Mục tiêu của đề tài là xác định hàm lượng lipid tổng của các mẫu Millepora platyphylla thu được trong 12 tháng; phân tích thành phần và hàm lượng các lớp chất lipid của các mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla thu thập được trong 12 tháng; phân tích thành phần và hàm lượng các lớp chất phospholipid của các mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla thu thập được trong 12 tháng
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đặng Thị Minh Tuyết NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LIPID, AXIT BÉO CỦA SAN HÔ THỦY TỨC MILLEPORA THU THẬP TẠI VÙNG BIỂN VIỆT NAM THEO CÁC THÁNG TRONG NĂM LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Hà Nội - năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đặng Thị Minh Tuyết NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LIPID, AXIT BÉO CỦA SAN HÔ THỦY TỨC MILLEPORA THU THẬP TẠI VÙNG BIỂN VIỆT NAM THEO CÁC THÁNG TRONG NĂM Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Đặng Thị Phương Ly Hà Nội - năm 2020 i Lời cam đoan Luận văn cơng trình nghiên cứu hướng dẫn khoa học TS Đặng Thị Phương Ly Các số liệu kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Đặng Thị Minh Tuyết ii Lời cảm ơn Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Đặng Thị Phương Ly, người tâm huyết hướng dẫn giúp đỡ suốt trình hồn thiện luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên (VAST), Trung tâm nghiên cứu Quốc gia sinh vật biển – Phân viện Viễn Đơng – LB Nga, GS.TS Phạm Quốc Long, PGS.TS Đồn Lan Phương anh chị Phịng Hóa sinh hữu - Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên giúp sở vật chất, trang thiết bị, dụng cụ thí nghiệm, kiến thức thực nghiệm…để tơi hồn thành tốt luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo thầy cô Học Viện Khoa học Công nghệ, Khoa Hóa học giảng dạy, hỗ trợ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập thực luận văn Tôi xin gửi lời tri ân tới gia đình, bàn bè, người thân ln động viên để tơi có động lực cơng việc hồn thành tốt luận văn Xin chân thành cảm ơn! iii Danh mục kí hiệu chữ viết tắt Kí hiệu Tiếng anh Tiếng việt CAEP Ceramide aminoethylphosphonate Ceramide aminoethylphosphonate DG Diacyl glycerol Diacyl glycerol FFA Free fatty acid Axit béo tự GC–MS Gas chromatography–mass spectrometry Sắc ký khí – khối phổ PC Phosphatidylcholine Phosphatidylcholine PE Phosphatidylethanolamine Phosphatidylethanolamine PI Phosphatidylinositol Phosphatidylinositol PL Polar lipid Lipid phân cực PS Phosphatidylserine Phosphatidylserine PUFA Polyunsaturated Fatty Acid Axit béo đa nối đôi ST Sterol Sterol MADAG Monoalkyldiacylglycerol Monoalkyldiacylglycerol MSC Mesenchymal stem cells Tế bào gốc trung mô TLC Thin-layer chromatography Sắc ký lớp mỏng TAG Triacylglycerol Triacylglycerol W Wax ester Sáp iv Danh mục bảng Bảng 2.1 Các mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla nghiên cứu 18 Bảng 3.1 Hàm lượng lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla nghiên cứu 26 Bảng 3.2 Thành phần lớp chất lipid lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 29 Bảng 3.3 Thành phần lớp chất phospholipid mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 36 Bảng 3.4 Thành phần hàm lượng axit béo lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla (%) 41 v Danh mục hình Hình 1.1 San hơ thủy tức Millepora platyphylla Hình 1.2 Sự phân bố dạng phân tử alkenylacyl, alkylacyl diacyl số lớp chất phospholipid lồi san hơ thủy tức MP: Millepora platyphylla; MD: Millepora dichotoma; AS: Allopora steinegeri loài san hô mềm SM: Sinularia macropodia; CS: Capnella sp.; XS: Xenia sp.; GR: Gersemia rubiformis; GF: Gersemia fruticosa [25] 11 Hình 1.3 Hàm lượng (%) axit béo C20 – C22 n-6, n-3 mẫu san hô thủy tức thu thập vùng biển Việt Nam vùng biển Okhotsk [25] 12 Hình 1.4 Sự sử dụng axit béo chìa khóa sinh tổng hợp phospholipid mẫu san hô thủy tức Millepora thu thập vùng biển Việt Nam Allopora thu thập vùng biển Okhotsk [25] 12 Hình 3.1 Sắc kí đồ phân tích hàm lượng lớp chất lipid chương trình phân tích hình ảnh Sorbfil TLC Videodensitometer DV (Krasnodar, LB Nga) 28 Hình 3.2 Sắc kí đồ phân tích hàm lượng lớp chất phospholipid chương trình Sorbfil TLC Videodensitometer DV (Krasnodar, LB Nga) 35 Hình 3.3 Phổ GC methyl ester axit béo lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla Mp.1 40 vi Danh mục biểu đồ Biểu đồ 3.1 Tỉ lệ hàm lượng lipid tổng tính trọng lượng khơ / hàm lượng lipid tổng trọng lượng tươi mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 27 Biểu đồ 3.2 Hàm lượng lớp chất axit béo tự (FFA) lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 30 Biểu đồ 3.3 Hàm lượng lớp chất sterol (ST) lipid phân cực (PL) lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 31 Biểu đồ 3.4 Hàm lượng lớp chất monoalkyldiacylglycerol (MADAG) sáp (W) lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 32 Biểu đồ 3.5 Hàm lượng lớp chất triacylglycerol (TAG) lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 33 Biểu đồ 3.6 Hàm lượng lớp chất phosphatidylinositol (PI) phosphatidylserine (PS) tổng phospholipid mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 37 Biểu đồ 3.7 Hàm lượng lớp chất ceramide aminoethylphosphonate (CAEP) tổng phospholipid mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 38 Biểu đồ 3.8 Hàm lượng lớp chất phosphatidylchonline (PC) phosphatidylethanolamine (PE) tổng phospholipid mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 39 Biểu đồ 3.9 Hàm lượng axit béo no axit béo không no lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 43 Biểu đồ 3.10 Hàm lượng axit béo 12:0, 14:0, 16:0, 18:0 lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 44 Biểu đồ 3.11 Tỉ lệ hàm lượng axit béo n-3/n-6 thành phần axit béo mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 45 Biểu đồ 3.12 Hàm lượng axit béo 20:4n-6, 20:5n-3, 22:5n-6, 22:6n-3 thành phần axit béo mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla 46 vii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Danh mục kí hiệu chữ viết tắt iii Danh mục bảng iv Danh mục hình v Danh mục biểu đồ vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 1.1.1.Giới thiệu lớp Hydrozoa 1.1.2.Vài nét san hô thủy tức Millepora 1.1.3.Tình hình nghiên cứu san hơ thủy thức 1.2 GIỚI THIỆU VÀ Ý NGHĨA CỦA LIPID VÀ AXIT BÉO 13 1.2.1.Giới thiệu lipid axit béo 13 1.2.2.Ý nghĩa việc nghiên cứu lipid, axit béo 15 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1.NGUYÊN LIỆU 18 2.2.SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU CHUNG 23 2.3.PHƯƠNG PHÁP 23 2.3.1 Phương pháp chiết lipid tổng 23 2.3.2 Phương pháp xác định thành phần hàm lượng lớp chất lipid 24 2.3.3.Phương pháp xác định thành phần hàm lượng lớp chất phospholipid 24 viii 2.3.4 Phương pháp xác định thành phần hàm lượng axit béo 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 HÀM LƯỢNG LIPID TỔNG TRONG CÁC MẪU SAN HÔ THỦY TỨC MILLEPORA PLATYPHYLLA 26 3.2 THÀNH PHẦN VÀ HÀM LƯỢNG CÁC LỚP CHẤT LIPID CỦA CÁC MẪU SAN HÔ THỦY TỨC MILLEPORA PLATYPHYLLA 28 3.3 THÀNH PHẦN VÀ HÀM LƯỢNG CÁC LỚP CHẤT PHOSPHOLIPID CỦA CÁC MẪU SAN HÔ THỦY TỨC MILLEPORA PLATYPHYLLA 34 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 Mp.6 Mp.7 Mp.8 Mp.9 Mp.10 Mp.11 Mp.12 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 -0.5 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 36/22:5n-6 35/22:4n-6 37/22:5n-3 34/ 33/20:5n-3 31/20:4n-6 32/20:4n-3 30/ 29/20:1n-9 38/22:6n-3 20/ 8/16:0 4.5 27/18:4n-3 3.5 9/16:1n-7 4.0 3/14:0 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 28/20:0 1/12:0 2/ 4/ 5/ 6/DMA 7/ 10/ 12/ 11/ 13/ 15/ 14/Phyt 17/DMA-18:0 18/ 16/17:1 19/ 21/18:1n-9 22/ 23/ 24/18:2n-6 25/18:3n-6 26/18:3n-3 PHỤ LỤC Phổ GC methyl ester axit béo lipid tổng mẫu san hô thủy tức Millepora platyphylla Mp.1 3.0 25.0 27.5 30.0 2.0 1.0 0.0 -1.0 2.5 3.0 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 47/22:5n-6 46/22:4n-6 48/22:5n-3 45/ 44/22:1 42/20:5n-3 43/22:0 41/20:4n-3 40/20:4n-6 38/ 39/ 37/ 35/ 36/20:1n-9 4.0 33/18:4n-3 34/20:0 8.0 7.0 49/22:6n-3 23/18:0 24/18:1n-9 11/16:0 9.0 31/ 32/18:3n-3 6.0 3/14:0 uV(x10,000) 10.0 Chromatogram 25/18:1n-7 26/ 27/ 28/18:2n-6 29/ 30/18:3n-6 1/12:0 2/ 4/ 5/ 6/ 8/ 7/ 10/ 9/DMA 12/ 14/16/ 15/ 17/Phyt 18/13/16:1n-7 20/17:1 19/ 21/ 22/ Mp.2 5.0 25.0 27.5 30.0 2.0 1.0 0.0 -1.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 24/ 25/20:1n-9 23/20:0 21/18:3n-3 31/20:5n-3 32/22:0 30/20:4n-3 27/ 28/ 29/20:4n-6 20.0 22.5 25.0 36/22:5n-6 35/22:4n-6 37/22:5n-3 34/ 22/18:4n-3 19/18:2n-6 20/18:3n-6 33/22:1 3.0 26/ 4.0 18/ 6.0 5.0 38/22:6n-3 15/18:0 7.0 16/18:1n-9 17/18:1n-7 9.0 7/16:0 uV(x10,000) 10.0 Chromatogram 8/ 10/ 9/16:1n-7 12/Phyt 11/ 13/ 14/17:1 1/12:0 2/ 3/14:0 4/ 5/ 6/ Mp.3 8.0 27.5 30.0 1.0 -1.0 0.0 3.0 2.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 24/18:4n-3 25/20:0 26/ 27/20:1n-9 23/18:3n-3 20/18:2n-6 21/ 22/18:3n-6 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 38/22:5n-3 37/22:5n-6 36/22:4n-6 35/22:1 33/20:5n-3 34/22:0 32/20:4n-3 29/ 30/ 31/20:4n-6 28/ 4.0 5.0 39/22:6n-3 18/18:1n-9 19/18:1n-7 9.0 17/18:0 7/16:0 uV(x10,000) 10.0 Chromatogram 2/14:0 3/ 4/ 5/ 6/8/ 9/16:1n-7 10/ 12/ 11/ 14/ 13/Phyt 15/ 16/17:1 1/12:0 Mp.4 8.0 7.0 6.0 25.0 27.5 30.0 1.0 -1.0 0.0 2.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 39/22:5n-3 26/18:4n-3 27/20:0 38/22:5n-6 37/22:4n-6 36/22:1 34/20:5n-3 35/22:0 33/20:4n-3 32/20:4n-6 28/ 29/20:1n-9 25/18:3n-3 30/ 31/ 4.0 22/18:2n-6 23/ 24/18:3n-6 7.0 6.0 40/22:6n-3 9.0 19/18:0 7/16:0 uV(x10,000) 10.0 Chromatogram 20/18:1n-9 21/18:1n-7 2/14:0 3.0 3/ 5/ 4/ 6/8/ 10/ 9/16:1n-7 11/ 12/ 14/ 13/Phyt 15/ 16/ 17/17:1 18/ 1/12:0 Mp.5 8.0 5.0 25.0 27.5 30.0 0.5 -0.5 1.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 32/22:4n-6 34/22:5n-3 31/22:1 29/20:5n-3 30/22:0 28/20:4n-3 27/20:4n-6 33/22:5n-6 22/18:4n-3 2.5 26/ 23/20:0 3.0 24/ 25/20:1n-9 21/18:3n-3 17/ 18/18:2n-6 20/18:3n-6 19/ 1.5 15/18:1n-9 2.0 16/18:1n-7 4.5 4.0 35/22:6n-3 14/18:0 7/16:0 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 2/14:0 3/ 4/ 6/ 5/ 8/ 10/ 9/16:1n-7 12/ 11/Phyt 13/17:1 1/12:0 Mp.6 3.5 25.0 27.5 30.0 0.5 -0.5 1.5 1.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 26/20:5n-3 27/22:0 25/20:4n-3 24/20:4n-6 23/20:1n-9 21/18:4n-3 22/20:0 20/18:3n-3 18/18:2n-6 19/18:3n-6 16/18:1n-9 17/18:1n-7 17.5 20.0 22.5 31/22:5n-3 30/22:5n-6 29/22:4n-6 4.0 3.5 32/22:6n-3 15/18:0 6/16:0 4.5 28/22:1 2.0 2/14:0 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 3/ 5/ 4/ 7/ 9/ 8/16:1n-7 11/Phyt 10/ 12/ 13/ 14/17:1 1/12:0 Mp.7 3.0 2.5 25.0 27.5 30.0 0.5 -0.5 1.5 1.0 0.0 2.5 5.0 7.5 23/ 24/20:1n-9 20/18:3n-3 17/18:2n-6 19/18:3n-6 18/ 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 33/22:5n-3 31/22:4n-6 30/22:1 28/20:5n-3 29/22:0 27/20:4n-3 26/20:4n-6 32/22:5n-6 21/18:4n-3 22/20:0 2.5 25/ 2.0 15/18:1n-9 16/18:1n-7 3.5 3.0 34/22:6n-3 4.5 14/18:0 6/16:0 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 2/14:0 3/ 4/ 5/ 7/ 9/ 8/16:1n-7 11/ 10/Phyt 12/17:1 13/ 1/12:0 Mp.8 4.0 25.0 27.5 30.0 0.5 -0.5 1.5 1.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 33/22:5n-3 31/22:4n-6 30/22:1 28/20:5n-3 29/22:0 27/20:4n-6 22/18:4n-3 32/22:5n-6 23/20:0 2.5 24/20:1n-9 21/18:3n-3 19/18:2n-6 20/18:3n-6 3.0 25/ 26/ 2.0 17/18:1n-9 18/18:1n-7 4.0 3.5 34/22:6n-3 4.5 16/18:0 7/16:0 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 2/14:0 3/ 4/ 6/ 5/ 8/ 10/ 9/16:1n-7 11/ 12/Phyt 13/ 14/ 15/17:1 1/12:0 Mp.9 25.0 27.5 30.0 0.5 -0.5 4.0 3.5 2.5 2.0 1.5 1.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 28/ 29/20:1n-9 12.5 15.0 33/20:4n-6 17.5 20.0 22.5 25.0 41/22:6n-3 39/22:5n-6 38/22:4n-6 40/22:5n-3 37/ 36/22:0 35/20:5n-3 34/20:4n-3 31/ 32/ 30/ 22/18:2n-6 26/18:4n-3 27/20:0 25/18:3n-3 23/ 24/18:3n-6 4.5 7/16:0 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 8/16:1n-7 9/ 11/ 10/ 12/ 13/Phyt 14/ 15/ 16/17:1 17/ 18/ 19/18:0 20/18:1n-9 21/18:1n-7 2/14:0 3.0 3/ 4/ 6/ 5/ 1/12:0 Mp.10 27.5 30.0 0.5 -0.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 38/22:1 37/22:0 20.0 22.5 42/22:5n-3 40/22:4n-6 25.0 29/18:4n-3 43/22:6n-3 41/22:5n-6 36/20:5n-3 34/20:4n-6 35/20:4n-3 32/ 33/ 39/ 30/20:0 31/20:1n-9 28/18:3n-3 4.5 9/16:0 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 2/14:0 3/ 4/ 8/5/ 7/DMA 6/ 10/16:1n-7 11/ 12/ 13/ 14/Phyt 15/ 16/17:1 17/ 18/DMA-18:0 19/ 21/18:0 20/ 22/18:1n-9 23/18:1n-7 24/ 25/18:2n-6 26/ 27/18:3n-6 1/12:0 Mp.11 27.5 30.0 0.5 -0.5 2.0 1.5 1.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 34/20:4n-6 15.0 17.5 20.0 22.5 2.5 25.0 42/22:6n-3 40/22:5n-6 39/22:4n-6 41/22:5n-3 38/ 36/20:5n-3 3.0 37/22:1 35/20:4n-3 33/ 32/20:1n-9 3.5 30/18:4n-3 4.0 31/20:0 29/18:3n-3 11/ 12/ 13/ 14/ 16/ 15/Phyt 17/17:1 18/DMA-18:0 19/ 21/18:0 20/ 23/ 22/18:1n-9 24/ 26/18:2n-6 25/ 27/ 28/18:3n-6 4.5 9/16:0 10/16:1n-7 2/14:0 uV(x10,000) 5.0 Chromatogram 3/ 4/ 5/ 7/ 6/8/DMA 1/12:0 Mp.12 27.5 30.0 ... NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đặng Thị Minh Tuyết NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LIPID, AXIT BÉO CỦA SAN HÔ THỦY TỨC MILLEPORA THU THẬP TẠI VÙNG BIỂN VIỆT NAM THEO CÁC THÁNG... (%) axit béo C20 – C22 n-6, n-3 mẫu san hô thủy tức thu thập vùng biển Việt Nam vùng biển Okhotsk [25] 12 Hình 1.4 Sự sử dụng axit béo chìa khóa sinh tổng hợp phospholipid mẫu san hô thủy tức Millepora. .. cứu thành phần lipid, axit béo san hô thủy tức Millepora thu thập vùng biển Việt Nam theo tháng năm? ?? theo nội dung sau: - Xác định hàm lượng lipid tổng mẫu Millepora platyphylla thu 12 tháng -