Nghiên cứu điều chế nanocompozit polyme bentonit DMDOA

Nghiên cứu điều chế nanocompozit polyme bentonit DMDOA Nghiên cứu điều chế nanocompozit polyme bentonit DMDOA Nghiên cứu điều chế nanocompozit polyme bentonit DMDOA luận văn tốt nghiệp,luận văn thạc sĩ, luận văn cao học, luận văn đại học, luận án tiến sĩ, đồ án tốt nghiệp luận văn tốt nghiệp,luận văn thạc sĩ, luận văn cao học, luận văn đại học, luận án tiến sĩ, đồ án tốt nghiệp

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Thu “NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ, PHÂN BỐ SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG GẮN VỚI TẾ BÀO UNG THƢ CỦA PHỨC HỢP MIỄN DỊCH PHÓNG XẠ 131I-RITUXIMAB” LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Thu “NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ, PHÂN BỐ SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG GẮN VỚI TẾ BÀO UNG THƢ CỦA PHỨC HỢP MIỄN DỊCH PHÓNG XẠ 131I-RITUXIMAB” Chuyên ngành: Mã số: Mô - phôi tế bào học 62420117 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS MAI TRỌNG KHOA PGS.TS VÕ THỊ THƢƠNG LAN XÁC NHẬN NCS ĐÃ CHỈNH SỬA THEO QUYẾT NGHỊ CỦA HỘI ĐỒNG ĐÁNH GIÁ LUẬN ÁN Ngƣời hƣớng dẫn khoa học Chủ tịch hội đồng đánh giá Luận án Tiến sĩ GS.TS Mai Trọng Khoa GS.TS Phan Văn Chi Hà Nội - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án tiến sĩ “Nghiên cứu điều chế, phân bố sinh học khả gắn với tế bào ung thƣ củaphức hợp miễn dịch phóng xạ131Irituximab” cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu tài liệu luận án trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình nghiên cứu Tất tham khảo kế thừa đƣợc trích dẫn tham chiếu đầy đủ Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Thu LỜI CẢM ƠN Trong trình thực luận án, nhận nhiều giúp đỡ từ quý thầy cô, bạn đồng nghiệp, gia đình bạn bè Tơi xinbày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc đến: - GS.TS Mai Trọng Khoa, PGS.TS Võ Thị Thương Lan, nhiệt tình hướng dẫn chun mơn, truyền cho kiến thức, gương sáng cho noi theo đường nghiên cứu khoa học - Các thầy cô môn Mô Phôi Tế bào học, khoa Sinh học, trường Đại học khoa học tự nhiên động viên, giúp đỡ chun mơn nhắc nhở kịp thời để tơi hồn thành luận án - Các bạn đồng nghiệp Trung Tâm Nghiên cứu điều chế đồng vị phóng xạ, Viện Nghiên cứu hạt nhân tham gia thực nghiệm, giúp đỡ, đồng hành thời gian dài tìm tịi, nghiên cứu gắn điều chế dược chất phóng xạ luận án - Các bác sỹ Tại Trung Tâm Y học hạt nhân Ung bướu, bệnh viện Bạch Mai, bạn đồng nghiệp Học Viện Quân Y giúp đỡ thực nghiên cứu đánh giá tiền lâm sàng luận án - Cuối xin chân thành cảm ơn gia đình tơi ln dành cho tơi u thương tạo điều kiện tốt cho học tập Xin chân thành cảm ơn người giúp hoàn thành luận án này! Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Thu MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình ảnh, đồ thị MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN 11 1.1 Bệnh u lympho ác tính khơng Hodgkin 11 1.2 Các phƣơng pháp điều trị bệnh ULAKH điều trị RIT 13 1.3 Dƣợc chất phóng xạ dùng điều trị RIT 20 1.4 Đồng vị phóng xạ phƣơng pháp gắn kháng thể với 131I 26 Chƣơng 2: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Nguyên vật liệu, hóa chất, thiết bị 33 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 34 2.2.1 Nghiên cứu điều chế phức miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab 34 2.2.2 Kiểm tra chất lƣợng phức hợp 131I-rituximab 38 2.2.3 Đánh giá khả gắn với tế bào ung thƣ 44 2.2.4 Đánh giá phân bố, đào thải an toàn động vật thực nghiệm 47 2.2.5 Xử lý kết 51 2.2.6 Xây dựng tiêu chuẩn Cơ sở 131I-rituximab 51 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 53 3.1 Kết khảo sát điều kiện gắn phóng xạ để điều chế phức hợp 131Irituximab 53 3.1.1 Kết khảo sát nồng độ chloramin T tham gia phản ứng tạo phức hợp 131I-rituximab 53 3.1.2 Kết khảo sát nồng độ kháng thể tạo phức hợp 131I-rituximab 55 3.1.3 Kết khảo sát thời gian phản ứng tạo phức hợp 131I-rituximab 56 3.1.4 Kết khảo sát pH phản ứng tạo phức 131I-rituximab 58 3.1.5 Kết điều chế phức hợp 131I-rituximab theo hoạt độ riêng 60 3.1.6 Kết tinh chế phức hợp 131I-rituximab theo dõi độ ổn định 63 3.1.7 Kết đánh giá tính ổn định phức hợp 131I-rituximab 65 3.2 Kết kiểm tra chất lƣợng phức hợp 131I-rituximab 67 3.2.1 Kết kiểm tra độ tinh khiết hố phóng xạ 68 3.2.2 Kết kiểm tra độ tinh khiết hạt nhân phóng xạ 71 3.2.3 Kết thử vô khuẩn nội độc tố vi khuẩn 73 3.2.4 Kết kiểm tra tính ổn định 75 3.2.5 Kết gắn với tế bào ung thƣ 80 3.2.6 Kết đánh giá phân bố, đào thải an toàn 131I-rituximab động vật thực nghiệm 88 3.2.7 Chứng minh thành công việc điều chế phức hợp miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab sử dụng điều trị lâm sàng 106 KẾT LUẬN 109 KIẾN NGHỊ 110 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ Raji đạt 50% nồng độ x 106 tế bào, Kd 6,2 nmol/L, Bmax 1,24 amol/tế bào, gắn với lympho bào B tách từ bệnh nhân ung thƣ NHL 22,5%± 9,52, gắn với kháng nguyên CD20 93-98% gắn 15% với nguyên bào sợi - Đã đánh giá đƣợc phân bố đào thải thỏ thí nghiệmvới khoảng 1030% liều tiêm/gam phân bố máu sau tiêm đến ngày, tập trung thận 10%, tập trung gan, tuyến giáp Thuốc đào thải khỏi máu sau khoảng tuần tiết nhanh qua thận - Đã xác định đƣợc tính an tồn 131I-rituximabthơng qua số huyết học, sinh hóa xét nghiệm vi thể tế bào động vật thí nghiệm Kết khơng có bất thƣờng hay tổn thƣơng - Nhƣ vậy, phức hợp 131 I-rituximab đƣợc nghiên cứu điều chế vàthử nghiệm tiền lâm sàng đạt tiêu chuẩn chất lƣợng thuốc phóng xạ miễn dịch theo Tiêu chuẩn sở (DPPX-13:2010 ISO 17025DPPX-14:2010 ISO 17025DPPX-15:2010 ISO 17025, DPPX-16:2010 ISO 17025 đƣợc công nhận từ Văn phịng Cơng nhận Chất lƣợng, Bộ Khoa học Cơng nghệ, mã số VILAS 519) vàcó thể sử dụng nghiên cứu điều trị lâm sàng 110 KIẾN NGHỊ Để đƣa dƣợc chất phóng xạ 131I-rituximab sử dụng điều trị Bệnh u lympho ác tính khơng Hodgkin, đề nghị nghiên cứu tƣơng lai: - Nghiên cứu cần hoàn thiện thêm phƣơng pháp liều lƣợng (dosing method) để tính tốn liều tiêm đƣa vào điều trị lâm sàng Cụ thể lànghiên cứu phác đồ định liều đa dạng nhiều bệnh nhân ung thƣ,và đánh giá đáp ứng điều trị có sử dụng hình ảnh lâm sàng thiết bị PET-CT để chụp hình immunoPET - Cần thử nghiệm điều trị bệnh nhân phase I phase II lâm sàng Cụ thể nghiên cứu điều trị lâm sàng nhiều bệnh nhân ung thƣ - Xin cấp phép Bộ Y Tếđể đƣa sản phẩm 131I-rituximab dùng lâm sàng 111 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Mai Trọng Khoa, Nguyễn Thị Thu, Trần Đình Hà, Võ Thị Cẩm Hoa, Bùi Văn Cƣờng (2013), “Nghiên cứu điều chế kháng thể đơn dòng gắn đồng vị phóng xạ131I-rituximab dùng điều trị u lympho ác tính khơng hodgkin”, Tạp chí Y học thực hành, số (858), tr.60-64 Mai Trọng Khoa, Nguyễn Thị Thu, Trần Đình Hà, Võ Thị Cẩm Hoa, Dƣơng Văn Đông, Bùi Văn Cƣờng, Nguyễn Thị Khánh Giang(2013),“Nghiên cứu đánh giá tính đặc hiệu phức miễn dịch phóng xạ131I-rituximab gắn kháng nguyên CD20, tế bào bạch cầu bệnh nhân ung thƣ NHL tế bào Raji”,Tạp chí Y học thực hành, số (859), tr.14-17 Mai Trọng Khoa, Nguyễn Thị Thu, Trần Đình Hà, Võ Thị Cẩm Hoa, Nguyễn Thị Khánh Giang, Nguyễn Lĩnh Toàn, Hồ Anh Sơn (2013), “Nghiên cứu đánh giá tiền lâm sàng phức miễn dịch phóng xạ131I-rituximab động vật thí nghiệm”, Tạp chí Y học thực hành, số (860), tr.30-34 Nguyễn Thị Thu, Mai Trọng Khoa, Trần Đình Hà, Võ Thị Cẩm Hoa, Dƣơng Văn Đông Bùi Văn Cƣờng, Nguyễn Thị Khánh Giang (2013), “Kiểm tra chất lƣợng kháng thể đơn dịng gắn đồng vị phóng xạ131I-rituximab dùng điều trị u lympho ác tính khơng hodgkin”,Tạp chí Khoa học- Đại học Quốc Gia Hà Nội, tập 29, số p.51-58 Nguyễn Thị Thu, Nguyễn Thị Ngọc, Nguyễn Thị Khánh Giang (2016), “Đánh giá khả gắn với tế bào ung thƣ dƣợc chất phóng xạ 131I-rituximab”, Tạp chí Y dược lâm sàng 108, tập 11, tr.10-15 112 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Bá Đức (1995),Nghiên cứu chẩn đoán điều trị U lympho ác tính khơng Hodgkin bệnh viện K Hà Nội từ 1982 - 1993, Luận án Phó tiến sỹ khoa học y dƣợc, Trƣờng Đại học Y Hà Nội Nguyễn Bá Đức(1999),Bệnh U lympho ác tính khơng Hodgkin, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyễn Bá Đức (2007),U lympho ác tính khơng Hodgkin, Chẩn đốn điều trị bệnh ung thư, Nhà xuất Y học,Hà Nội Phạm Xuân Dũng, Trần Thị Phƣơng Thảo, Nguyễn Chấn Hùng cộng (1999), “U lympho ác tính không Hodgkin ngƣời lớn, lâm sàng, giải phẫu bệnh điều trị”, Y học TP Hồ Chí Minh,số đặc biệt chuyên đề Ung bướu học, phụ số 4, tập Trần Phƣơng Hạnh, Nguyễn Sào Trung (2008),Giải phẫu bệnh học, Sách tham khảo Mai Trọng Khoa (2012), Điều trị miễn dịch phóng xạ (RadioimmunotherapyRIT), Giáo trình Y học hạt nhân (Sách dùng cho đào tạo đại học), Nhà xuất Y học, Hà Nội Mai Trọng Khoa (2012), Điều trị miễn dịch phóng xạ, Giáo trình Y học hạt nhân (Sách dùng cho đào tạo sau đại học), Nhà xuất Y học, Hà Nội Lê Đình Roanh, Đặng Thế Căn, Tạ Văn Tờ CS (2005),“U lympho ác tính khơng Hogdkin: kiểu hình miễn dịch áp dụng phân loại mô học WHO 2001”, Đặc san Ung thư học, quý II - 2005, tr 49 - 52 Viện Nghiên cứu hạt nhân (2014), Tiêu chuẩn sở DPPX-13:2010 ISO 17025 10 Viện Nghiên cứu hạt nhân (2014),Tiêu chuẩn sở DPPX-14:2010 ISO 17025 11 Viện Nghiên cứu hạt nhân (2014), Tiêu chuẩn sở DPPX-15:2010 ISO 17025 12 Viện Nghiên cứu hạt nhân (2014), Tiêu chuẩn sở DPPX-16:2010 ISO 17025 113 TIẾNG ANH 13 Andreas O Schaffland, Franz Buchegger, MD Marek Kosinski, et al (2004), “131I-Rituximab: Relationship Between Immunoreactivity and Specific Activity”,Journal of Nuclear Medicine, 45(10), pp 1784-1790 14 Andrew Boswell and Martin W Brechbiel (2007), “Development of Radioimmunotherapeutic and Diagnostic Antibodies: An Inside-Out View”,Nucl Med Biol 34(7),pp 757-778 15 Ansell S.M., Armitage J., (2005), “Non-Hodgkin lymphoma: diagnosis and treatment”, NCBI, Aug 80 (8), pp 1087-97 16 Antibody society (2015),An extraordinary year for first marketing approvals of antibody therapeutics, News, approvals 17 Arnol S.F., Lee M.N (1995), “Malignant Lymphomas”, Harrison’s principles of internal medicine, 13th Edition, Mc GrawHill, pp 1777-1778 18 Azuwuike Owunwanne, Mohan Patel and Samy Sadek (1995),The handbook of Radiopharmaceuticals,Chapman and Hall Medical, New York 19 Bhargawa, K.K and Acharya, S.A (1989), “Labelling of monoclonal antibodies with radionuclidides”, Semin Nucl Med 19, pp 187-201 20 Bhargawa, K.K., Huppi K, Spangler G et al (1995), “Point mutation in the cmyc transactivation domain are common in Burkitt lymphoma and mouse plasmacytoma”, Nat gene 5, pp 56 21 Birx DL, Redfield RR, Tosato G (1986), “Defective regulation of Eipstein Barr virus infection in patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) or AIDS-related disorders”, Engl J Med 314, pp 874 22 Boyum A (2009), “Isolation of Lymphocytes, Granulocytes and Macrophages”, Scand J of Immunol, 2009 23 BTSI (Bio-Tech Systems, Inc.) (2012),New Therapeutic Radiopharmaceuticals Drive Market Growth Worldwide, The National Academies Press 24 Carter, P J (2006), “Potent antibody therapeutics by design”,Nature reviews6, pp 343-357 114 ... đồng nghiệp Trung Tâm Nghiên cứu điều chế đồng vị phóng xạ, Viện Nghiên cứu hạt nhân tham gia thực nghiệm, giúp đỡ, đồng hành thời gian dài tìm tịi, nghiên cứu gắn điều chế dược chất phóng xạ... sử dụng nghiên cứu điều trị lâm sàng 110 KIẾN NGHỊ Để đƣa dƣợc chất phóng xạ 131I-rituximab sử dụng điều trị Bệnh u lympho ác tính khơng Hodgkin, đề nghị nghiên cứu tƣơng lai: - Nghiên cứu cần... 33 2.1 Nguyên vật liệu, hóa chất, thiết bị 33 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 34 2.2.1 Nghiên cứu điều chế phức miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab 34 2.2.2 Kiểm tra chất lƣợng