PL9 50N-PL9 ĐC+ 50N-GH1-1 25N-GH1-1 25N-PL9 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 5,5567 5,5151 5,5069 5,4812 5,3924 5,2736 5,0943 4,2623 4,1215 3,7558 Grouping A A A A A A A B B B Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Số chồi/m2 19 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 32708 30892 63600 MS 3634 1030 F 3.53 P 0.004 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức ĐC+ 100N-PL9 100N-GH1-1 75N-GH1-1 75N-PL9 50N-GH1-1 50N-PL9 25N-GH1-1 25N-PL9 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 315.00 311.00 300.00 296.00 283.00 274.00 261.00 248.00 243.00 228.00 Grouping A A A B A B A B C A B C D B C D C D C D D Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Số chồi/m2 44 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 172732 148756 321488 MS 19192 4959 F 3.87 P 0.002 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 100N-GH1-1 75N-PL9 ĐC+ 75N-GH1-1 50N-GH1-1 50N-PL9 25N-PL9 25N-GH1-1 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 728.00 712.00 706.00 698.00 689.00 659.00 641.00 588.00 580.00 518.00 Grouping A A A A A B A B C A B C B C D C D D Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Số chồi 65/m2 ngày versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 191377 201339 392716 MS 21264 6711 F 3,17 P 0,008 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 100N-GH1-1 ĐC+ 75N-PL9 75N-GH1-1 50N-GH1-1 50N-PL9 25N-PL9 25N-GH1-1 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 738,00 690,00 682,50 679,50 661,50 657,00 607,50 562,50 555,00 507,00 Grouping A A B A B A B C A B C D A B C D B C D E C D E D E E Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Số hạt chắc/bông versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 3630 4736 8367 MS 403 158 F 2.56 P 0.026 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 75N-GH1-1 100N-PL9 100N-GH1-1 ĐC+ 75N-PL9 25N-GH1-1 50N-PL9 25N-PL9 50N-GH1-1 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 120.70 120.20 117.80 115.30 113.55 111.85 108.95 108.45 97.05 89.65 Grouping A A A A A B A B A B A B B C C Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: Tỉ lệ hạt lép(%) versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 80.93 261.59 342.52 MS 8.99 8.72 F 1.03 P 0.439 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 50N-GH1-1 ĐC+ 50N-PL9 75N-PL9 100N-GH1-1 100N-PL9 75N-GH1-1 25N-GH1-1 ĐC25N-PL9 N 4 4 4 4 4 Mean 11.366 10.510 8.714 7.985 7.843 7.584 7.530 7.473 7.399 6.606 Grouping A A B A B A B A B A B A B A B A B B Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: KL 1000 hạt versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total DF 30 39 SS 8.44 42.24 50.68 MS 0.94 1.41 F 0.67 P 0.732 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức 100N-PL9 75N-GH1-1 100N-GH1-1 50N-GH1-1 ĐC+ 75N-PL9 25N-GH1-1 25N-PL9 50N-PL9 ĐC- N 4 4 4 4 4 Mean 23.000 23.000 22.875 22.575 22.275 22.150 22.075 21.950 21.900 21.675 Grouping A A A A A A A A A A Means that not share a letter are significantly different Phụ lục 33: Một số hình ảnh trình thực luận án 33.1 Hình ành thí nghiệm phịng thí nghiệm C Chủng vi khuẩn vào hạt lúa nảy mầm Trồng lúa dung dịch Yoshida Trồng lúa dung dịch Yoshida 33.2 Hình ảnh thử nghiệm lúa trồng chậu Cây lúa trồng chậu giai đoạn 25 ngày Cây lúa trồng chậu giai đoạn 44 ngày Cây lúa trồng chậu giai đoạn 65 ngày Chiều dài bơng lúa giai đoạn thu hoạch 33.3 Hình ảnh khảo nghiệm trồng lúa đồng Làm đất, đấp ô thí nghiệm Chuẩn bị mạ, chủng vi khuẩn Đặt khung lấy tiêu Bón phân giai đoạn 20 ngày Lấy tiêu chiều cao lúa Cây lúa trồng đồng giai đoạn 44 ngày Lúa giai đoạn chín Đặt khung lấy tiêu giai đoạn thu hoạch Lấy tiêu suất Máy đo ẩm độ hạt lúa ... cho thấy, có nhiều dịng vi khuẩn có khả thay tới 50% phân đạm vô cơ, đồng thời tổng hợp IAA với hàm lượng cao Vì đề tài ? ?Phân lập tuyển chọn vi khuẩn chịu mặn có khả cố định đạm, tổng hợp IAA mơ... hóa dịng vi khuẩn phân lập Nội dung Xác định khả cố định đạm tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập Nội dung Định danh dòng vi khuẩn có hoạt tính tổng hợp NH4+ tổng hợp IAA phương pháp so sánh độ... 2.3 Khả cố định đạm tổng hợp IAA vi khuẩn vùng rễ lúa 12 2.4 Khả chịu mặn vi khuẩn cố định đạm tổng hợp IAA 14 2.5 Cơ chế nhân tố ảnh hưởng đến khả cố định đạm vi khuẩn 15 2.6 Tổng