Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
Chủ đề: High-throughput analysis of 19 endogenous androgenic steroids by ultra-performance convergence chromatography tandem mass spectrometry Nôi dung: Giới thiệu Thực nghiệm Kết Bàn luận Kết luận Giới thiệu Các rối loạn nội tiết : - Tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh (CAH) Hormon Steroid đóng vai trị quan trọng điều hịa số q trình sinh lý thể - Hội chứng buồng trứng đa nang (PCOS) - Bệnh aldosteron nguyên phát ung thư phụ thuộc hormone tuyến tiền liệt ung thư vú có liên quan đến việc rối loạn sản xuất hormone steroid Giới thiệu Tất hormone steroid có nguồn gốc từ cholesterol có cấu trúc vịng cyclopentanoperhydrophenanthrene Thay đổi cấu trúc khung steroid vòng vị trí liên kết đơi, hay vị trí nhóm chức hydroxyl keto > thay đổi chức sinh lý hormone steroid Những khác biệt cấu trúc, riêng biệt cho hoocmon steroid, làm phức tạp đáng kể phân tách phân tử có cấu trúc tương tự, bao gồm đồng vị Giới thiệu Giới thiệu Giới thiệu Phương pháp sắc ký khí-khối phổ (GC- MS) cho độ phân giải độ nhạy tốt, chuẩn bị mẫu phức tạp: gồm thủy phân dẫn xuất hóa, không dùng cho xét nghiệm thông lượng cao Mặc dù sắc ký lỏng song song khối phổ (LCR - MS / MS) không đạt độ phân giải GC-MS, Nhưng hầu hết trường hợp, LC-MS / MS khơng u cầu dẫn xuất hóa mẫu thiết bị sắc ký lỏng siêu hiệu (UHPLC) có thời gian chạy giảm đáng kể so vớ LC truyền thống Giới thiệu UPCC kết hợp LC GC, CO2 siêu tới hạn làm pha động giúp đơn giản hóa chuẩn bị mẫu, giảm thời gian sắc ký CO2 siêu tới hạn hỗn hịa với dung mơi hữu có độ phân cực từ hexan (0.009) đến methanol (0.762) -> tăng khả phân tích Ứng dụng phương pháp sắc ký hội tụ siêu hiệu gắn khối phổ hai lần UPCC-MS/MS có độ nhạy cao, giúp phân tách định lượng chất phân tích phức tạp, đặc biệt chất chuyển hóa steroid Thực Nghiệm Thực Nghiệm Hệ thống sắc ký hội tụ siêu hiệu UPCC PDA-MS Thực Nghiệm 2.6 So sánh với tách định lượng bằng UPLC-MS/MS Thông số chạy UPLC: UPLC ACQUITY (Waters, Mil- ford, USA) Pha đông (A) 0,1% axit formic (B) 100% methanol Gradient linear (5 phút) 55% A → 25% A 45% B → 75% B Tốc độ dòng 0,6 mL/min Nhiệt độ cột 50oC Thể tích tiêm 20,0 µ L Thông số đầu MS: chạy UPCC (đã trình bày trên), thay đổi điên áp từ 3.8 kV → 4kV Thực Nghiệm So sánh với tách định lượng bằng UPLC-MS/MS Sử dụng UPLC high strength (HSS) cột T3 (2,1 mm 50 mm, 1,8 µm) (Waters, Mil- ford, USA) với UPLC ACQUITY (Waters, Mil- ford, USA) đã mô tả Các pha động : (A) 0,1% axit formic (B) 100% methanol Gradient tuyến tính phút từ 55% A đến 75% B sử dụng để tách steroid C19 Tốc độ dòng 0,6 mL/ nhiệt độ cột 50 ◦ C Thể tích tiêm 20,0 µ L Phân tích bằng ky thuật ghi phổ (multiple reaction monitoring MRM) sử dụng ion hóa tia điện dương (ESI+) Các thiết lập sau đã sử dụng: điện áp 4,0 kV, nguồn nhiệt 150 ◦ C, nhiệt độ hóa 500 ◦ C, khí hóa 1000 L/ h cone gas 150 L/h Thu thập phân tích liệu bằng MassLynx 4,1 (Waters Corporation) Kết 3.1 Tách bằng UPCC UPCC -MS / MS xác định 19 định lượng 15 steroid C19 , bao gồm tất chất chuyển hóa đường 11OHA4, Sử dụng cột BEH 2-EP kích thước hạt 1,7 micro m phút Tốc độ dòng chảy 2,0 mL/min ABPR 2000 psi 3.1 Tách bằng UPCC 11Kepi AST 11KDHT 3α -adiol 11OHAST không giải Định lượng bằng cách sử dụng MRMs dựa phân cực (Hình 3a), trật tự rửa giải hỗn hợp (Hình 3b) Rửa giải 11KA4 (1), 11KT (2), 11OHA4 (3), 11OHT (4), A4 (5) and T (6) by (a) UPLC–MS/MS (b) UPC2-MS/MS 3.1 Tách bằng UPCC Thứ tự rửa giải thu phương pháp UPCC 3.2 Khối phổ Dung dịch rửa giải UPC2 đảm bảo ion hóa steroid ESI Tốc độ dòng chảy tối ưu 0,2 mL/min Methanol chứa 1% acid formic cung cấp hiệu ion hóa - Ion thu dạng ion dương bị proton hóa dạng [M+H]+ - Ion thu nhiều cho AST, epiAST, 11OHAST 11OHepiAST [M−H2O+H]+ 3.3 Hiệu suất xác nhận 3.3.1 Phạm vi hiệu chuẩn 15 steroids có sẵn LOQs dao động từ 0,01 đến 10 ng/mL Độ nhạy tăng gấp 50 lần steroid dễ bị ion hóa, T A4, Cải tiến đáng kể LOQ cho steroid khó ion hóa , chẳng hạn DHT (5 lần) Mặc dù khối lượng tiêm thấp 10 lần Phương trình bậc hai phù hợp với giá trị r2 chấp nhận (>0,9906) cho đường cong tiêu chuẩn bao gồm tiêu chuẩn 250 ng/mL, Tuy nhiên, độ bão hòa độ độ xác máy dị lớn 20% nồng độ tiêu chuẩn này, loại trừ khỏi phạm vi hiệu chuẩn Do đó, giới hạn định lượng (ULOQ) 100 ng/mL 3.3 Hiệu suất xác nhận 3.3.2 Độ độ xác Độ độ xác xác định mức tối thiểu ba nồng độ phạm vi hiệu chuẩn steroid thể Bảng 2, tương ứng % RSD chấp nhận thu cho tất nồng độ cho độ độ xác, xác định ba ngày (Bảng 3) [20] 3.3 Hiệu suất xác nhận 3.3.2 Độ độ xác % RSD chấp nhận thu cho tất nồng độ cho độ độ xác, xác định ba ngày (Bảng 3) [20] 3.3 Hiệu suất xác nhận 3.3.2 Độ độ xác Độ tái lập phịng thí nghiệm thể Bảng bổ sung 3.3 Hiệu suất xác nhận 3.3.3 Phục hồi, hiệu matrix hiệu phục hồi Bàn luận Bàn luận Độ nhạy phương pháp vượt trội (5 -50 lần) cho phương thức (khơng có chất dẫn xuất). Độ nhạy tăng lên kết hợp tốc độ dòng chảy tối ưu đạt bằng cách - thiết lập bơm - giảm chất gây nhiễm trung tính gây nhiễu bằng hướng dẫn ion StepWave [24] Hạn chế cho tăng độ nhạy phạm vi tuyến tính giảm bão hòa máy dò nồng độ cao hơn. Khắc phục bằng cách pha loãng mẫu nữa. Độ nhạy tăng cho phép nhà phân tích điều tra trao đổi chất steroid nuôi cấy tế bào nồng độ sinh lý lần đầu tiên. Ví dụ: chúng tơi đã đo lường trao đổi chất 10 nM 11KT T bằng dòng tế bào ung thư tuyến tiền liệt [18] Những thí nghiệm trước đã dựa vào việc sử dụng nồng độ chất siêu âm hạn chế độ nhạy Hơn nữa, tăng độ nhạy đạt bằng cách sử dụng thể tích tiêm µL, phương pháp MS / MS UPLC thông thường dựa vào thể tích tiêm -20 µL để đạt độ nhạy Tài liêu tham khảo PGS.TS Hoàng Thị Kim Huyền cộng (2006 ), Dược lâm sàng, (NXB Y Học Hà Nội), trang 207-209 Elzette Pretorius1, DonitaJ.Africander, MaréVlok2, MeghanS.Perkins, JonathanQuanson,KarlHeinzStorbeck, (2016), 11-Ketotestosterone and 11 Ketodihydrotestosterone in Castration Resistant Prostate Cancer: Potent Androgens Which Can No Longer BeIgnored ... phút), → tách C19 steroid - Tốc dịng: 2mL/phút Xevo TQ-S triple quadrupole mass spectrometer Thực Nghiệm 2.4 Thiết bị điều kiên sắc ký Định lượng (Xevo TQ-S triple quadrupole mass spectrometer)... gas 150 L/h Thu thập phân tích liệu bằng MassLynx 4,1 (Waters Corporation) Kết 3.1 Tách bằng UPCC UPCC -MS / MS xác định 19 định lượng 15 steroid C19 , bao gồm tất chất chuyển hóa đường 11OHA4, ... tách định lượng bằng UPLC-MS/MS Thiết bị Xevo TQ-S triple quadrupole mass? ? spectrometer (Waters, Milford, USA) UPLC high strength silica (HSS) T3 column (2.1 mm × 50 mm, 1.8 m) Thực Nghiệm