Nghiên cứu xây dựng bộ dữ liệu phân tích định tính, định lượng hoạt chất trong dược liệu hà thủ ô đỏ fallopia multiflora (thunberg) haraldson bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGUYỄN THỊ THOA NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG BỘ DỮ LIỆU PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT TRONG DƯỢC LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ FALLOPIA MULTIFLORA (THUNBERG) HARALDSON BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC Hà Nội - 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGUYỄN THỊ THOA NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG BỘ DỮ LIỆU PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT TRONG DƯỢC LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ FALLOPIA MULTIFLORA (THUNBERG) HARALDSON BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 9.44.01.14 LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Nguyễn Tiến Đạt TS Nguyễn Hải Đăng Hà Nội - 2021 iii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận án cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn khoa học PGS.TS Nguyễn Tiến Đạt TS Nguyễn Hải Đăng Các số liệu, kết luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Hà Nội, ngày 16 tháng 02 năm 2021 Tác giả luận án Nguyễn Thị Thoa iv LỜI CẢM ƠN Luận án hồn thành Viện Hóa sinh biển - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, với hỗ trợ kinh phí đề tài VAST.ƯDCN.05/1416 Trong trình nghiên cứu, tác giả nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, nhà khoa học, đồng nghiệp, bạn bè gia đình Tơi xin bảy tỏ lời cảm ơn chân thành sâu sắc, cảm phục kính trọng tới PGS.TS Nguyễn Tiến Đạt TS Nguyễn Hải Đăng - người thầy tận tâm hướng dẫn, động viên, khích lệ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Hóa sinh biển tập thể cán Viện quan tâm giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu thực luận án Tôi xin chân thành cảm ơn phòng Hoạt chất sinh học, Trung tâm tiên tiến Hóa sinh hữu - Viện Hóa sinh biển tạo điều kiện sở vật chất, trang thiết bị tốt để tơi thực hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Trường Đại học Công nghiệp Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa Cơng nghệ hóa đồng nghiệp giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để học tập thực luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới tồn thể gia đình, bạn bè người thân ln ln quan tâm, khích lệ, động viên tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu thực luận án Xin trân trọng cảm ơn! Tác giả Nguyễn Thị Thoa v MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN iv MỤC LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC BẢNG xi DANH MỤC HÌNH xiii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chi Fallopia 1.2 Giới thiệu chung hà thủ ô đỏ 1.3 Tình hình nghiên cứu hà thủ ô đỏ giới 1.3.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học 1.3.1.1 Hợp chất stilbene 1.3.1.2 Hợp chất quinone 10 1.3.1.3 Hợp chất flavonoid 12 1.3.1.4 Hợp chất lipid 15 1.3.1.5 Một số hợp chất khác 16 1.3.2 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học 19 1.3.3 Các nghiên cứu khả gây độc gan hà thủ ô đỏ 20 1.3.4 Các nghiên cứu phân tích định tính, định lượng hoạt chất hà thủ ô đỏ 21 1.4 Tình hình nghiên cứu hà thủ đỏ Việt Nam 26 1.5 Tổng quan thẩm định phương pháp phân tích 28 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 30 2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2 Phương pháp nghiên cứu 31 2.2.1 Phương pháp phân lập hợp chất 31 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 31 2.2.3 Phương pháp xử lí mẫu 32 2.2.4 Phương pháp phân tích định tính, định lượng hợp chất 32 2.3 Phân lập hợp chất 33 2.4 Hằng số vật lí kiện phổ hợp chất 37 2.4.1 Hợp chất FM3 37 vi 2.4.2 Hợp chất FM4 37 2.4.3 Hợp chất FM1 37 2.4.4 Hợp chất FM2 37 2.4.5 Hợp chất FM5 38 2.4.6 Hợp chất FM6 38 2.4.7 Hợp chất FM7 38 2.4.8 Hợp chất FM8 38 2.4.9 Hợp chất FM9 39 2.4.10 Hợp chất FM10 39 2.4.11 Hợp chất FM11 39 2.5 Kết thiết lập điều kiện phân tích cho hệ thống HPLC 39 2.5.1 Kết khảo sát thể tích bơm mẫu 39 2.5.2 Kết lựa chọn cột sắc ký 40 2.5.3 Kết khảo sát bước sóng phân tích 40 2.5.4 Kết khảo sát pha động 42 2.5.5 Kết khảo sát thời gian lưu độ tinh khiết chất tham chiếu 43 2.5.6 Kết khảo sát hệ thống LC/MS 45 2.6 Kết xây dựng đường chuẩn định lượng 46 2.7 Quy trình xử lí mẫu phân tích 49 2.8 Kết thẩm định phương pháp định tính, định lượng 50 2.8.1 Kết xác định tính chọn lọc phương pháp 50 2.8.2 Kết xác định LOD, LOQ 50 2.8.3 Kết xác định độ chụm 51 2.8.3.1 Kết xác định độ lặp 51 2.8.3.2 Kết xác định độ tái lặp 57 2.8.4 Kết xác định độ 60 2.9 Kết phân tích mẫu 65 CHƯƠNG THẢO LUẬN KẾT QUẢ 71 3.1 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ hà thủ ô đỏ 71 3.1.1 Hợp chất FM3 71 3.1.2 Hợp chất FM4 78 3.1.3 Hợp chất FM1 85 3.1.4 Hợp chất FM2 86 vii 3.1.5 Hợp chất FM5 89 3.1.6 Hợp chất FM6 91 3.1.7 Hợp chất FM7 93 3.1.8 Hợp chất FM8 95 3.1.9 Hợp chất FM9 97 3.1.10 Hợp chất FM10 99 3.1.11 Hợp chất FM11 101 3.2 Thiết lập quy trình định tính, định lượng hoạt chất hà thủ ô đỏ .104 3.4 Hàm lượng hoạt chất mẫu rễ củ hà thủ ô đỏ 109 3.4.1 Sắc ký đồ DAD 280 nm mẫu rễ củ hà thủ ô đỏ 109 3.4.2 Sắc ký đồ DAD 320 nm mẫu rễ củ hà thủ ô đỏ 111 3.4.3 Sắc ký đồ mẫu rễ củ hà thủ ô đỏ Hà Giang 113 3.4.4 Kết phân tích mẫu rễ củ hà thủ ô đỏ 114 KIẾN NGHỊ 120 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 121 TÀI LIỆU THAM KHẢO Error! Bookmark not defined viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu H-NMR 13 C-NMR AOAC ASTM CC CL COSY DAD DEPT DMSO EC50 ESI-MS GI50 HPLC ix HR-MS HMBC HSQC IC50 ICH ISO LC/MS LOD LOQ MCF-7 MS NMR NOESY PAD RP RSD 196 Kết mẫu TT1 (FM2) 197 198 Kết mẫu TT2 (FM2) 199 Kết mẫu TT2 (FM4) 200 Kết mẫu TT3 (FM2) 201 Kết mẫu TT3 (FM4) 202 Kết mẫu TT4 (FM2) 203 Kết mẫu TT4 (FM4) 204 Kết mẫu TT4 (FM1) 205 Kết mẫu TT5 (FM2) 206 Kết mẫu TT5 (FM4) 207 MỘT SỐ BẢNG TRA CỨU Bảng Độ lặp lại tối đa chấp nhận nồng độ khác (theo AOAC)[78] TT Hàm lượng % 10 Bảng Độ thu hồi chấp nhận nồng độ khác (theo AOAC)[78] TT Hàm lượng (%) 10 208 Bảng Bảng phân phối chuẩn Student [78] Bậc tự 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 209 Bậc tự 22 23 24 25 26 27 28 29 30 ... để phân tích định tính định lượng hoạt chất dược liệu Vì vậy, HPLC-DAD-MS lựa chọn nhằm xây dựng liệu định tính, định lượng hoạt chất dược liệu hà thủ ô đỏ 1.4 Tình hình nghiên cứu hà thủ đỏ. .. nhiều nghiên cứu phân tích định tính định lượng hoạt chất hà thủ ô đỏ công bố Teng-Hua Wang cộng tiến hành nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích định tính định lượng hoạt chất nhằm kiểm soát chất. .. [18], dược liệu hà thủ ô đỏ xây dựng phương pháp định tính định lượng tiêu chuẩn chất lượng loại dược liệu Phương pháp định lượng hàm lượng hoạt chất dược liệu hà thủ ô đỏ lần đưa vào Dược điển