Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở trong kiểm định vắcxin viêm não nhật bản bất hoạt sản xuất trên tế bào vero

MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN Đặc điểm virút viêm não Nhật Bản 1.1 1.1.1 Hình thể 1.1.2 Cấu trúc Vắcxin VNNB .5 1.2 1.2.1 Các vắcxin VNNB đƣợc sản xuất sử dụng quy mô lớn 1.2.1.1 Vắcxin VNNB bất hoạt từ não chuột .5 1.2.1.2 Vắcxin VNNB bất hoạt từ tế bào thận chuột Hamster tiên phát 1.2.1.3 Vắcxin VNNB sống giảm độc lực 1.2.2 So sánh công nghệ sản xuất vắcxin VNNB não chuột tế bào 1.2.3 Tế bào Vero ứng dụng sản xuất vắcxin 1.3 Quy trình sản xuất vắcxin viêm não Nhật Bản bất hoạt, sản xuất tế bào Vero (JECEVAX) VABIOTECH 1.4 Căn sở xây dựng tiêu chuẩn cở sở kiểm định chất lƣợng vắcxin JECEVAX 11 1.4.1 Yêu cầu chung .11 1.4.2 Căn sở để xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm định vắcxin JECEVAX .12 1.4.2.1 Kiểm tra thành phần hóa học .13 1.4.2.2 Kiểm tra tính an tồn cơng hiệu 15 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 18 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 18 2.2 Vật liệu 18 2.2.1 Hóa chất .18 2.2.2 Vắcxin, sinh phẩm, động vật thí nghiệm 19 2.2.3 Trang thiết bị .20 2.2.4 Dụng cụ 21 2.3 Phƣơng pháp 22 2.3.1 Kiểm tra tính chất vật lý 22 2.3.2 Soi vắcxin .22 2.3.3 Kiểm tra thể tích đóng lọ vắcxin .23 2.3.4 Kiểm tra pH 23 2.3.5 Kiểm tra hàm lƣợng Thimerosal .23 2.3.6 Kiểm tra hàm lƣợng Formaldehyde 25 2.3.7 Kiểm tra hàm lƣợng Protein 25 2.3.8 Kiểm tra hàm lƣợng ADN tồn dƣ 26 2.3.9 Kiểm tra vô khuẩn 28 2.3.10 Chuẩn độ hiệu giá virút VNNB kỹ thuật tạo đám hoại tử PFU .29 2.3.11 Kiểm tra bất hoạt giai đoạn bán thành phẩm thô 30 2.3.12 Kiểm tra hàm lƣợng kháng nguyên virút VNNB kỹ thuật ELISA .30 2.3.13 Kiểm tra bất hoạt bán thành phẩm tinh chế 33 2.3.14 Kiểm tra chất gây sốt 34 2.3.15 Kiểm tra an toàn chung chuột nhắt chuột lang 34 2.3.16 Kiểm tra an toàn đặc hiệu 34 2.3.17 Kiểm tra công hiệu 35 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 3.1 Kết phân tích thành phần hóa học kiểm định vắcxin JECEVAX 39 3.1.1 Kiểm tra giai đoạn vắcxin JECEVAX BTP tinh khiết 39 3.1.2 Kiểm tra giai đoạn vắcxin JECEVAX BTP cuối .42 3.1.3 3.2 Kiểm tra giai đoạn vắcxin JECEVAX thành phẩm 43 Kết kiểm tra tính an tồn cơng hiệu kiểm định vắcxin JECEVAX 49 3.2.1 Kiểm tra giai đoạn vắcxin JECEVAX BTP thô .49 3.2.2 Kiểm tra giai đoạn vắcxin BTP tinh khiết 51 3.2.3 Kiểm tra giai đoạn vắcxin JECEVAX BTP cuối .54 3.2.4 Kiểm tra giai đoạn vắcxin JECEVAX thành phẩm 54 3.3 So sánh kết kiểm định chất lƣợng vắcxin JECEVAX VABIOTECH, NICVB 60 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm định vắcxin JECEVAX 62 3.4.1 Xây dựng tiêu chuẩn sở thành phần hóa học .62 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68 4.1 Kết luận 68 4.2 Kiến nghị 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Học viên Nguyễn Vũ Thu Hương LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành đến: Trƣờng Đại học Bách Khoa Hà Nội, Viện Đào tạo Sau Đại học, Viện Công nghệ Sinh học – Công nghệ Thực phẩm giúp đỡ tạo điều kiện hoàn tất thủ tục cho tơi hồn thành bảo vệ luận văn Công ty TNHH MTV Vắcxin Sinh phẩm số 1, phòng Quản lý chất lượng giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập, thực tập hoàn thành luận văn Trong q trình học tập hồn thành luận văn, tơi dạy dỗ giúp đỡ nhiệt tình thầy giáo, bạn bè đồng nghiệp Cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới: GS.TS Huỳnh Thị Phƣơng Liên, Cố vấn khoa học, Công ty TNHH MTV Vắcxin Sinh phẩm số 1, ngườithầy hướng dẫn kỹ thuật kiểm định vắcxin, truyền đạt kiến thức, phương pháp nghiên cứu khoa học, đạo đức người làm công tác kiểm định giúp đỡ suốt q trình học tập, cơng tác hồn thành luận văn PGS TS Nguyễn Thị Xuân Sâm, Trưởng mơn Vi sinh - Hóa sinh - Sinh học phân tử, Viện Công nghệ Sinh học – Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, người thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hoàn thành luận văn TS Đỗ Tuấn Đạt, Giám đốc Công ty TNHH MTV Vắcxin Sinh phẩm số 1; TS.Nguyễn Quế Anh, Phó Giám đốc chất lượng Cơng ty TNHH MTV Vắcxin Sinh phẩm số 1; ThS Nguyễn Thị Thu Hằng, Phó phịng Quản lý chất lượng,Cơng ty TNHH MTV Vắcxin Sinh phẩm số tạo điều kiện cho tơi q trình học tập hoàn thành luận văn Các đồng nghiệp tơi Phịng Quản lý chất lượng,Cơng ty TNHH MTV Vắcxin Sinh phẩm số 1, giúp đỡ tơi nhiều q trình học tập thực luận văn tốt nghiệp Các thầy cô Viện Công nghệ Sinh học – Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình truyền đạt kiến thức tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập Tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè người động viên giúp đỡ suốt trình làm luận văn Hà Nội, ngày 28 tháng 09 năm 2015 Học viên Nguyễn Vũ Thu Hương DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT aa Amino acid (axit amin) ADN Deoxyribonucleic acid (axit deoxyribonucleic) ARN Ribonucleic acid (axit ribonucleic) BHK21 Baby hamster kidney cells (tế bào có nguồn gốc từ thận chuột hamster sơ sinh) BTP Vắcxin bán thành phẩm CPE Cytopathic effect (sự hủy hoại tế bào) CTTCMR Chương trình tiêm chủng mở rộng CV Challenge virus (virút thử thách) D Dalton DĐVN Dược điển Việt Nam E Envelope (Vùng vỏ) ELISA Enzyme-linked immunosorbant assay (Thử nghiệm phấp phụ miễn dịch liên kết gắn enzym) GMP Good manufacturing pratice (thực hành sản xuất tốt) HGKT Hiệu giá kháng thể HLKN Hàm lượng kháng nguyên IU International unit (đơn vị quốc tế) JEVAX Vắcxin viêm não Nhật Bản bất hoạt, sản xuất não chuột JECEVAX Vắcxin viêm não Nhật Bản bất hoạt, sản xuất tế bào Vero KN Kháng nguyên KT Kháng thể MCB Master cell bank (ngân hàng tế gốc) MRC5 Medical Research Council cell strain 59 (Tế bào MRC5 lưỡng bội từ người) ND Not done (không làm) SD Standard deviation (độ lệch chuẩn) PFU Plaque forming unit (tạo đám hoại tử) PRNT Plaque reduction neutralization test (trung hòa giảm đám hoại tử) RK13 Rabbit kidney (tế bào thận thỏ) TCCT Tiêu chuẩn chấp thuận TCCS Tiêu chuẩn sở TCYTTG Tổ chức y tế giới TP Vắcxin thành phẩm VABIOTECH Vaccine and Biological No1 company (Công ty TNHH MTV Vắcxin Sinh phẩm số 1) Vero Dòng tế bào có nguồn gốc từ thận khỉ xanh châu Phi (Verda Reno) VNNB Viêm não Nhật Bản NICVB National institute for control of vaccine and biologicals (Viện Kiểm định Vắcxin Sinh phẩm y tế) WCB Working cell bank (Ngân hàng tế bào sản xuất) DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết kiểm tra hàm lƣợng AND tồn dƣ vắcxin JECEVAX TP .48 Bảng 3.2 Kết kiểm tra chất gây sốt (từng thỏ) vắcxin JECEVAX BTP tinh khiết 52 Bảng 3.3 Kết kiểm tra chất gây sốt (từng thỏ) vắcxin JECEVAX TP .58 Bảng 3.4 So sánh kết kiểm định chất lƣợng vắcxin JECEVAX VABIOTECH, NICVB tiêu chuẩn TCYTTG 60 DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1.Mơ hình cấu trúc hạtvirút VNNB [9] Hình 1.2.Sơ đồ xếp Genom virút VNNB [9] Hình 1.3 Hình ảnh hạt virút VNNB tinh khiết quan sát dƣới kính hiển vi điện tử JEM - T8 độ phóng đại 120.000 lần Hình 3.1.Kết kiểm tra pH vắcxin JECEVAX BTP tinh khiết .39 Hình 3.2 Kết kiểm tra Formaldehyde vắcxin JECEVAX BTP tinh khiết 40 Hình 3.3.Kết kiểm tra Thimerosal vắcxin JECEVAX BTP tinh khiết .41 Hình 3.4.Kết kiểm trahàm lƣợng Protein vắcxin JECEVAX BTP tinh khiết 42 Hình 3.5 Kết kiểm tra pH vắcxin JECEVAX BTP cuối 43 Hình 3.6.Kết kiểm tra thể tích đóng ống vắcxin JECEVAX TP 44 Hình 3.7.Kết kiểm tra pH vắcxin JECEVAX TP 45 Hình 3.8.Kết kiểm tra hàm lƣợng Thimerosal vắcxin JECEVAX TP .46 Hình 3.9.Kết kiểm tra hàm lƣợng Formaldehyde vắcxin JECEVAX TP 47 Hình 3.10.Kết kiểm tra hàm lƣợng Protein vắcxin JECEVAX TP 48 Hình 3.11 Kết Chuẩn độ hiệu giá virút VNNB phƣơng pháp tạo đám hoại tử PFU vắcxin JECEVAX BTP thô trƣớc bất hoạt .50 Hình 3.12.Kết kiểm tra Chất gây sốt thỏ vắcxin JECEVAX BPT tinh khiết 52 Hình 3.13.Kết hàm lƣợng kháng nguyên virút VNNB vắcxin JECEVAX BTP tinh khiết 53 Hình 3.14.Kết kiểm tra An toàn chung chuột lang vắcxin JECEVAX TP 55 Hình 3.15.Kết kiểm tra An toàn chung chuột nhắt vắcxin JECEVAX TP 56 Hình 3.16.Kết kiểm tra An tồn đặc hiệu vắcxin JECEVAX TP 57 Hình 3.17 Kết kiểm tra chất gây sốt thỏ vắcxin JECEVAX TP 58 Hình 3.18 Kết kiểm tra Công hiệu vắcxin JECEVAX TP 59 3.2.4.4 Kiểm tra an toàn đặc hiệu vắcxin JECEVAX TP JC-08 JC-09 JC-10 JC-11 JC-12 JC-13 JC-14 JC-15 JC-16 JC-17 Loạt Hình 3.16.Kết kiểm tra An tồn đặc hiệu vắcxin JECEVAX TP An toàn đặc hiệu thử chuột nhắt trắng Swiss, tiêm thẳng vào não chuột với liều 0,03 ml/ chuột theo dõi 14 ngày Liều 0,03 ml/ chuột vào não nguy hiểm, tiêm vào tổ chức thần kinh mà virút VNNB nhạy cảm để nhân lên dễ dàng, virút VNNB chưa bất hoạt Vắcxin không tinh khiết, nhiều protein tạp, liệt virút chưa bất hoạt Kết thu hình 3.16 cho thấy kết tăng trọng An toàn đặc hiệu vắcxin JECEVAX TP “100% chuột sống khỏe mạnh, tăng cân, khơng liệt, khơng có dấu hiệu bệnh lý sau 14 ngày theo dõi, tăng cân dao động từ 189,8% đến 233,0%” Tiêu chuẩn An tồn đặc hiệu vắcxin TP JEVAX®, DĐVN4 cho phép “100% chuột sống khỏe mạnh, tăng cân, không liệt, khơng có dấu hiệu bệnh lý sau 14 ngày theo dõi‎” TCYTTG không khuyến cáo cho tiêu Kiểm tra An toàn đặc hiệu vắcxin JECEVAX TP đạt 10/10 loạt 57 3.2.4.5 Kiểm tra chất gây sốt vắcxin JECEVAX TP Bảng 3.3 Kết kiểm tra chất gây sốt (từng thỏ) vắcxin JECEVAX TP Loạt JC-08 JC-09 JC-10 JC-11 JC-12 JC-13 JC-14 JC-15 JC-16 JC-17 Chất gây sốt (oC) (từng thỏ) 0,0; 0,0; 0,1; 0,4; 0,2; 0,0; 0,0; 0,0; 0,2; 0,0; 0,0; 0,1; 0,5; 0,1; 0,2; 0,1; 0,4; 0,0; 0,0; 0,5; 0,3 0,0 0,2 0,3 0,0 0,3 0,3 0,4 0,0 0,2 JC-08 JC-09 JC-10 JC-11 JC-12 JC-13 JC-14 JC-15 JC-16 JC-17 Loạt Hình 3.17 Kết kiểm tra chất gây sốt thỏ vắcxin JECEVAX TP Kết thu bảng 3.8 hình 3.17 cho thấy kết Chất gây sốt vắcxin JECEVAX TP, thỏ dao động từ 0,0oC đến 0,5oC, tổng nhiệt độ thỏ dao động từ 0,1oC đến 0,8oC Tiêu chuẩn Chất gây sốt vắcxin TP JEVAX®, DĐVN cho phép “Nhiệt độ tăng thỏ ≤ 0,6oC Tổng nhiệt độ tăng thỏ sau theo dõi  1,3oC” theo khuyến cáo TCYTTG theo tiêu chuẩn quan quản lý quốc gia Kiểm tra chất gây sốt vắcxin JECEVAX TP đạt 10/10 loạt 58 3.2.4.6 Kiểm tra công hiệu vắcxin JECEVAX TP JC-08 JC-09 JC-10 JC-11 JC-12 JC-13 JC-14 JC-15 JC-16 JC-17 Loạt Hình 3.18 Kết kiểm tra Cơng hiệu vắcxin JECEVAX TP Mục đích kiểm tra công hiệu xác định khả sinh miễn dịch vắcxin Kết đạt thử nghiệm công hiệu liên quan đến hiệu lực bảo vệ người Công hiệu vắcxin VNNB thực kỹ thuật trung hòa giảm đám hoại tử 50% (PRNT50) để đo hiệu giá kháng thể Theo thường quy Tổ chức Y tế giới yêu cầu bắt buộc phải tiến hành song song với sinh phẩm chuẩn Quốc gia xác định theo mẫu chuẩn Quốc tế, đáp ứng kháng thể chuột bị ảnh hưởng lớn chế độ ăn uống, điều kiện chăn ni, chăm sóc Khi thực đồng thời mẫu thử mẫu chuẩn vắcxin để dễ dàng so sánh nhận định kết Kết thu hình 3.18 cho thấy kết cơng hiệu vắcxin JECEVAX TP động từ 1,013 đến 1,076 Tiêu chuẩn cơng hiệu vắcxin TP JEVAX®, DĐVN4, TCYTTG cho phép “HGKT trung hòa vắcxin mẫu thử  HGKT trung hịa vắcxin mẫu chuẩn” Kiểm tra Cơng hiệu vắcxin JECEVAX TP đạt 10/10 loạt 59 Đối chiếu với tiêu chuẩn khuyến cáo TCYTTG, DĐVN4 so sánh với JEVAX® chúng tơi thấy loạt vắcxin JECEVAX đạt tiêu chuẩn đề cho vắcxin VNNB Căn kết thí nghiệm cho thấy thơng số nghiên cứu có độ lệch chuẩn thấp, chứng tỏ chất lượng vắcxin ổn định Sự ổn định cho thấy thực hành quy trình sản xuất tốt khẳng định công nghệ sản xuất vắcxin VNNB bất hoạt, sản xuất tế bào Vero hồn thiện quy mơ phịng thí nghiệm 3.3 So sánh kết kiểm định chất lƣợng vắcxin JECEVAX VABIOTECH, NICVB Các phương pháp chọn để nghiên cứu đánh giá phương pháp chuẩn TCYTTG, DĐVN quy định hay thẩm định phương pháp Để kết khách quan xác, chúng tơi nghiên cứu so sánh 10 loạt vắcxin VNNB bất hoạt sản xuất tế bào Vero VABIOTECH Các mẫu vắcxin kiểm tra đạt yêu cầu chất lượng thành phần hóa học, tính an tồn cơng hiệu Với tiêu chuẩn, mẫu vắcxin tiến hành điều kiện (sử dụng loại thiết bị, hóa chất, dụng cụ…) Bảng 3.4 So sánh kết kiểm định chất lƣợng vắcxin JECEVAX VABIOTECH, NICVB tiêu chuẩn TCYTTG Loạt Thử nghiệm Tiêu chuẩn JC-11 JC-12 JC-13 VABIOTECH NICVB VABIOTECH NICVB VABIOTECH NICVB TCYTTG pH 7,06 7,170 7,07 7,198 6,96 7,214 Protein (g/ml) 7,8 7,5 6,3 6,3 7,3 7,5 Thimerosal (% w/v) 0,0053 0,0048 0,0049 0,0048 0,0048 0,0047 Formaldehyde (% w/v) 0,00003 0,0 0,00007 0,0 0,00002 0,0 60 Theo quan quản lý quốc gia (6,8 - 7,4) Theo quan quản lý quốc gia (≤ 80) Theo quan quản lý quốc gia (≤ 0,012) ≤ 0,01 Loạt Thử nghiệm Vô khuẩn An toàn chung chuột lang An toàn chung chuột nhắt An toàn đặc hiệu Chất gây sốt (oC) Công hiệu (HGKT tương quan vắcxin thử/ vắcxin chuẩn) Tiêu chuẩn JC-11 JC-12 JC-13 VABIOTECH NICVB VABIOTECH NICVB VABIOTECH NICVB Khơng có phát triển nấm vi khuẩn Khơng có phát triển nấm vi khuẩn Khơng có phát triển nấm vi khuẩn Khơng có phát triển nấm vi khuẩn Khơng có phát triển nấm vi khuẩn TCYTTG Khơng có phát triển nấm vi khuẩn 116,3 114,3 125,3 117,3 124,1 116,7 142,0 132,1 139 127,0 149,5 137,9 208,5 200,8 217,1 233,8 205,2 214,0 0,8 0,7 0,4 0,5 0,4 0,6 1,024 1,01 1,076 1,03 1,029 1,05 Khơng có phát triển nấm vi khuẩn 100% chuột sống khỏe mạnh, tăng cân, khơng có dấu hiệu bệnh lý suốt thời gian theo dõi Tổng nhiệt độ tăng thỏ sau theo dõi  1,3oC HGKT trung hòa vắcxin mẫu thử  HGKT trung hòa vắcxin chuẩn Qua bảng 3.4 cho thấy kết thực kiểm định phịng thí nghiệm cho kết tương đương đạt tiêu chuẩn TCYTTG Điều chứng tỏ thử nghiệm tiến hành VABIOTECH đáng tin cậy 61 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm định vắcxin JECEVAX 3.4.1 Xây dựng tiêu chuẩn sở thành phần hóa học Xây dựng Tiêu chuẩn tiêu chuẩn JEVAX® JECEVAX Giai đoạn bán thành phẩm tinh khiết STT Thử nghiệm Tính chất vật lý pH Formaldehyde Tiêu chuẩn DĐVN TCYTTG Dung dịch Dung dịch Không quy Không quy trong, có màu trong, có màu định định vàng nhạt vàng nhạt Không quy định Không quy định Không quy Theo quan định quản lý quốc 6,8 - 7,4 6,8 - 7,4 Hàm lượng Tiêu chuẩn ≤ 0,002 ≤ 0,01 ( % w/v) gia Hàm lượng Thimerosal ≤ 0,007 ≤ 0,012 Không quy Theo quan định quản lý quốc (% w/v) Hàm lượng Protein (g/ml) gia Không áp Không áp Không quy Không quy dụng dụng định định tiêu chuẩn Giai đoạn bán thành phẩm cuối Tính chất vật lý pH Dung dịch Dung dịch Không quy Không quy trong, không trong, không định định màu màu Không quy định Không quy định Dung dịch trong, không màu Không quy định 6,8 - 7,4 6,8 - 7,4 Giai đoạn vắcxin thành phẩm Tính chất vật lý Dung dịch trong, khơng màu Dung dịch trong, không màu 62 STT Thử nghiệm Soi vắcxin Kiểm tra thể tích đóng ống (ml) Xây dựng tiêu chuẩn JECEVAX Khơng có dị Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn JEVAX® DĐVN TCYTTG Khơng có dị Khơng có dị Khơng có dị vật vật vật vật Thể tích vắcxin đóng lọ phải khơng nhỏ thể tích cơng bố nhãn Thể tích vắcxin đóng lọ phải khơng nhỏ thể tích cơng bố nhãn Khơng quy định Khơng quy định Theo quan pH 6,8 - 7,4 6,8 - 7,4 6,8 - 7,4 quản lý quốc gia Hàm lượng Thimerosal Theo quan  0,007  0,012  0,012 (% w/v) Hàm lượng Formaldehyde (% w/v) Hàm lượng Protein (g/ml) ADN tồn dư (ng/liều) quản lý quốc gia  0,002  0,01  0,01  0,01 Theo quan  20  80  80 quản lý quốc gia < 10 Không áp dụng 63 Không áp dụng < 10 3.4.2 Xây dựng tiêu chuẩn sở tính an tồn cơng hiệu Xây dựng tiêu STT Thử nghiệm chuẩn JECEVAX Giai đoạn bán thành phẩm thô Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn JEVAX® DĐVN TCYTTG Khơng có Khơng có Khơng có Khơng có phát triển phát triển phát triển phát triển nấm vi nấm vi nấm vi nấm vi khuẩn sau 14 khuẩn sau 14 khuẩn sau 14 khuẩn sau 14 ngày theo dõi ngày theo dõi ngày theo dõi ngày theo dõi Chuẩn độ Hiệu giá virút Hiệu giá virút Khuyến cáo Khuyến cáo hiệu giá virút bán bán nhà sản xuất nhà sản xuất VNNB thành phẩm thô thành phẩm thô thiết lập phương pháp ≥ 104 PFU/ml ≥ 107 PFU/ml tạo đám hoại (Hiệu giá gây (Hiệu giá gây tử PFU nhiễm 104 nhiễm 107 (PFU/ml) PFU/ml) PFU/ml) 100% chuột 100% chuột phải sống khỏe phải sống khỏe mạnh, khơng mạnh, khơng liệt, khơng có liệt, khơng có dấu hiệu bệnh dấu hiệu bệnh lý sau 14 ngày lý sau 14 ngày theo dõi theo dõi Vô khuẩn Bất hoạt thiết lập Không quy định Không quy định Giai đoạn bán thành phẩm tinh khiết Vô khuẩn Không có Khơng có Khơng có Khơng có phát triển phát triển phát triển phát triển nấm vi nấm vi nấm vi nấm vi khuẩn sau 14 khuẩn sau 14 khuẩn sau 14 khuẩn sau 14 ngày theo dõi ngày theo dõi ngày theo dõi ngày theo dõi 64 STT Thử nghiệm Bất hoạt Chất gây sốt Xây dựng tiêu chuẩn JECEVAX - Tế bào phát triền bình thường, khơng có hủy hoại tế bào (CPE) 14 ngày theo dõi - 100% chuột sống khỏe mạnh, tăng cân, khơng liệt, khơng có dấu hiệu bệnh lý sau 14 ngày theo dõi - Nhiệt độ tăng Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn JEVAX® DĐVN TCYTTG thỏ ≤ - Tế bào phát Không quy triền bình định thường, khơng có hủy hoại tế bào (CPE) 14 ngày theo dõi - 100% chuột sống khỏe mạnh, tăng cân, khơng liệt, khơng có dấu hiệu bệnh lý sau 14 ngày theo dõi - Nhiệt độ tăng Không quy thỏ ≤ định 0,6oC 0,6oC Vô khuẩn Không quy định - Tổng nhiệt độ - Tổng nhiệt độ tăng thỏ tăng thỏ sau theo sau theo dõi  1,3oC dõi  1,3oC Hàm lượng Không áp Không áp kháng nguyên dụng dụng virút VNNB ELISA Giai đoạn bán thành phẩm cuối - Tế bào phát triền bình thường, khơng có hủy hoại tế bào (CPE) 14 ngày theo dõi - 100% chuột sống khỏe mạnh, tăng cân, khơng có dấu hiệu bệnh lý sau 14 ngày theo dõi Khơng có phát triển nấm vi khuẩn sau 14 ngày theo dõi Khơng có phát triển nấm vi khuẩn sau 14 ngày theo dõi 65 Không quy định Không quy định tiêu chuẩn Khơng có phát triển nấm vi khuẩn sau 14 ngày theo dõi Không có phát triển nấm vi khuẩn sau 14 ngày theo dõi Xây dựng tiêu STT Thử nghiệm chuẩn JECEVAX Giai đoạn vắcxin thành phẩm Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn JEVAX® DĐVN TCYTTG Khơng có phát triển nấm vi khuẩn sau 14 ngày theo dõi 100% chuột Khơng có phát triển nấm vi khuẩn sau 14 ngày theo dõi 100% chuột Khơng có phát triển nấm vi khuẩn sau 14 ngày theo dõi 100% chuột Khơng có phát triển nấm vi khuẩn sau 14 ngày theo dõi Theo quan sống khỏe sống khỏe sống khỏe quản lý quốc An toàn mạnh, tăng mạnh, tăng mạnh, tăng gia chung cân, khơng có cân, khơng có cân, khơng có chuột lang dấu hiệu bệnh dấu hiệu bệnh dấu hiệu bệnh lý sau ngày lý sau ngày lý sau ngày theo dõi theo dõi theo dõi 100% chuột 100% chuột 100% chuột Theo quan sống khỏe sống khỏe sống khỏe quản lý quốc An toàn mạnh, tăng mạnh, tăng mạnh, tăng gia chung cân, khơng có cân, khơng có cân, khơng có chuột nhắt dấu hiệu bệnh dấu hiệu bệnh dấu hiệu bệnh lý sau ngày lý sau ngày lý sau ngày theo dõi theo dõi theo dõi 100% chuột 100% chuột 100% chuột Không quy sống khỏe sống khỏe sống khỏe định mạnh, tăng mạnh, tăng mạnh, tăng An toàn đặc cân, khơng cân, khơng cân, khơng hiệu liệt, khơng có liệt, khơng có liệt, khơng có dấu hiệu bệnh dấu hiệu bệnh dấu hiệu bệnh lý sau 14 ngày lý sau 14 ngày lý sau 14 ngày theo dõi theo dõi theo dõi Vô khuẩn 66 STT Thử nghiệm Xây dựng tiêu chuẩn JECEVAX Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn Tiêu chuẩn JEVAX® DĐVN TCYTTG - Nhiệt độ tăng - Nhiệt độ tăng Theo quan thỏ thỏ quản lý quốc ≤0,6oC ≤0,6oC gia - Tổng nhiệt - Tổng nhiệt độ tăng độ tăng thỏ sau thỏ sau theo dõi  theo dõi  1,3oC 1,3oC HGKT trung HGKT trung HGKT trung HGKT trung hòa vắcxin hòa vắcxin hòa vắcxin hòa vắcxin mẫu thử  mẫu thử  mẫu thử  mẫu thử  HGKT trung HGKT trung HGKT trung HGKT trung hòa vắcxin hòa vắcxin hòa vắcxin hòa vắcxin mẫu chuẩn mẫu chuẩn mẫu chuẩn mẫu chuẩn - Nhiệt độ tăng o thỏ ≤0,6 C Chất gây sốt - Tổng nhiệt độ tăng thỏ sau theo dõi  1,3oC Công hiệu 67 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Căn kết kiểm tra 10 loạt vắcxin JECEVAX đáp ứng tiêu chuẩn TCYTG cho vắcxin viêm não Nhật Bản bất hoạt, sản xuất tế bào, tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam so sánh với tiêu chuẩn vắcxin JEVAX® Chúng xây dựng được: - Tiêu chuẩn sở thành phần hóa học kiểm định vắcxin viêm não Nhật Bản, bất hoạt sản xuất tế bào Vero - Tiêu chuẩn sở tính an tồn công hiệu kiểm định vắcxin viêm não Nhật Bản, bất hoạt sản xuất tế bào Vero 4.2 Kiến nghị Dựa kết nghiên cứu kiểm tra chất lượng 10 loạt vắcxin viêm não Nhật Bản bất hoạt, sản xuất tế bào Vero đáp ứng tiêu chuẩn TCYTTG DĐVN4 đề so sánh với tiêu chuẩn JEVAX®, xây dựng tiêu chuẩn sở thành phần hóa học, tính an tồn cơng hiệu Chúng xin đề nghị tiếp tục nghiên cứu tính ổn định theo điều kiện bảo quản thực vắcxin viêm não Nhật Bản, sản xuất tế bào Vero 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam, lần xuất thứ 4, Nhà xuất y học, Hà nội Huỳnh Phương Liên cộng (2015), Phân tích thành phần hóa học quan sát hình thái virút vắcxin VNNB sản xuất thử nghiệm từ chủng Beijing-1 Tạp chí y học thực hành, số 6/2005 Huỳnh Phương Liên cộng sự, Đánh giá tính an tồn công hiệu vắcxin VNNB sản xuất từ chủng Beijing-1 Tạp chí y học thực hành, số 6/2005 Huỳnh Phương Liên cộng (2009), Nghiên cứu sản xuất thử nghiệm vắcxin VNNB bất hoạt tế bào Vero Tạp chí Y học dự phịng, số (103), trang 8691 Huỳnh Phương Liên (2011), Nghiên cứu phát triển vắcxin VNNB bất hoạt tế bào Vero, Báo cáo Kết khoa học công nghệ Huỳnh Phương Liên cộng (2006), Nghiên cứu thay chủng Nakayama chủng Beijing-1 sản xuất vắcxin VNNB Đề tài cấp nhà nước KC1022, nghiệm thu 4/2006 Huỳnh Thị Phương Liên (1998), Hồn thiện quy trình cơng nghệ sản xuất vắcxin VNNB quy mô bán công nghiệp đạt tiêu chuẩn chất lượng quốc tế, dự phòng bệnh VNNB cho trẻ em Việt Nam, Báo cáo tổng kết dự án công nghệ sinh học Ngô Thuỳ Anh (2000), Xây dựng tiêu chuẩn Việt Nam thành phần hoá học cho vắcxin viêm gan B VNNB Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội Nguyễn Quế Anh, Huỳnh Phương Liên, Đỗ Thuỷ Ngân, Nguyễn Thu Vân (2003), Đánh giá thử nghiệm công hiệu vắcxin VNNB sơ đồ Shewhart Y học dự phòng Tập XIII, số (61) , trang 32-36 69 10 Phan Thị Ngà cs (1998), Những nghiên cứu virút VNNB miền Bắc Việt Nam Tạp chí y học dự phịng Tập VIII, số 2, trang 36 11 Phan Thị Ngà cs (2002), Giám sát, chẩn đoán VNNB Việt Nam Tạp chí y học dự phịng Tập XIII, số 2, trang 5-11 12 Phan Thị Ngà (2004),Virút VNNB kỹ thuật chẩn đoán NXB: Y học 13 Phạm Văn Ty (2005),Virút học NXB: Giáo dục, trang 178-183 Tiếng Anh 14 Alan D.T.B (1997), Japanese Encephalitis and Dengue Vaccines, Biologicals 25, pp 27-34 15 American Academy of Pediatrics (1999), Thimerosal in vaccine: an interim report to clinicians AAP News 15, pp 10-12 16 Association of biologicals manufacturers of Japan (1986), Minimum requirements for biological products Daiichishiroy Corp.Japan, pp 315, 317, 336 17 Appaiahgari MB (2004), Immunogenicity and protective efficacy in mice of a formaldehyde inactivated Indian strain of Japanese encephalitis virút grown in Vero cells Vaccine, pp 3669-3675 18 British Phamacopoeia (1988), Determination of protein in vaccine, London: HMSO, Vol II, Appendix A 118, method VII 19 British Phamacopoeia (1988), Vaccine, free formaldehyde, London: HMSO, Vol II, pp 1045-1048 20 Centers for Disease Control and Prevention, Inactivated Japanese encephalitis virus vaccine, Recommendations of the advisory committee on immunization practices (ACIP) MMWR 1993;42(No RR - 1) 21 Kaketsuken (2010), Newly development of Vero cell derived Japanese encephalitis vaccine 4th annual World vaccine congress Asia 2010 70 22 Motoharu Abe, el al (2006), Immunological equivalence between mouse brainderived and Vero cell-derived Japanese encephalitis vaccines,Virus Res, 121 (2), pp 152-60 23 National Institute of Infectious Diseases (2006), Minimum requirements for biological products, Japanese Encephalitis Vaccine, pp 92-95 24 Oya A (1987), New development of criteria on Japanese encephalitis vaccine requirements in Japan, JE&HFRS Bull 2, pp 11-13 25 Srivastava AK et al, (2001), A purified inactivated Japanese encephalitis virút vaccine made in Vero cells vaccine, 19 (31), pp 4557-65 26 Sugawara K., et al (2002), Development of Vero cell-derived inactivated Japanese encephalitis vaccine, Biological vol 30, pp 303-314 27 Theodore F Tsai Japanese Encephalitis Vaccines 1990 28 Tauber E, Kollaritsch H, et al (2007), Safety and immunogenicity of a Verocell-derived, inactivated Japanese encephalitis vaccine: a non-inferiority, phase III, randomised controlled trial, Lancet 370 (9602), pp 1847 -53 29 WHO Technical Report Series 963 (2011) Recommendations for Japanese encephalitis vaccine(inactivated) for human use, pp 57-115 71 ... hóa học kiểm định vắcxin viêm não Nhật Bản, bất hoạt sản xuất tế bào Vero - Xây dựng tiêu chuẩn sở tính an tồn cơng hiệu kiểm định vắcxin viêm não Nhật Bản, bất hoạt sản xuất tế bào Vero Nội... quy trình sản xuất vắcxin viêm não Nhật Bản bất hoạt sản xuất tế bào Vero Vì vậy, yêu cầu cấp bách cho việc xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm định vắcxin viêm não Nhật Bản sản xuất tế bào Vero nhằm... an tồn cơng hiệu cho người sử dụng, thực đề tài: ? ?Xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm định vắcxin viêm não Nhật Bản bất hoạt, sản xuất tế bào Vero? ?? Đề tài gồm mục tiêu: - Xây dựng tiêu chuẩn sở thành