(Luận văn thạc sĩ) góp phần nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh từ streptomyces 119 112​

BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ NGỌỌ̣C HIỆP GĨP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MENTỞNG HỢP KHÁNG SINH TỪSTREPTOMYCES 119.112 KHOA LUẬN TỐT NGHIÊP DƯỢC SI HÀ NỘI-2013 BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỢI LÊ THỊ NGỌỌ̣C HIỆP GĨP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH TỪ STREPTOMYCES 119.112 KHOA LUẬN TỐT NGHIÊP DƯỢC SI Người hướng dẫn: Ths Võ Thị Thu Thủy Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh& Sinh học Trường Đại họọ̣c Dược Hà Nợi HÀ NỢI-2013 LỜỜ̀I CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô giáo Ths Võ Thị Thu Thủy người đa tận tình hướng dẫn từ những bước đầu tiên cho đến hoàn thiện khóa luận này Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, các cán bộ, kỹ thuật viên giảng dạy, công tác tại Bộ môn Vi sinh - Sinh học , Bộ môn Công nghiệp dược trường Đại học Dược Hà Nợi , Bợộ̣ mơn Hóó́a vậộ̣t liệộ̣u - khoa Hóó́a trườờ̀ng Đạộ̣i họộ̣c Khoa họộ̣c tự nhiên Hàờ̀ Nộộ̣i đa giúp đỡ thời gian làm thưc nghiệm Nhân dip này cũng xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu cùng toàn thể các thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội đa dạy dỗ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho thời gian học tập tại trường Và cuối cùng là lời cảm ơn gửi tới gia đình và bạn bè đa động viên , giúp đỡ suốt thời gian thưc hiện khóa luận Do thời gian làm thưc nghiệm cũng kiến thức cua bản thân có hạn , khóa luận này còn có nhiều thiếu sót Tôi rât mong nhận được sư góp ý cua các thầy cô , bạn bè để khóa luận được hoàn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10, tháng 5, năm 2013 Sinh viên LÊ THỊ NGỌC HIỆP MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔỔ̉NG QUAN 1.1 Đạộ̣i cương vềờ̀ kháó́ng sinh 1.1.1 Định nghĩa kháó́ng sinh 1.1.2 Phân loạộ̣i kháó́ng sinh 1.1.3 Cơ chếó́ táó́c dụng kháó́ng sinh 1.2.Đạộ̣i cương vềờ̀ xạộ̣ khuẩn 1.2.1 Đặc điểể̉m hìờ̀nh tháó́i xạộ̣ khuẩn 1.2.2 Đặc điểể̉m xạộ̣ khuẩn chi Streptomyces 1.3 Sơ đồ tổng quáó́t sinh tổng hợộ̣p kháó́ng sinh……………………………………….…6 1.4.Tuyểể̉n chọộ̣n, cảể̉i tạộ̣o vàờ̀ bảể̉o quảể̉n giớó́ng xạộ̣ khuẩn 1.4.1 Mục đích 1.4.2 Chọộ̣n chủng cóó́ HTKS cao sáó́ng lọộ̣c ngẫẫ̃u nhiên .7 1.4.3 Đợộ̣t biếó́n cảể̉i tạộ̣o giớó́ng… 1.4.4 Bảể̉o quảể̉n giớó́ng xạộ̣ khuẩn …………………………………………………… 1.5 Lên men sinh tổng hợộ̣p kháó́ng sinh 1.5.1 Cáó́c phương pháó́p lên men 1.5.2 Mợộ̣t sớó́ ́ó́u tớó́ ảể̉nh hưởng đếó́n quáó́ trìờ̀nh lên men 10 1.6 Chiếó́t táó́ch vàờ̀ tinh chếó́ kháó́ng sinh từờ̀ dịch lên men 10 1.6.1 Vai tròờ̀ chiếó́t táó́ch vàờ̀ tinh chếó́ kháó́ng sinh 10 1.6.2 Cáó́c phương pháó́p chiếó́t táó́ch 11 1.7.Bướó́c đầờ̀u nghiên cứó́u cấu trúó́c kháó́ng sinh 12 1.7.1 Phổ tửể̉ ngoạộ̣i - khảể̉ kiếó́n 12 1.7.2 Phổ hồng ngoạộ̣i 12 1.7.3 Khớó́i phổ 13 1.8 Mợộ̣t sớó́ nghiên cứó́u liên quan…………………………………………………… 13 1.8.1 So sánh glucose và glycerol làm nguồn carbon cho sảể̉n xuất ε-poly- L-Lysin từờ̀Streptomyces sp M-Z18………………………………………………………… 13 1.8.2 Tinh chếó́ áó́i lực Phosphoprotein xáó́c định các protein tham gia vào Sadenosyl-L-methionine làờ̀m tăng cườờ̀ng sảể̉n xuất kháó́ng sinh Streptomycescoelicolor……………………………………………………………… .14 1.8.3 Xáó́c định định hoạộ̣t tính sinh họộ̣c mợộ̣t nhóó́m gồm 51 macrolide cáó́ch kích hoạộ̣t enzyme tổng hợộ̣p polyketide Streptomyces ambofaciens……… .14 CHƯƠNG 2: ĐỐỐ́I TƯỢỌ̣NG VÀỜ̀ PHƯƠNG PHÁỐ́P NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vậộ̣t liệộ̣u vàờ̀ thiếó́t bị 2.1.1 Nguyên vậộ̣t liệộ̣u 2.1.2 Máó́y móó́c thiếó́t bị 2.2 Nợộ̣i dung nghiên cứó́u 2.2.1 Chọộ̣n lọộ̣c, cảể̉i tạộ̣o giớó́ng 2.2.2 Lên men, chiếó́t táó́ch kháó́ng sinh tớó́i ưu 2.2.3 Sơ bợộ̣ xáó́c định mợộ̣t sớó́ tính chất kháó́ng sinh thu đượộ̣c 2.3 Phương pháó́p thực nghiệộ̣m 2.3.1 Nuôi cấy vàờ̀ giữẫ̃ giớó́ng xạộ̣ khuẩn 2.3.2 Đáó́nh giáó́ hoạộ̣t tính kháó́ng sinh phương pháó́p khuếó́ch táó́n 2.3.3 Chọộ̣n lọộ̣c ngẫẫ̃u nhiên 2.3.4 Đợộ̣t biếó́n ……………………… 21 2.3.5 Lên men chìờ̀m tổng hợộ̣p kháó́ng sinh 2.3.6 Chiếó́t kháó́ng sinh từờ̀ dịch lên men dung môi hữẫ̃u 2.3.7 Táó́ch cáó́c thàờ̀nh phầờ̀n kháó́ng sinh sắó́c kýó́ lớó́p mỏng 2.3.8 Thu kháng sinh thơ phương pháó́p cất quay 2.3.9 Tinh chếó́ kháó́ng sinh thơ sắó́c kýó́ cợộ̣t .24 2.3.10 Phương pháó́p xáó́c định kháó́ng sinh tinh khiếó́t thu đượộ̣c .25 CHƯƠNG 3: KÊỐ́T QUẢ THỰC NGHIỆM VÀỜ̀ NHẬỌ̣N XÉT .26 3.1 Kếó́t quảể̉ sàờ̀ng lọộ̣c ngẫẫ̃u nhiên 26 3.2 Kếó́t quảể̉ đợộ̣t biếó́n cảể̉i tạộ̣o giớó́ng lầờ̀n 27 3.3 Kếó́t quảể̉ đợộ̣t biếó́n cảể̉i tạộ̣o giớó́ng lầờ̀n 27 3.4 Kếó́t quảể̉ đợộ̣t biếó́n hóó́a họộ̣c HNO2 28 3.5 Kếó́t quảể̉ chọộ̣n mơi trườờ̀ng lên men chìờ̀m 29 3.6 Kếó́t quảể̉ chọộ̣n chủng lên men 30 3.7 Kếó́t quảể̉ chọộ̣n dung mơi vàờ̀ pH chiếó́t 30 3.8 Kếó́t quảể̉ sắó́c kýó́ lớó́p mỏng chọộ̣n hệộ̣ dung môi 31 3.9 Kếó́t quảể̉ sắó́c kí cợộ̣t………………… 32 3.9.1 Kếó́t quảể̉ sắó́c kýó́ cợộ̣t lầờ̀n 32 3.9.2 Kếó́t quảể̉ sắó́c kýó́ cợộ̣t lầờ̀n 34 3.9.3 Kếó́t quảể̉ sắó́c kýó́ cợộ̣t lầờ̀n 36 3.10 Kếó́t quảể̉ đo nhiệộ̣t đợộ̣ nóó́ng chảể̉y, đo phổ kháó́ng sinh tinh khiếó́t 39 KÊỐ́T LUẬỌ̣N VÀỜ̀ KIÊỐ́N NGHỊ 41 DANH MỤC CÁỐ́C KÝ HIỆU, CÁỐ́C CHỮ VIÊỐ́T TẮT ISP International Streptomyces Project (Chương trìờ̀nh Streptomyces q́ó́c tếó́) ADN Acid deoxyribonucleic ARN Acid ribonucleic ATCC 6633 Trung tâm giữẫ̃ giớó́ng Hoa Kỳ BV 108 Bệộ̣nh việộ̣n 108 B.subtilis Bacillussubtilis ATCC 6633 Đợộ̣t biếó́n lầờ̀n ĐB1 ĐB2 Đợộ̣t biếó́n lầờ̀n ĐBHH Đợộ̣t biếó́n hóó́a họộ̣c G(+) Gram dương G(-) Gram âm HTKS Hoạộ̣t tính kháó́ng sinh MC Mẫẫ̃u chứó́ng MT Mơi trườờ̀ng MT1dt Mơi trườờ̀ng dịch thểể̉ MT2dt Môi trườờ̀ng dịch thểể̉ MT6dt Môi trườờ̀ng dịch thểể̉ P mirabilis Proteus mirabilis BV 108 SLNN Sàờ̀ng lọộ̣c ngẫẫ̃u nhiên VSV Vi sinh vậộ̣t DANH MỤC CÁỐ́C BẢNG Bảể̉ng 1: Cáó́c vi khuẩn kiểể̉m định Bảể̉ng 2: Cáó́c MT ni cấy xạộ̣ khuẩn Bảể̉ng 3: Cáó́c MT ni cấy VSV kiểể̉m định Bảể̉ng 4: Cáó́c dung mơi đaẫ̃ sửể̉ dụng Bảể̉ng 5: Kếó́t quảể̉ thửể̉ HTKS sàờ̀ng họộ̣c ngẫẫ̃u nhiên Bảể̉ng 6: Kếó́t quảể̉ thửể̉ HTKS đợộ̣t biếó́n lầờ̀n Bảể̉ng 7: Kếó́t quảể̉ thửể̉ HTKS đợộ̣t biếó́n lầờ̀n Bảể̉ng 8: Kếó́t quảể̉ thửể̉ HTKS đợộ̣t biếó́n hóó́a họộ̣c Bảể̉ng 9: Kếó́t quảể̉ chọộ̣n mơi trườờ̀ng lên men chìờ̀m Bảể̉ng 10: Kếó́t quảể̉ chọộ̣n chủng lên men Bảể̉ng 11: Kếó́t quảể̉ chọộ̣n dung mơi vàờ̀ pH chiếó́t Bảể̉ng 12: Kếó́t quảể̉ SKLM chọộ̣n hệộ̣ dung mơi Bảể̉ng 13: Kếó́t quảể̉ thửể̉ HTKS cáó́c phân đoạộ̣n sau chạộ̣y sắó́c kýó́ lầờ̀n Bảể̉ng 14: Kếó́t quảể̉ SKLM sau chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n Bảể̉ng 15: Kếó́t quảể̉ thửể̉ HTKS cáó́c phân đoạộ̣n sau chạộ̣y sắó́c kýó́ lầờ̀n Bảể̉ng 16: Kếó́t quảể̉ SKLM cáó́c phân đoạộ̣n sau chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n Bảể̉ng 17: Kếó́t quảể̉ thửể̉ HTKS nhóó́m sau chạộ̣y cợộ̣t Bảể̉ng 18: Kếó́t quảể̉ SKLM nhóó́m sau chạộ̣y cợộ̣t Bảể̉ng 19: Kếó́t quảể̉ thửể̉ HTKS nhóó́m sau chạộ̣y cợộ̣t Bảể̉ng 20: Kếó́t quảể̉ SKLM nhóó́m sau chạộ̣y cợộ̣t Bảể̉ng 21: Kếó́t quảể̉ IR DANH MỤC CÁỐ́C HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hìờ̀nh 1: Sơ đồ chếó́ táó́c dụng cáó́c họộ̣ kháó́ng sinh Hìờ̀nh 2: Sơ bợộ̣ phân loạộ̣i xạộ̣ khuẩn Hìờ̀nh 3: Cáó́c khuẩn ty xạộ̣ khuẩn Hìờ̀nh 4: Sơ đồ tổng quáó́t lên men sảể̉n xuất kháó́ng sinh Hìờ̀nh 5: Đườờ̀ng cong sinh trưởng pháó́t triểể̉n xạộ̣ khuẩn Hìờ̀nh 6: Pic sắó́c kýó́ cợộ̣t lầờ̀n Hìờ̀nh 7: Pic sắó́c kýó́ cợộ̣t lầờ̀n Hìờ̀nh 8: Pic sắó́c kýó́ cợộ̣t lầờ̀n nhóó́m Hìờ̀nh 9: Pic sắó́c kýó́ cợộ̣t lầờ̀n nhóó́m Hìờ̀nh PL1: Xạộ̣ khuẩn giai đoạộ̣n pháó́t triểể̉n 5-6 ngày Hìờ̀nh PL2: Kếó́t quảể̉ đợộ̣t biếó́n áó́nh sáó́ng UV Hìờ̀nh PL3: Thửể̉ HTKS phương pháó́p khớó́i thạộ̣ch(P mirabilis) Hìờ̀nh PL4: Thửể̉ HTKS phương pháó́p giếó́ng thạộ̣ch (B subtilis) Hìờ̀nh PL5: Thửể̉ HTKS phương pháó́p khoanh giấy lọộ̣c(B subtilis) Hình PL6: Kếó́t quảể̉ chọộ̣n MT lên men chìm Hìờ̀nh PL7: Kếó́t quảể̉ chọộ̣n chủng lên men Hìờ̀nh PL8: Kếó́t quảể̉ SKLM sau chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n Hìờ̀nh PL9: Kếó́t quảể̉ chạộ̣y sắó́c kýó́ cợộ̣t Hìờ̀nh PL10: Kếó́t quảể̉ đo phổ UV kháó́ng sinh Hìờ̀nh PL11: Kếó́t quảể̉ đo phổ IR kháó́ng sinh Hìờ̀nh PL12: Kếó́t quảể̉ đo phổ khớó́i kháó́ng sinh ĐẶT VẤN ĐỀ Việộ̣c kháó́m pháó́ vàờ̀ pháó́t triểể̉n cáó́c kháó́ng sinh đaẫ̃ tạộ̣o cáó́c thếó́ lực vũẫ̃ khí hữẫ̃u hiệộ̣u giúó́p ngườờ̀i chớó́ng lạộ̣i vi khuẩn Phạộ̣m vi điềờ̀u trị kháó́ng sinh hiệộ̣n khơng dừờ̀ng lạộ̣i cáó́c bệộ̣nh nhiễm khuẩn, màờ̀ kháó́ng sinh còờ̀n đượộ̣c dùờ̀ng ngàờ̀y mợộ̣t nhiềờ̀u đểể̉ điềờ̀u trị ung thư Tuy nhiên, việộ̣c nghiên cứó́u pháó́t triểể̉n kháó́ng sinh mớó́i cóó́ xu hướó́ng giảể̉m theo thờờ̀i gian Trong đóó́, mơ hìờ̀nh cáó́c bệộ̣nh nhiễm khuẩn ngàờ̀y càờ̀ng đa dạộ̣ng, việộ̣c sửể̉ dụng kháó́ng sinh ngàờ̀y mợộ̣t tràờ̀n lan, tìờ̀nh hìờ̀nh kháó́ng kháó́ng sinh ngàờ̀y càờ̀ng gia tăng vàờ̀ làờ̀ mớó́i lo ngạộ̣i toàờ̀n cầờ̀u Hiệộ̣n trạộ̣ng đóó́ làờ̀ tiếó́ng chng cảể̉nh báó́o, ngườờ̀i thua c̣ộ̣c chiếó́n chớó́ng vi khuẩn Vìờ̀ vậộ̣y, đẩy mạộ̣nh nghiên cứó́u, sảể̉n xuất cáó́c kháó́ng sinh cóó́ hiệộ̣u quảể̉ điềờ̀u trị cao, đợộ̣c tính thấp vàờ̀ bị kháó́ng th́ó́c làờ̀ mợộ̣t u cầờ̀u tất ́ó́u vàờ̀ cấp thiếó́t cơng c̣ộ̣c bảể̉o vệộ̣ vàờ̀ chăm sóó́c sứó́c khỏe ngườờ̀i dân Trong tất cảể̉ cáó́c kháó́ng sinh đượộ̣c biếó́t đếó́n hiệộ̣n thìờ̀ cóó́ khoảể̉ng 55% cóó́ nguồn gớó́c từờ̀ xạộ̣ khuẩn vàờ̀ 60% sớó́ đóó́ tḥộ̣c chi Streptomyces Đóó́ làờ̀ sở đểể̉ cáó́c nhàờ̀ khoa họộ̣c nướó́c ta hiệộ̣n tậộ̣p trung nghiên cứó́u vàờ̀o chi xạộ̣ khuẩn nàờ̀y Chính vìờ̀ vậộ̣y, em chọộ̣n đềờ̀ tàờ̀i: “Góp phần nghiên cứu lên men tổng hợọ̣p kháng sinh từ Streptomyces 119.112” làờ̀m khóó́a luậộ̣n tớó́t nghiệộ̣p Chủng Streptomyces 119.112 Bợộ̣ mơn Vi sinh – Sinh họộ̣c trườờ̀ng đạộ̣i họộ̣c Dượộ̣c Hàờ̀ Nộộ̣i phân lậộ̣p vàờ̀ cung cấp Khóó́a ḷộ̣n mong ḿó́n đạộ̣t đượộ̣c cáó́c mục tiêu sau đây: - Nâng cao hiệộ̣u suất sinh tổng hợộ̣p kháó́ng sinh từờ̀ chủng Streptomyces 119.112bằng sàờ̀ng lọộ̣c ngẫẫ̃u nhiên vàờ̀ đợộ̣t biếó́n cảể̉i tạộ̣o giớó́ng - Lựa chọộ̣n mơi trườờ̀ng vàờ̀ biếó́n chủng thích hợộ̣p cho quáó́ trìờ̀nh lên men - Chiếó́t táó́ch vàờ̀ tinh chếó́ kháó́ng sinh thu đượộ̣c - Từờ̀ng bướó́c xáó́c định đáó́nh giáó́ tính chất vậộ̣t lýó́ vàờ̀ cấu trúó́c hóó́a họộ̣c kháó́ng sinh chủng Streptomyces 119.112 44 KÊỐ́T LUẬỌ̣N VÀỜ̀ KIÊỐ́N NGHỊ KÊỐ́T LUẬỌ̣N Sau mộộ̣t thờờ̀i gian nghiên cứó́u, chúó́ng tơi đaẫ̃ bảể̉n hoàờ̀n thàờ̀nh đượộ̣c mục tiêu ban đầờ̀u khóó́a ḷộ̣n tớó́t nghiệộ̣p Cáó́c kếó́t luậộ̣n cụ thểể̉ sau: - Qua lầờ̀n đợộ̣t biếó́n UV thìờ̀ hoạộ̣t tính kháó́ng sinh Streptomyces 119.112tăng lên đáó́ng kểể̉ -Tìờ̀m đượộ̣c MT ni cấy bềờ̀ mặt tớó́t làờ̀ MT1 vàờ̀ MT lên men chìờ̀m tớó́t vớó́i chủng Streptomyces 119.112 làờ̀ MT1dt, biếó́n chủng ĐB2.18 cóó́ khảể̉ sinh tổng hợộ̣p KS mạộ̣nh - Chiếó́t kháó́ng sinh từờ̀ dịch lên men dung mơi ethylacetat pH cho hiệộ̣u quảể̉ tớó́t nhất, sửể̉ dụng hệộ̣ dung môi butylacetat: ethanol: triethylamin (1: 2: 1) vàờ̀ hệộ̣ ethylacetat: methanol (10: 1) đểể̉ táó́ch cáó́c thàờ̀nh phầờ̀n kháó́ng sinh Kháng sinh Streptomyces 119.112sinh tổng hợộ̣p cóó́ mợộ̣t sớó́ đặc điểể̉m sau: + Làờ̀ kháó́ng sinh cóó́ phổ táó́c dụng rợộ̣ng, cảể̉ vi khuẩn Gram(+) vàờ̀ vi khuẩn Gram(-) + + Tương đớó́i bềờ̀n vớó́i nhiệộ̣t đợộ̣ Táó́ch riêng đượộ̣c thàờ̀nh phầờ̀n kháó́ng sinh thơ thu đượộ̣c: hỡẫ̃n hợộ̣p kháó́ng sinh, kháng sinh 1(KS1) là KS chính, kháng sinh (KS2) + Kháó́ng sinh thơ thu đượộ̣c cóó́ thàờ̀nh phầờ̀n + Hiệộ̣u suất tinh chếó́ kháó́ng sinh: - HKS1%=20,20% - HKS2%=11,17% + Kháó́ng sinh tinh khiếó́t cóó́ nhiệộ̣t đợộ̣ nóó́ng chảể̉y 216ºC, hấp thụ áó́nh sáó́ng tửể̉ ngoạộ̣i, hồng ngoạộ̣i, phổ khớó́i Cấu trúó́c phân tửể̉ kháó́ng sinh đượộ̣c dự đoáó́n cóó́ thểể̉ cóó́ chứó́a nhân thơm, nớó́i đơi liên hợộ̣p, dị tớó́, cáó́c nhóó́m chứó́c cóó́ kháó́ng sinh làờ̀: ester, alkyl clorid, alkyl flourid, amin, nitro, … 45 ĐỀ XUẤT Từờ̀ nhữẫ̃ng kếó́t quảể̉ đaẫ̃ thu đượộ̣c, chúó́ng tơi đềờ̀ xuất tiếó́p tục pháó́t triểể̉n đềờ̀ tàờ̀i nghiên cứó́u sâu theo cáó́c hướó́ng sau: - Tiếó́n hàờ̀nh giảể̉i trìờ̀nh tự gen đểể̉ xáó́c định xáó́c tên khoa họộ̣c Streptomyces 119.112 - Tiếó́p tục đợộ̣t biếó́n chủng Streptomyces 119.112(bằng UV, hóó́a chất, phương pháó́p đợộ̣t biếó́n bậộ̣c thang, …) đểể̉ tạộ̣o chủng cóó́ khảể̉ siêu sinh tổng hợộ̣p kháng sinh - Khảể̉o sáó́t tìờ̀m điềờ̀u kiệộ̣n lên men tớó́i ưu Nghiên cứó́u cáó́c phương pháó́p chiếó́t, táó́ch đểể̉ tạộ̣o kháó́ng sinh vớó́i đợộ̣ tinh khiếó́t vàờ̀ hiệộ̣u suất cao Chiếó́t táó́ch đểể̉ thu lấy cáó́c kháó́ng sinh phụ vàờ̀ nghiên cứó́u sâu - Tiếó́n hàờ̀nh phổ khớó́i, cợộ̣ng hưởng từờ̀ hạộ̣t nhân, xáó́c định cáó́c tính chất lýó́, hóó́a, … đểể̉ xáó́c định xáó́c cấu trúó́c hóó́a họộ̣c kháó́ng sinh Streptomyces 119.112sinh tổng TÀỜ̀I LIỆU THAM KHẢO Tiếng ViệỌ̣t: Trầờ̀n Tửể̉ An (2007), Hóa phân tích, NXB Y họộ̣c, tậộ̣p Trầờ̀n Thị Hồng Anh (1993), Quang phổ hấp thụ tử ngoại-khả kiến ứng dụng định lượng kháng sinh, NXB Khoa họộ̣c vàờ̀ kỹẫ̃ tḥộ̣t Bợộ̣ Y Tếó́ (2009), Dược điển Việt Nam IV, tr PL129-PL131 Nguyễn Văn Cáó́ch, Cơng nghệ lên men kháng sinh, NXB Khoa họộ̣c vàờ̀ kỹẫ̃ thuậộ̣t Lê Huy Chính (2007), Vi sinh vật y học, NXB Y họộ̣c, tr 25-57 Nguyễn Lân Dũẫ̃ng (2001), Vi sinh vật học, NXB Giáó́o dục, tr 3967 Trầờ̀n Đứó́c Hậộ̣u (2006), Hóa dược, NXB Y họộ̣c, tậộ̣p Võ Thị Bạộ̣ch Huệộ̣ (2008) ,Hóa phân tích, NXB y họộ̣c, tậộ̣p 2, tr 58-122, tr 205-225 Từờ̀ Minh Koóó́ng (2006), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm II, NXB Y họộ̣c, tậộ̣p 10 Đoàờ̀n Thị Nguyệộ̣n (2009), Vi sinh vật, NXB Giáó́o dục Việộ̣t Nam, tr 737 11 Lương Đứó́c Phẩm (1999), Cơng nghệ vi sinh vật, NXB Nông nghiệộ̣p 12 Trịnh Mai Phương, Góp phần nâng cao sinh tổng hợp khángsinh nhờStreptomyces 119.112, khóó́a ḷộ̣n tớó́t nghiệộ̣p Dượộ̣c sĩ khóó́a 2006-2012, Trườờ̀ng ĐH Dượộ̣c Hàờ̀ Nộộ̣i 13 Nguyễn Văn Thạộ̣ch (2009), Cơng nghệ sinh học dược, NXB Giáó́o dục Việộ̣t Nam, tr 35-57 14 Trầờ̀n Thị Thanh (2001), Công nghệ vi sinh, NXB Giáó́o dục, tr 4052 15 Cao Văn Thu (2008), Vi sinh vật học, NXB Y họộ̣c, Hàờ̀ Nợộ̣i 16 Mai Tất Tớó́, Vũẫ̃ Thị Trâm (2007), Dược lý học, NXB Y họộ̣c, tậộ̣p Tiếng Anh: 17 Chen XS, Mao ZG (2013), ‘‘Comparison of Glucose and Glycerol as Carbon Sources for ε-Poly-L-Lysine Production by Streptomyces sp M-Z18’’ The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University 18 Meng L, Yang SH, Palaniyandi SA, Lee SK, Lee IA, Kim TJ, Suh JW (2013), ‘‘Phosphoprotein affinity purification identifies proteins involved in Sadenosyl-L-methionine-induced enhancement of antibiotic production in Streptomyces coelicolor’’, Division of Bioscience and Bioinformatics, College of Natural Science, Myongji University, Gyeonggi-Do, Korea 19 Laureti L, Song L, Huang S, Corre C, Leblond P, Challis GL, Aigle B (2013), ‘‘Identification of a bioactive 51-membered macrolide complex by activation of a silent polyketide synthase in Streptomyces ambofaciens’’Unité Mixte de Recherche1128 Génétique et Microbiologie, Université Henri Poincaré, France PHỤ LỤC Hình PL1: Xạ khuẩn giai đoạn phát triển 5-6 ngày Hình PL2: Kết đột biến ánh sáng UV Hình PL3: Thử HTKS phương pháp khối thạch(P mirabilis) Hình PL4: Thử HTKS phương pháp giếng thạch(B subtilis) Hình PL5: Thử HTKS phương pháp khoanh giấy lọc (B subtilis) Hình PL6: Kết chọn MT lên men chìm Hình PL7: Kết chọn chủng lên men Hình PL8: Kết sắc ký lớỐ́p mỏng sau chạy cột lần Hình PL9: Kết chạy sắc ký cột Hình PL10: Kết đo phổ UV kháng sinh Ten may: GX-PerkinElmer-USA Resolution: 4cm-1 Date: 3/13/2013 70 3265 65 60 55 50 %T 45 40 35 30 25 20 15 10 0.0 4000.0 Hình PL11: Kết đo phổ IR kháng sinh Hình PL12: Kết đo phổ khối ... hiệộ̣n tậộ̣p trung nghiên cứó́u vàờ̀o chi xạộ̣ khuẩn nàờ̀y Chính vìờ̀ vậộ̣y, em chọộ̣n đềờ̀ tàờ̀i: ? ?Góp phần nghiên cứu lên men tổng hợọ̣p kháng sinh từ Streptomyces 119. 112” làờ̀m khóó́a... trình lên men cao • Nhược điểm: Đầu tư trang thiết bi kỹ tḥt ban đầu lớn • Cáó́c phương pháó́p lên men chìờ̀m: Lên men mẻ, lên men cóó́ bổ sung, lên men báó́n liên tục, lên men liên... trườờ̀ng thạộ̣ch nghiêng thích hợộ̣p, cất ớó́ng thạộ̣ch nghiêng tủ lạộ̣nh 2°C vàờ̀ định kỳ 3-6 tháó́ng cấy lạộ̣i lầờ̀n [9], [13] 1.5 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh Lên men làờ̀ quáó́