Đại cương vi sinh vật y học

Các vaccine chống virus, cũng như tất cả các loại vaccine, dưạ trên sự kích thích chủ động hệ thống miễn dịch bằng cách đưa vào trong cơ thể kháng nguyên của tác nhân nhiễm trùng đã được[r]

PHẦN I

ĐẠI CƯƠNG VI SINH Y HỌC ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

VÀ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT HỌC Mục tiêu học tập

1 Trình bày đối tượng nghiên cứu vi sinh vật học.

2 Trình bày lịch sử phát triển vi sinh vật học hướng giải bệnh nhiễm trùng hiện nay.

I ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU CỦA VI SINH VẬT HỌC

Vi sinh vật học (Microbiology) khoa học khảo sát hoạt động vi sinh vật (từ Hylạp micros nhỏ bé, bios sống logos khoa học)

Vi sinh vật sinh vật nhỏ bé mắt trần không thấy phát kính hiển vi

Muốn đo kích thước vi sinh vật, người ta sử dụng đơn vị sau: Micromet (m, micrometre) = 10-6m

Nanomet (nm, nanometre) = 10-9m

Angstrom = 10-10m

Vi sinh vật bao gồm vi khuẩn, nấm men, nấm mốc, tảo, nguyên sinh động vật virus Trước khám phá vi sinh vật người ta chia sinh vật làm hai giới: giới động vật giới thực vật Sau khám phá vi sinh vật người ta nhận thấy vi sinh vật kết hợp đặc tính thực vật động vật với tất tổ hợp có, việc phân loại sinh vật thành hai giới làm phát sinh số điều không hợp lý Ví dụ nấm men phân loại thực vật phần lớn khơng di động chúng có tính chất thực vật cho thấy liên hệ sinh tiến hóa đậm nét với nguyên sinh động vật

Năm 1866 nhà khoa học Đức E Haeckel đề nghị xếp vi sinh vật vào giới riêng, giới Nguyên sinh (Protista) Giới phân biệt với thực vật động vật tổ chức đơn giản chúng: dù đơn bào đa bào, tế bào chúng khơng biệt hóa thành mô

Năm 1969 nhà sinh thái học Mỹ R.H Whittaker đề xuất hệ thống phân loại năm giới: Đó giới Khởi sinh (Prokaryota hay Monera) bao gồm vi khuẩn vi khuẩn lam, giới Nguyên sinh (Protista), giới Nấm (Fungi), giới Thực vật (Plantae) giới Động vật (Animalia)

Theo kiến nghị nhà sinh vật học Trung Quốc Trần Thế Tương năm 1979 nhóm giới sinh vật nhân thật bao gồm giới Thực vật, giới Nấm giới Động vật, nhóm giới sinh vật nhân nguyên thuỷ bao gồm giới Vi khuẩn giới Vi khuẩn lam, cịn giới Virus thuộc nhóm giới sinh vật chưa có tế bào

Phần lớn vi sinh vật nằm giới: Cổ khuẩn, Vi khuẩn, Nguyên sinh Nấm hệ thống giới nói

Tế bào nhân thật có nhân chứa số đôi nhiễm sắc thể, màng nhân nối liền với lưới nội chất nguyên sinh Nguyên tương tế bào nhân thật có lưới nội chất nguyên sinh, không bào plastit tự chép Những plastit chứa ADN riêng nhân lên phân liệt Những plastit bao gồm ti lạp thể chứa hệ thống chuyên chở điện tử phosphoryl hóa lục lạp sinh vật quang hợp chứa lục diệp tố thành phần quang hợp khác Nguyên tương chất lipoprotein nằm bên màng tế bào Nhiều vi sinh vật tế bào nhân thật có vách tế bào tạo nên celluloza, chitin oxyt silic.Tế bào nhân thật di động nhờ lơng Những lơng gồm bó sợi nhỏ bao quanh sợi nhỏ trung tâm

Tế bào nhân nguyên thuỷ (Tế bào nhân sơ) có cấu trúc tế bào đơn giản Nhân gồm có nhiễm sắc thể không màng nhân, vách tế bào lại phức tạp Tế bào nhân ngun thuỷ khơng có plastit tự chép ti lạp thể lục lạp Enzyme cytochrom tìm thấy màng tế bào; thể quang hợp, sắc tố quang hợp tìm thấy phiến mỏng nằm màng tế bào Vi khuẩn thường tích tụ vật liệu trữ hình thức hạt nhỏ khơng hịa tan, dạng polyme, trung tính, trơ thẩm thấu Vật liệu cacbon biến đổi số vi khuẩn thành polyme polyaxit-- hydrobutyric vi khuẩn khác thành polyme glucoza tương tự glycogen gọi granuloza Những hạt nhỏ dự trữ sử dụng nguồn C lúc tổng hợp protein axit nucleic thực trở lại Một cách tương tự vài vi khuẩn oxy hóa sulfua biến đổi lượng thừa H2S mơi trường bên

ngoài thành hạt sulfua nội bào Nhiều vi khuẩn tích trữ phốt phát hữu thành hạt nhỏ polymemetaphosphate gọi volutin

Virus khác với tất thể có tế bào kể vi khuẩn Rickettsia Virion hay là hạt virus gồm phân tử ADN ARN nằm bên vỏ protein gọi capsid Vào bên tế bào vật chủ, axit nucleic virus sử dụng máy tổng hợp tế bào để hình thành axit nucleic thành phần khác virus Axit nucleic thành phần protein đặc hiệu kết hợp thành hạt virus xâm nhiễm hoàn chỉnh gọi virion Virion phóng thích vào mơi trường bên ngồi bắt đầu trình xâm nhiễm tế bào vật chủ

II SƠ LƯỢC LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT HỌC

1 Sự phát vi sinh vật

Sự phát vi sinh vật gắn liền với phát minh kính hiển vi Anton van Leeuwenhoek (1632 - 1723) người Hà Lan, người kỷ XVII nhìn thấy vi sinh vật nhờ kính hiển vi độ phóng đại 270 - 300 lần mà ông chế tạo (1676) Do hạn chế độ phóng đại độ phân giải kính hiển vi nghiên cứu hiển vi thể sống bị hạn chế đến đầu kỷ XIX kính hiển vi hồn chỉnh đời từ người sáng tạo hàng loạt loại kính hiển vi quang học khác nhiều kiện quan trọng phát

2 Sự trưởng thành vi sinh vật học

Trong kỷ XVII suốt kỷ XVIII vi sinh vật học trọng phần mơ tả, nhiên có số cơng trình xuất sắc Spallanzani sử dụng môi trường nuôi cấy khử khuẩn nhiệt, Edward Jenner phát minh vaccine đậu mùa, Zinke phát tác nhân bệnh dại nước bọt chó bị dại

Thế kỷ XIX cho thấy bước phát triển lớn vi sinh vật học nhờ công lao Louis Pasteur Robert Koch

L.Pasteur (1822 - 1895) hoàn chỉnh việc nghiên cứu vi sinh vật Vi sinh vật mơ tả xác mà cịn khảo sát đầy đủ tính chất sinh lý

- Chấm dứt tranh luận thuyết tự sinh thí nghiệm xuất sắc với bình cổ ngỗng

- Phát tác nhân lên men lên men rượu, lên men thối vi sinh vât: vi sinh vật phát triển tạo thành enzyme chịu trách nhiệm tượng lên men

- Xác định vai trò tác nhân gây bệnh vi sinh vật bệnh nhiễm trùng

- Khái quát hóa vấn đề vaccine tìm phương pháp điều chế số vaccine phịng bệnh vaccine bệnh than, vaccine bệnh tả gà phát minh vaccine dại

R.Koch (1843 - 1910) đóng góp lớn lao cho vi sinh vật học nhờ cơng trình:

- Phát triển kỹ thuật cố định nhuộm vi khuẩn - Sử dụng mơi trường đặc để phân lập vi khuẩn rịng - Nêu tiêu chuẩn xác định bệnh nhiễm trùng

- Khám phá vi khuẩn lao, vi khuẩn tả

Nhờ công lao L.Pasteur, R.Koch nhiều nhà bác học khác, phần lớn vi khuẩn gây bệnh người động vật khám phá đầu kỷ XX Lúc vi sinh học trở thành khoa học ứng dụng quan trọng lĩnh vực y học, nông nghiệp công nghiệp

Trong lâm sàng, khoa lây thành lập để tiếp nhận bệnh nhân nhiêm trùng, khoa ngoại sử dụng phương pháp phẩu thuật sát trùng, tiền đề phương pháp phẩu thuật vô trùng ngày

3 Những thành tựu đại

Trong thập kỷ gần từ khoa học ứng dụng, vi sinh vật học trở thành khoa học làm phát sinh ngành khoa học mới: sinh học phân tử phân tử với ngành khoa học khác tạo nên cách mạng khoa học kỹ thuật đại

Nhờ hiểu biết di truyền học đại mà mơ hình nghiên cứu E.coli, Watson Crick phát mẫu cấu trúc ADN chế chép bán bảo tồn làm sở cho hình thành sinh học phân tử phân tử Những phát kỳ diệu cấu mã di truyền cấu trúc khác tế bào sống sử dụng làm sở cho phát triển công nghiệp sinh học, ngành công nghiệp cho phép người can thiệp vào trình hình thành phát triển sinh vật để phục vụ lợi ích người

Gần kỹ thuật tổng hợp gen, tháo ghép gen làm cho công nghệ sinh học trở thành lực lượng sản xuất mũi nhọn kinh tế giới Trong lĩnh vực y học kỹ thuật có nhiều triển vọng giải bệnh di truyền, phòng chống bệnh nhiễm trùng, bệnh ung thư

III NHỮNG VẤN ĐỀ HIỆN NAY CỦA VI SINH VẬT Y HỌC

Trong y học, vi sinh vật nguyên bệnh nhiễm trùng Vì xét tầm quan trọng vi sinh vật y học phải đề cập tới tình hình bệnh nhiễm trùng

Từ ngàn xưa bệnh nhiễm trùng tai họa cho nhân loại Bệnh đậu mùa, bệnh dịch hạch, bệnh dịch tả giết chết hàng triệu người, tàn phá nhiều làng mạc, thành phố

Từ vi sinh vật học trưởng thành người có khả chế ngự bệnh nhiễm trùng Nhưng đường chế ngự để tiến tới xóa bỏ bệnh nhiễm trùng đường khó khăn lâu dài

thấy huyết liệu pháp có mặt hạn chế hữu hiệu bệnh nhiễm độc tố vi khuẩn bạch hầu, uốn ván, hoại thư sinh v.v

Thành tựu vang dội thứ hai công lao G.Domagk phát minh sulfonamit năm 1935 Nhưng vũ khí sulfonamit tỏ yếu khơng đủ khả điều trị phần lớn bệnh nhiễm trùng thường gặp

Năm 1940 Fleming, Florey Chain phát minh penicillin đưa vào điều trị mở đầu thời đại kháng sinh Trong suốt hai thập kỷ, nhiều kháng sinh hữu hiệu phát minh người ta chế ngự cách hữu hiệu bệnh nhiễm trùng Nhưng thời gian cho thấy bệnh nhiễm trùng lâu giải xong vi khuẩn kháng thuốc quan sát loài vi khuẩn May mắn kháng sinh hữu hiệu khám phá giữ không cho vi khuẩn kháng thuốc phát triển quy mô lớn không chế ngự Đầu thập kỷ 80, thực tế cho thấy vi khuẩn kháng thuốc xuất ngày nhiều kháng sinh hữu hiệu khám phá trở nên dần Trừ kháng sinh thuộc nhóm quinolon, kháng sinh gọi xắp xếp lại thay đổi cấu trúc phân tử kháng sinh khám phá từ trước kỹ thuật bán tổng hợp tổng hợp

Hiện nay, phần lớn bệnh nhiễm trùng chế ngự cách hữu hiệu, vụ dịch dập tắt nhanh chóng cần nghiên cứu nhiều để chế ngự vi khuẩn kháng thuốc tìm thuốc hữu hiệu để điều trị bệnh virus

Hướng giải bệnh nhiễm trùng sử dụng đồng thời ba biện pháp sau:

- Thực chiến lược kháng sinh để hạn chế vi khuẩn kháng thuốc

- Tiếp tục tìm kiếm kháng sinh hữu hiệu để điều trị bệnh vi khuẩn phát minh thuốc kháng virus hữu hiệu

HÌNH THỂ , CẤU TẠO VÀ SINH LÝ CỦA VI KHUẨN

Mục tiêu học tập

1 Mô tả loại hình thể vi khuẩn 2 Mơ tả cấu trúc tế bào vi khuẩn

3 Trình bày nét sinh lý vi khuẩn

I HÌNH THỂ CỦA VI KHUẨN

Vi khuẩn thơng thường có hình thể định vách tế bào xác định Một số không vách ( hình thức L) Mycoplasma khơng có hình thể định Đường kính trung bình vi khuẩn khỏang 1m Những đại diện nhỏ Mycoplasma có đường kính khỏang 0,1m đại diện lớn có kích thước hàng chục m Spirilium volutans 20m. Các vi khuẩn gây bệnh có kích thước từ 0,2m đến 10m

Về hình thể người ta chia vi khuẩn thành cầu khuẩn, trực khuẩn vi khuẩn hình xoắn

1 Cầu khuẩn :

Là vi khuẩn hình cầu, hình trứng hay hình hạt cà phê 1.1 Micrococci (Đơn cầu)

Đây cầu khuẩn xếp hàng không đều, tạp khuẩn tìm thấy khơng khí nước

1.2 Diplococci (Song cầu)

Là cầu khuẩn xếp đôi phân chia mặt phẳng Một số gây bệnh cho người phế cầu, lậu cầu, cầu khuẩn màng não

1.3 Stretococci (Liên cầu):

Là cầu khuẩn xếp thành chuỗi ngắn dài Một số lọai gây bệnh cho người như Streptococcus pyogenes thuộc nhóm A Lancefield.

1.4 Tetracocci (Tứ cầu)

Các cầu khuẩn hợp thành 4, phân chia theo hai mặt phẳng, gây bệnh 1.5 Sarcina (Bát cầu)

Các cầu khuẩn xếp thành 8-16 con, phân chia theo ba mặt phẳng, thường tìm thấy khơng khí

1.6 Staphylococci (Tụ cầu)

Các cầu khuẩn hợp thành đám chùm nho, phân chia theo mặt phẳng, số loại gây bệnh cho người thường phát triển nhanh chóng tính đề kháng với nhiều kháng sinh

2 Trực khuẩn

Là vi khuẩn có hình que thẳng 2.1.Bacteria

Là trực khuẩn hiếu khí, khơng tạo nha bào vi khuẩn đường mật, vi khuẩn bạch cầu, vi khuẩn lao

2.2 Bacilli

Là trực khuẩn hiếu khí tuyệt đối tạo nha bào ví dụ trực khuẩn bệnh than 2.3.Clostridia

Là trực khuẩn kỵ khí Gram dương tạo nha bào, ví dụ trực khuẩn uốn ván, trực khuẩn ngộ độc thịt

3 Vi khuẩn hình xoắn

3.1 Phẩy khuẩn

3.2.Xoắn khuẩn

Có nhiều vịng xoắn, ví dụ xoắn khuẩn giang mai, Leptospira, Borrelia II CẤU TẠO CỦA TẾ BÀO VI KHUẨN

Khác với thành viên protista lớp có nhân thật tế bào động vật thực vật, vi khuẩn có tế bào nhân sơ, nhân có nhiễm sắc thể, khơng có màng nhân, khơng có ti lạp thể, khơng có máy phân bào tế bào lại phức tạp

1 Vách tế bào

Sự diện vách tế bào vi khuẩn phát hiện tuợng ly tương, cách nhuộm phân lập trực tiếp

Tác dụng học siêu âm phối hợp với ly tâm cho phép thu hoạch vách tế bào ròng, tách rời khỏi nguyên tương

1.1.Vách tế bào vi khuẩn gram dương

Kính hiển vi điện tử cho thấy vách tế bào dày từ 15 đến 50 nm Thành phần chủ yếu mucopeptit gọi murein, chất trùng hợp mà đơn vị hoá học đường amin N-acetyl glucosamin axít N-acetyl muramic chuỗi peptit ngắn chứa alanin, axít glutamic axít diaminopimelic lysin Ngoài vách tế bào số vi khuẩn gram dương cịn chứa axít teichoic Ở vài lọai vi khuẩn, axít teichoic chiếm tới 30% trọng lượng khô vách tế bào

1.2 Vách tế bào vi khuẩn Gram âm gồm ba lớp

Lớp mucopeptit mỏng khỏang 10nm hai lớp lipoprotein lipopolysaccharide bên ngoài, lớp lipoprotein chứa tất axít amin thơng thường Khơng có axít teichoic, vách tế bào vi khuẩn gram âm chứa lượng lipit đáng kể, khoảng 20 % trọng lượng khô vách tế bào

1.3.Chức vách tế bào

Vách tế bào vi khuẩn có nhiều chức năng:

- Duy trì hình thể vi khuẩn: Vách cứng tạo nên khung, làm cho vi khuẩn có hình thể định

- Quyết định tính bắt màu gram vi khuẩn: Sự bắt màu gram khác vi khuẩn gram dương gram âm tính thẩm thấu khác cồn hai nhóm vi khuẩn Nếu dùng lysozym biến đổi vi khuẩn gram dương thành protoplast khơng có vách protoplast lại bắt màu gram âm

- Tạo nên kháng nguyên thân O vi khuẩn đường ruột: Để điều chế kháng nguyên vi khuẩn đường ruột xử lý vi khuẩn không di động nhiệt cồn

- Tạo nên nội độc tố vi khuẩn đường ruột Nội độc tố giải tỏa lúc vi khuẩn bị li giải Ở vi khuẩn đường ruột, nội độc tố phức hợp lipopoly-saccarit dẫn xuất từ vách tế bào

2 Màng nguyên tương

Là màng bán thấm dày khoảng 10nm nằm sát vách tế bào Người ta chứng minh diện tượng ly tương nhuộm với xanh Victoria 4R Nó chứa 60-70% lipit, 20-30% protein lượng nhỏ hydrat cacbon Màng nguyên tương có chức rào cản thẩm thấu tế bào, ngăn cản không cho nhiều phẩm vật vào bên tế bào lại xúc tác việc chuyên chở họat động nhiều phẩm vật khác vào bên tế bào Hơn màng tế bào chứa nhiều hệ thống enzyme có chức giống ti lạp thể động vật thực vật Màng nguyên tương cho thấy chỗ lõm vào gọi mạc thể Ở vi khuẩn Gram dương mạc thể phát triển cho thấy hình ảnh nhiều đồng tâm Ở vi khuẩn Gram âm mạc thể vết nhăn đơn giản

3 Nguyên tương

nồng độ cao, hợp chát có trọng lượng phân tử thấp Nguyên tương chứa dày đặc hạt hình cầu đường kính 18nm gọi ribơsơm Ngồi cịn tìm thấy hạt dự trữ glycogen, granulosa polymetaphotphat

4 Nhân tế bào

Có thể thấy với kính hiển vi ánh sáng sau nhuộm soi trực tiếp kính hiển vi pha tương phản Nhân hình cầu, hình que, hình tạ hình chữ V Khảo sát kính hiển vi điện tử nhân khơng có màng nhân máy phân bào Nó sợi DNA trọng lượng phân tử 3x109 dallon chứa nhiễm sắc thể dài khoảng 1mm không

xoắn Nhân nối liền đầu với thể mạc Sự nối liền giữ vai trò chủ yếu tách rời nhiễm sắc thể sau sợi nhiễm sắc thể mẹ tách đôi Trong phân chia nhân hai mạc thể qua chổ nối liền với màng nguyên tương di chuyển theo hướng đối nghịch theo hai nhóm nối liền với chúng Như màng nguyên tương tự động máy thô sơ gián phân với mạc thể đảm nhận vai trị thai vơ sắc

5 Lơng vi khuẩn

Lông chịu trách nhiệm tính di động vi khuẩn Người ta quan sát di động vi khuẩn kính hiển vi nhìn giọt treo đặt giọt vi khuẩn lam kính phủ kính mỏng Lơng dài 3-12 m hình sợi gợn sóng, mảnh 10- 20nm ) nên phải nhuộm với axít tannic đê tạo thành lớp kết tủa làm dày lông dễ phát Lông phát xuất từ thể đáy bên màng ngun tương có chuyển động xoay trịn Bản chất protein tạo nên tập hợp đơn vị phụ gọi flagellin tạo thành cấu trúc hình trụ rỗng Cách thức mọc lơng đặc tính di truyền Ở số loại nhiều lơng mọc quanh thân, số lọai lông mọc cực số loại khác chùm lông cực Nếu lông bị làm học lơng tạo thành nhanh chóng Lơng đóng vai trị kháng ngun kháng ngun H vi khuẩn đường ruột

6 Pili

Là phụ hình sợi, mềm mại lơng, mảnh nhiều có xu hướng thẳng đường kính 2-3 nm dài từ 0,3-1nm, tìm thấy từ đến trăm mặt vi khuẩn, chất protein Pili phát xuất màng nguyên tương xuyên qua vách tế bào Pili tìm thấy vi khuẩn gram âm tìm thấy số vi khuẩn gram dương Pili F có nhiệm vụ tiếp hợp Những pili khác giúp cho vi khuẩn bám vào niêm mạc bề mặt khác tế bào

7 Vỏ vi khuẩn

Vỏ cấu trúc nhầy bọc quanh vách tế bào số vi khuẩn, thường polysaccharide, có vỏ B.anthracis polypeptide acid D-glutamic Vỏ phát dễ dàng huyền dịch mực tàu, vùng sáng môi trường mờ đục tế bào vi khuẩn trơng rõ Cũng phát phản ứng phình vỏ kỹ thuật nhuộm đặc biệt Sự đột biến tạo thành vỏ dể nhận biết tế bào có vỏ tạo nên khuẩn lạc bóng láng nhầy M tế bào khơng vỏ tạo nên khuẩn lạc xù xì R Nhiệm vụ biết vỏ bảo vệ vi khuẩn chống thực bào chống virut muốn gắn vào vách tế bào

Những thành viên Bacillus, Clostridium Sporosarcina tạo thành nội nha bào ảnh hưởng mơi trường bên ngồi không thuận lợi, tế bào làm phát sinh nha bào Nha bào nằm giữa, đầu nút gần đầu nút tùy theo loài, vách nha bào chứa thành phần mucopeptide axít dipicolinic Sự dề kháng nha bào với hóa chất độc tính khơng thẩm thấu vách nha bào, đề kháng với nhiệt liên hệ đến trạng thái nước cao Vì chịu đựng với điều kiện khơng thụân lợi bên ngồi nha bào góp phần quan trọng khả lây bệnh trực khuẩn hiếu khí tạo nha bào trực khuẩn than trực khuẩn kỵ khí tạo nha bào Clostridia, trực khuẩn uốn ván, hoại thư, sinh hơi, ngộ độc thịt

III SINH LÝ VI KHUẨN

Như sinh vật khác vi khuẩn dinh dưỡng, chuyển hoa phát triển

1 Sự dinh dưỡng

Để phát triển vi khuẩn địi hỏi mơi trường ni cấy chứa đầy đủ yếu tố dinh dưỡng bao gồm hợp chất cần thiết để cung cấp lượng hợp chất dùng làm nguyên liệu để tổng hợp vật liệu tế bào Về nguyên liệu tổng hợp, vi khuẩn đòi hỏi nhu cầu muối khoáng PO43-, K+, Mg2+ với lượng đáng kể, số

ion ( nguyên tố vi lượng ) cần nồng độ thấp Fe2+, Zn2+, Mo2+, Ca2+, ion

này thường tìm thấy nước muối khống không tinh khiết Nguồn C thức ăn lượng cung cấp Nguồn N thơng thưịng protein muối amoni

Phần lớn vi khuẩn cung cấp đầy đủ yếu tố có khả tổng hợp chất cấu tạo tế bào Nhưng số vi khuẩn khả tổng hợp vài hợp chất đòi hỏi đưọc cung cấp mơi trường ni cấy Đó yếu tố phát triển; chúng chia thành hai loại, loại cần cung cấp lượng nhỏ đảm nhận chức vụ xúc tác thành phần enzyme ví dụ vitamin B, loại cần cung cấp lượng lớn dùng làm nguyên liệu cấu tạo tế bào axit amin, purin, pyrimidin

Ngoài điều kiện vật lý nhiệt độ pH, áp suất oxy ảnh hưởng đến phát triển cân điều chỉnh thích hợp

2 Sự chuyển hóa

Bao gồm tất phản ứng hóa học xảy tế bào sống Nhờ phản ứng lượng chiết từ môi trường sử dụng cho sinh tổng hợp phát triển Trong chuyển hóa quan trọng oxy hóa sinh học

2.1 Sự oxy hóa sinh học

Sự oxy hóa định nghĩa loại bỏ điện tử từ chất kèm theo loại bỏ ion hydrô tức loại bỏ ngun tử hydrơ Vì oxy hóa xem vận chuyển nguyên tử hydrơ Cơ chất bị oxy hóa gọi chất cho hydrô phẩm vật bị khử gọi chất nhận hydro Phần lớn hợp chất hữu ion hydrô loại bỏ điện tử Điện tử trạng thái tự dung dịch loại bỏ khỏi chất chất thích hợp để nhận Sự vận chuyển điện tử cốt lõi oxy hóa khử

Tùy theo chất chất nhận hydro cuối người ta chia oxy hóa sinh học thành ba hình thức : Hơ hấp hiếu khí, hơ hấp kỵ khí lên men Chất nhận hydrô cuối oxy phân tử (O2) hơ hấp hiếu khí, hợp chất vơ (nitrat, sulfat, cacbonat )

trong hô hấp kỵ khí, hợp chất hữu lên men Về nhu cầu oxy người ta chia thành :

- Vi khuẩn hiếu khí bắt buộc vi khuẩn lao vài trực khuẩn tạo nha bào, vi khuẩn đói hỏi oxy thiếu khả lên men

- Vi khuẩn tùy ý nấm men, vi khuẩn đường ruột Những vi khuẩn sống khơng có oxy đổi thành chuyển hóa hơ hấp lúc có oxy

2.2 Sự hơ hấp hiếu khí

Chất nhận hydrơ cuối oxy phân tử Cơ chất thông thường đường axít béo, axít amin Điện tử chuyển từ chất cho hydrô đến chất nhận hydrô qua nhiều bước Điện tử lấy từ chất cho hydro chuyển đến coenzyme thứ A, A bị khử thành AH2 Một enzyme khác lại xúc tác chuyển

điện tử từ AH2 đến coenzyme thứ hai B AH2 oxy hóa trở lại thành A B

trở nên trở thành BH Quá trình tiếp diễn qua nhiều bước tạo nên dây chuyền hô hấp điện tử từ chât cho hydrơ đến oxy

Hình 1: minh hoạ dây chuyền điện tử

Kết cuối hình thành sản phẩm oxy hóa, sản phẩm khử lượng Năng lượng phát sinh dự trữ dây nối sẵn lượng tỏa thành nhiệt

2.3 Sự hơ hấp kỵ khí

Cơ chất hợp chất hữu chất vơ Chất nhận điện tử khơng phải oxy khơng khí mà nitrat, sulfat, cacbonat

2.4 Sự lên men

Cơ chất hợp chất hữu chât nhân điện tử hợp chất hữu Ở đây, dây chuyền điện tử thơng thường có NAD chất mang điện tử trung gian

Hình 2: Sự chuyển điện tử lên men

So với hô hấp, lên men hiệu nhiều, cung cấp ATP 19 lần mol glucoza chuyển hóa Một vi khuẩn phát triển với lượng giới hạn glucoza cho thấy hiệu suất phát triển (trọng lượng khô vi khuẩn / trọng lượng chất chuyển hóa) lớn điều kiện hiếu khí so với điều kiện kỵ khí

3 Sự phát triển vi khuẩn

Tế bào nhân lên phát triển Ở vi khuẩn đơn bào, phát triển làm gia tăng số lượng vi khuẩn sản phẩm cấy Vi khuẩn nhân lên phân liệt Một hệ định nghĩa tăng đôi tế bào Thời gian hệ khỏan thời gian cần thiết dể tăng đôi số tế bào Thời gian hệ thay đổi tùy lọai vi khuẩn, 20 phút E.coli, 20 - 24 vi khuẩn lao

Vì hai tế bào phát triển tốc độ tế bào mẹ nên số tế bào ruột sản phẩm cấy tăng lên với thời gian cấp số nhân 20, 21, 22, 23 Nghĩa phát

triển lũy thừa

Tốc độ phát triển sản phẩm cấy thời gian xác định tỷ lệ với số tế bào diện thời gian Sự liên hệ biểu thị dạng phương trình sau

dN

= kN (1) dT

Phân tích phương trình ta có :

N = N0 e kt (2)

Trong N0 số tế bào thời gian N số tế bào thời gian t sau Trong

phương trình (2), k số phát triển : Giải phương trình theo k ta có : Ln N - Ln N0

k = (3) t

Chuyển sang logarit thập phân

log N - log N0

k = 2,302

t2 - t1

Như k biểu thị tốc độ logarit tự nhiên số tế bào tăng lên với thời gian xác định đồ thị

Hình Tốc độ logarit tự nhiên số tế bào tăng lên với thời gian. 3.2 Đường biểu diễn phát triển :

Cấy vào môi trường lỏng vi khuẩn lấy từ sản phẩm cấy trước phát triển đên bão hòa, xác định số tế bào 1ml biểu diển logarit nồng độ tế bào theo thời gian thu đường biểu diễn phát triển

Đường biểu diển gồm pha:

Hình Đường biểu diễn phát triển

A :Pha tiềm ẩn B: pha lũy thừa C: pha dừng D: pha chết

- Pha tiềm ẩn: Biểu thị giai đọan tế bào bắt đầu thích nghi với mơi trường Enzyme chất chuyển hóa trung gian đưọc tạo thành tích lũy đạt đến nồng độ mà phát triển bắt đầu trở lại

- Pha lũy thừa: Trong pha tốc độ phát triển không đổi Tất vi khuẩn điều nhân lên với tốt độ không đổi kích thước trung bình tế bào không đổi

Hiện tượng tiếp tục trì hai kiện sau xảy Một hay nhiều thức ăn môi trường bị thiếu hụt sản phẩm chuyển hóa độc tích tụ nhiều Đối với vi khuẩn hiếu khí thức ăn trở nên giới hạn oxy Lúc nồng độ tế bào khoảng 107/ml trường hợp vi khuẩn hiếu khí, tốc độ vi khuẩn giảm xuống oxy không được

cho vào môi trường cách khuấy bơm khơng khí Lúc nồng độ tế bào đạt đến 4-5 x 10 9/ml tốc độ khuếch tán oxy thoả mãn nhu cầu mơi trường thống

khí phát triển giảm tốc độ

- Pha dừng: giai đoạn thiếu hụt thức ăn tích lũy vật phẩm độc làm cho số lượng tế bào dừng lại hoàn toàn Các vi khuẩn sinh sản dần phát triển khối lượng giảm dần, có số tế bào chết bù lại nhờ tạo thành số tế bào

DI TRUYỀN VI KHUẨN Mục tiêu học tập

1 Trình bày chế vận chuyển di truyền vi khuẩn. 2 Trình bày chế di truyền tính kháng thuốc vi khuẩn.

Di truyền trì đặc điểm qua nhiều hệ Cơ sở vật chất di truyền nhiễm sắc thể Nhiễm sắc thể vi khuẩn ví dụ E.coli gồm 5x106 đôi nucleotide

chia thành nhiều đoạn gọi gen, gen định tổng hợp protein đặc hiệu Những protein đặc hiệu enzyme cấu tạo khác tế bào xác định tất tính trạng cá thể

Nhiễm sắc thể chịu nhân đôi trước phân bào Do tế bào nhận gen tương đương với tế bào mẹ Sự nhân đôi nhiễm sắc thể q trình xác, nhiên gen có xác xuất nhỏ sai sót chép, làm phát sinh đột biến Đột biến xảy ngẫu nhiên không cần can thiệp mơi trường bên ngồi với tần suất nhỏ từ 10-5 đến 10-9

I SỰ VẬN CHUYỂN DI TRUYỀN Ở VI SINH VẬT

Sự tiến hóa vi sinh vật phụ thuộc vào biến dị chọn lọc Nó diễn chậm chạp, lúc biến dị xảy tích lũy biến dị liên tiếp chủng sinh vật Q trình trở nên nhanh chóng vi sinh vật nhờ vi sinh vật phát triển chế vận chuyển di truyền cá thể

Vi khuẩn vận chuyển yếu tố di truyền qua ba chế: biến nạp, tải nạp tiếp hợp

Trong biến nạp, đoạn ADN vận chuyển vào tế bào nhận Đây chế thô sơ vận chuyển gen

Trong tải nạp tiếp hợp, plasmid vận chuyển qua trung gian phage qua tiếp xúc

Plasmid phân tử ADN dạng vịng trịn nằm ngồi nhiễm sắc thể có khả tự chép Plasmid có trọng khối nhỏ so với nhiễm sắc thể Hai plasmid gọi không phù hợp chúng tồn bền vững tế bào Những plasmid F mang nhân tố sinh sản F Những plasmid tồn vi khuẩn với nhân tố F gọi Fi+

nếu chúng ngăn cản tiếp hợp F, gọi Fi- trường hợp ngược lại.

1 Biến nạp (Transformation)

Biến nạp vận chuyển ADN hòa tan nhiễm sắc thể từ vi khuẩn cho sang vi khuẩn nhận Khi tế bào vi khuẩn bị vỡ làm tan (lysis), ADN dạng vịng trịn chúng mơi trường thành đoạn thẳng với chiều dài khác nhau, có khả gây biến nạp cho tế bào nhận khác

Griffith năm 1928 khám phá biến nạp phế cầu thí nghiệm sau chuột nhắt :

- Tiêm vào chuột phế cầu sống S1 có vỏ chuột chết nhiễm khuẩn huyết - Tiêm vào chuột phế cầu R1 sống không vỏ chuột khơng chết

- Tiêm vào chuột phế cầu S1 chết chuột khơng chết

- Tiêm vào chuột hỗn hợp phế cầu S1 chết với R1 sống chuột chết nhiễm khuẩn huyết Từ máu chuột phân lập S1 sống có vỏ

Alloway năm 1933 thực thí nghiệm ống nghiệm phân lập phế cầu S1 hỗn hợp phế cầu S1 chết phế cầu R1 sống

Avery, Mac-Leod, Mac-Carthy năm 1944 phân lập nhân tố biến nạp xác định ADN Nhưng lúc giới khoa học chưa chấp nhận ADN chất liệu di truyền Đến năm 1952 lúc Hershey Chase chứng minh ADN Phage vào bên vi khuẩn vỏ Protein bị giữ bên ngồi ADN cơng nhận nhân tố biến nạp

Sự biến nạp khám phá thêm nhiều vi khuẩn khác: Hemophilus, Neisseria,

Streptococcus, Bacillus, Acinetobacter

Trong biến nạp, tế bào nhận phải trạng thái sinh lý đặc biệt gọi khả nạp (competence) có khả tiếp nhận ADN hòa tan tế bào cho Trạng thái khả nạp xuất giai đoạn định trình phát triển tế bào vào lúc tê bào tổng hợp vách

Sau xâm nhập, phân tử ADN sợi kép bị endonuclease cắt màng tế bào thành đoạn ngắn sợi đơn vào nguyên tương Đoạn ADN sợi đơn kết đôi với ADN tế bào nhận đoạn tương đồng tái tổ hợp; cách ADN biến nạp kết hợp vào nhiễm sắc thể tế bào nhận Nhiễm sắc thể tái tổ hợp phân tử ADN sợi kép tế bào nhận đoạn ngắn sợi thay đoạn ADN tế bào cho

Đối với vi khuẩn đường ruột, tiếp nhận đòi hỏi biến đổi bề mặt tế bào cách xử lý với CaCl2

Ý nghĩa biến nạp:

Sự biến nạp cho phép kết hợp vào nhiễm sắc thể vi khuẩn ADN tổng hợp ADN biến đổi invitro

Biến nạp sử dụng để xác định vùng nhỏ đồ di truyền vi khuẩn

Biến nạp xảy thiên nhiên Người ta chọn lọc vi khuẩn tái tổ hợp độc lực tăng lúc tiêm chủng phế cầu vào phúc mạc chuột nhắt Như biến nạp có ý nghĩa dịch tễ học, nhiên vận chuyển di truyền biến nạp không hữu hiệu vận chuyển di truyền plasmid

2 Tải nạp (Transduction)

Tải nạp vận chuyển ADN từ vi khuẩn vi khuẩn nhận nhờ phage Trong tải nạp chung, phage mang gen vi khuẩn cho sang vi khuẩn nhận Trong tải nạp đặc hiệu, phage định mang số gen định vi khuẩn cho sang vi khuẩn nhận

2.1 Sự tải nạp chung

Kiểu tải nạp Zinder Lederberg khám phá năm 1951 lúc khảo sát tiếp hợp Salmonella Lúc lai giống chủng L22 chủng L2, chủng mang cặp tính trạng

đột biến khác thu với tỷ lệ nhỏ số tế bào tái tổ hợp mang cặp tính trạng đột biến tế bào hoang dại gốc, phage P22 tìm thấy nước lọc canh khuẩn

của chủng vi khuẩn Phage P22 độc lực với chủng L2 ơn hịa với chủng L22 Lúc

cho P22 vào canh khuẩn L2 tất tế bào L2 bị dung giải phóng thích phage P22

đó có phage chứa mảnh ADN L2 Lúc cho chủng L22 vào dung dịch phage P22

nói số phage vận chuyển gen L2 vào L22 vi khuẩn tự dưỡng type

hoang dại phát sinh qua tái tổ hợp 2.2 Sự tải nạp đặc hiệu

nhiễm sắc thể đòi hỏi tích hợp phage Hơn khác với tải nạp chung, phage tải nạp đặc hiệu phóng thích lúc chiếu tia cực tím khơng tự tách rời khỏi nhiễm sắc thể

Lúc chiếu tia cực tím vào canh khuẩn E.coli K12 Gal+ sinh tan với phage 

trong phage phóng thích có khoảng 10-6 d Gal  dGal phage  mang gen Gal

nhưng thiếu dọan ADN mà để lại nhiễm sắc thể vi khuẩn Đó phage khơng hồn chỉnh khơng thể nhân lên không bổ sung đoạn ADN bị thiếu vận chuyển gen Gal Lúc cho dịch dung giải nói vào canh khuẩn E.coli K12 Gal- thu

khỏang 10-6 vi khuẩn tải nạp galactose dương tính Đó tượng tải nạp tần số thấp LFT

(Low Frequency Transduction) Một số tế bào canh khuẩn E.coli K12 Gal- nhiễm dịch

LFT trở nên hai lần sinh tan với phage  bình thường phage  dGal Những tế bào hình thành clon tế bào hai lần sinh tan Lúc chiếu tia cực tím vào tế bào nói thu được dịch phage phage  phage  dGal Đó tải nạp tần số cao (High Frequency Transduction)

Ý nghĩa tải nạp:

Sự tải nạp cho phép xác định gen gần nhiễm sắc thể, sử dụng để thiết lập đồ di truyền Dựa vào tần số tải nạp hai gen lúc người ta xác định khoảng cách gen nhờ xác định vị trí chúng

Trong thiên nhiên tải nạp giữ vai trị có ý nghĩa lây lan plasmid kháng thuốc vi khuẩn gram dương plasmid penicillinase tụ cầu Ngồi prophage đem lại cho vi khuẩn số tính chất đặc biệt quan trọng ví dụ prophage  trực khuẩn bạch hầu

3 Tiếp hợp (Conjugation)

Tiếp hợp tượng vận chuyển yếu tố di truyền từ vi khuẩn cho (đực) sang vi khuẩn nhận (cái) hai vi khuẩn tiếp xúc với

Lederberg Tatum lần năm 1946 phát tiếp hợp vi khuẩn Hỗn hợp hai biến chủng E.coli K12 với Chủng khuyết dưỡng với Biotin Methionin

nhưng có khả tổng hợp Threonin Leucin ký hiệu B-M-T+ L+ Chủng khuyết dưỡng

với Threonin Leucin tổng hợp Biotin Methionin, ký hiệu B+M+T- L-

Cả hai biến chủng không mọc môi trường tổng hợp tối thiểu không chứa bốn chất nên không tạo thành khuẩn lạc

Nếu trộn hai biến chủng với cấy vào mơi trường tối thiểu thấy mọc khuẩn lạc với tần số 10-6 Điều cho thấy hai chủng lọai vi khuấn qua trao đổi gen đã

tạo thành tế bào tái tổ hợp có khả tổng hợp bốn chất: Biotin, Methionin, Threonin, Leucin, ký hiệu B+, M+, T+, L+.

Hiện tượng tiếp hợp liên quan đến nhân tố sinh sản F Nhân tố F plasmid Tế bào chứa F tế bào đực hay tế bào F+ đóng vai trị tế bào cho Tế bào khơng chứa F tế

bào F- dóng vai trị tế bào nhận Trong thí nghiệm tiếp hợp trên, chủng (1) đóng vai trị

chủng cho chủng (2) đóng vai trò chủng nhận

Từ tế bào F+, Cavalli phân lập tế bào Hfr (High frequency of

recombination) có khả vận chuyển gen với tần số cao Khi lai Hfr x F- thì thu được

các tế bào tái tổ hợp 1000 lần nhiều lai F+x F-

Trong tế bào F+ nhân tố F tạo nên lực đặc biệt gọi lực tiếp hợp Chính nhờ

lực mà xảy tiếp hợp vi khuẩn

nhưng q trình tiếp hợp nằm cuối gen, đẩy gen vào tế bào nhận qua cầu nguyên tương nối liền hai tế bào tiếp hợp

Ở tế bào Hfr số trường hợp F tách rời khỏi nhiễm sắc thể mang theo đoạn ADN nhiễm sắc thể gọi F’ F’ có khả tự chép vận chuyển vào tế bào nhận F’ vận chuyển số tính trạng vi khuẩn sang vi khuẩn khác F’ sử dụng để phân lập vận chuyển số gen chọn lọc

Tiếp hợp thường xảy vi khuẩn lồi xảy những vi khuẩn khác loài E.coli với Salmonella Shigella tần số tái tổ hợp thấp

Ý nghĩa tiếp hợp:

Sự tiếp hợp công cụ khảo sát quan trọng nhiều lĩnh vực sinh lý di truyền vi khuẩn cho phép tạo nên vi khuẩn phối hợp nhiều đột biến khác

Nhờ kỹ thuật tiếp hợp ngắt quãng người ta thiết lập đồ nhiễm sắc thể vi khuẩn Ngoài chủng F’ sử dụng để nghiên cứu hoạt động số gen

Trong thiên nhiên tiếp hợp giữ vai trò đáng kể biến dị vi khuẩn đặc biệt lây lan tính kháng thuốc vi khuẩn Gram âm

II DI TRUYỀN VỀ TÍNH KHÁNG THUỐC

Các vi khuẩn kháng thuốc tìm thấy khắp nơi kể nơi chưa sử dụng kháng sinh Ngay phát minh penicilin năm 1940, vi khuẩn kháng penicilin báo cáo Ngày vấn đề kháng thuốc trở thành mối bận tâm hàng đầu điều trị bệnh nhiễm trùng kháng sinh đồ thử nghiệm hàng ngày phịng xét nghiệm vi trùng

Sự hình thành tính kháng thuốc vi sinh vật biến đổi gen nhiễm sắc thể tiếp nhận plasmid kháng thuốc

Vi khuẩn trở nên kháng thuốc qua chế: đột biến, tái tổ hợp thu hoạch plasmid kháng thuốc thu hoạch transposon

1 Đột biến thành kháng thuốc

Nhiều thí nghiệm chứng minh tính kháng thuốc phát sinh đột biến, tính kháng thuốc liên hệ đến biến đổi gen nhiễm sắc thể di truyền cho hệ sau Sự đột biến xảy với tần suất 10-5 - 10 -9

Trong tính kháng thuốc, kháng sinh giữ vai trị chọn lọc khơng phải vai trị đạo Việc sử dụng rộng rãi kháng sinh làm phát triển nhanh chóng vi khuẩn kháng thuốc cách giết chết vi khuẩn nhạy cảm, tạo điều kiện cho vi khuẩn kháng thuốc phát sinh đột biến chiếm ưu

2 Sự tái tổ hợp

Lúc đột biến kháng thuốc xuất quần thể vi khuẩn vi khuẩn kháng thuốc vận chuyển gen kháng thuốc đến vi khuẩn nhạy cảm theo chế vận chuyển di truyền: biến nạp, tải nạp tiếp hợp tùy theo loài vi khuẩn Sự tái tổ hợp vi khuẩn, vi khuẩn kháng kháng sinh làm xuất vi khuẩn kháng với loại kháng sinh Trong thiên nhiên, vận chuyển gen kháng thuốc tải nạp tiếp hợp xảy với tần suất thấp khoảng 10-5 Trong biến nạp tần suất chưa biết, có

thể thấp

3 Thu hoạch plasmid kháng thuốc

3.1 Plasmid kháng thuốc vi khuẩn Gram âm

Năm 1946 lần Nhật Bản người ta phân lập nhiều chủng Shigella kháng với nhiều kháng sinh : streptomycin, chloramphenicol, tetracyclin, sulfonamit Nhân tố chịu trách nhiệm tính kháng nhiều thuốc plasmid kháng thuốc goi nhân tố R Nhân tố R điển hình plasmid lớn với phần, chức riêng biệt Phần thứ RTF gọi nhân tố vận chuyển đề kháng (Resistance transfer factor), khoảng 80 kb chứa gen tự chép tiếp hợp Phần nhỏ định đề kháng (R determinant), kích thước thay đổi chứa gen kháng thuốc (R genes) RTF định đề kháng thông thường tạo nên đơn vị Nhân tố R thường tái tổ hợp với làm phát sinh tổ hợp kháng thuốc

Nhân tố R khơng lây truyền rộng rãi nhiều loài vi khuẩn đường ruột mà cịn lây truyền cho nhiều vi khuẩn khác vi khuẩn tả, vi khuẩn dịch hạch

Nhân tố R lây truyền vi khuẩn qua tiếp xúc nên tính kháng thuốc lan tràn quần thể vi khuẩn nhạy cảm bệnh truyền nhiễm

3.2 Plasmid kháng thuốc vi khuẩn Gram dương

Sự đề kháng nhiều chủng tụ cầu vàng với penicillin, erythromycin nhiều kháng sinh plasmid gây nên Plasmid vi khuẩn Gram dương vận chuyển tiếp hợp mà tải nạp qua trung gian phage Hiện phần lớn chủng tụ cầu kháng penicillin bệnh viện mang plasmid penicillinase

4.Thu hoạch transposon

Transposon gọi gen nhảy đoạn ADN, kích thước nhỏ chứa hay nhiều gen có đầu tận chuổi nucleotic giống ngược chiều (inverted repeat) nhảy từ plasmid vào nhiễm sắc thể từ nhiễm sắc thể vào plasmid từ plasmid đến plasmid Tất gen có gen kháng thuốc nằm transposon Những transposon đạo kháng kim loại nặng, tạo thành độc tố khả sử dụng số chất chuyển hóa (lactose, raffinose, histidin, hợp chất lưu huỳnh) mô tả Đặc biệt quan trọng vi sinh học transposon kháng kháng sinh Tn3 mang gen kháng ampicillin, Tn5 mang gen kháng kanamycin, Tn10 mang gen kháng tetracyclin, Tn4 mang gen kháng ba kháng sinh ampicillin, streptomycin sulfamit

ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC NHÂN TỐ NGOẠI CẢNH ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT

Mục tiêu học tập

1 Trình bày tác động số nhân tố vật lý, hoá học sinh học lên phát triển của vi sinh vật.

2 Giải thích chế tác động vài yếu tố vật lý, hoá học sinh học lên phát triển vi sinh vật.

công tác tiệt trùng, khử trùng dụng cụ y tế, dược phẩm, tẩy uế mơi trường, phịng mổ, phịng bệnh nhân, nghiên cứu vi sinh vật

I NHÂN TỐ VẬT LÝ

1 Vận động giới

Vi sinh vật chịu ảnh hưởng tần số rung động môi trường, yếu tố có tác dụng kích thích hay ức chế phát triển vi sinh vật tiêu diệt vi sinh vật

- Khi lắc canh khuẩn với tần số vừa (1-60 lần / phút ) có tác động tốt đến phát triển vi khuẩn tăng khả thơng khí, thúc đẩy phân bào

- Khi lắc mạnh lại ức chế phát triển vi khuẩn, lắc kéo dài tiêu diệt vi sinh vật

Vận động giới thường ứng dụng nuôi cấy vi sinh vật để làm tăng sinh khối thu nhận số lượng lớn sản phẩm vi khuẩn tiết

2 Làm nước

Nước cần thiết cho hoạt động sống vi sinh vật, làm nước vi sinh vật chết Tốc độ chết tùy thuộc vào môi trường vi khuẩn sống

- Huyền dịch vi khuẩn nước đem làm khơ vi khuẩn chết nhanh - Huyền dịch vi khuẩn thể keo làm khô vi khuẩn chết chậm

- Huyền dịch vi khuẩn làm đông băng nhanh trước tiến hành làm nước vi khuẩn chết Phương pháp áp dụng để làm đông khô vi khuẩn nhằm bảo quản vi khuẩn thời gian dài

Trạng thái nha bào trạng thái nước tự nhiên vi khuẩn Nha bào chịu khô hanh lâu dài

3 Hấp phụ

4 pH

Độ pH mơi trường có ảnh hưởng đến họat động sống vi khuẩn làm thay đổi cân trao đổi chất môi trường vi khuẩn giết chết vi khuẩn Mỗi loại vi khuẩn thích hợp với giới hạn pH định (từ 5,5 đến 8,5), đa số pH trung tính (pH=7), pH nội bào tế bào sống trung tính Ở mơi trường kiềm, Pseudomonas và

Vibrio phát triển tốt, đặc tính hữu ích để phân lập chúng Trong Lactobacillus

phát triển tốt pH=6 thấp Trong q trình điều chế mơi trường ni cấy phải đảm bảo pH thích hợp vi khuẩn phát triển tốt Trong tiệt khuẩn khử khuẩn người ta sử dụng hóa chất có pH axit kiềm để loại trừ vi khuẩn

5 Áp suất

5.1 Áp suất thủy tĩnh (áp suất giới)

Vi khuẩn có khả chịu áp suất cao khơng khí, thường từ 2000-5000 atm virus, phage; từ 5000-6000 atm vi khuẩn khơng có nha bào; từ 17000-20000 atm vi khuẩn có nha bào Cơ chế tác động áp suất giới vi khuẩn chưa rõ

5.2 Áp suất thẩm thấu

Áp suất thẩm thấu môi trường xung quanh có tác động mạnh đến tế bào vi khuẩn tính thẩm thấu màng nguyên tương Đa số vi khuẩn phát triển thích hợp mơi trường có áp suất thẩm thấu atm (dung dịch NaCl 0,9%)

- Trong dung dịch nhược trương, áp suất thẩm thấu bên tế bào cao môi trường nên nước bị hút vào tế bào vi khuẩn làm tế bào phình to lên vỡ

- Trong dung dịch ưu trương, áp suất thẩm thấu môi trường cao nên nước bị hút môi trường làm tế bào bị teo lại

6 Nhiệt độ

Nhiệt độ yếu tố ảnh hưởng lớn đến phát triển vi khuẩn Mỗi loại vi sinh vật phát triển giới hạn nhiệt độ định, dựa vào khoảng nhiệt độ phát triển tối ưu, vi khuẩn chia làm nhóm: nhóm ưa ấm có nhiệt độ tối ưu 20oC-45oC, nhóm ưa

lạnh có nhiệt độ tối ưu 20oC nhóm ưa nóng có nhiệt độ tối ưu 45oC Ở nhiệt độ

quá thấp vi khuẩn khơng phát triển sống; nhiệt độ cao cao vi khuẩn bị tiêu diệt

- Nhiệt độ thấp: Ở nhiệt độ thấp phản ứng chuyển hóa vi khuẩn bị giảm đi, bị ngừng lại Một số vi sinh vật bị chết đa số sống thời gian dài Lúc làm đông băng vi sinh vật số bị chết, làm đơng băng nhanh số vi sinh vật sống sót nhiều Người ta sử dụng đặc điểm để bảo quản chủng vi khuẩn nhiệt độ thấp

- Nhiệt độ cao: Nhiệt độ cao có khả giết chết vi khuẩn Sức đề kháng vi khuẩn với nhiệt độ cao tùy chủng loại tùy theo trạng thái sinh trưởng hay trạng thái nha bào Đa số vi khuẩn trạng thái sinh trưởng nhiệt độ 56-60oC 30 phút chết ở

1000C chết Thể nha bào chịu nhiệt độ cao lâu 1210C 15-30

phút nồi hấp chết 1700C 30 phút - nhiệt khô bị tiêu diệt.

- Cơ chế tác dụng nhiệt độ cao vi khuẩn: + Protein bị đông đặc

+ Enzyme bị phá hủy

+ Tổn thương màng nguyên tương làm thay đổi tính thẫm thấu

7 Bức xạ

- Ánh sáng mặt trời: ánh sáng mặt trời có tia cực tím có bước sóng từ 200-300 nm, 253,7nm, có tác dụng sát khuẩn

- Tia Rơnghen: có hiệu ứng diệt khuẩn gây đột biến vi sinh vật

- Nguyên tố phóng xạ: tạo xạ ,   tia ,  có tác dụng diệt khuẩn hay ức chế vi khuẩn phát triển Cịn tia  có tác dụng

Cơ chế tác dụng xạ: Do nguyên tương vi khuẩn có thành phần cấu tạo phân tử phức tạp, phân tử có khả hấp thụ cách chọn lọc tia xạ có bước sóng khác Thí dụ axit nucleic vi khuẩn có khả hấp thụ tia xạ dài 253,7nm, lúc trình chép DNA bị biến đổi bị ức chế DNA bị phá hủy không thuận nghịch làm vi khuẩn chết

8 Siêu âm

Khi tần số chấn động vượt 20.000 lần/1 phút gọi siêu âm (do tai ta khơng nghe nữa) Siêu âm có khả giết chết vi khuẩn chấn động có tần số cao phát sinh áp suất co giãn cao làm cho tế bào vi khuẩn bị xé tan; nước tế bào vi khuẩn tác dụng siêu âm phát sinh H2O2 có tác dụng giết chết vi khuẩn;

siêu âm phá hủy hệ thống keo làm cho chất keo đông lại

9 Tia laser

Tia laser lượng cao tập trung nên thời gian ngắn làm cho vật chất nóng chảy bay hơi, tăng nhiệt độ, áp suất chỗ lên cao nên có tác dụng giết chết vi khuẩn

II CÁC NHÂN TỐ HĨA HỌC

Các hóa chất mơi trường có ảnh hưởng kích thích ức chế phát triển vi khuẩn Các hóa chất có tác dụng kích thích phát triển vi khuẩn ứng dụng nuôi cấy vi khuẩn Các hóa chất có tác dụng ức chế tiêu diệt vi khuẩn sử dụng làm chất tẩy uế, chất khử khuẩn sát khuẩn tùy theo mục đích sử dụng nồng độ sử dụng

1 Chất tẩy uế, chất khử khuẩn

- Chất tẩy uế hóa chất có khả giết chết vi khuẩn gây bệnh vi sinh vật khác, nha bào tác dụng giết khuẩn phần Chất tẩy uế sử dụng bề mặt đồ dùng, dụng cụ y tế, chất thải bệnh viện

- Chất khử khuẩn hóa chất có tác dụng ngăn cản phát triển vi khuẩn, chất có tác dụng giết chết vi khuẩn phần có tác dụng ức chê vi khuẩn mạnh Chất khử khuẩn dùng để vơ khuẩn vết mổ, nơi tiêm chích Thực chất tẩy uế khử khuẩn khác nồng độ sử dụng Ví dụ: phênol nồng độ 2-5% dùng để tẩy uế, cịn nồng độ thấp 100 -1000 lần dùng làm chất khử khuẩn

- Chỉ số phenol tỉ lệ nồng độ tối thiểu chất tẩy uế có tác dụng diệt khuẩn nồng độ tối thiểu phenol sử dụng chủng vi khuẩn định Chỉ số dùng làm đơn vị đánh giá tác dụng diệt khuẩn hóa chất

2 Các nhân tố hóa học ảnh hưởng đến phát triển vi khuẩn

2.1 Axit bazơ

Axit bazơ có khả phân li thành ion H+ OH- mạnh, làm cho pH mơi

trường thay đổi có tác dụng diệt khuẩn ức chế phát triển vi khuẩn 2.2 Các muối kim loại

kết hợp ion kim loại với nhóm -SH protein tế bào Hoạt tính diệt khuẩn theo thứ tự Hg, Ag, Cu, Zn Ví dụ :

- Muối thủy ngân: dùng nhiều để tẩy uế sublimê (HgCl2),

- Muối bạc: có tác dụng sát khuẩn nitrat bạc (dung dịch argyrol) - Muối đồng: sunphát đồng dùng để chữa bệnh nấm da

- Muối vàng: dùng để điều trị bệnh vi khuẩn kháng cồn- axit dạng muối thiosunphát

2.3 Nhóm Halogen

Tác dụng diệt khuẩn phản ứng oxy hoá halogen hoá chất hữu Phản ứng oxy hoá xảy nhanh khơng thuận nghịch, cịn halogen hố chậm khơng mạnh Những phản ứng xảy với nhiều chất hữu khác nhau, làm giảm hoạt tính diệt khuẩn dung dịch có nhiều chất bẩn hữu hay chất oxy hoá halogen hoá khác, amoniac

+ Iốt: Cồn iốt (7% I, 3% KI ) thường sử dụng để sát trùng da, có số phenol cao

+ Clo: thường dùng dạng khí nguyên chất dạng hợp chất hữu hay vô Clo dùng để khử khuẩn nước sinh hoạt, nước bể bơi

Cl2 + H2O HCl + HClO

2HClO 2HCl + O2

(HClO có hoạt tính giải phóng oxy, khơng diệt vi khuẩn lao virus đường ruột)

Chlorua vôi thường sử dụng để khử trùng chất nôn, chất thải dụng cụ thơ rắc hố xí Chloramin tinh khiết 1% nước có khả khử trùng bàn tay cách ngâm phút dung dịch khử khuẩn dụng cụ cách ngâm 20 phút 2.4 Phenol

Là chất tẩy uế tốt sử dụng từ sớm Tuy nhiên phenol độc với da, niêm mạc gây độc thần kinh

- Nồng độ: khoảng 1% giết chết vi khuẩn trạng thái sinh trưởng - Nồng độ 5% giết chết vi khuẩn trạng thái nha bào

2.5 Cồn

Rượu ethylic có tác dụng sát trùng da Tác dụng diệt khuẩn tùy theo nồng độ, cao dung dịch ethanol 70% nồng độ thấp tác dụng diệt khuẩn giảm Cồn tuyệt đối tác dụng diệt khuẩn Ngồi dung dịch ethanol, dung dịch isopropanol 70% thường sử dụng

2.6 Andehyt (các tác nhân ankyl hóa)

Rất độc tế bào vi khuẩn Formol chất diệt khuẩn mạnh nhóm này, sử dụng để phá huỷ hiệu lực độc tố virus mà không phá huỷ khả sinh kháng, sử dụng để tẩy uế phịng bệnh, quần áo, chăn

2.7 Các chất oxy hoá khác thuốc nhuộm:

H2O2, KMnO4, thuốc nhuộm thường pha thành dung dịch lỏng dùng làm chất sát khuẩn

Thuốc nhuộm thường dùng để ức chế phát triển tạp khuẩn mơi trường chọn lọc

2.8 Các tác nhân có hoạt tính bề mặt

benzalkonium chlorua Những hợp chất sử dụng rộng rãi để khử khuẩn Chúng tác động cách làm tan màng tế bào vi khuẩn hòa tan màng lipit che chở vi khuẩn làm biến thể protein

3 Cơ chế tác động hóa chất tế bào vi khuẩn.

- Phá hủy màng tế bào: ion hóa, thay đổi sức căng bề mặt, làm tan màng lipit che chở vi khuẩn

- Biến đổi chức protein axit nucleic

- Tác động hóa học làm giải phóng oxy phân tử, clo có tác dụng giết chết vi khuẩn

4 Các yếu tố ảnh hưởng đến tác dụng chất tẩy uế sát khuẩn.

- Nồng độ hóa chất: nồng độ cao tác dụng mạnh - Thời gian tiếp xúc: tiếp xúc lâu tác dụng mạnh - Nhiệt độ

- Thành phần môi trường xung quanh: chất hữu có tác dụng bảo vệ vi khuẩn tác dụng với hóa chất làm giảm hiệu lực

- Mật độ vi sinh vật nơi khử trùng

- Khả đề kháng vi sinh vật (virus có lớp vỏ lipit nhạy cảm với chất hoà tan lipit cồn, phenol virus khơng có vỏ)

III NHÂN TỐ SINH VẬT

Trong trình tồn vi sinh vật chúng phải sống điều kiện có vi sinh vật khác chúng bị cạnh tranh sinh tồn, bị tiêu diệt song song tồn

1 Chất đối kháng (Bacterioxin)

Nhiều loại vi khuẩn phát triển tổng hợp chất đối kháng có tác dụng ức chế các vi khuẩn loài loài lân cận Ví dụ : Colixin E.coli, Staphylococxin của Tụ cầu Chúng có chất protein phức hợp gluxit-lipit-protein, có tác động đặc hiệu với vi khuẩn nhạy cảm

2 Phage

3 Interferon

Là chất tế bào sản sinh bị virus xâm nhập, có chất glycoprotein, có tác dụng ức chế nhân lên virus

4 Chất kích thích

TIỆT TRÙNG - KHỬ TRÙNG VÀ KHÁNG SINH

Mục tiêu học tập

1 Nêu phương pháp tiệt trùng khử trùng phịng thí nghiệm. 2 Trình bày định nghĩa kháng sinh, chế tác dụng kháng sinh.

3 Kể nhóm thc kháng sinh hiệu chúng với nhóm vi khuẩn chính. 4 Mơ tả đươc chế đề kháng vi khuẩn với kháng sinh, nguồn gốc đề kháng, cách theo dõi đề kháng mục đích phối hợp kháng sinh điều trị bệnh nhiễm trùng

I TIỆT TRÙNG VÀ KHỬ TRÙNG

1 Tiệt trùng

Tiệt trùng lọai bỏ tất vi sinh vật sống (gồm thể dinh dưỡng nha bào chúng) nhiệt độ, tia xạ, hóa chất biện pháp học Tiệt trùng công việc cần thiết y học nhằm giết chết vi sinh vật sinh bệnh khỏi dụng cụ y tế, sinh vật phẩm, dược phẩm Trong phịng thí nghiệm vi sinh vật, tiệt trùng biện pháp thiếu cho việc phân lập, nuôi cấy lưu giữ vi khuẩn khiết Người ta dùng nhiều phương pháp tiệt trùng khác phịng thí nghiệm vi sinh học

- Các phương pháp tiệt trùng dùng nhiệt đốt nóng lửa ,dùng lị sấy khô 160-1700C, dùng nhiệt ẩm nồi áp suất, chưng cách thủy ngắt quảng kiểu

Tyndal

- Tiệt trùng tia xạ: tia xạ cực tím , tia gamma, tia beta có tác dụng giết chết vi sinh vật, dùng để tiệt trùng dụng cụ, chế phẩm sinh học

- Tiệt trùng học dùng máy lọc, vi khuẩn bị giữ lại phía máy lọc Phương pháp dùng để tiệt trùng môi trường nuôi cấy vi khuẩn

2 Khử trùng (hay khử khuẩn)

Thuật ngữ dùng cho tác nhân vật lý, thường hóa học có khả giết chết vi sinh vật sống đồ dùng, dụng cụ thí nghiệm, phịng thí nghiệm, phịng bệnh

Tác nhân vật lý tia cực tím dùng để khử trùng phịng mổ, phịng ni cấy vi khuẩn

Nhiều hóa chất đặc biệt dùng cho mục đích khử trùng phịng làm việc, phịng thí nghiệm, khử trùng đồ dùng, dụng cụ thí nghiệm xà phòng, phenol , hợp chất halogen, muối kim loại, cồn

Thuật ngữ sát khuẩn (antiseptic) sử dụng cho hóa chất dùng để giết chết vi sinh vật bề mặt thể người động vật mà không làm tổn thương tổ chức thể Các hóa chất độc với thể thường nồng độ thấp Như hóa chất sử dụng làm dung dịch khử khuẩn sử dụng để sát khuẩn phụ thuộc vào mục đích sử dụng nồng độ chất sử dụng ví dụ phenol nồng độ 2-5% dùng chất khử trùng, nồng độ thấp 100 đến 1000 lần dùng làm chất sát khuẩn II CÁC CHẤT KHÁNG SINH

1 Định nghĩa

kháng sinh bán tổng hợp cách biến đổi cấu trúc phân tử kháng sinh để thu kháng sinh

Hiện kháng sinh xem hợp chất hóa học có tác dụng cản khuẩn diệt khuẩn với chế tác động mức phân tử, hữu hiệu liều lượng thấp sử dụng để điều trị bệnh nhiễm trùng

Các kháng sinh có tác dụng đặc hiệu loại vi khuẩn nhóm vi khuẩn định Các kháng sinh có hoạt tính khác nhau, có loại có phổ kháng khuẩn rộng, có loại có phổ kháng khuẩn hẹp

2 Cơ chế tác dụng kháng sinh

2.1 Ức chế tổng hợp vách tế bào

Khác với tế bào động vật, vi khuẩn có vách tế bào Loại bỏ vách ngăn cản tạo thành vách làm tan tế bào vi khuẩn Vách tế bào vi khuẩn chứa mucopeptit gọi murein hay peptidoglycan Các penicilline cephalosporin tác động lên phân tử protein chọn lọc đặc hiệu nên ức chế liên kết ngang cuối cấu trúc mucopeptit vách tế bào, vi khuẩn dể dàng bị tan

Các kháng sinh khác bacitracin, vancomycin, novobiocin, D-cycloserin ức chế tạo vách vi khuẩn ức chế hình thành mucopeptit vách

2.2 Ức chế chức màng nguyên tương

Màng nguyên tương hoạt động màng bán thấm Màng thẩm thấu chất chọn lọc nhờ kiểm soát thành phần bên tế bào Nếu toàn vẹn màng nguyên tương bị phá vỡ thành phần nội bào thoát khỏi tế bào tế bào chết Màng tế bào số vi khuẩn nấm dễ bị phá vỡ số thuốc kháng sinh tế bào động vật hoạt tính tác dụng chọn lọc kháng sinh lên nhóm cấu trúc hóa học đặc biệt có màng vi khuẩn nấm mà khơng có tế bào động vật Polymycin có tác động màng nguyên tương vi khuẩn gram âm, polyen có tác động màng nguyên tương nấm

2.3 Ức chế tổng hợp protein

Nhiều thuốc kháng sinh ức chế tổng hợp protein vi khuẩn:

2.3.1.Chloramphenicol: chloramphenicol dẫn chất thuộc nhóm ngăn cản kết hợp axit amin vào chuỗi peptit sinh đơn vị 50S ribosome vi khuẩn qua việc cản trở tác động enzyme peptidyl-transferaza

2.3.2 Các tetracyclin: tetracyclin thuốc kháng sinh nhóm ức chế tổng hợp protein vi khuẩn cách ngăn cản gắn liền amino acyl-RNA vận chuyển vào đơn vị 30S ribosome

2.3.3 Các macrolid lincomycin: Các kháng sinh nhóm ngăn cản tổng hợp protein cạnh tranh vị trí kết hợp axit amin ribosome cách phong bế phản ứng dây chuyển aminoacyl

2.3.4 Các aminoglycoside: thuốc kháng sinh nhóm aminoglycoside ức chế tổng hợp protein cách gắn vào protein tiếp nhận đơn vị 30S ribosome làm đọc sai thông tin ARN thơng tin làm hình thành protein khơng có họat tính, ngồi cịn làm tách ribosome trạng thái polymer thành monomer

2 Tác dụng ức chế hình thành acid nucleic

2.4.1 Các sulfonamid trimethoprim: Đối với nhiều vi sinh vật, axit para-aminobenzoic (viết tắt PABA) chất chuyển hóa cần thiết trình tổng hợp axit folic cần thiết để tổng hợp purin ADN Sulfonamid có cấu trúc tương tự PABA nên vào phản ứng thay cho PABA, hậu chất tương tự axit folic khơng có họat tính tạo thành ngăn cản phát triển vi khuẩn

Sự phối hợp sulfonamid với trimethoprim, hai chất tác động hai khâu khác trình tổng hợp làm tăng rõ họat tính thuốc, cotrimoxazol (sulfamethoxazol trimethoprim) chế phẩm phối hợp sử dụng hiệu điều trị bệnh nhiễm trùng

2.4.2 Rifampin: Rifampin dẫn chất kết hợp với ARN polymerase phụ thuộc ADN ức chế tổng hợp ARN vi khuẩn

2.4.3.Các quinolone: Các quinolon cacboxy fluoroquinolon kết hợp vào ADN gyrase nên ức chế tổng hợp ADN

3 Các nhóm thuốc kháng sinh

3.1 Sulfonamid

Là hợp chất thay nhóm amit (SO2NH2) nhóm amin (NH2) axit

sulfanilamic

Sulfonamid có tác dụng cản khuẩn vi khuẩn gram âm vi khuẩn gram dương Chúng ức chế nhiều vi khuẩn gram dương vi khuẩn đường ruột bao gồm E.coli, Klebsiella và Proteus.

Các sulfonamid đưọc sử dụng rộng rãi sulfaguanidin, sulfadiazim, sulfisoxazol, sulfamethoxazol, sulfadimethoxin

Trở ngại thuốc nhóm sulfamid vi khuẩn trở nên đề kháng với thuốc nhanh chóng, thêm vào nhiều sulfamid gây phản ứng phụ nghiêm trọng Nên thuốc nhóm sulfamid dùng hạn chế

Chế phẩm sulfamid dùng rộng rãi cotrimoxazol phối hợp sulfamethoxazol trimethoprim Thuốc dùng điều trị nhiễm trùng đường tiêu hóa, hơ hấp tiết niệu Dạng phối hợp khác fansidar bao gồm sulfadoxin pyrimethamin có hiệu điều trị sốt rét, hiệu bệnh nhiễm trùng

3 Các beta- lactamin

Các thuốc cơng thức hóa học có chứa vịng beta-lactam bao gồm penicillin cephalosporin

3.2.1 Các penicillin

Các penicillin có nhân chung axit amino-penicillanic hợp vòng thiazolidin vòng -lactam penicillin khác với penicillin khác chổ gốc R gắn vào nhân chung

Các penicillin dùng điều trị thuộc nhóm :

- Các penicillin có hoạt tính cao vi khuẩn gram dương, bị phá hủy enzyme penicillinase: penicillin G, penicillin V (phenoxy methylpenicillin), benzathin penicillin

- Các penicillin có hoạt tính vi khuẩn gram dương, đề kháng enzyme penicillinase: methicillin, nafcillin, oxacillin, dicloxacillin

- Các penicillin có hoạt tính rộng vi khuẩn gram duơng vi khuẩn gram âm, bị phá hủy enzyme penicillinase Các penicillin nhóm bao gồm:

+ Các aminopenicillin: ampicillin, amoxicillin, becampicillin, metampicillin + Các carboxy penicillin: carbenicillin, ticarcillin

+ Các ureidopenicillin: azlocillin, mezlocillin, piperacillin

3.2.2 Các cephalosporin

Các cephalosporin có nhân chung axit faminocephalo-sporanic hình thành vịng  lactam kết hợp với vòng dihydrotiazin thay hydro cuả nhóm amin gốc R khác thu cephalosporin bán tổng hợp

Các cephaloporin có hoạt tính với vi khuẩn gram dương với vi khuẩn gram âm

Dựa vào tính kháng khuẩn cephalosporin chia hệ: - Các cephalosporin hệ thứ nhất:

Bao gồm cephalothin, cephazolin, cephalein, cefaclor Các thuốc có hoạt tính đối với tụ cầu liên cầu A, phế cầu, E coli, Klebsiella, Proteus

- Cephalosporin hệ thứ hai:

Các thuốc nhóm có hoạt tính tốt thuốc cephalosporin hệ thứ chống lại E coli, Klebsiella, Proteus, Citrobacter, Enterobacter, H.influenzae, N.gonorrhoe,

N meningitidis Các thuốc nhóm gồm: cefamandol, cefuroxime, cefonicid, cefoxitin

- Cephalosporin hệ thứ ba:

Có phổ tác dụng kháng khuẩn bao trùm tồn vi khuẩn đường tiêu hóa, nhiên có tác dụng với vi khuẩn gram dương, thuốc nhóm chia 02 nhóm, nhóm có tác dụng chống Pseudononas aeruginosa gồm ceftazidime cefoperazone, nhóm khơng có tác dụng chống P aeruginosa bao gồm cefotaxim, ceftazidime, ceftizoxime, moxalactam Nhiều thuốc nhóm thấm vào màng não tốt nên dùng để điều trị viêm màng não vi khuẩn gram âm

3.2.3 Monobactam Carbapenem:

Hai nhóm thuốc khác với beta-lactam cấu tạo hóa học chế tác dụng ức chế tổng hợp vách tương tự cách tác dụng beta lactam, aztreonam thuốc thuộc nhóm monobactam có sẵn nay, phổ kháng khuẩn giới hạn vi khuẩn gram âm tương tự aminoglycoside

Imipenem kháng sinh carbapenem có sẵn nay, phổ kháng khuẩn thuốc xem rộng thuốc kháng sinh bao trùm lên vi khuẩn gram dương gồm liên cầu D, có tác dụng chống lại hầu hết vi khuẩn gram âm kể

P.aeruginosa, có tác dụng chống lại vi khuẩn kỵ khí

3.3 Các kháng sinh aminoglycoside

Gồm streptomycin, neomycin, gentamycin, tobramycin, amikacin, kanamycin

Các kháng sinh nhóm có tác dụng diệt khuẩn bao gồm vi khuẩn gram dương nhiều vi khuẩn gram âm gentamycin, tobramycin, neomycin có tác dụng chống

P.aeruginosa, trái lại streptomycin có tác dụng với vi khuẩn lao nên thuốc dành riêng để

điều trị lao

3 Các thuốc tetracyclin

Có cơng thức hóa học tương tự Các thuốc khác gốc R khác nhau. Các thuốc bao gồm tetracyclin, chlotetracyclin, oxytetracyclin, doxycyclin, minocyclin, thuốc nhóm có tác dụng cản khuẩn với vi khuẩn gram dương gram âm, các tetracyclin có hiệu với Rickettsia, Chlamydia, Mycoplasma pneumoniae và

Leptospira.

3 Chloramphenicol

Lúc đầu chiết xuất từ Streptomyces venezuelae tổng hợp Thuốc có tác dụng cản khuẩn phổ kháng khuẩn rộng Nó có hiệu bệnh thương hàn và nhiễm trùng Rickettsia.

3 Macrolit thuốc tương tự

dùng làm thuốc thay penicillin nhiễm trùng vi khuẩn gram dương bệnh nhân dị ứng với penicillin Lincomycin clindamycin có chế tác dụng họat phổ tương tự erythromycin

3.7 Polypeptid

Kháng sinh nhóm polypeptit chủ yếu polymycin, phổ tác dụng chủ yếu diệt khuẩn với vi khuẩn gram âm kể Pseudomonas Polymycin độc với thần kinh thận, ít dùng đường tồn thân để điều trị nhiễm trùng gram âm Cac thuốc có polymycin thường dùng để điều trị nhiễm trùng chỗ

3.8 Rifamycin

Là kháng sinh chiết suất từ Streptomyces mediterranei, chất dẫn xuất bán tổng hợp là rifampin, hai thuốc có họat phổ số vi khuẩn gram âm gram dương, vi khuẩn đường ruột, vi khuẩn kháng acid cồn Rifamycin thuốc sử dụng chủ yếu để điều trị bệnh lao

3.9 Các quinolon cacboxy - fluoroquinolon

Hợp chất quinolon tổng hợp axit nalidixic chủ yếu dùng để điều trị nhiễm trùng đường tiết niệu Các cacboxy-fluoroquinolon dẫn chất từ axit nalidixic, thuốc có tác dụng diệt khuẩn đối nhiều vi khuẩn gram dương vi khuẩn gram âm kể tụ cầu đề kháng với methicillin P.aeruginosa, chúng cịn cịn có tác dụng chống Mycoplasma và

Chlamydia Các fluoroquinolon sử dụng nhiều nhiễm trùng quan Một số

fluoroquinolon thường dùng gồm ciprofloxacin, enoxacin, norfloxacin, pefloxacin

4 Sự đề kháng vi khuẩn với thuốc kháng sinh

4.1 Cơ chế kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn

Nhiều chế kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn khảo sát Ở chủng vi khuẩn khác nhau, đề kháng với lọai kháng sinh họăc nhiều chế khác

4.1.1.Tăng phá hủy thuốc enzyme

Đây chế đề kháng thông thường qua trung gian plasmid Ví dụ điển hình enzyme beta lactamase gây nên đề kháng với kháng sinh beta lactamin Các vi khuẩn sản xuất enzyme penicillinase đề kháng với penicillin, vi khuẩn tạo enzyme cephalosporinase đề kháng với cephalosporin, aminoglycoside bị bất họat enzyme phosphorylase, adenylase, acetylase Chloramphenizol bị bất họat acetylase 4.1.2 Sự biến đổi receptor thuốc

Đây chế quan trọng Sự biên đổi protein đặc hiệu với thuốc ribosome làm vi khuẩn trở nên đề kháng thuốc kháng sinh đề kháng với thuốc nhóm aminoglycoside, erythromycin, đề kháng với rifampin sở thay đổi amino axit tiểu đơn vị beta enzyme ARN polymerarase phụ thuộc ADN làm thay đổi gắn vào enzyme rifampin Sự đề kháng sulfonamid trimethoprim tương tự biến đổi phân tử enzyme nên sulfamid không nhận vào phản ứng để tổng hợp acid folic

4.1.3.Giảm tính thấm màng nguyên tương

Tính chất thay đổi hệ thống vận chuyển màng nguyên tương Sự đề kháng gặp kháng sinh beta lactamin, chloramphenicol, quinolon, tetracyclin trimethoprim Ngoài rào cản thẩm thấu bình thường màng nguyên tương chịu trách nhiệm cho đề kháng tự nhiên nhiều thuốc

4.1.4.Tăng tạo thành enzyme

4.2 Nguồn gốc tính kháng thuốc

Kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn chủ yếu hình thành gen kháng thuốc nhiễm sắc thể plasmid nhiên vài trạng thái sinh lý đặc biệt vi khuân trở thành đề kháng với thuốc kháng sinh Các vi khuẩn ỏ trạng thái ngủ nghĩa không nhân lên khơng chịu tác động thuốc vi khuẩn lao hình thức vách số tế bào vi khuẩn (dạng L) không bị ảnh hưởng thuốc ức chế tạo thành vách penicillin sau thời gian dùng thuốc vi khuẩn lấy lại cấu trúc nguyên vẹn

4.2.1 Kháng thuốc đột biến nhiễm sắc thể

Một quần thể vi khuẩn chứa biến chủng nhạy cảm với thứ thuốc Sự diện thuốc kháng sinh chọn lọc cho phép chủng nhạy cảm sống sót Như vai trò thuốc yếu tố chọn lọc khơng có vai trị gây nên đột biến kháng thuốc Một có diện biến chủng vi khuẩn kháng thuốc biến chủng truyền tính kháng thuốc đến vi khuẩn khác nhiều chế khác nhau: Chuyển thể, chuyển nạp, giao phối

4.2.2.Kháng thuốc qua plasmid

Plasmid phân tử ADN tự chép nhỏ diện nguyên tương nhiều vi khuẩn Phân tử ADN nhỏ thường mang gen kháng thuốc (resistance) nên gọi R plasmid Các plasmid vi khuẩn thường cịn mang gen cho phép chúng gắn vào bề mặt niêm mạc, tạo độc tố, xâm nhập, plasmid kháng thuốc truyền cho vi khuẩn làm lan nhanh đề kháng

4.2.3.Các chế làm lan truyền tính kháng thuốc

Như nêu xuất biến chủng mang gen đề kháng thuốc nhiễm sắc thể plasmid, biến chủng lan truyền nhanh tính đê kháng cho vi khuẩn khác chế trao đổi vật liệu di truyền sau :

- Biến nạp

- Tải nạp bacteriophage - Tiếp hợp

Các phương tiện làm lây lan nhanh tính kháng thuốc:

- Plasmid: thêm vào gen kháng thuốc, plasmid mang gen thúc đẩy trao đổi gen vi khuẩn

- Do transposon: gen có khả di chuyển Các transposon có mang gen kháng kháng sinh nhảy từ plasmid đến plasmid khác từ plasmid qua nhiễm sắc thể Một số transposon kháng thuốc tìm thấy vi khuẩn Gram âm mang gen thúc đẩy lây truyền

- Do integron vector mang gen kháng kháng sinh, integron chèn vào vị trí định nhiễm sắc thể

4.2.4.Xác định độ nhạy cảm vi khuẩn với kháng sinh

sinh ổn định rõ ràng không cần thiết phải làm kháng sinh đồ vi khuẩn bạch hầu, liên cầu A tan máu  Tính chất đề kháng kháng sinh vi khuẩn có tính chất dịch tễ, kết kháng sinh đồ vi khuẩn gây bệnh khác bệnh viện bệnh viện khác vùng khác nhau, bệnh viện độ nhạy cảm vi khuẩn thay đổi hàng ngày Vì phịng thí nghiệm vi khuẩn bệnh viện cần làm kháng sinh đồ để chọn kháng sinh thích hợp điều trị bệnh nhiễm trùng

4.2.5 Phối hợp kháng sinh

Phối hợp kháng sinh để điều trị bệnh nhiễm trùng nhằm số mục tiêu sau :

- Giảm khả xuất chủng vi khuẩn đề kháng Đối với vi khuẩn đề kháng đột biến phải phối hợp kháng sinh làm giảm tần suất đột biến kép, ví dụ đột biến vi khuẩn lao kháng streptomycin 10-7, đột biến kháng rifamycin 10-9 xác xuất đột biến

kháng với hai thứ thuốc 10-7x10-9 = 10-16 Đây lý phải phối hợp

kháng sinh để điều trị lao

- Điều trị nhiễm khuẩn hỗn hợp : Một lọai kháng sinh có phổ tác động một nhóm vi khuẩn định Trong nhiễm khuẩn nhiều lọai vi khuẩn thủ phạm viêm phổi, viêm phúc mạc thường vi khuẩn khí vi khuẩn kỵ khí Phối hợp kháng sinh diệt dược hai lọai vi khuẩn

- Để tăng khả diệt khuẩn: Ví dụ phối hợp sulfamethoxazol trimethoprim làm

tăng khả diệt khuẩn nhiều vi khuẩn so với dùng đơn độc hai thuốc trên Mục đích dùng trường hợp điều trị nhiễm trùng Pseudomonas

ĐẠI CƯƠNG VIRUS Mục tiêu học tập

1 Trình bày đặc điểm , kích thước, hình thể cấu trúc virus.

2 Trình bày nhân lên virus hậu nhân lên virus tế bào. 3 Trình bày hình thái nhiễm virus phương pháp nuôi cấy virus.

I SƠ LƯỢC LỊCH SỬ PHÁT HIỆN VIRUS

Năm 1796 E.Jenner cho chủng đậu để phòng bệnh đậu mùa L.Pasteur dã tìm vaccine chống bệnh dại vào năm 1885, chưa chứng minh tác nhân gây bệnh chúng khơng trơng thấy kính hiển vi quang học không mọc môi trường nuôi cấy nhân tạo

Năm 1892 D.I Ivanovski chứng minh mầm bệnh gây bệnh khảm thuốc chui qua lọc vi khuẩn sứ Ivanovski cho chất độc tương tự độc tố bị bệnh tiết

Năm 1898 M.W.Beijerinck chứng minh tác nhân gây bệnh khảm thuốc khơng phải chất độc qua lọc vi khuẩn ông dùng tiếng Latin virus (mầm độc) để gọi mầm bệnh

Năm 1898 F.Loeffler P.Frosch chứng minh tính qua lọc sứ tác nhân gây bệnh lở mồm long móng bị

Năm 1915 - 1917 F.W.Twort F.H d’Hérelle phát virus vi khuẩn đặt tên Bacteriophage, sau thường gọi tắt phage

Năm 1935, W.M Stanley lần tách biệt kết tinh virus khảm thuốc Từ năm 1940 trở kính hiển vi điện tử hoàn thiện dần cho phép quan sát hình dạng thành phần cấu trúc virus

II NHỮNG ĐẶC ĐIỂM CỦA VIRUS

Virus tác nhân nhiễm trùng nhỏ (đường kính từ 20 - 300 nm ) lọt qua lọc vi khuẩn, có cấu tạo đơn giản Virus đại phân tử nucleoprotein có đặc tính sinh vật, khơng có khả tự sinh sản, khơng có cấu tạo tế bào, khơng có q trình trao đổi chất coi chúng trung gian chất sống chất vô sinh

Virus khác biệt với vi sinh vật khác đặc điểm sau đây:

- Virus chứa loại axit nucleic nhất: ADN ARN, không chứa đồng thời loại axit nhân

- Virus sinh sản cách chép từ vật liệu di truyền chúng, không phân chia cách phân đôi vi khuẩn

- Virus ký sinh bắt buộc tế bào sống, chúng dựa vào nguồn lượng máy tế bào (ví dụ ribosome, ARN vận chuyển ) để tổng hợp protein

- Virus tổng hợp thành phần chúng cách riêng rẽ sau tự lắp ráp với để tạo thành hạt virus

- Virus không nhạy cảm với kháng sinh thông thường

III KÍCH THƯỚC, HÌNH THỂ VÀ CẤU TRÚC CỦA VIRUS

Virus có kích thước nhỏ bé, qua lọc vi khuẩn Chính mà quan sát thấy virus qua kính hiển vi điện tử

Đơn vị đo kích thước virus nanomet (nm) nm =1/1000 micromet

Mỗi loại virus có kích thước định (từ 20-300 nm) không thay đổi suốt trình phát triển

2 Hình thể

Phần lớn virus có hình thể định, đặc trưng cho loài virus Một số loại hình thể virus thường gặp:

-Hình cầu : virus cúm, sởi, bại liệt

-Hình khối đa diện : Adenovirus, Papovavirus. -Hình que : virus khảm thuốc

-Hình viên gạch : virus đậu mùa

-Hình dùi trống (đinh ghim): phage T2 E.coli

3 Cấu trúc

Virus có cấu trúc đơn giản, khơng có cấu tạo tế bào Tất hạt virus có hai thành phần bản: axit nucleic thành phần mang mật mã di truyền virus capsid vó protein bao quanh axit nucleic Lõi axit nucleic capsid hợp lại tạo thành nucleocapsid Đối với số virus, nucleocapsid bao quanh vó lipit hay lipoprotein gọi bao ngồi (envelope peplos)

3.1 Axit nucleic virus

Mỗi hạt virus có hai loại axit nucleic ADN ARN Axit nucleic nằm hạt virus tạo thành lõi hay hệ gen virus

Phân tử ADN virus phần lớn dạng ADN sợi có số dạng ADN sợi như Parvoviridae Phân tử ARN virus đa số dạng ARN sợi, trừ số dạng ARN 2 sợi Reoviridae.

Các axit nucleic chiếm 1-2% trọng lượng phân tử hạt virus có chức đặc biệt quan trọng :

- Axit nucleic mang toàn mã thông tin di truyền đặc trưng cho virus - Axit nucleic định khả gây nhiễm trùng virus tế bào cảm thụ - Axit nucleic định chu kỳ nhân lên virus tế bào cảm thụ

- Axit nucleic mang tính kháng nguyên đặc hiệu virus 3.2 Capsid

Capsid cấu trúc bao quanh lõi axit nucleic Bản chất hóa học capsid protein Capsid cấu tạo đơn vị hình thái gọi capsomer bao gồm phân tử protein có xếp đặc trưng cho loại virus Các capsomer xếp theo trật tự không gian xác định tạo nên kiểu đối xứng capsid : đối xứng xoắn đối xứng khối đối xứng phức hợp

Capsid virus có chức sau đây:

- Vó protein có tác dụng bảo vệ axit nucleic virus - Protein capsid mang tính kháng nguyên đặc hiệu virus

- Capsid đóng vai trị quan trọng giai đoạn bám xâm nhập tế bào virus - Capsid giữ cho hình thể kích thước virus luôn ổn định

Các virus Herpesviridae, Flaviviridae, Orthomyxoviridae, Paramyxoviridae, cịn có thêm lớp vỏ bao bọc ngồi capsid gọi envelope peplos Bản chất hóa học vỏ phức hợp lipid, protein gluxit Vỏ ngồi có nguồn gốc từ màng bào tương màng nhân cùa tế bào chủ bị virus cải tạo mang tính kháng nguyên đặc hiệu cho virus Vỏ ngồi có thề bị dung mơi hịa tan lipid (như ether, muối mật , ) phá hùy

Vỏ ngồi virus có chức :

- Tham gia vào bám virus vào tế bào cảm thụ

- Tham gia vào giai đoạn lắp ráp giải phóng virus khỏi tế bào sau chu kỳ nhân lên

Những virus khơng có vỏ gọi virus trần 3.4 Gai protein

Trên vỏ ngồi số virus có mấu gai protein lồi lên có chức riêng biệt ngưng kết hồng cầu tố enzyme neuraminidase hoạt động

3.5 Một số enzyme

Virus khơng có hệ enzyme chuyển hóa hồn chỉnh vi khuẩn, thành phần cấu trúc số virus có vài loại protein có hoạt tính enzyme Phổ biến polymerase ARN polymerase, ADN polymerase, ADN polymerase phụ thuộc ARN (enzyme chép ngược)

4 Virion

Hạt virus hồn chỉnh có khả gây nhiễm trùng cho tế bào cảm thụ gọi virion Tùy theo lồi virus, virion có capsid trần capsid có vỏ ngồi

5 Pseudovirion

Hạt virus nhận vật liệu di truyền tế bào chủ trình chép thay cho axit nucleic virus gọi pseudovirion Những hạt pseudovirion quan sát kính hiển vi điện tử chúng giống hệt virion bình thường, chúng khơng có hoạt tính nhiễm trùng khơng thể nhân lên Các hạt có khả chuyển gen tế bào từ tế bào chủ đến tế bào chủ khác

6 Viroid

IV PHÂN LOẠI VIRUS

Có nhiều cách để phân loại virus Hiện việc phân loại virus dựa theo tiêu chuẩn sau đây:

- Loại axit nucleic (ADN ARN) cấu trúc chúng (số sợi) - Đối xứng capsid

- Có khơng có vỏ ngồi (envelope) - Cấu trúc gen virus

- Đường kính số lượng capsomer virus - Các enzyme

- Nhạy cảm với ether - Tính kháng nguyên - Triệu chứng học

Căn vào tiêu chuẩn để chia virus thành họ ( viridae), giống ( virus), loài type virus

Theo phân loại nay, virus người động vật có xương sống chia thành 22 họ khác nhau: họ virus chứa ADN 14 họ virus chứa ARN

Các họ virus chứa ADN gồm có:

- Parvoviridae - Iridoviridae - Polyomaviridae - Poxviridae

- Papillomaviridae - Hepadnaviridae - Adenoviridae - Herpesviridae

Các họ virus chứa ARN gồm có:

- Reoviridae - Paramyxoviridae - Picornaviridae - Rhabdoviridae - Astroviridae - Filoviridae

- Caliciviridae - Arenaviridae

- Togaviridae - Coronaviridae - Flaviviridae - Bunyaviridae

- Orthomyxoviridae - Retroviridae

V SỰ NHÂN LÊN CỦA VIRUS

Virus khơng có q trình trao đổi chất, khơng có khả tự nhân lên ngồi tế bào sống Vì nhân lên virus thực tế bào sống nhờ vào trao đổi chất tế bào chủ Điều cho thấy tính ký sinh virus tế bào sống bắt buộc

Sự nhân lên virus q trình phức tạp, axit nucleic virus giữ vai trò chủ đạo truyền đạt thông tin di truyền chúng cho tế bào chủ Virus hướng trình trao đổi chất tế bào chủ sang việc tổng hợp hạt virus

Nói chung q trình nhân lên virus tế bào chia thành giai đoạn : Hấp phụ Xâm nhập Tổng hợp thành phần cấu trúc Lắp ráp Giải phóng

1 Sự hấp phụ virus vào bề mặt tế bào

thụ với chúng Ví dụ virus cúm gây nhiễm tế bào biểu mô đường hô hấp trên, virus HIV xâm nhập tế bào bạch huyết gọi tế bào lympho CD4

2 Sự xâm nhập virus vào tế bào

Các virus động vật sau gắn vào thụ thể đặc hiệu bề mặt tế bào cảm thụ xâm nhập vào tế bào theo chế ẩm bào Khi lọt vào tế bào, capsid virus enzyme cởi vỏ (decapsidase) tế bào phân hủy, giải phóng axit nucleic virus Đó giai đoạn “cởi áo”

Đối với phage, sau hấp phụ lên bề mặt tế bào bao co rút, lõi bên chọc thủng màng tế bào bơm axit nucleic vào tế bào cịn casid nằm lại bên ngồi

3 Sự tổng hợp thành phần cấu trúc virus

Ngay sau axit nucleic virus giải phóng, virus bị khả lây nhiễm vào giai đoạn tiềm ẩn, giai đoạn không thấy virus tế bào Đây giai đoạn virus truyền đạt thông tin di truyền cho tế bào chủ bắt tế bào chủ chuyển hướng hoạt động sang việc tổng hợp thành phần virus Trước hết, axit nucleic virus nhân lên, sau protein virus tổng hợp Các axit nucleic virus xác định tính đặc hiệu protein Như cấu trúc kháng nguyên virus không bị phụ thuộc vào tế bào chủ mà axit nucleic virus định Cơ chế nhân lên ADN ARN virus có khác Dưới ví dụ ba loại virus có ba loại axít nucleic khác nhau:

- Ở virus chứa ADN hai sợi: thông tin di truyền virus chép từ ADN sang ARN thông tin nhờ ARN polymerase phụ thuộc ADN Các ARN thông tin virus đóng vai trị truyền tin để tạo ADN protein virus

- Ở virus chứa ARN sợi dương: thông tin di truyền virus mã hóa phân tử ARN chép sang ARN bổ sung nhờ có ARN polymerase phụ thuộc ARN từ chúng làm khuôn mẫu để tạo ARN virus Đồng thời ARN virus đóng vai trị ARN thông tin để tổng hợp nên protein virus

- Ở virus chứa ARN có enzyme chép ngược: thông tin di truyền mã hóa ARN virus chép ngược để tạo ADN trung gian nhờ có enzyme chép ngược (reverse transcriptase; ADN polymerase phụ thuộc ARN).Từ ADN trung gian mã thông tin di truyền virus chép sang ARN thơng tin, từ chúng tiếp tục chép để tổng hợp ARN virus protein virus

4 Sự lắp ráp thành phần virus

Sau thành phần virus tổng hợp tích lũy phong phú tế bào chủ bắt đầu trình lắp ráp Hình chế lắp ráp thành phần virion xảy tự phát kết tương tác phân tử đặc biệt cao phân tử capsid với axit nucleic virus để tạo thành virion

Việc lắp ráp tạo virus hoàn chỉnh (các virion) lắp ráp sai tạo virus khơng hồn chỉnh (hạt DIP) tạo virus giả (Pseudovirion)

5 Sự giải phóng hạt virus khỏi tế bào

Virus thoát khỏi tế bào chủ theo nhiều kiểu khác tùy theo loài virus

Nhiều virus giải phóng theo kiểu phá vỡ màng tế bào làm hủy hoại tế bào virus đồng loạt phóng thích Hoặc giải phóng nhờ xuất bào (exocytosis) qua rãnh đặc biệt mà không làm hủy hoại tế bào chủ

Thời gian nhân lên virus thường ngắn nhiều so với vi khuẩn.Ví dụ từ virus ban đầu, tế bào bị nhiễm virus cúm tạo hàng nghìn virus sau khoảng - giờ

VI HẬU QUẢ CỦA SỰ NHÂN LÊN CỦA VIRUS TRONG TẾ BÀO

Khi virus xâm nhập nhân lên tế bào để tạo hệ virus gây nhiều hậu khác tùy thuộc vào bàn chất sinh học tế bào virus

1.Tế bào bị hủy hoại

Sau virus xâm nhập nhân lên tế bào hầu hết tế bào bị phá hủy Do hoạt động bình thường tế bào bị ức chế , chất cần thiết cho tế bào không tổng hợp mà tổng hợp hạt virus tế bào bị chết Đây trường hợp hay gặp

Ở nuôi cấy tế bào in vitro thấy tế bào bị nhiễm virus biến dạng, dính lại với nhau, ly giải

2 Tế bào bị tổn thương nhiễm sắc thể

Virus làm cho nhiễm sắc thể tế bào chủ bị gãy, bị phân mảnh, bị đảo lộn trật tự xếp gây hậu như:

2.1 Dị tật bẩm sinh, thai chết lưu

Ở phụ nữ có thai, đặc biệt ba tháng đầu thời kỳ mang thai, mà bị nhiễm virus làm sai lệch nhiễm sắc thể dẫn tới số thiếu hụt bẩm sinh trình hình thành bào thai gây trạng thái nhiễm virus cho bào thai

2.2 Tế bào tăng sinh vô hạn tạo khối u

Các tế bào bị nhiễm số loại virus (chủ yếu virus gây khối u) có tượng ức chế tiếp xúc tế bào sinh sản nên tạo đám tế bào chồng chất lên

3 Tạo tiểu thể đặc trưng cho virus khác nhau

Trong tế bào nhiễm virus xuất thể vùi trongnhân (Adenovirus ), bào tương (tiểu thể Negri virus dại ), hai nơi (virus sởi ) Bản chất tiểu thể tích tụ virion thành phần virion hạt phản ứng tế bào nhiễm virus

Các tiểu thể nhuộm soi thấy kính hiển vi quang học dựa vào chẩn đốn gián tiếp nhiễm virus tế bào

4 Tạo hạt virus khơng hồn chỉnh (DIP: Defective interfering particles)

Hạt virus khơng hồn chỉnh virus có capsid, khơng có có khơng hồn chỉnh axit nucleic Do hạt DIP khơng có khả nhân lên độc lập vào tế bào, có nghĩa hạt DIP khơng có khả gây nhiễm trùng cho tế bào Những hạt DIP giao thoa đặc hiệu với virus đồng chủng

5 Các hậu tích hợp genom virus vào ADN tế bào chủ

Axít nucleic virus tích hợp vào ADN tế bào chủ dẫn tới hậu khác nhau:

- Chuyển thể tế bào (transformation) gây nên khối u ung thư - Làm thay đổi kháng nguyên bề mặt tế bào

- Làm thay đổi số tính chất tế bào - Tế bào trở thành tế bào sinh tan

Interferon glycoprotein có trọng lượng phân tử khoảng 17.000 - 25.000 Daltons tế bào tổng hợp sau bị kích thích chất cảm ứng sinh interferon virus chất cảm ứng khác

Có loại Interferon: Interferon-alpha, interferon-beta interferon-gama Các loại phân biệt kháng thể đặc hiệu Interferon-alpha thường tế bào bạch cầu sinh Interferon-beta sản xuất nguyên bào sợi Interferon-gama lymphokin tế bào lympho T sinh

Một số tính chất interferon: - Tính kháng nguyên yếu

- Xuất sớm (vài ) sau kích thích chất cảm ứng

-Tính chất chống virus interferon mang tính đặc hiệu lồi nhưngkhơng đặc hiệu với virus: Interferon tế bào lồi sinh có tác dụng ức chế nhân lên virus tế bào lồi (ví dụ có interferon sản xuất từ tế bào có nguồn gốc từ người có tác dụng bảo vệ cho người) Trái lại, interferon có phổ tác dụng rộng ức chế nhân lên nhiều loại virus khác với virus cảm ứng sinh interferon

- Interferon không tác động trực tiếp lên virus kháng thể mà phản ứng ức chế nhân lên virus xảy bên tế bào

Cơ chế sinh interferon tế bào:

Ở tế bào người có 15 gen khác mã hóa cho interferon-alpha, có gen mã hóa cho interferon-beta gen mã hóa cho interferon-gama Bình thưịng gen trạng thái ức chế không hoạt động Các chất cảm ứng sinh interferon có tác dụng giải ức chế cho gen làm cho chúng trở lại dạng hoạt động tế bào tổng hợp Interferon Chất cảm ứng quan trọng gen alpha beta virus, gen gama chất hoạt hóa lympho bào T Hai loại alpha interferon-beta có tác dụng chống virus mạnh so với interferon-gama Các interferon-gama có tác dụng điều hịa miễn dịch ức chế tế bào ung thư mạnh interferon-alpha interferon-beta

Cơ chế tác dụng chống virus interferon:

Interferon gắn vào thụ thể đặc hiệu dành cho interferon bề mặt màng tế bào, gây giải ức chế số gen mã hóa protein ức chế virus Dưới tác dụng kích thích interferon có gen tế bào hoạt hóa để tổng hợp enzyme là: elF2 kinase 2’, 5’-oligoadenylate synthetase elF2

yếu tố khởi động cần thiết cho việc gắn

ARN thông tin vào ribosome; elF2kinase phosphoryl hóa yếu tố elF2 làm bất hoạt elF2 ngăn cản tổng hợp protein virus Oligoadenylate có tác dụng hoạt hóa ribonuclease tế bào để phân hủy ARN thông tin virus, ức chế tổng hợp protein virus

Như vậy, interferon thể tác dụng chống virus tế bào sống thực chất kích thích tế bào dùng chế enzyme để phân hủy ARN thông tin virus ức chế tổng hợp protein virus

VII KHẢ NĂNG GÂY BỆNH

Virus có khả gây bệnh cho người Một virus gây nhiều hội chứng khác ngược lại hội chứng nhiều virus khác gây

Nhiễm virus chia làm hai loại tùy theo thời gian cư trú virus thể:

1 Tác động virus lên thể xảy thời gian ngắn

- Nhiễm virus cấp tính: có đặc điểm thời gian ủ bệnh ngắn( từ vài ngày đến vài tuần lễ ) sau triệu chứng đặc trưng cho tác nhân gây bệnh phát triển Nhiễm virus cấp kết thúc khỏi hồn tồn, phần, tử vong.Trong trinh hồi phục virus bị thải trừ

- Nhiễm virus không biểu lộ: nhiễm virus khơng có triệu chứng, virus thể thời gian ngắn thải trừ nhanh Xác minh có virus thể nhờ phát hiệu giá kháng thể huyết

2 Tác động kéo dài virus thể

Cả bốn hình thái nhiễm trùng loại có đặc điểm trạng thái mang virus kéo dài:

- Nhiễm virus tồn dai dẵng: virus tồn dai dẵng triệu chứng có kèm theo thải virus mơi trường chung quanh Hình thái hình thành sau bình phục sức khỏe Nó đóng vai trị quan trọng dịch tể nguy trực tiếp gây nhiễm mơi trường Ví dụ bệnh viêm gan B

- Nhiễm virus tiềm tàng: virus tồn dai dẵng, khơng có triệu chứng không thải virus môi trường xung quanh Trong nhiễm virus tiềm tàng virus dạng tiền virus, axit nucleic virus tích hợp vào gen tế bào chủ Trong vài trường hợp ảnh hưởng hay nhiều tác nhân chấn thương, stress, giảm miễn dịch, v.v , tiền virus hoạt hóa chuyển sang trạng thái nhân lên, gây bệnh cấp tính cho thể Ví dụ bệnh herpes

- Nhiễm virus mạn tính: virus tồn dai dẵng có kèm theo vài triệu chứng lúc ban đầu, sau tổn thương bệnh lý tiếp tục phát triển khỏang thời gian dài Đặc điểm tiến triển nhiễm virus mạn tính có thời kỳ sức khỏe bệnh nhân lên, bệnh thuyên giảm, xen kẽ với nhữnhg giai đoạn bệnh bùng phát, kéo dài vài tháng có năm

VIII NI CẤY VIRUS

Virus động vật ni cấy hệ thống tế bào sống bao gồm động vật cảm thụ, phôi gà tế bào nuôi ống nghiệm (in vitro)

1 Động vật thí nghiệm cảm thụ

Trước kỹ thuật phơi gà ni cấy tế bào phát minh tiêm nhiễm động vật phương pháp để ni cấy virus Mỗi lồi virus có vài động vật cảm thụ riêng Ví dụ Arbovirus, động vật thí nghiệm cảm thụ thường sử dụng chuột nhắt trắng đẻ

Tùy theo loài virus sử dụng động vật cảm thụ khác chuột nhắt bú, chuột nhắt, chuột lang, thỏ, khỉ đường gây nhiễm khác nhau: tiêm, uống, nhỏ mũi, mắt

Hiện động vật sử dụng để sản xuất vaccine phân lập số virus mà động vật thí nghiệm vật chủ nhạy cảm vật chủ chọn lưạ

2.Phôi gà

Thường dùng trứng gà ấp 9-12 ngày, lúc phơi tạo thành, khoang ối khoang niệu phát triển đầy đủ

Tùy theo mục đích : phân lập, thử nghiệm, sản xuất vaccine tùy theo lồi virus, tiêm nhiễm vào màng niệu đệm (virus đậu mùa, đậu vaccine, Herpesvirus),vào khoang ối (virus cúm, quai bị), vào khoang niệu (virus cúm, quai bị , virus Newcastle)

3 Nuôi cấy tế bào

Xử lý mô trypsin để tách rời tế bào nuôi tế bào ống nghiệm có chứa mơi trường ni đặc biệt Tế bào phát triển thành lớp tế bào đặn bám vào mặt cuả ống nghiệm gọi nuôi cấy tế bào lớp

Các loại tế bào thường dùng nuôi cấy virus:

- Tế bào nguyên phát: tế bào có nguồn gốc từ mô động vật, thực vật hay côn trùng nuôi cấy thành lớp tế bào ống nghiệm thường dùng để nuôi cấy phân lập virus Các tế bào nguyên phát có đặc điểm sử dụng lần, cấy truyền nhiều lân Những mô thường dùng để sản xuất tế bào nguyên phát thận khỉ, thận bào thai người, thận chuột đồng, mô phôi gà v.v

- Tế bào thường trực: có nguồn gốc từ mơ đơng vật, thực vật hay côn trùng cấy truyền nhiều lần mà khơng bị thối hố Các tế bào thường trực thường dùng tế bào Hela, Hep-2, Vero, C6 / 36,

BACTERIOPHAGE Mục tiêu học tập

1 Trình bày hình thái cấu trúc phage. 2 Nêu mối quan hệ phage vi khuẩn túc chủ.

Bacteriophage thường gọi tắt phage Twort phát Tụ cầu năm 1915 sau d’Herelle phát vi khuẩn lỵ Phage virus có khả xâm nhiễm vi khuẩn Mỗi vi khuẩn vật chủ nhiều phage Phage sử dụng để khảo sát liên hệ ký sinh vật chủ, nhân lên virus, vận chuyển yếu tố di truyền nghiên cứu sinh học phân tử

I HÌNH THÁI VÀ CẤU TRÚC CỦA PHAGE

Những phage khảo sát nhiều phage xâm nhiễm E.coli Hình thái phage kính hiển vi điện tử trơng giống hình thái tinh trùng gồm có đầu

Đầu có cấu trúc đối xứng hình khối, capsid hợp nhiều capsomer kết hợp thành cấu trúc hình lăng trụ, thơng thường có thiết diện thẳng hình cạnh Bên đầu chứa axit nucleic Phần lớn phage chứa ADN sợi, có phage chứa ADN sợi Những phage chứa ARN sợi tìm thấy

Đi có cấu trúc dạng hình xoắn Ở phage T2 đỉnh đầu kéo dài thành

đi dài 95 nm Nó hợp phần lồng vào nhau: ống bên cứng đường kính nm thơng với đầu, vỏ bên ngồi hình xoắn đường kính 20 nm co rút theo chiều dọc lò xo Tận góc góc có sợi đính vào Phần tận tạo nên hệ thống phage bám vào bề mặt vi khuẩn

II MỐI QUAN HỆ GIỮA PHAGE VÀ VI KHUẨN TÚC CHỦ

1 Phage độc lực phage ôn hòa

Lúc gặp vi khuẩn cảm thụ, phage hấp phụ lên bề mặt vi khuẩn axit nucleic bơm vào bên Axit nucleic cung cấp mã di truyền để tế bào vi khuẩn cho tổng hợp axit nucleic đơn vị protein capsid phage Các thành phần tự lắp ráp để hình thành phage Vi khuẩn bị ly giải phage tự phóng thích Đó phage độc lực

Nhiều phage gọi phage ơn hịa lúc xâm nhiễm vi khuẩn axit nucleic phage tích hợp vào nhiễm sắc thể vi khuẩn Trong trình phân bào axit nucleic phage chép đồng thời với nhiễm sắc thể vi khuẩn Ở dạng tích hợp axit nucleic phage gọi prophage Vi khuẩn chứa prophage nhiễm sắc thể gọi vi khuẩn sinh tan Sau số lần phân bào prophage tách rời khỏi nhiễm sắc thể trở thành phage độc lực Nó cho tổng hợp phage con, làm tan vi khuẩn phóng thích phage độc lực

Cũng có trường hợp vi khuẩn sinh tan prophage trở thành vi khuẩn bình thường

2 Hệ thống sinh tan

Những phage ơn hịa khơng ly giải vi khuẩn mà chúng nhiễm chép đồng thời với vi khuẩn nhiều hệ

Hệ thống sinh tan có đặc điểm sau : 2.1 Miễn dịch

Lúc vi khuẩn mang prophage trở nên miễn dịch với phage tương ứng Phage hấp phụ bị loại khỏi tế bào lúc phân bào Những phage ôn hòa làm xuất tế bào chất trấn áp ức chế nhân lên phage phong tỏa tách rời phage 2.2 Sự cảm ứng

Những vi khuẩn sinh tan cảm ứng nhiều cách khác để phóng thích phage độc lực, ví dụ : ảnh hưởng tia cực tím phần lớn vi khuẩn sinh tan phóng thích phage Cũng có số trường hợp prophage tự động tách rời nhiễm sắc thể trở thành phage sinh dưỡng

2.3 Đột biến thành độc lực

Hậu nhiễm phage vi khuẩn xác định cạnh tranh chép phage tạo thành chất trấn áp Nếu trình chép tiến xa trước xuất chất trấn áp vi khuẩn bị ly giải Nếu chất trấn áp xuất sớm vi khuẩn sóng sót trở nên sinh tan

Phage ơn hịa đột biến thành phage độc lực Hai type biến chủng quan sát Trong type thứ đột biến làm cho phage đề kháng với chất trấn áp, type thứ phage khả tạo thành chất trấn áp

3 Phương pháp khảo sát phage

Vì tất virus phage nhân lên tế bào sống Vì kích thước không cho phép quan sát trực tiếp kính hiển vi điện tử nên cần thiết theo dõi hoạt động chúng phương tiện gián tiếp Trong mục đích người ta sử dụng kiện hạt phage cho vào lớp vi khuẩn phân chia thạch dinh dưỡng tạo nên vùng phân giải sáng film mờ đục vi khuẩn phát triển Vùng phân giải gọi “plaque”; tạo thành tế bào vi khuẩn bị nhiễm phage phân giải phóng thích nhiều hạt phage mới, phage liền xâm nhiễm tế bào vi khuẩn kế cận Qua trình lặp lại phát triển vi khuẩn dĩa thạch ngừng lại hết thức ăn tích tụ phẩm vật độc Lúc thao tác khéo léo, hạt phage tạo nên plaque Mọi vật liệu chứa phage định lượng cách pha lỗng thích hợp cho vào dĩa thạch dinh dưỡng mọc dày đặc vi khuẩn nhạy cảm Đếm plaque tương tự đếm khuẩn lạc định lượng vi khuẩn

III ỨNG DỤNG CỦA BACTERIOPHAGE

1 Ưng dụng nghiên cứu sinh học phân tử

Phage dùng làm phương tiện vận chuyển gen nghiên cứu sinh học phân tử, nhiều phage sử dụng để nghiên cứu di truyền vi khuẩn Sự chuyển nạp trình vận chuyển gen vi khuẩn qua trung gian phage Một vài chủng phage ví dụ phage P22 có

thể vận chuyển gen vi khuẩn, chuyển nạp tổng quát Trong chuyển nạp đặc hiệu, số phage đặc hiệu ví dụ phage  vận chuyển số gen vi khuẩn cho sang vi khuẩn nhận

2 Ưng dụng chẩn đoán vi khuẩn dịch tễ học

Phage sử dụng để định type phage vi khuẩn Mỗi lồi vi khuẩn gồm nhiều type phage khác chất receptor vi khuẩn phage khác Người ta chọn số phage Trong phage, phage làm li giải type phage loài vi khuẩn Việc định type phage có giá trị chẩn đốn vi khuẩn dịch tễ học

Phage ơn hịa  tích hợp vào nhiễm sắc thể vi khuẩn bạch hầu; trạng thái sinh tan vi khuẩn bạch hầu tạo thành độc tố

3 Ứng dụng khác

PHÒNG NGỪA VÀ ĐIỀU TRỊ BỆNH VIRUS Mục tiêu học tập

1.Trình bày biện pháp phòng ngừa tiếp xúc với tác nhân nhiễm trùng.

2 Trình bày phương pháp phòng ngừa điều trị liệu pháp miễn dịch đặc hiệu. 3.Trình bày phương pháp phịng ngừa điều trị liệu pháp hoá học.

I PHÒNG NGỪA SỰ TIẾP XÚC VỚI TÁC NHÂN NHIỄM TRÙNG

Các biện pháp phòng ngừa như: cải thiện vệ sinh, cải thiện nguồn nước sinh hoạt, cách ly bệnh nhân, khử trùng tiệt trùng dụng cụ môi trường, diệt tác nhân trung gian truyền bệnh áp dụng thích hợp bệnh, vụ dịch

Những biện pháp kể góp phần đáng kể để giải bệnh virus, việc thực đòi hỏi nhiều công sức tiền Biện pháp diệt tác nhân trung gian truyền bệnh biện pháp phòng dịch hữu hiệu

II PHÒNG NGỪA VÀ ĐIỀU TRỊ BẰNG LIỆU PHÁP MIỄN DỊCH ĐẶC HIỆU Liệu pháp miễn dịch nhằm làm tăng cường miễn dịch bảo vệ đặc hiệu thể thành phần virus Bao gồm liệu pháp miễn dịch chủ động chủng ngừa vaccine chống virus liệu pháp miễn dịch thụ động tiêm globulin miễn dịch

1 Liệu pháp miễn dịch chủ động

Các vaccine chống virus, tất loại vaccine, dưạ kích thích chủ động hệ thống miễn dịch cách đưa vào thể kháng nguyên tác nhân nhiễm trùng làm khả gây bệnh cho người, làm cho thể tự tạo tình trạng miễn dịch chống lại tác nhân gây bệnh Tình trạng miễn dịch mà thể có sau sử dụng vaccine kết đáp ứng miễn dịch thành phần kháng nguyên có vaccine

Việc sử dụng vaccine để phòng bệnh phương thức chủ yếu để làm giảm tỷ lệ mắc tỷ lệ tử vong nhiễm trùng virus Các vaccine virus sử dụng bao gồm virus sống làm giảm độc lực, virus bị bất họat, thành phần cấu trúc virus Các thành phần cấu trúc virus chế tạo nhờ kỹ thuật tái tổ hợp ADN thu từ virion

1.1 Vaccine bất hoạt (còn gọi vaccine chết )

Loại vaccine sản xuất cách làm bất hoạt virus tác nhân lý hóa nhiệt, formol, beta propiolacton tia cực tím Như vậy, loại vaccine bao gồm virion tinh khiết bị giết chết, khả gây nhiễm trùng, khả gây bệnh

Vaccine bất hoạt gây nên đáp ứng miễn dịch tốt lúc tiêm đủ liều lượng, thời gian Nó chủng ngừa cho đối tượng bị suy giảm miễn dịch phụ nữ có thai

Vaccine bất hoạt thường không gây miễn dịch lâu bền so với vaccine sống giảm độc lực thưịng phải tiêm nhiều lần để trì miễn dịch Loại vaccine kích thích thể tiết IgG IgM kháng virus máu Vì ngăn cản xâm nhập virus hoang dại vào niêm mạc đường tiêu hóa hơ hấp, chống lại nhiễm trùng giai đoạn nhiễm virus máu có nhiễm trùng lan tỏa

Một dạng khác vaccine bất hoạt (Subunit (Subvirion) vaccine) bao gồm thành phần kháng nguyên quan trọng phương diện sinh miễn dịch virion tinh khiết làm bất hoạt Ví dụ loại vaccine viêm gan B điều chế từ HBsAg có huyết tương người nhiễm kháng nguyên

1.2 Vaccine sống giảm độc lực

Loại vaccine chứa virus đột biến phần lớn độc lực chúng người Virus vaccine gây miễn dịch không gây bệnh người chúng nhân lên có giới hạn người chủng vaccine

Để sản xuất loại vaccine cần phải sử dụng chủng virus khơng có khả gây bệnh ( khác với chủng virus độc lực hoang dại )nhưng đồng kháng nguyên gần giống với virus hoang dại gây bệnh cấu trúc kháng nguyên

Đặc trưng chủ yếu cúa vaccine sống giảm độc lực tạo thể trình giống trình nhiễm trùng tự nhiên, kích thích thể đáp ứng miễn dịch toàn thể miễn dịch chổ, miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào Đặc biệt kích thích đường vào virus vaccine thể tạo đáp ứng miễn dịch bảo vệ chổ mà chủ yếu tiết IgA chống virus Ví dụ cho trẻ em uống vaccine bại liệt sống giảm độc lực (vaccine Sabin) tạo miễn dịch chổ niêm mạc đường tiêu hóa có tác dụng phịng ngừa xâm nhập sau virus bại liệt hoang dại vào ống tiêu hóa

Những vaccine cịn có ưu điểm gây miễn dịch mức độ cao tồn thời gian dài, thường tiêm chủng lần dùng đường uống

Tuy nhiên điều cần lưu ý đặc biệt tính an tồn vaccine sống phải đảm bảo khơng cịn khả gây bệnh gây bệnh nhẹ chủng virus vaccine phải có tính di truyền ổn định khơng đột biến trở lại độc lực ban đầu

Các vaccine virus sống giảm độc lực cho phép sử dụng người gồm có vaccine bại liệt (vaccine Sabin), vaccine sởi, vaccine quai bị, vaccine Rubella, vaccine thủy đậu, vaccine sốt vàng, v.v

1.3 Vaccine tái tổ hợp

Một loại vaccine tái tổ hợp gồm thành phần virus sản xuất kỹ thuật tái tổ hợp ADN Ví dụ vaccine viêm gan B tái tổ hợp ADN điều chế công nghệ sinh học phân tử công nghệ di truyền

1.4 Một số vaccine phòng bệnh virus dùng Việt Nam 1.4.1.Vaccine phòng bệnh bại liệt

Vaccine phòng bệnh bại liệt dùng Việt Nam thuộc loại vaccine sống giảm độc lực, dạng nước để uống, có tên vaccine Sabin gồm týp virus Sabin: týp 1, týp 2, týp 3, Trung tâm khoa học - sản xuất vaccine Sabin nước ta sản xuất Vaccine Sabin tạo miễn dịch cho trẻ tuổi: uống liều vào tháng 2, 3, sau sinh Mỗi liều giọt ( tương đương 0, ml ) Tạo miễn dịch bổ sung cho trẻ em từ - tuổi cách năm uống liều cách tháng chiến dịch uống vaccine phòng bại liêt

1.4.2 Vaccine phòng bệnh sởi

Vaccine sởi dùng nước ta nhập từ nước ( Pháp, Canada, Nhật, Ấn độ ).Vaccine sởi vaccine sống giảm độc lực, dạng đông khô Khi dùng, vaccine đông khô pha với nước cất để tiêm da vùng cánh tay với liều 0, ml cho trẻ tháng đến 11 tháng tuổi

Hiện nhiều nước Mỹ , Bỉ, Pháp, Ấn Độ, vaccine phòng bệnh sởi sản xuất dạng vaccine tam liên phòng bệnh Sởi - Quai bị - Rubella, có biệt dược M - M -R Đây vaccine sống giảm độc lực, đông khô, tiêm da bắp thịt với liều 0,5ml cho trẻ em khoảng 12 tháng đến 15 tháng tuổi

1.4.3 Vaccine phòng bệnh viêm gan B

Vaccine phòng bệnh viêm gan B dùng Việt Nam sản xuất Viện Vệ sinh Dịch tể (Hà Nội) nhập từ nước Bỉ, Mỹ, Hàn Quốc, Vaccine viêm gan B có loại : loại thứ (thế hệ 1) sản xuất từ kháng nguyên bề mặt (HBsAg) virút viêm gan B có huyết tương người lành Loại thứ (thế hệ 2) sản xuất từ HBsAg tạo nhờ công nghệ ADN tái tổ hợp thực tế bào nấm men Vaccine viêm gan B dạng nước để tiêm phòng bệnh cho đối tượng bao gồm trẻ sơ sinh, trẻ lớn, người khỏe mạnh, người có nguy cao nhiễm virus viêm gan B Cách dùng vaccine viêm gan B theo dẫn nhà sản xuất vaccine nước

1.4.4 Vaccine phòng bệnh viêm não Nhật Bản

Vaccine phòng bệnh viêm não Nhật sản xuất Viện Vệ sinh Dịch tể (Hà Nội) nhập từ nước (Nhật bản, Hàn quốc, ) Đây loại vaccine virus bất hoạt, dạng nước, tiêm da với liều 0,5ml trẻ tuổi, với liều 1ml trẻ từ tuổi trở lên

- Tạo miễm dịch cách tiêm liều: + Liều thứ nhất: vào thời điểm chọn tiêm + Liều thứ hai: Sau liều thứ từ - tuần + Liều thứ ba: Sau liều thứ năm Nên tiêm trước tháng có dịch

- Tiêm nhắc lại :

+ Mỗi năm tiêm liều vùng có dịch viêm não lưu hành Nên tiêm vào tháng gần trước tháng phát dịch

+ Bốn năm tiêm liều vùng khơng có dịch viêm não lưu hành 1.4.5.Vaccine phòng bệnh dại cho người

Có loại vaccine phịng bệnh dại cho người dùng nước ta:

- Vaccine dại Fuenzalida Việt Nam sản xuất, dạng đông khô dạng nước, tiêm da mũi cách nhật :

Dưới 15 tuổi: liều tiêm 0,1ml

Không dùng thuốc ức chế miễn dịch ACTH, corticoid thời gian tháng kể từ tiêm vaccine phòng dại

- Vaccine dại Verorab Pháp sản xuất tế bào Vero, dạng đông khô, tiêm da bắp thịt liều,mỗi liều 0,5ml vào ngày: ngày (thời điểm chọn tiêm), ngày 3, ngày 7, ngày 14, ngày 30 Tùy ý tiêm nhắc lại liều 0,5ml vào ngày 90

Vaccine dại cần tiêm sớm cho nạn nhân bị chó (hoặc mèo) cắn, sau xử lý chổ vết cắn

Các vaccine thường sử dụng để phịng bệnh tiêm vaccine thời kỳ ủ bệnh để điều trị bệnh virus Đối với bệnh có thời kỳ ủ bệnh dài bệnh dại việc tiêm vaccine tỏ hữu hiệu thực bị nhiễm virus

2 Liệu pháp miễn dịch thụ động

Thường sử dụng globulin miễn dịch bào chế từ huyết người chia làm loại:

- Globulin miễn dịch bình thường hay cịn gọi globulin miễn dịch huyết người bào chế từ huyết tất người khỏe mạnh, chọn lọc, chứa kháng thể chống lại virus phổ biến cộng đồng Trên thực tế loại huyết có hiệu việc phòng ngừa bệnh sởi viêm gan A

- Globulin miễn dịch đặc hiệu điều chế từ huyết người thời kỳ hồi phục sau mắc bệnh nhiễm trùng khỏi , người tiêm chủng vaccine Nhờ có chọn lọc thích hợp người cho máu nên globulin miễn dịch đặc hiệu nồng độ kháng thể chống lại virus nguyên bệnh nhiễm trùng mà người cho mắc tiêm chủng thường cao gấp hàng chục lần so với loại globulin miễn dịch bình thường

Ngồi globulin miễn dịch bào chế từ huyết người, cịn có globulin miễn dịch bào chế từ huyết động vật tiêm vaccine để kích thích sản xuất kháng thể Ngày việc sử dụng huyết động vật giảm nhiều tỷ lệ gây phản ứng cao hẳn so với kháng thể sản xuất từ huyết người

Các kháng thể kết hợp với protein virus nằm bề mặt bên virion ngăn cản hấp phụ virion vào thụ thể (receptor) đặc hiệu với virus bề mặt tế bào

Có chứng cụ thể cho thấy tiêm globulin miễn dịch sớm thời kỳ ủ bệnh ngăn chặn làm giảm trầm trọng nhiều bệnh virus như: sởi, thủy đậu, viêm gan virus, dại, đậu mùa, đậu vaccine Cần sử dụng lượng globulin miễn dịch đầy đủ tiêm sớm trước giai đoạn nhiễm virus máu Kháng thể phát huy hiệu lực sau tiêm vào thể , tồn thời gian ngắn không tuần lễ

III PHÒNG NGỪA VÀ ĐIỀU TRỊ BẰNG LIỆU PHÁP HÓA HỌC

Khác với vi khuẩn, virus ký sinh bắt buộc bên tế bào sống, chúng khơng có chuyển hóa chép virus hồn tồn nằm tế bào chủ nên chúng khơng nhạy cảm với kháng sinh thường dùng Do thuốc điều trị đặc hiệu cho virus phải đạt yêu cầu sau :

-Thuốc phải xâm nhập vào tế bào, đặc biệt tế bào bị nhiễm virus -Thuốc ngăn cản trình tổng hợp virus khơng ảnh hưởng đến hoạt động tế bào

Amantadine rimantadine ngăn cản xâm nhập và/hoặc cởi áo vài virus ARN có vỏ ngồi; lâm sàng có hiệu chống lại virus cúm type A người Thuốc có tác dụng giảm số lượng người mắc bệnh, giảm nhẹ biểu lâm sàng rút ngắn thời gian bị bệnh Cả thuốc ngăn cản nhân lên virus thông qua tương tác với protein M2 virus cúm type A, ngăn cản q trình cởi áo

Các chủng virus cúm A đột biến đề kháng amantadine tìm thấy bệnh nhân bị cúm Sự đề kháng phụ thuộc vào đột biến gen mã hóa protein bao ngồi Rimantadine dẫn xuất amantadine có tác dụng chống virus cúm A tương tự amantadine, có tác dụng phụ Những biến chủng đề kháng amantadine đề kháng với rimantadine Amantadine ức chế cởi áo gen (genome) virus, sau xâm nhiễm axit nucleic virus khơng phóng thích khỏi capsid để tiến hành q trình chép

2.Thuốc ức chế giai đoạn tổng hợp thành phần virus

2.1 Các thuốc có cấu trúc tương tự nucleoside

Chỉ trừ virus nhỏ chứa ADN (Polyomavirus, Papillomavirus Parvovirus), tất virus mã hóa enzyme polymerase riêng chúng để tổng hợp nên axít nucleic virus Các enzyme polymerase virus đích lý tưởng thuốc kháng virus loại tương tự nucleoside Nói chung, thuốc tương tự nucleoside kháng virus phosphoryl hóa thành nucleoside triphosphate nhờ enzyme kinase virus tế bào chủ Sau triphosphate tác động chất ức chế cạnh tranh với nucleoside triphosphate bình thường có tế b tế bào sử dụng tiền chất cho tổng hợp axit nucleic Đối với chất tương tự nucleoside để có tác dụng chống virus, phải có đặc tính sau: phosphoryl hóa thành triphosphate, có lực với enzyme polymerase virus cao lực với enzyme polymerase tế bào chủ kết hợp vào chuỗi axit nucleic nối dài vị trí chất tương đồng cạnh tranh

Hai thuốc chống virus sử dụng rộng rãi thực hành lâm sàng aciclovir zidovudine

2.1.1 Aciclovir

Aciclovir có cấu tạo tương tự deoxyguanosine, nucleoside cần thiết cho q trình tổng hợp nên ADN Nó có hiệu điều trị nhiễm trùng virus herpes simplex virus thủy đậu gây Aciclovir phosphoryl hóa để trở thành monophosphate nhờ enzyme kinase virus sau thành triphosphate nhờ enzyme tế bào chủ Aciclovir triphosphate có lực với ADN polymerase virus mạnh nhiều lực với ADN polymerase tế bào Vì thế, nồng độ mà ức chế chức ADN polymerase virus khơng ức chế ADN polymerase tế bào Aciclovir triphosphate sử dụng tiền chất cho tổng hợp ADN Khi kết hợp vào chuỗi ADN nối dài vị trí deoxyguanosine triphosphate làm cho nối dài chuỗi ADN bị gián đoạn Như vậy, cách thức tác động aciclovir ngăn cản trình tổng hợp ADN virus Aciclovir nồng độ điều trị thực khơng độc phosphoryl hóa cần phải có enzyme kinase virus; cho nên, khơng có aciclovir triphosphate tế b khơng bị nhiễm virus herpes simplex virus thủy đậu Đã tìm thấy lâm sàng chủng virus herpes simplex đột biến đề kháng aciclovir Có lẽ đột biến có ảnh hưởng đến gen kinase gen ADN polymerase

2.1.2 Zidovudine (azidothymidine, AZT)

Zidovudine phosphoryl hóa thành dẫn xuất triphosphate nhờ enzyme kinase tế bào chủ Triphosphate ức chế enzyme chép ngược HIV, trình mã ngược từ sợi ARN gen virus thành sợi ADN bổ xung bị ức chế Nó kết hợp vào chuỗi ADN nối dài thay cho axit thymidylic, làm cho nối dài chuỗi ADN bị gián đoạn

Như vậy, Zidovudine ức chế tổng hợp ADN virus từ ARN gen virus

Zidovudine có số hạn chế là: ức chế enzyme chép ngược HIV tế bàoTCD4, không tác động HIV nhân lên mạnh mẽ đại thực bào số tế

bào khác Có độc tính cao gây buồn nôn, nôn, đau đầu ngủ, đặc biệt gây thiếu máu, giảm bạch cầu ức chế tủy xương (gặp 50% bệnh nhân) Để khắc phục tình trạng đó, phải luân phiên dùng số thuốc nhóm

Hiện có hai dideoxynucleoside đưa vào điều trị AIDS là: Zalcitidine (dideoxycytidine ddC) didanosine (dideoxyinosine ddI).Giống Zidovudine, ddC ddI tác động chất ức chế enzyme chép ngược HIV

2.1.3 Ribavirin

Ribavirin loại nucleoside tổng hợp tương tự guanosine có tác dụng ức chế in vitro phát triển nhiều virus chứa ADN virus chứa ARN Nó độc tế bào chủ, gây quái thai động vật Mặc dù gây độc tế bào, ribavirin sử dụng có kết lâm sàng hai trường hợp: đường tỉnh mạch để điều trị bệnh sốt Lassa đường khí dung để điều trị nhiễm trùng đường hô hấp virus hợp bào đường hô hấp (R.S virus) gây trẻ nhỏ

2.1.4 Vidarabine (Adenine arabinoside, ARA-A)

Đây nucleoside tổng hợp có cấu tạo tương tự adenosine Nó biến thành dạng triphosphate nhờ enzyme tế bào trở thành chất ức chế ADN polymerase virus Nó dùng để điều trị nhiễm trùng herpes trẻ sơ sinh, bệnh thủy đậu bệnh nhân bị suy giảm miễn dịch

2.1.5 Ganciclovir (Dihydroxy-propoxy-methyl-guanine, DHPG)

Ganciclovir nucleoside gần giống acyclovir, hoạt hóa thành dạng triphosphate nhờ enzyme tế bào nhờ enzyme protein kinase virus Nó chất ức chế mạnh enzyme ADN polymerase Cytomegalovirus

Ganciclovir dùnh để điều trị nhiễm trùng nặng Cytomegalovirus gây ra viêm phổi, viêm võng mạc, viêm đại tràng

2.1.6 Idoxuridine Trifluridine

2.2 Foscarnet (trisodium phosphonoformate)

Foscarnet có cấu trúc tương tự pyrophosphate Nó ức chế ADN polymerase virus herpes virus viêm gan B enzyme chép ngược HIV Trái với nucleoside kháng virus, để có hiệu lực foscarnet khơng cần có phosphoryl hóa trước Nó dùng để điều trị viêm võng mạc Cytomegalovirus bệnh nhân AIDS Foscarnet ganciclovir có tác dụng ức chế hiệp đồng lên chép Cytomegalovirus in vitro

2.3 Methisazone (Marboran, IBT)

Methisazone thiosemicarbazone có tác dụng ức chế nhân lên Poxvirus cách phong tỏa ARN thông tin muộn virus (ức chế dịch mã Poxvirus) Thuốc có tác dụng phịng ngừa bệnh đậu mùa sử dụng để điều trị biến chứng bệnh đậu vaccine chàm, đậu lan toàn thân

2.4.Các thuốc ức chế protease HIV

Có số loại thuốc ức chế enzyme protease HIV sử dụng điều trị HIV saquinavir, ritonavir, indinavir, nelfinavir, amprénavir lopinavir Các thuốc ức chế protease cạnh tranh với polyprotein để gắn vào vị trí hoạt động protease, ngăn cản cắt polyprotein virus dẫn đến tạo thành hạt virus khả gây nhiễm 2.5 Interferon

Interferon (IFN) có tác dụng chống virus, điều hịa miễn dịch chống lại tế bào ung thư Hai loại IFN - alpha IFN - beta có tác dụng kháng virus, IFN - gama có tác dụng điều hịa miễn dịch ức chế tế bào ung thư

Những đặc tính chống virus quan trọng IFN có hiệu lực nồng độ nanogram, có tác dụng chống lại tất lồi virus, khơng có biến chủng đề kháng IFN Nói chung, tác dụng chống virus IFN có tính đặc hiệu lồi Vì thế, IFN dùng điều trị cho nhiễm trùng người phải IFN sản xuất từ nuôi cấy tế bào người Tác dụng chống virus chủ yếu IFN ức chế dịch mã ARN thông tin virus

3.Thuốc ức chế giải phóng virus khỏi tế bào

Trong trình nhân lên virus cúm, virion giải phóng khỏi tế bào theo kiểu nẩy chồi với tham gia neuraminidase Nếu enzyme bị ức chế virion khơng giải phóng

NHIỄM TRÙNG VÀ ĐỘC LỰC CỦA VI SINH VẬT

Mục tiêu học tập

1 Trình bày khái niệm liên quan đến tương tác vi sinh vật nhiễm trùng và cơ thể vật chủ

2 Mô tả vai trò gây bệnh vi sinh vật gồm yếu tố độc lực vi sinh vật, số lượng vi sinh vật đường xâm nhập

3 Trình bày sở di truyền độc lực vi khuẩn phương thức vi khuẩn tránh được loại bỏ thể vật chủ

I ĐẠI CƯƠNG

Đối với vi khuẩn, thể người mơi trường sống thích hợp cho nhiều vi sinh vật, mơi trường có nhiệt độ, độ ẩm thức ăn thích hợp cho chúng phát triển Nhiều vi khuẩn cư trú (colonization) bề mặt thể người mà không gây hại cho thể vật chủ, chúng sống cộng sinh (commensal) bình thường với thể vật chủ tạo nên thành phần khuẩn chí ( normal microflora) thể, nhiên vi khuẩn chí trở thành tác nhân gây bệnh vượt qua rào cản thể ( da, niêm mạc) xâm nhập vào thể vật chủ Những vi khuẩn có độc lực vi khuẩn bạch hầu, thương hàn, tả, vi khuẩn lỵ chúng ln có chế làm dễ dàng cho chúng phát triển thể vật chủ gây tổn thương tố chức quan thể gây nên bệnh nhiễm trùng

Khi vi sinh vật gây bệnh xâm nhập vào thể vật chủ, điều kiện tự nhiên xã hội định gây nên trình phản ứng tương tác phức tạp gọi nhiễm trùng Trong trình vi sinh vật nguyên nhân, thể người đối tượng cảm thụ Hoàn cảnh khách quan ảnh hưởng trực tiếp họăc gián tiếp đến nhiễm trùng Khi vi sinh vật chưa xâm nhập vào thể u tố hịan cảnh có ảnh hưởng trực tiếp đến người vi sinh vật gây bệnh tạo điều kiện thuận lợi không thuận lợi cho trình nhiễm khuẩn Khi vi sinh vật xâm nhập vào thể hịan cảnh tác động vào người có ảnh hưởng đến vi sinh vật

II CÁC HÌNH THÁI CỦA SỰ NHIỄM TRÙNG

Quá trình nhiễm trùng đưa đến tổn thương tổ chức quan thể vật chủ, làm rối lọan chế điều hòa thần kinh, miễn dịch làm xuất triệu chứng rõ chứng bệnh Đó bệnh nhiễm trùng thể lâm sàng Độ trầm trọng triệu chứng bệnh phụ thuộc vào quan bị ảnh hưởng mức độ tổn thương quan nhiễm trùng

Ở người khoẻ mạnh bình thường, đa số trường hợp nhiễm trùng gây nên tổn thương tổ chức khơng đáng kể mặt lâm sàng khơng có biểu rõ ràng cua chứng bệnh nhiễm trùng thể ẩn Nhiễm trùng không triệu chứng làm cho thể vật chủ có tính miễn dịch với tác nhân nhiễm trùng, giúp cho thể loại bỏ hiệu nhiễm trùng vi sinh vật vào lần sau

Về phương tiện dịch tễ học, nhiễm trùng thể ẩn nguy hiểm nguồn lây lan mầm bệnh mà khơng biết vụ dịch dịch tả, dich bại liệt, viên gan tỷ lệ bệnh nhiễm trùng thể ẩn cao so với thể lâm sàng

Bệnh nhiễm trùng biểu chổ tồn thân, cấp tính hay mãn tính Lúc vi sinh vật gây bệnh trực tiếp truyền từ người sang người khác, gây nên trình nhiễm trùng chúng làm phát sinh bệnh truyền nhiễm Bệnh truyền nhiễm tản phát hay phát triển thành dịch địa phương thành đại dịch

III VI SINH VẬT GÂY BỆNH

Vi sinh vật gây bệnh ngun nhân bệnh nhiễm trùng Khơng có vi sinh vật gây bệnh khơng có nhiễm trùng Khả gây bệnh vi sinh vật phụ thuộc vào độc lực, số lượng vi sinh vật xâm nhập đường xâm nhập

1 Độc lực vi sinh vật

Là khả gây bệnh mạnh hay yếu loài vi sinh vật, vi khuẩn Salnonella

typhi Salmonella paratyphi gây nên bệnh sốt thương hàn, bệnh sốt thương hàn

do Salmonella typhi biểu với triệu chứng bệnh trầm trọng hơn.

Để đánh giá độc lực chủng vi khuẩn, người ta dùng liều gây chết 50 (LD 50) LD 50 liều lượng vi sinh vật độc tố chúng làm chết 50% quần thể súc vật thí nghiệm khoảng thời gian định Hiện người ta có xu hướng dùng đơn vị liều gây chết tối thiểu (MLD) MLD liều lượng nhỏ chủng vi sinh vật độc tố giết chết súc vật thí nghiệm có trọng lượng định, khoảng thời gian thực nghiệm định MLD xác phụ thuộc vào trạng thái, chức hệ miễn dịch thần kinh vật thí nghiệm

Độc lực chủng vi sinh vật cố định Khi phân lập thể bệnh nhân vi sinh vật thường có độc lực cao qua q trình cấy chuyền độc lực giảm dần có hẳn, chọn lọc lại biến chủng thích nghi điều kiện Trên sở nhiều loại vacxin vi sinh vật sống giảm độc điều chế ví dụ vacxin bại liệt, vacxin BCG Ở vacxin BCG vi khuẩn có nguồn gốc chủng vi khuẩn lao bò (M bovis) độc qua ni cấy mơi trường mật bị nhiều năm cấy chuyền nhiều lần Calmette Guerin tạo chủng vi khuẩn hồn tồn khơng độc gọi vi khuẩn BCG dùng làm vacxin phòng lao (Bacille de Calmette et Guerin) Mặt khác chủng vi sinh vật giảm độc tiêm truyền vào thể súc vật làm gia tăng độc lực chúng

Độc lực vi sinh vật bao gồm độc tố, khả bám dính khả xâm nhiễm chúng

1.1 Khả bám dính

Bám dính bước q trình nhiễm trùng, nhiều vi khuẩn có bề mặt chúng đại phân tử gọi yếu tố bám dính (adhesin) làm trung gian cho bám dính vi khuẩn vào receptor đặc hiệu tìm thấy số tế bào động vật khơng tìm thấy tế bào khác Những thành phần bám dính vi khuẩn pili đảm nhiệm, E.coli bám dính vào tế bào ruột tế bào biểu mô bàng quang vào niêm mạc miệng Shigella gây bệnh bám dính vào biểu mơ ruột Tương tự Neisseria

gonorrhoae bám dính vào biểu mơ niệu đạo.

Kháng thể thành phần bề mặt vi khuẩn khơng có tác dụng opsonin hóa vi khuẩn mà trung hòa kháng nguyên ngăn cản vi khuẩn bám dính vào biểu mơ Hơn nửa glycoprotein chất tiết thể cạnh tranh với recepor bám vi khuẩn ngăn cản bám dính vi khuẩn, bong tế bào biểu mô bề mặt chế bảo vệ khác loại bỏ vi khuẩn bám dính vào tế bào

Là khả vào bên tổ chức thể vật chủ, nhân lên lan tràn sang vùng khác

1.2.1 Khả tạo vỏ: Vỏ nhiều vi khuẩn giúp cho vi khuẩn đề kháng lại thực bào, ví dụ rõ ràng phế cầu: so sánh chủng phế cầu có vỏ (khuẩn lạc dạng S) chủng phế cầu khơng có vỏ (khuẩn lạc dạng R), chủng phế cầu có vỏ (S) gây bệnh chuột nhắt trong chủng khơng có vỏ (R) khơng bệnh Ở Streptococcus pyogenes yếu tố kháng đại thực bào nằm mặt vách tế bào

1.2.2 Các enzyme: Nhiều vi khuẩn gây bệnh tạo nhiều enzyme góp phần vào khả xâm nhiễm chúng

- Enzyme hyaluronidase tụ cầu, liên cầu tiết làm thủy phân axit hyaluronic thành phần mô liên kết, làm cho vi khuẩn phân tán vào mô dễ dàng

- Collagenase phân hủy collagen thành phần mô - Streptokinase làm tan cục máu đông

- Leucocidin giết chết bạch cầu - Hemolysin làm tan hồng cầu

- Mucinase số vi khuẩn đường tiêu hóa tiết ra, làm phá vỡ lớp niêm dịch bao phủ niêm mạc ruột, tạo điều kiện vi khuẩn tiếp xúc trực tiếp với tế bào xâm nhập vào bên biểu mô

1.3 Khả sinh độc tố

Độc tố tạo thành q trình chuyển hóa vi khuẩn Người ta chia độc tố vi khuẩn thành ngoại độc tố nội độc tố

1.3.1 Ngoại độc tố: Do số vi khuẩn gram dương vi khuẩn gram âm tạo thành phân tiết mơi trường xung quanh, chất hóa học protein, có tính chất sinh kháng cao dễ bị phá hủy nhiệt độ (600C) Nhiều ngoại độc tố vi khuẩn ngoại độc tố của

bạch hầu, uốn ván, ngộ độc thịt chiết xuất dạng tinh khiết Ngoại độc tố có độc tính mạnh,ví dụ cần 0,02mg ngoại độc tố bạch hầu giết chết người

Ngoại độc tố xử lý focmol nhiệt độ sau thời gian tính độc mà vân giữ hồn tồn tính chất kháng ngun, chế phẩm gọi giải độc tố dùng để làm vacxin phòng bệnh đặc hiệu

1.3.2 Nội độc tố: Độc tố liên hệ chặt chẽ với vách tế bào vi khuẩn gram âm, khơng khuyếch tán mơi trường bên ngồi, vi khuẩn chết, tế bào bị phá hủy nội độc tố phóng thích bên ngồi

Cấu tạo hóa học vách vi khuẩn gram âm hỗn hợp glucit, lipit protein thành phần có độc tính nội độc tố chủ yếu thành phần lipid A lớp lipopolysacarit vách tế bào Nội độc chịu nhiệt cao, độc tính yếu so với ngoại độc tố Hiện người ta biết rõ ràng nội độc tố vi khuẩn gram âm (-) có tác động sinh học vừa có lợi cho thể vật chủ kích thích đáp ứng miễn dịch mặt khác tác động độc gây chống chết

Tính chất sinh miễn dịch nội độc tố yếu, khơng có khả biến thành giải độc tố xử lý với focmol

2 Độc lực virus

virus môi trường tiếp tục chu kỳ nhân lên tế bào kế cận Như tính chất gây bệnh virus liên hệ đến

- Phá vỡ quần thể tế bào bị xâm nhiễm

- Thay đổi hình thái, cấu trúc làm cho tế bào chức

3 Số lượng vi sinh vật

Cơ thể người có chế bảo vệ hữu hiệu Vi sinh vật gây bệnh lúc số lượng xâm nhập đạt mức Nếu số lượng q vi sinh vật đễ dàng bị thể vật chủ loại bỏ Thí nghiệm người tình nguyện cho thấy số lượng Salmonella typhi nuốt vào ruột để gây bệnh vào khoảng 106 để gây bệnh tả thực nghiệm, người

tình nguyện phải uống dung dịch natri bicarbonate để làm kiềm hóa dịch dày đồng thời uống lượng khoảng 109 vi khuẩn tả.

4 Đường xâm nhập

Đường xâm nhập ảnh hưởng đến khả gây bệnh nhiễm trùng Nhiều vi sinh vật có đặc tính hướng quan, chúng chọn lọc bề mặt tổ chức mà chúng xâm nhiễm Não mơ cầu phế cầu thường tìm thấy vùng mũi hầu phế cầu xâm nhiễm đường hô hấp gây nên viêm phổi não mô cầu xâm nhiễm đường hô hấp xâm nhập gây viêm màng não Vi sinh vật gây bệnh lúc chúng xâm nhập thể qua đường thích hợp: Vi khuẩn thương hàn qua đường miệng, lậu cầu qua đường sinh dục, trực khuẩn uốn ván qua đường vết thương, viêm gan virus A, virus bại liệt qua đường miệng, virus viêm gan B qua đường tiêm chuyền

IV CƠ SỞ DI TRUYỀN CỦA ĐỘC LỰC VI SINH VẬT

Các yếu tố độc lực vi sinh vật mã hố DNA nhiễm sắc thể, DNA bacteriophage, plasmid đoạn gen nhảy nằm plasmid nằm nhiễm sắc thể

Độc tố nhiều vi khuẩn gây bệnh mã đoạn gen nhiễm sắc thể vi khuẩn độc tố ruột vi khuẩn tả, độc tố ruột loài Shigella, ngoại độc tố A Pseudomonas aeruginose Các yếu tố xâm nhiễm E coli, độc tố bong da S.

aureus, độc tố vi khuẩn than mã hoá đoạn gen plasmid vi khuẩn Ở

nhiều vi khuẩn chúng có khả tạo độc tố chúng bị nhiễm bacteriophage đặc hiệu, bacteriophage tích hợp đoạn DNA chúng vào DNA vi khuẩn, trạng thái này vi khuẩn sản xuất độc tố độc tố bạch hầu, độc tố sinh đỏ Streptococcus

pyogenes

Với kỹ thuật phân tử người ta dễ dàng xác định gen độc lực vi khuẩn gây nhiễm trùng, điều có ý nghĩa để tìm nguồn gốc dịch tễ học chủng vi khuẩn gây bệnh, để chẩn đoán nguyên nhân bệnh nhiễm trùng

V SỰ TRÁNH NÉ VỚI ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA VI SINH VẬT

Về lý thuyết, vi khuẩn tồn thể vật chủ lâu chúng có nhiều thời gian để gây tổn thương cho thể, vi sinh vật tránh né sức đề kháng thể vật chủ có khả để gây bệnh

1 Sự lẩn tránh tổ chức tế bào

Nhiều vi sinh vật nằm bên tế bào tránh tác dụng có hại cho chúng kháng thể thuốc kháng sinh Mycobacterium tuberculosis M leprae thoát khỏi chế miễn dịch tế bào ngăn cản hòa nhập lysozim đại thực bào với phagosom lưới nguyên tương có chứa vi khuẩn Virus herpes simplex virus zoster sau xâm nhập vào tế bào biểu mô, virus đến vùng hạch rễ thần kinh lưng chúng tồn thời gian dài, Epstein-Barr virus tồn tế bào lympho B

Nhiều vi khuẩn có khả tạo yếu tố hòa tan làm trở ngại đáp ứng miễn dịch thể vật chủ chống lại Ví dụ nhiều chủng tụ cầu sản sinh protein A kết hợp với vùng Fc phân tử kháng thể ảnh hưởng đến chức kháng thể trình opsonin hóa, lậu cầu nhiều não mơ cầu tạo enzyme protease phá hủy phân tử IgA miễn dịch

3 Thay đổi kháng nguyên

KHÁNG NGUYÊN VI SINH VẬT Mục tiêu học tập

1 Trình bày kháng nguyên vi khuẩn. 2 Trình bày kháng nguyên virus.

Đối với thể người động vật vi sinh vật chất độc chúng kháng nguyên Mỗi chủng vi sinh vật cấu tạo nhiều chất phức tạp có tính kháng nguyên khác nhau, chủng vi sinh vật có nhiều kháng nguyên

I KHÁNG NGUYÊN CỦA VI KHUẨN Chia làm loại :

1 Các kháng ngun hịa tan

Đó kháng ngun vi khuẩn tiết môi trường xung quanh trình phát triển Chúng bao gồm kháng nguyên ngoại tế bào có chất protein độc tố enzyme

1.1 Kháng nguyên ngoại độc tố

Các vi khuẩn bạch hầu, uốn ván, ngộ độc thịt.v.v Có ngoại độc tố kháng nguyên mạnh có khả biến đổi thành giải độc tố sau xử lý với formol 400C trong

một thời gian Giải độc tố khơng cịn độc tính giữ khả sinh miễn dịch, dùng để làm vaccine phòng bệnh tốt Các vaccine phòng bệnh bạch hầu, bệnh uốn ván giải độc tố

Vi khuẩn tả số E.coli ETEC gây bênh chế sinh độc tố ruột (enterotoxin) Độc tố ruột có tính kháng ngun cao, kích thích hình thành kháng thể IgA tiết ruột, chủ yếu chống lại phần B độc tố ruột

1.2 Kháng nguyên enzyme

Trong enzyme ngoại tế bào có tính kháng nguyên mạnh, đáng kể dung huyết tố Ví dụ dung huyết tố Streptolysin O liên cầu kháng nguyên mạnh, kích thích thể hình thành antistreptolysin O (ASO) , phản ứng huyết ASO thường dùng chẩn đoán bệnh liên cầu Enzyme Streptokinase nhiều chủng liên cầu tan máu  tạo thành kháng nguyên tốt khích động hình thành antistreptokinase (ASK)

2 Các kháng nguyên tế bào

Tế bào vi khuẩn có thành phần cấu tạo có nhiêu loại kháng nguyên 2.1 Kháng nguyên vách tế bào vi khuẩn

- Vi khuẩn Gram dương: Cấu tạo vách tế bào vi khuẩn Gram dương peptidoglycan gọi murein Nhiệm vụ murein làm sườn vách tế bào vai trò sinh miễn dịch thứ yếu Những thành phần cấu tạo khác vách tế bào tỷ lệ thấp có tính kháng ngun cao, là:

+ Các protein: thường kháng nguyên gây ngưng kết đặc hiệu, vào chia vi khuẩn thành nhiều nhóm, nhóm thành nhiều type, thí dụ protein A tụ cầu, protein M liên cầu A

+ Polysaccharide: thường hapten, gắn với protein trở thành có tính sinh miễn dịch, ví dụ polysaccharide C liên cầu, phế cầu

hợp có tính chất kháng ngun, phần polysaccharide quy định tính đặc hiệu kháng nguyên, phần lipid có tính độc Kháng ngun vách tế bào vi khuẩn Gram âm thường gọi kháng nguyên O có chất lipopolysaccharide (LPS) Kháng nguyên O (LPS) nội độc tố vi khuẩn Gram âm

2.2 Kháng nguyên vỏ vi khuẩn

Một số vi khuẩn có vỏ bọc ngồi vách tế bào, che chở vi khuẩn chống tượng thực bào Kháng nguyên vỏ chất thường polysaccharide đặc hiệu type phế cầu dạng S, E.coli , polypeptide vỏ trực khuẩn than, trực khuẩn dịch hạch

2.3 Kháng nguyên lông vi khuẩn

Một số vi khuẩn Gram âm có kháng ngun lơng chất protein mang tính đặc hiệu type Kháng ngun lơng khơng đóng vai trị quan trọng việc gây bệnh, có tác dụng việc chẩn đoán xếp loại vi khuẩn Kháng nguyên lông thường gọi kháng nguyên H

2.4 Kháng nguyên bề mặt Vi

Một vài loài Salmonella có lớp polysaccharide mỏng bao bọc bên ngồi vách tế bào vi khuẩn, khơng nhìn thấy kính hiển vi quang học Ví dụ kháng nguyên Vi của Salmonella typhi.

II KHÁNG NGUYÊN CỦA VIRUS

Các kháng nguyên virus chia làm loại: kháng nguyên hòa tan kháng nguyên thành phần cấu tạo hạt virus

1 Các kháng ngun hịa tan

Đó kháng nguyên thu từ nuôi cấy tế bào nhiễm virus sau loại bỏ virus thành phần tế bào Các kháng nguyên enzyme virus, thành phần cấu tạo mà virus tổng hợp thừa trình nhân lên Các kháng ngun có ý nghĩa thực tế

2 Các kháng nguyên hạt virus

Mọi virus có thành phần cấu tạo axit nucleic capsid Một số virus cịn có vỏ (envelope)

2.1 Kháng nguyên nucleoprotein

Là phức hợp kháng nguyên tạo nên axit nucleic protein Ở virus cúm, ribonucleoprotein kháng nguyên đặc hiệu type

2.2 Kháng nguyên capsid

Là kháng nguyên quan trọng mạnh virus capsid chứa phần lớn protein virus Nó kháng nguyên riêng biệt gắn với nucleoprotein thành kháng nguyên phức hợp Vỏ protein gây nên thể kháng thể trung hòa đảm bảo miễn dịch đặc hiệu chống lại virus Kháng nguyên đóng vai trị quan trọng phân loại virus khơng có vỏ ngồi (envelope)

2.3 Kháng ngun vỏ (envelope)

SỰ ĐỀ KHÁNG CỦA CƠ THỂ CHỐNG LẠI CÁC VI SINH VẬT GÂY BỆNH

Mục tiêu học tập

Trình bày chế bảo vệ không đặc hiệu đặc hiệu thể chống lại các vi sinh vật gây bệnh

Cơ thể người phải đối phó nhiều lồi vi sinh vật Chúng khác cấu trúc, thành phần hóa học, cách xâm nhiễm hoạt động thể người Cơ chế bảo vệ không đặc hiệu huy động để ngăn cản vi sinh vật xâm nhập thể giảm số lượng khả gây nhiễm chúng Trong trình chống vi sinh vật có phối hợp chặt chẽ chế bảo vệ không đặc hiệu với chế bảo vệ đặc hiệu chế miễn dịch thể dịch chế miễn dịch tế bào

I CƠ CHẾ BẢO VỆ KHÔNG ĐẶC HIỆU

Cơ chế bao gồm nhiều hệ thống sẵn có thể nên hoạt động nhằm mục đích ngăn cản xâm nhập lồi vi sinh vật gây bệnh

1 Da niêm mạc

Da niêm mạc rào cản ngăn chặn xâm nhập vi sinh vật vào thể chế sau:

1.1 Cơ học

Các tế bào sừng hóa da, tế bào biểu mơ có lơng niêm mạc đường hơ hấp tiêu hóa vật cản đẩy lùi vi sinh vật lạ xâm nhập

1.2 Vật lý hóa học

Sự tiết chất bả nhờn (axit béo), tiết mồ hôi (axit lactic) bề mặt da độ pH thấp (mơi trường axit) số vị trí da niêm mạc dày hay đường tiết niệu sinh dục có tác dụng ức chế diệt vi sinh vật Lysozym có nước bọt, nước mắt, dịch nhầy mũi họng có tác dụng diệt vi sinh vật

1.3 Cạnh tranh sinh học

Xảy vi sinh vật gây bệnh xâm nhập vào da niêm mạc với quần thể vi sinh vật bình thường cư trú bề mặt da, niêm mạc thể Chính điều đẫ tạo bảo vệ tự nhiên cho thể

2 Phản ứng viêm

Khi vi sinh vật qua da niêm mạc, thể chống lại phản ứng viêm chỗ nơi vi sinh vật vừa lọt vào Viêm phản ứng tích cực thể với biểu sưng, nóng, đỏ đau Tại chổ viêm có tập trung tế bào bạch cầu đa nhân trung tính, đại thực bào, lympho bào chất có hoạt tính sinh học histamin, serotonin, men gây phân hủy tổ chức Tại chổ viêm: tuần hồn chậm, giãn mạch, chất diệt khuẩn có máu tràn vào ổ viêm, có thay đổi sinh hóa tăng axit lactic, pH giảm làm cho vi sinh vật phát triển khơng thuận lợi Có hàng rào fibrin bao bọc ngăn cách ổ viêm không cho vi sinh vật lan rộng.Q trình viêm lan tỏa, khu trú ổ viêm, song nhằm mục đích ngăn cản xâm nhập lan tỏa vi sinh vật gây bệnh sản phẩm độc hại chúng

3 Bạch cầu trung tính

đó tượng opsonin hóa Hiện tượng làm cho thực bào xảy nhanh chóng hơn, vi khuẩn có vỏ polysaccharide phế cầu Với khả bắt tiêu diệt vi khuẩn, bạch cầu trung tính quan trọng phản ứng viêm cấp tính

4 Đại thực bào

Nếu vi sinh vật khỏi bạch cầu trung tính chúng theo máu bạch huyết đến tổ chức Ở chúng bị đại thực bào công Các tế bào đơn nhân thực bào bắt nguồn từ lọai tế bào tủy xương, phát triển thành tế bào chín tuần hoàn máu ngoại vi rối đến tổ chức khác nhau: Tế bào mono tìm thấy tủy xương máu, đại thực bào tổ chức Chức quan trọng đại thực bào bắt giữ xử lý vật lạ Gọi thực bào lúc vật lạ có kích thứơc lớn tế bào, vi khuẩn, ký sinh trùng đơn bào ẩm bào vật lạ phân tử dạng hòa tan Thực bào phải qua giai đoạn : bám, nuốt tiêu hóa Phần lớn vi sinh vật bị lysosom tiêu diệt, chúng bị nhận chìm bọng nội bào liên kiết với lysosom để hình thành phagolysosom Các đại thực bào tế bào mono tiêu diệt vi sinh vật theo chế giống bạch cầu trung tính thơng qua thụ thể (receptor) dành cho Fc C3 Một số vi khuẩn độc lực vi khuẩn lao, Listeria,

Brucella không bị tiêu diệt mà cịn nhân lên đại thực bào thóat

khỏi tác dụng chất huyết có khả tiêu diệt chúng

5 Kháng thể tự nhiên

Có số protein huyết bình thường với đặc tính cấu trúc globulin miễn dịch Chúng phản ứng đặc hiệu với vài kháng nguyên cá nhân chúng tìm thấy chưa tiếp xúc với kháng ngun Chúng tìm thấy huyết hiệu giá thấp có vai trị có ý nghĩa đề kháng với vài nhiễm trùng Sự thực bào vi khuẩn gây bệnh tăng cường kháng thể tự nhiên tác dụng opsonin hóa Kháng thể tự nhiên hình thành thể tiếp xúc với vi sinh vật có chung thành phần kháng nguyên với vi sinh vật gây bệnh tiếp xúc với kháng nguyên diện thiên nhiên ví dụ nhiễm trùng khơng biểu thức ăn

6 Bổ thể

Tìm thấy huyết động vật, khơng bền với nhiệt (560/30 phút) Bổ thể

(C’ ) gồm chín thành phần C

1 - C9 Lúc thành phần thứ bị khích động phức hợp

miễn dịch có khả khích động nhiều phân tử thành phần thứ hai tạo nên hiệu ứng dây chuyền khuếch đại Theo cách khích động phân tử C1

làm khích động hàng nghìn phân tử thành phần Ở giai đọan, khích động làm xuất họat tính enzyme Thành phần cuối làm thủng lỗ màng tế bào làm cho tế bào chết Như qua phản ứng khuếch đại dây chuyền, khích động thành phần C1 dẫn đên tiêu bào nhận biết mắt

Hoạt tính sinh học bổ thể: 6.1.Làm tan tế bào

Mơ hình phổ biến phan ứng miễn dịch làm tan hồng cầu Khái quát phản ứng kết hợp bổ thể gây tan vi khuẩn, tế bào ung thư Bổ thể làm tan vi khuẩn lần Pfeiffer phát lúc tiêm vi khuẩn tả vào phúc mạc chuột lang miễn dịch với phẩy khuẩn tả

6.2.Dự phần vào tượng opsonin hóa

Bề mặt bạch cầu trung tính có thụ thể dành cho Fc IgG thụ thể dành cho C3b bổ thể nên bạch cầu trung tính dễ bám bắt vi khuẩn gắn với kháng thể bổ

Phản ứng miễn dịch kết dính xảy phức hợp bao phủ C3b với

một số tế bào bạch cầu trung tính, đại thực bào, tế bào mono người

Đối với tế bào, tượng miễn dịch kết dính có tác dụng thúc đẩy tượng thực bào Nó cịn có tác dụng khởi động giải phóng enzyme từ lysosom bạch cầu trung tính làm nhiệm vụ thực bào

6.4.Họat tính hóa hướng động

Một số sản phẩm phân hóa phóng thích phản ứng chuỗi bổ thể C5a, Phức hợp C5, C6, C7 có họat tính hóa hướng động bạch cầu máu ngoại vi

người

6.5 Họat tính phản vệ

C3a, C5a sản phâm phân hóa C3 C5.Các sản phẩm gây nên co bóp

trơn, gây nên tượng giãn huyết quản tăng tính thẩm thấu mao mạch tương tự histamin

7 Properdin

Thu từ huyết bình thường cách hấp phụ lên Zymosan, thành phần vách tê bào nấm men Nó giết chết nhiều vi khuẩn virus với diện Mg++ bổ thể qua họat hóa theo đường tắt.

8 Interferon (INF)

Khi thể bị nhiễm virus, chất có vai trị quan trọng giai đoạn đầu để ức chế diệt virus IFN IFN glycoprotein nhiều loại tế bào sản xuất sau có tác dụng kích thích virus IFN xuất sớm (vài giờ) sau nhiễm virus tồn ngắn khoảng vài ngày đến vài tuần IFN có tính đặc hiệu loài, IFN tế bào loài sinh bảo vệ cho tế bào lồi Nó có tác động ngăn cản nhân lên nhiều lồi virus khác khơng phải với virus kích thích sinh IFN Như IFN không tác dụng đặc hiệu cho loại virus gây bệnh IFN không tác động trực tiếp lên virus kháng thể Chúng tác động đến tế bào, kích thích tế bào dùng chế enzyme để ngăn cản nhân lên virus

II CƠ CHẾ BẢO VỆ ĐẶC HIỆU

Các chế miễn dịch khơng đặc hiệu họat động độc lập thường tác động hợp đồng với chế miễn dịch đặc hiệu, làm tăng hiệu chế miễn dịch đặc hiệu lên nhiều, vi sinh vật có độc lực cao Các chế bảo vệ đặc hiệu có thể tiếp xúc với kháng nguyên vi sinh vật gây bệnh (do nhiễm trùng dùng vacxin) Cơ chế bảo vệ đặc hiệu gồm có miễn dịch dịch thể bảo vê miễn dịch tế bào bảo vệ

1 Cơ chế miễn dịch dịch thể bảo vệ

Sự hồi phục thể vật chủ nhiều trường hợp nhiễm vi sinh vật phụ thuộc vào xuất kháng thể bảo vệ Sự tồn kháng thể giúp cho thể đề phịng tái nhiễm Kháng thể có tác dụng khác vi sinh vật

1.1 Ngăn cản vi sinh vật bám

Đối với nhiều loài vi sinh vật gây bệnh, việc bám vào niêm mạc đường tiêu hóa, tiết niệu, hơ hấp bước quan trọng để chúng gây bệnh E.coli, lậu cầu, vi khuẩn tả,

Mycoplasma, lọai virus Các kháng thể thường IgA tiết ( IgAs ) có khả ngăn cản

các vi sinh vật bám vào niêm mạc

1.2 Trung hòa độc lực virus, Rickettsia, ngoại độc tố enzyme

1.3 Làm tan vi sinh vật trường hợp có bổ thể tham gia

Các kháng thể IgG, IgA IgM kết hợp đặc hiệu với kháng nguyên vi sinh vật hoạt hóa bổ thể đẫn tới làm tan tế bào vi sinh vật (vi khuẩn Gram âm, virut ) 1.4 Ngưng kết vi sinh vật kết tủa sản phẩm hòa tan vi sinh vật

Các kháng thể IgG, IgA IgM kết hợp đặc hiệu với vi sinh vật gây ngưng kết vi sinh vật này, kết hợp với sản phẩm hòa tan vi sinh vật gây nên kết tủa sản phẩm

1.5 Opsonin hóa

Lúc opsonin hóa tức kết hợp với kháng thể bổ thể vi sinh vật dễ dàng bị bạch cầu trung tính đại thực bào thâu tóm bề mặt bạch cầu trung tính đại thực bào có thụ thể dành cho Fc kháng thể C3b bổ thể bị tiêu diệt nhanh chóng

hơn Qua opsonin hóa thực bào với vi sinh vật có độc lực thực mạnh mẽ

1.6 Hiện tượng gây độc tế bào tế bào phụ thuộc kháng thể (Antibody dependent cellular cytotoxicity: ADCC)

Gọi tắt hiệu ADCC Các tê bào gây nên tượng lympho K cịn gọi tế bào Null Ngồi đại thực bào tế bào mono gây hiệu Cho đến chưa hiểu hết chế làm tan tế bào hiệu ADCC Một số nghiên cưú cho tượng tan tế bào hiệu ADCC có điểm giống tan tế bào lympho T gây độc, số khác lại cho tượng tan tế bào dẫn đến vỡ màng tế bào giống tác đụng kháng thể bổ thể Hiệu ADCC liên quan đến tế bào ung thư, vi sinh vật bị tiêu diệt theo chế Tuy in virto người ta chứng minh khả giết vi khuẩn tế bào nhiễm virus theo chế hiệu ADCC chưa hiểu hết tầm quan trọng hiệu Trong bệnh viên gan B hiệu ADCC có vai trị quan trọng việc tiêu diệt tế bào gan nhiễm virus Ở trẻ em bị sởi hiệu ADCC có tác dụng diệt tế bào nhiễm virus chưa rõ ý nghĩa lâm sàng hiệu

2 Cơ chế miễn dịch qua trung gian tế bào bảo vệ

Một số vi khuẩn vi khuẩn lao, vi khuẩn phong Listeria, Brucella tất virus có khả sống tiếp tục phát triển bên tế bào nên kháng thể tiếp cận với vi sinh vật Chính chế miên dịch qua trung gian tế bào gọi tắt đáp ứng miên dịch tế bào có vai trị quan trọng việc chống lại vi sinh vật ký sinh bên tế bào Có hai hình thức đáp ứng miễn dịch tế bào : Một hình thức lympho T gây mẫn muộn (Delayed-typee hypersensitivity T lymphocyte: Lympho TDTH) đại thực

bào phụ trách, hình thức lympho T gây độc (Cytotoxicity T lymphocyte: lympho Tc) phụ trách

2.1 Hình thức đáp ứng miễn dịch tế bào lympho T gây mẫn muộn (lympho TDTH :

Delayed-type hypersensitivity) đại thực bào phụ trách

Gồm hai giai đọan: Trong giai đọan đầu xảy tương tác gữa đại thực bào làm nhiệm vụ trình diện kháng nguyên với lympho TDTH lympho TDTH nhận diện

các định kháng ngun Ngồi kích thích kháng ngun, lympho TDTH cịn nhận

sự kích thích Interleukin Lympho T cảm ứng tiết Sau nhân hai kích thích , định kháng nguyên, Interleukin 2, lympho TDTH trở thành dạng họat

hóa phân chia để tăng sinh Trong giai đọan 2, lympho TDTH họat hóa tiết lymphokin,

2.2 Hình thức đáp ứng miễn dịch tế bào lympho T gây độc (lympho Tc: Cytotoxicity) phụ trách

Những nghiên cứu tế bào người cho thấy người có hình thức đáp ứng miễn dịch tế bào lympho Tc đảm nhận Lympho Tc người bị sới diệt tế bào

đích nhiễm virus in vitro Lúc lympho Tc tế bào đích lấy từ thể khả tiêu

diệt tế bào đích đạt tối đa

Lympho Tc có khả tiêu diệt tế bào đích bị nhiễm virus (sởi, cúm, Epstein

Barr ) lympho Tc nhận diện kháng nguyên virus lẫn kháng nguyên phù hợp tổ

chức bề mặt tế bào đích Ngồi kích thích kháng ngun, lympho Tc cịn nhận

kích thích interleukin Sau nhận hai kích thích, kháng nguyên, Interleukin 2, tiền lympho Tc họat hóa thành lympho Tc họat động có khả diệt tế

bào đích nhiễm virus Cơ chế lympho Tc diệt tế bào đích nhiễm virus chưa

KỸ THUẬT MIỄN DỊCH SỬ DỤNG TRONG CHẨN ĐOÁN VI SINH VẬT

Mục tiêu học tập

1.Trình bày nguyên lý số kỹ thuật miễn dịch.

2.Biết áp dụng số kỹ thuật huyết học chẩn đoán bệnh nhiễm trùng.

I BẢN CHẤT CỦA SỰ KẾT HỢP GIỮA KHÁNG NGUYÊN VÀ KHÁNG THỂ Sự kết hợp kháng nguyên kháng thể phụ thuộc vào cấu trúc bề mặt kháng nguyên kháng thể Sự kết hợp xảy phần giới hạn phân tử kháng nguyên (nhóm định) phần giới hạn phân tử kháng thể (trung tâm hoạt động)

Theo Pauling, phân tử kháng thể thường hóa trị hai nghĩa lúc kết hợp với hai phân tử kháng ngun Cịn kháng ngun đa hóa trị nên lúc kết hợp với nhiều phân tử kháng thể Cho nên kháng nguyên kháng thể kết hợp với để tạo thành phức hợp hình mạng lưới khơng gian ba chiều Vì kích thước q lớn nên phức hợp kết tủa ngưng kết

Kháng nguyên kháng thể kết hợp với theo tỷ lệ phản ứng yếu thừa thiếu kháng nguyên kháng thể Phản ứng rõ rệt lúc số phân tử kháng nguyên tương đương với số phân tử kháng thể

Sự kết hợp phân tử kháng nguyên kháng thể xảy nhờ lực như: lực liên kết ion (lực tĩnh điện Coulomb) ngun tử nhóm hố học mang điện trái dấu, ví dụ NH3+ COO-, lực liên kết cầu nối hydro nguyên tử hydro

mang điện tích dương với nguyên tử mang điện tích âm, lực Van der Walls (lực hấp dẫn liên phân tử) hai phân tử phụ thuộc vào tương tác lớp mây điện tử mặt lực ố thuỷ diện tiếp xúc phía kháng nguyên kháng thể có axít amin ố thuỷ kháng ngun kháng thể kết hợp, nước bị đẩy tạo nên lực gắn axít amin ố thuỷ đó, kết hợp khơng phải phản ứng hóa học

Phản ứng kết hợp kháng nguyên kháng thể đặc hiệu Một kháng nguyên kết hợp với kháng thể kích thích thể tạo thành Do phản ứng kết hợp kháng nguyên - kháng thể sử dụng để xác định kháng nguyên kháng thể hai phân tử biết

Hiệu giá kháng thể huyết người động vật xác định nhờ kháng nguyên biết cho biết tiếp xúc trước với kháng nguyên Ngược lại nhờ kháng thể biết kháng nguyên khác vi sinh vật nhận mặt Mặt khác hiểu biết cấu tạo kháng nguyên cho phép chọn lựa thích đáng vi sinh vật dùng làm vaccine phòng ngừa bệnh nhiễm trùng

II PHẢN ỨNG KẾT TỦA

1 Nguyên lý

Phản ứng kết tủa kết hợp kháng nguyên hòa tan lúc gặp kháng thể tương ứng, tạo thành tủa quan sát trực tiếp mắt thường nhờ soi kính lúp

Kháng ngun đa hóa trị kết hợp với kháng thể hóa trị hai để tạo thành kết tủa hình mạng lưới chiều Phản ứng thực mơi trường lỏng mơi trường gel

2.1 Phản ứng định tính

Được thực với kháng huyết pha lỗng khơng pha lỗng Kháng huyết kháng nguyên trộn với quan sát kết tủa tạo thành Cũng cho kháng huyết vào ống nghiệm nhỏ sau cho kháng nguyên vào theo thành ống Một vòng kết tủa quan sát mặt phẳng phân cách

2.2 Phản ứng định lượng

Cho phép xác định lượng kháng thể kết tủa với lượng kháng nguyên biết Cho lượng kháng nguyên tăng dần vào lượng kháng huyết không đổi,lấy kết tủa ly tâm định lượng protein phương pháp thông thường để xác định lượng kháng thể phản ứng

3 Phản ứng kết tủa môi trường gel

2.1 Phản ứng khuếch tán đôi Ouchterlony

Kháng nguyên kháng thể đặt vào lỗ đục thạch Chúng khuếch tán tạo nên đường kết tủa mặt thạch Một phẩm vật chứa nhiều kháng nguyên tạo thành nhiều đường kết tủa

Những liên hệ miễn dịch hai kháng nguyên khảo sát phản ứng khuếch tán đơi Những dải kết tủa tạo thành cho biết tương đồng miễn dịch, đồng phần không liên hệ

2.2 Phản ứng khuếch tán đơn

Có thể làm cho khuếch tán môi trường gel nhạy cách trộn kháng thể vào thạch Kháng nguyên cho khuếch tán từ lỗ đục môi trường thạch chứa kháng thể Lúc bắt đầu khuếch tán, kháng nguyên nồng độ cao nên tạo thành phức hợp hòa tan Lúc khuếch tán xa hơn, nồng độ hạ dần đạt trị số thích nghi vịng kết tủa tạo thành Phương pháp khơng ứng dụng để nhận mặt kháng ngun mà cịn cho phép định lượng IgG huyết

III PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT

1 Nguyên lý

Phản ứng ngưng kết kết hợp kháng nguyên hữu hình với kháng thể tương ứng, tạo thành hạt ngưng kết quan sát mắt thường

Kháng nguyên vi khuẩn, hồng cầu, bạch cầu, tinh trùng.v.v Phản ứng ngưng kết chi xảy có chất điện giải, rõ nhất, nhanh pH từ đến 7,2 nhiệt độ 370C.

2 Phản ứng ngưng kết trực tiếp

Vi sinh vật sống chết có khả ngưng kết với kháng thể Với vi sinh vật sống, thực phản ứng phiến kính Phản ứng thường sử dụng để nhận mặt vi khuẩn Ngoài vi khuẩn, tếbào hồng cầu, tinh trùng có khả ngưng kết với kháng thể đối ứng

Trường hợp kháng nguyên vi sinh vật chết, thực phản ứng ống nghiệm để xác định hiệu giá kháng thể huyết chẩn đoán bệnh phản ứng Widal chẩn đoán bệnh thương hàn

3 Phản ứng ngưng kết gián tiếp

Để phòng ngừa cho bà mẹ Rh- khỏi bị nhạy cảm hóa kháng nguyên D đứa Rh+, tiêm vào người mẹ trước sinh đứa thứ lượng nhỏ kháng thể D

4 Phản ứng ngưng kết thụ động

Kháng nguyên hòa tan hấp phụ lên bề mặt mượn hạt bentonit, hạt latex thông dụng hồng cầu cừu Những hạt ngưng kết với kháng thể nhờ diện kháng nguyên dính vào bề mặt chúng Những hạt lớn nên phản ứng dương tính khám phá mắt thường Trong trường hợp hồng cầu sử dụng làm giá mang kháng nguyên phản ứng gọi phản ứng ngưng kết hồng cầu thụ động

Để phát kháng nguyên, người ta gắn kháng thể lên mượn Khi kháng thể gặp kháng nguyên đặc hiệu, tượng ngưng kết xuất Loại gọi phản ứng ngưng kết thụ động ngược

Phản ứng ngưng kết thụ động nhạy phản ứng ngưng kết trực tiếp nhờ hình thể tương đối lớn hạt mang kháng nguyên độ đặc hiệu cao phản ứng ngưng kết trực tiếp tinh chế kháng nguyên kháng thể trước gắn lên mượn Loại phản ứng dùng chẩn đoán nhiều bệnh nhiễm trùng dịch hạch, Whitmore, viêm màng não mủ

5 Phản ứng ngăn ngưng kết hồng cầu

Có số virus có khả ngưng kết hồng cầu số động vật phản ứng bị ức chế kháng huyết virus Đó phản ứng ngăn ngưng kết hồng cầu Phản ứng ngăn ngưng kết hồng cầu sử dụng để chẩn đoán nhiều chứng bệnh virus cúm, quai bị, sốt xuất huyết, đậu mùa.v.v

IV PHẢN ỨNG KẾT HỢP BỔ THỂ

1 Nguyên lý

Kháng thể đặc hiệu với tham gia bổ thể gây ly giải tế bào vi khuẩn số tế bào động vật khác

2 Các giai đoạn tiến hành phản ứng kết hợp bổ thể

Trong phịng thí nghiệm người ta thực phản ứng kết hợp bổ thể cách ghép hệ thống phản ứng:

- Trong hệ thống 1, kháng nguyên cho tác dụng với kháng thể (một yếu tố biết, yếu tố chưa biết) Nếu kháng nguyên kháng thể phản ứng đặc hiệu tất lượng bổ thể kết hợp vào phức hợp kháng nguyên - kháng thể (KN-KT)

- Hệ thống thứ hai sử dụng để nhận mặt bổ thể tự (không kết hợp) Thêm vào hệ thống thứ hồng cầu cừu huyết kháng hồng cầu cừu (hệ thống tan máu) Lúc bổ thể kết hợp vào phức hợp KN-KT hệ thống khơng cịn bổ thể để ly giải hồng cầu cừu nhạy cảm hóa Nếu hệ thống 1, kháng nguyên kháng thể không phản ứng đặc hiệu với bổ thể tự kết hợp với phức hợp hồng cầu cừu - kháng hồng cầu cừu làm tan hồng cầu cừu Cho nên đọc kết phản ứng dương tính lúc khơng có tan máu âm tính lúc có tan máu

Phản ứng kết hợp bổ thể sử dụng để chẩn đoán bệnh giang mai, bệnh virus để nhận mặt kháng nguyên kháng thể

V CÁC PHẢN ỨNG TRUNG HÒA

1.Nguyên lý

2 Phản ứng trung hòa độc tố

Độc tố nói ngoại độc tố Nêú liều chí mạng hay lớn độc tố hỗn hợp với lượng thích nghi kháng độc tố đối ứng tiêm hỗn hợp vào động vật nhạy cảm vật khơng bị nguy hiểm Tính độc độc tố bị kháng độc tố trung hòa Cũng phản ứng miễn dịch khác, phản ứng đặc hiệu: độc tố trung hòa với kháng độc tố tương ứng

Lượng kháng độc tố cần thiết để trung hòa lượng độc tố phụ thuộc với cách thức hỗn hợp cấu trúc với tùy theo điều kiện thí nghiệm độc tố có khả kết hợp với kháng độc tố tỷ lệ khác Nếu thay cho lượng độc tố biết vào lượng kháng độc tố để trung hòa, người ta cho lượng độc tố làm hai lần vào lượng kháng độc tố hỗn hợp khơng trung hịa động vật thí nghiệm Đó tượng Danysz Người ta cho lúc cho nửa lượng độc tố vào kháng độc tố độc tố kết hợp với nhiều kháng độc tố số lượng phân tử kháng độc tố tự cịn lại khơng đủ để trung hòa lượng độc tố lại

3 Phản ứng trung hịa virus

Nhiều lồi virus phát triển ni cấy tế bào phá hủy tế bào (hiện tượng tế bào bệnh lý) cho kháng thể tương ứng virus vào đồng thời với virus virus bị trung hịa khơng nhân lên tượng tế bào bệnh lý không xảy Phản ứng sử dụng để xác định hàm lượng kháng thể huyết định type virus

Mặt khác định lượng kháng thể virus huyết cách hỗn hợp kháng huyết với virus tiêm hỗn hợp vào nhóm động vật nhạy cảm Nếu động vật thử nghiệm không cho thấy triệu chứng bệnh diện kháng thể trung hịa chứng minh

4 Phản ứng trung hòa enzyme

Nhiều enzyme vi khuẩn có tính chất sinh kháng tốt kích thích tạo thành kháng thể streptolysin O, streptokinase liên cầu khích động tạo thành kháng streptolysin O (antistreptolysin O - ASO), kháng streptokinase (anti streptokinase - ASK) Dựa nguyên tắc phản ứng trung hịa định lượng kháng streptolysin O (ASO), kháng streptokinase (ASK) có huyết bệnh nhân để chẩn đoán nhiễm liên cầu Đặc biệt phản ứng ASO phát kháng thể kháng streptolysin O sử dụng chẩn đoán bệnh thấp tim viêm cầu thận cấp sau nhiễm liên cầu nhóm A

VI PHẢN ỨNG MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG

1.Nguyên lý

Những thuốc nhuộm huỳnh quang Fluorescein, Rhodamin kết hợp với kháng thể mà khơng phá hủy tính chất đặc hiệu kháng thể Kháng thể liên hợp có khả kết hợp với kháng nguyên phức hợp KN-KT quan sát kính hiển vi huỳnh quang

2 Phương pháp trực tiếp

Kháng thể liên hợp với thuốc nhuộm huỳnh quang cho tác dụng với kháng nguyên Ví dụ chẩn đốn vi khuẩn tả sau - nuôi cấy nước pepton kiềm, làm phiến phết nhuộm với kháng huyết liên hợp với Fluorescein Quan sát kính hiển vi huỳnh quang, ta phát thấy khuẩn tả phát huỳnh quang xanh lục mầu phân dương tính

3 Phương pháp gián tiếp

globulin người gắn Fluorescein quan sát kính hiển vi huỳnh quang Phương pháp sử dụng để chẩn đoán bệnh giang mai (phản ứng FTA - Abs), bệnh tự miễn Phương pháp gián tiếp có nhiều ưu điểm như: Sự phát huỳnh quang mạnh hơn, tiết kiệm thời gian nhiều huyết thử nghiệm lúc

VII PHẢN ỨNG MIỄN DỊCH ENZYME (Enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA)

Nguyên lý: Kỹ thuật sử dụng kháng thể kháng nguyên cố định vào polystyren Sau dùng để bắt kháng nguyên kháng thể đối ứng dung dịch thử nghiệm phức hợp phát nhờ enzyme gắn với kháng thể kháng nguyên tác động lên chất đặc hiệu Cơ chất enzyme thủy phân đo quang phổ kế, tỷ lệ với nồng độ kháng thể kháng nguyên dung dịch thử nghiệm

Kháng nguyên kháng thể liên hợp với enzyme giữ hoạt tính miễn dịch Enzyme sử dụng photphatase kiễm peroxydase Thử nghiệm cho kết khách quan nhạy Thử nghiệm miễn dịch liên kết enzyme áp dựng để chẩn đoán những vi khuẩn giang mai, Brucella, Salmonella, vi khuẩn tả virus virus viêm gan, virus sởi, virus rota

VIII PHẢN ỨNG MIỄN DỊCH PHÓNG XẠ (Radioimmunoassay: RIA)

Nguyên lý: Dùng đồng vị phóng xạ Thymidin H3 Cacbon 14, I125 đánh dấu

kháng nguyên kháng thể để theo dõi phản ứng kết hợp kháng nguyên kháng thể

Có thể xác định vị trí kháng ngun (hoặc kháng thể) đánh dấu đồng vị phóng xạ cách cho nhũ tương ảnh lên tiêu tổ chức học, sau phát phương pháp chụp ảnh thông thường Để phát đo lường đồng vị phóng xạ mơi trường lỏng, ví dụ đồng vị phát xạ beta (như thymidin H3, Cacbon C14 ), cần dùng

dung dịch nhấp nháy đo máy đếm tự động Phương pháp đồng vị phóng xạ khơng khu trú vị trí kết hợp cách xác mà cịn làm tăng độ nhạy cảm phản ứng lên hàng nghìn lần

IX KỸ THUẬT SẮC KÝ MIỄN DỊCH

Nguyên lý: Phức hợp kháng kháng thể (KKT) gắn chất màu phân bố giấy sắc ký Kháng nguyên (KN) đặc thù vi sinh vật gắn cố định “vạch phản ứng” Khi nhỏ huyết cần xác định kháng thể (KT) lên sắc ký, KT đặc hiệu (nếu có) huyết kết hợp với KKT gắn màu, phức hợp miễn dịch KT-KKT gắn màu di chuyển giấy sắc ký bị giữ lại “vạch phản ứng” KT kết hợp với KN vi sinh vật, kết “vạch phản ứng” màu Nếu huyết khơng có KT đặc hiệu, “vạch phản ứng” KN giữ KKT gắn màu, khơng màu

X NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ CÁC PHẢN ỨNG KẾT HỢP KHÁNG NGUYÊN KHÁNG THỂ

Trong nhận định kết phản ứng kháng nguyên kháng thể trước hết phải lưu ý đến độ nhạy

1 Kết định tính

Kết định tính cho biết mẫu xét nghiệm có hay khơng có kháng thể kháng ngun Thơng thường kết phản ứng ký hiệu mức độ dương tính (+, + +, + + +) , khơng rõ dương tính hay âm tính (+/-), âm tính (-) Các ký hiệu có tiêu chuẩn quy định phụ thuộc vào chủ quan người đọc kết

2 Kết định lượng

đánh giá qua hiệu giá kháng thể Thông thường kháng thể người bệnh pha loãng dần theo cấp sô Đậm độ huyết thấp cho kết dương tính đậm độ hiệu giá

Các phản ứng định lượng cần thiết để theo dõi động lực kháng thể huyết kép thường lấy cách ngày Động lực kháng thể đại lượng đặc trưng cho mức độ thay đổi hiệu giá kháng thể theo thời gian Trong nhận định, quan trọng số thương hiệu số hai lần kết Đối với bệnh virus hiệu giá kháng thể tăng lên lần có giá trị chắn

3 Ranh giới hiệu giá

Là ranh giới hiệu giá kháng thể bình thường hiệu giá bệnh lý Liên cầu thường cư trú hầu hết người nên huyết hầu hết người có kháng thể kháng streptolysin O (ASO) Vì người ta xem 1/200 (200 đơn vị /ml), hiệu giá ranh giới Chỉ huyết có 400 đơn vị/ml trở lên bệnh lý

4 Kết dương tính giả

Hay gặp lúc làm phản ứng huyết học kỹ thuật vài trạng thái sinh lý bệnh lý người bệnh

Trong huyết học cổ điển chẩn đoán giang mai với kháng nguyên lipoit thấy nhiều kết dương tính giả (sốt rét, số bệnh ký sinh trùng khác ) Trong thực tế người ta thực nhiều phản ứng huyết học khác lúc để kiểm tra dương tính giả Ví dụ Kolmer, Kaln, VDRL dùng kháng nguyên đặc hiệu để tránh dương tính giả, ví dụ TPI, FTA-Abs

5 Kết âm tính giả

Có nhiều nguyên nhân dẫn đến tượng âm tính giả như: thành phần tham gia phản ứng không chuẩn độ, lượng kháng thể nhiều so với kháng nguyên ngược lại, kháng thể mẫu kháng nguyên mẫu bị hỏng

Để khắc phục tượng dương tính giả, âm tính giả phải chuẩn độ thành phần tham gia phản ứng, đảm bảo điều kiện phản ứng (dung dịch đệm, nhiệt độ, thời gian ủ ) phải luôn có chứng dương, chứng âm

VACCINE VÀ HUYẾT THANH Mục tiêu học tập

1 Trình bày nguyên lý sử dụng phân loại vaccine huyết thanh. 2 Trình bày nguyên tắc sử dụng vaccine huyết thanh.

Vaccine huyết chế phẩm phòng ngừa bệnh nhiễm trùng phương tiện miễn dịch Những phương tiện biến đổi tính thụ cảm vật chủ thành đề kháng tạm thời vĩnh viễn Chúng tạo nên tính miễn dịch hoạt động (vaccine) thụ động (huyết thanh) thông thường đặc hiệu

I VACCINE

1 Nguyên lý sử dụng vaccine

bảo độ an toàn cần thiết, làm cho thể tự tạo tình trạng miễn dịch chống lại tác nhân gây bệnh

Sự bảo vệ hình thành nhờ đáp ứng miễn dịch vừa dịch thể (globulin miễn dịch đặc hiệu IgG, IgA IgM), vừa trung gian tế bào (đại thực bào tế bào lympho)

Cường độ hiệu đáp ứng miễn dịch biến thiên theo :

- Vaccine: Tính chất nồng độ kháng nguyên, chất phụ gia miễn dịch, thường sử dụng muối kim loại: Al Ca tăng cường đáp ứng vài vaccine bất hoạt

- Vật chủ: Tuổi nhân tố quan trọng Trẻ sơ sinh cần tháng để đạt trưởng thành miễn dịch (dịch thể), ngồi kháng thể từ sữa mẹ đóng vai trị ngăn ngừa bệnh nhiễm trùng Ngược lại đáp ứng miễn dịch giảm dần với tuổi không biến người lớn tuổi Những nhân tố di truyền, chưa biết rõ ảnh hưởng đến cường độ đáp ứng miễn dịch Cuối vài nhân tố làm suy giảm đáp ứng miễn dịch, chúng di truyền khơng có  globulin huyết, giảm sút tế bào miễn dịch mắc phải bệnh u ác tính, điều trị giảm miễn dịch, suy dinh dưỡng

2 Các loại vaccine

2.1 Vaccine sống giảm độc lực

Là tác nhân nhiễm trùng tự nhiên, làm giảm độc cách nhân tạo phịng thí nghiệm Vaccine đậu mùa, vaccine lịch sử, virus động vật (đậu bị) có khả đem lại bảo vệ chéo chống lại virus đậu mùa mà gần gũi Phần lớn vaccine sống có vaccine virus: vaccine sốt vàng, vaccine bại liệt, sởi, rubêon, quai bị Một vaccine vi khuẩn sống thường sử dụng BCG Đối với vaccine sống, chủng ngừa thường lần, gây nên nhiễm trùng nhẹ không biểu hiện, nhân lên virus thể gây nên miễn dịch thường lâu bền, tương đương với miễn dịch nhiễm trùng tự nhiên

Những thuận lợi vaccine sống tiện lợi (tiêm lần), giá thành thường rẻ Điều bất tiện đem lại nguy nhiễm trùng (phản ứng biến chứng)

2.2 Vaccine chết

Là chế phẩm kháng nguyên khả nhiễm trùng cịn bảo tồn tính chất gây miễn dịch Người ta phân biệt :

2.2.1 Những vaccine chết toàn thể

Loại vaccine chứa tất thành phần tác nhân nhiễm trùng, giết chết nhiệt, formol  propiolacton, bao gồm vaccine vi khuẩn ho gà, thương hàn TAB, dịch tả vaccine virus cúm, bại liệt, dại

2.2.2 Những vaccine chết chứa kháng nguyên tinh chế

Loại vaccine bao gồm thành phần kháng nguyên quan trọng phương diện sinh miễn dịch vi khuẩn virus tinh khiết làm bất hoạt Ví dụ vaccine chứa giải độc tố vi khuẩn chất protein (vaccine uốn ván, vaccine bạch hầu), vaccine chứa thành phần polysaccharide vi khuẩn (vaccine não mô cầu, vaccine phế cầu), vaccine chứa thành phần kháng nguyên virus (vaccine virus viêm gan B điều chế từ HBsAg có huyết tương người nhiễm kháng nguyên này)

Những vaccine chết có ưu điểm khơng có nguy nhiễm trùng Những bất lợi bao gồm: giá thành thường cao, nguy mẫn cảm, lịch chủng ngừa nhiều lần lặp lại 2.3 Vaccine tái tổ hợp

3 Nguyên tắc sử dụng vaccine

Việc sử dụng vaccine phải đảm bảo nguyên tắc sau: - Tiêm chủng phạm vi rộng, đạt tỷ lệ cao

- Tiêm chủng đối tượng

- Bắt đầu tiêm chủng lúc, bảo đảm khoảng cách lần tiêm chủng, tiêm chủng nhắc lại thời gian

- Tiêm chủng đường liều lượng

- Nắm vững phương pháp phòng xử trí phản ứng khơng mong muốn tiêm chủng

- Bảo quản vaccine quy định 3.1 Phạm vi tỷ lệ tiêm chủng

3.1.1 Phạm vi tiêm chủng

3.1.2 Tỷ lệ tiêm chủng

Những khu vực có lưu hành bệnh truyền nhiễm, tiêm chủng phải đạt 80% đối tượng chưa có miễn dịch có khả ngăn ngừa dịch Nếu tỷ lệ tiêm chủng đạt khoảng 50 đến 80%, nguy xảy dịch giảm bớt Nếu tỷ lệ tiêm chủng 50% dịch dễ dàng xảy

3.2 Đối tượng tiêm chủng

Đối tượng cần tiêm chủng loại vaccine tất người có nguy nhiễm vi sinh vật gây bệnh mà chưa có miễn dịch

Trẻ em đối tượng cần đặc biệt quan tâm Sau hết miễn dịch thụ động mẹ truyền (trong thời gian khoảng tháng), nguy mắc bệnh nhiễm trùng trẻ lớn Mặt khác miễn dịch thụ động nhờ kháng thể truyền qua rau thai qua sữa có bệnh mà chế bảo vệ chủ yếu miễn dịch dịch thể Đối với bệnh nhiễm trùng mà chế bảo vệ miễn dịch qua trung gian tế bào trẻ bị bệnh từ tháng sau sinh Những hiểu biết sở cho việc quy định thời điểm bắt đầu tiêm chủng cho trẻ em Trừ đối tượng chống định, tất trẻ em phải tiêm chủng

Đối với người lớn, đối tượng tiêm chủng thu hẹp Thường tiến hành tiêm chủng cho nhóm người có nguy cao Những người du lịch đến vùng dịch tể cần phải tiêm chủng

Trong năm gần đây, để phòng bệnh uốn ván sơ sinh, phụ nữ lứa tuổi sinh đẻ tiêm phòng uốn ván

Diện chống định tiêm chủng có hướng dẫn riêng cho vaccine Nói chung khơng tiêm chủng cho đối tượng sau đây:

- Những người bị sốt cao Những trường hợp bị nhiễm trùng nhẹ không sốt sốt nhẹ khơng cần phải hỗn tiêm chủng

- Những người tình trạng dị ứng Những người có địa dị ứng có lịch sử gia đình bị dị ứng tiêm chủng được, cần phải theo dõi cẩn thận

- Vaccine sống giảm độc lực không tiêm chủng cho người bị thiếu hụt miễn dịch, người dùng thuốc ức chế miễn dịch người mắc bệnh ác tính

- Tất loại vaccine virus sống giảm độc lực không tiêm cho phụ nữ mang thai

3.3 Thời gian tiêm chủng

Việc tiêm chủng tiến hành thường xuyên tập trung tiêm chủng hàng loạt tuỳ thuộc vào yêu cầu loại vaccine điều kiện cụ thể khác

3.3.1 Thời điểm tổ chức tiêm chủng

Khi xác định quy luật xuất dịch, cần phải tiến hành tiêm chủng đón trước mùa dịch, để thể có đủ thời gian hình thành miễn dịch Đối với vaccine tiêm chủng lần đầu, thời gian tiềm tàng kéo dài từ 24 (trung bình khoảng tuần), tuỳ thuộc vào chất vaccine tính phản ứng thể Hiệu giá kháng thể đạt đỉnh cao sau khoảng ngày đến tuần (trung bình tuần) Đó kết đáp ứng tiên phát Khi tiêm chủng nhắc lại, thời gian tiềm tàng rút ngắn, hiệu giá kháng thể đạt đỉnh cao sau số ngày nhờ tế bào lympho có trí nhớ miễn dịch Đó kết đáp ứng miễn dịch thứ phát

Đối với vaccine phải tiêm chủng nhiều lần (khi tạo miễn dịch bản), khoảng cách hợp lý lần tiêm chủng tháng Nếu khoảng cách ngắn hơn, tiêm chủng lần sau kết đáp ứng thể tiên phát, đáp ứng miễn dịch thứ phát khơng có bị hạn chế Ngược lại lý phải tiêm chủng lần sau tháng, hiệu miễn dịch đảm bảo, lần tiêm chủng trước tính Tuy nhiên khơng nên kéo dài việc tiêm chủng khơng có lý bắt buộc, trẻ bị măc bệnh trước tiêm chủng đầy đủ

3.3.3 Thời gian tiêm chủng nhắc lại

Thời gian tiêm chủng nhắc lại tuỳ thuộc vào thời gian trì tình trạng miễn dịch có đủ hiệu lực bảo vệ loại vaccine Thời gian khác loại vaccine khác Khi tiêm chủng nhắc lại thường cần lần Với lần tăng cường này, thể đáp ứng miễn dịch nhanh mạnh hơn, cho dù kháng thể lần tiêm chủng trước cịn lại

3.4 Liều lượng đường đưa vaccine vào thể 3.4.1 Liều lượng

Liều lượng vaccine tuỳ thuộc vào loại vaccine đường vào thể Liều lượng thấp không đủ khả kích thích thể đáp ứng miễn dịch Ngược lại, liều lượng lớn dẫn đến tình trạng dung nạp đặc hiệu lần tiêm chủng

3.4.2 Đường tiêm chủng

Mỗi loại vaccine địi hỏi cách thức chủng ngừa thích hợp Người ta sử dụng nhiều phương pháp chủng ngừa :

- Chủng (rạch da): đường cổ điển nhất, thực từ lúc Jenner sáng chế vaccine phòng bệnh đậu mùa Đối với vaccine này, đường chủng dùng bệnh đậu mùa bị tiêu diệt hoàn toàn hành tinh (1979), không cần phải chủng đậu Ngày đường chủng sử dụng cho số vaccine (BCG, dịch hạch)

- Đưịng tiêm: tiêm da, tiêm da tiêm bắp, không tiêm vaccine vào đường tĩnh mạch Đa số vaccine tiêm da, số vaccine không cho phép sử dụng cách chủng ngừa này, BCG phải tiêm da, tiêm da thường hay gây loét Phương pháp tiêm da có nhiều ưu điểm : cần lượng vaccin tương đối nhỏ (0,1ml), gây phản ứng, hiệu ứng miễn dịch khơng phương pháp tiêm da Tiêm da thực bơm kim tiêm bơm nén áp lực không kim, phương pháp giúp việc tiêm chủng nhanh chóng dễ thực với quy mô rộng rãi, cần lưu ý kỹ thuật

- Đường uống: Đường uống đường đưa vaccine vào thể dễ thực Tuy nhiên thực vaccine khơng bị dịch đường tiêu hố phá huỷ Sự hiểu biết tốt vai trò miễn dịch chổ IgA tiết, vaccine phòng nhiễm trùng đường tiêu hoá nhiếm trùng nơi khác vi sinh vật xâm nhập vào thể theo đường tiêu hoá sử dụng (như vaccin bại liệt) nghiên cứu đưa vào thể cách uống Đường uống có lợi điểm kích thích miễn dịch chỗ mạnh nhiều so với đường tiêm, đường uống không bảo đảm cố định virut vaccine, uống ba lần liên tiếp vaccin bại liệt xem cần thiết đê tạo thành miễn dịch

- Ngậm lưỡi: có số vaccine đường ruột điều chế dạng viên để ngậm lưỡi Cần phải có liều lượng kháng nguyên cao bảo đảm tác dụng gây miễn dịch

- Ngoài vaccine đưa vào thể theo số đường khác khí dung, thụt đại tràng, đường sử dụng

3.5 Các phản ứng phụ tiêm chủng

Về nguyên tắc, vaccine phải đảm bảo đủ độ an toàn Song thực tế khơng thể đạt mức độ an tồn tuyệt đối Tất vaccine gây phản ứng phụ số người

- Phản ứng chỗ: Những phản ứng nhẹ thường gặp sau tiêm chủng nơi tiêm đau, mẩn đỏ, sưng cục nhỏ Những phản ứng nhanh chóng sau vài ngày, khơng cần phải can thiệp Nếu tiêm chủng khơng đảm bảo vơ trùng, nơi tiêm chủng bị viêm nhiễm, làm mủ

- Phản ứng toàn thân: Trong phản ứng toàn thân, sốt hay gặp (10 - 20%) Sốt thường hết nhanh sau vài ngày Co giật gặp với tỷ lệ thấp (1/10.000), hầu hết khỏi không để lại di chứng Một số vaccine gây phản ứng nguy hiểm hơn, có sốc phản vệ, nhiên tỷ lệ thấp

Khi bàn đến phản ứng vaccine, cần thiết phải nhấn mạnh mức độ nguy hiểm vaccine nhỏ nhiều so với mức độ nguy hiểm bệnh nhiễm trùng tương ứng gây Thí dụ, tỷ lệ biến chứng nguy hiểm bệnh ho gà gấp hàng trăm đến hàng nghìn lần phản ứng nguy hiểm vaccine bạch hầu - ho gà - uốn ván (vaccine DPT) gây

3.6 Bảo quản vaccine

Vaccine dễ bị hỏng không bảo quản Chất lượng vaccine ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu lực tạo miễn dịch, vaccine cần phải bảo quản tốt từ lúc sản xuất tiêm chủng vào thể Thường quy bảo quản vaccine không giống nhau, nói chung vaccine cần bảo quản điều kiện khô, tối lạnh

Nhiệt ánh sáng phá huỷ tất loại vaccine, vaccine sống vaccine sởi, bại liệt vaccine BCG sống Ngược lại, đông lạnh phá huỷ nhanh vaccine giải độc tố (như vaccine phòng uốn ván bạch hầu) Trong trình sử dụng cộng đồng, vaccine cần bảo quản nhiệt độ khoảng từ 20C đến 80C.

Một công việc quan trọng việc tổ chức tiêm chủng tạo lập dây chuyền lạnh Dây chuyền lạnh khơng đơn có nhà lạnh, tủ lạnh, phích đá hộp cách nhiệt mà cịn phải lưu ý khâu trung gian trình vận chuyển vaccine tiến hành tiêm chủng Vaccine bị phá huỷ dù có bảo quản lại điều kiện thích hợp khơng thể có hiệu lực trở lại, khơng có tác dụng nữa, phải loại bỏ

4 Tiêu chuẩn vaccine

Hai tiêu chuẩn vaccine an toàn hiệu lực 4.1 An toàn

Một vaccine lý tưởng sử dụng không gây bệnh, không gây độc không gây phản ứng Sau sản xuất vaccine phải quan kiểm định nhà nước kiểm tra chặt chẽ mặt vô trùng, khiết không độc

- Vô trùng: vaccine không nhiễm vi sinh vật khác, vi sinh vật gây bệnh

- Thuần khiết: kháng nguyên đưa vào để kích thích thể đáp ứng miễn dịch chống vi sinh vật gây bệnh, không lẫn thành phần kháng nguyên khác gây phản ứng phụ bất lợi

Tuy nhiên, khơng có vaccine đạt độ an toàn tuyệt đối Khi cân nhắc để định xem vaccine có đưa vào sử dụng hay không, cần phải so sánh mức độ phản ứng vaccine tính nguy hiểm bệnh nhiễm trùng tương ứng

4.2 Hiệu lực

Vaccine có hiệu lực lớn vaccine gây miễn dịch mức độ cao tồn thời gian dài

Hiệu lực vaccine khác Người ta đánh giá cách đo đáp ứng miễn dịch Sự đáp ứng dịch thể khám phá rõ ràng định lượng thử nghiệm huyết khác nhau, phản ảnh bảo vệ nhiều tùy theo lượng kháng thể máu Miễn dịch trung gian tế bào khó đánh giá trừ trường hợp sử dụng kỹ thuật tìm mẫn cảm thử nghiệm tuberculin Nhưng nhờ đánh giá kết dịch tễ học người ta đo hiệu lực thực sự chủng ngừa Việc đơi gặp khó khăn làm phát sinh mâu thuẫn

Ngoài tiêu chuẩn trên, để chọn vaccine tiêm chủng, người ta quan tâm đến giá thành tính thuận lợi cho việc tiến hành tiêm chủng

5 Phối hợp vaccine

Mục đích việc phối hợp vaccine giảm bớt số mũi tiêm chủng làm giảm bớt số lần tổ chức tiêm chủng Có hai loại phối hợp vaccine:

- Tiêm chủng vaccine phối hợp (trộn vaccine với nhau, tiêm chủng lần, đường)

- Tiêm chủng nhiều vaccine riêng biệt thời gian, vị trí khác theo đường khác

Phối hợp vaccine phải đảm bảo giữ hiệu lực tạo miễn dịch khơng gây tác hại Hiệu lực tạo miễn dịch thành phần vaccine phải chúng tiêm chủng riêng rẻ Một số trường hợp phối hợp vaccine tạo đáp ứng miễn dịch mạnh Ngược lại có trường hợp phối hợp khơng hợp lý làm giảm hiệu lực tạo miễn dịch Sự phối hợp vaccine hợp lý không làm tăng tỷ lệ phản ứng phụ, nghĩa độ an toàn đảm bảo chúng tiêm chủng riêng rẽ thời gian khác

6 Lịch tiêm chủng

Cơ sở xây dựng lịch tiêm chủng hiểu biết dịch tể học bệnh truyền nhiễm đáp ứng miễn dịch đối tượng tiêm chủng Trước lập lịch tiêm chủng cần phải xác định vấn đề sau đây: tuổi tốt cho việc tiến hành tiêm chủng vaccine, thời gian trẻ có nguy mắc bệnh lớn nhất, tính nguy hiểm bệnh lứa tuổi khác khả đáp ứng trẻ tiêm chủng Tuy nhiên, dịch tể học bệnh truyền nhiễm thời gian bị thay đổi việc sử dụng vaccine, lịch tiêm chủng cần điều chỉnh cho phù hợp với tình hình

Căn vào dịch tể học bệnh truyền nhiễm nước phát triển khả cung cấp vaccine, Tổ chức Y tế giới đưa chương trình tiêm chủng mở rộng với mục tiêu làm giảm tỷ lệ trẻ em mắc tử vong bệnh bạch hầu, ho gà, uốn ván, lao, sởi bại liệt tiêm chủng vaccine Lịch tiêm chủng vaccine chương trình tiêm chủng mở rộng Tổ chức Y tế giới khuyến cáo sau:

Vaccine Liều lượng Đường tiêm chủng Tuổi tiêm chủng

BCG (phòng lao) 0,1 ml Trong da

(thường cánh tay trái)

Sơ sinh lúc sau

tháng tuổi DPT (phòng bạch hầu, ho

gà, uốn ván)

0,5 ml Tiêm bắp (thường đùi) Lúc 2,3,4 tháng tuổi

Sởi 0,5 ml Dưới da

(thường cánh tay trái)

Lúc tháng tuổi sớm sau

Lịch tiêm chủng thơng dụng hướng dẫn mà người ta áp dụng với mức độ tương đối uyển chuyển tùy theo hồn cảnh cá nhân Lúc có chậm trễ áp dụng lịch, không cần bắt đầu lại chương trình, cần lấy lại giai đoạn bị gián đoạn Trí nhớ miễn dịch đặc biệt hiệu thời gian dài

Ngoài tiêm chủng mở rộng trẻ tuổi, tiêm chủng định trường hợp sau:

- Hoàn cảnh cá nhân bị thương tích: vết thương, tiêm giải độc tố uốn ván; động vật dại cắn, tiêm vaccine dại Những tiêm chủng thực sau bị thương tích bị cắn hiệu thời gian bảo vệ vaccine lớn thời gian ủ bệnh Bệnh uốn ván nhờ tránh khỏi mũi tiêm nhắc lại Trong bệnh dại, thời gian ủ bệnh thơng thường lâu nên có thê tiêm chủng sơ khởi

- Nguy nghề nghiệp: tiêm vaccine viêm gan B cho cán có nguy bệnh viện

- Nguy bệnh dịch: tiêm chủng nhanh cho tập thể có nguy dẫn đến bệnh bại liệt, sởi, đậu mùa, não mô cầu, tả

II HUYẾT THANH

1 Nguyên lý sử dụng huyết thanh

Dùng huyết miễn dịch đưa vào thể kháng thể có nguồn gốc từ người hay động vật, giúp cho thể có kháng thể đặc hiệu chống lại tác nhân gây bệnh Điều trị huyết đem lại tính miễn dịch thụ động tức thời thoáng qua, điều trái ngược với tính miễn dịch hoạt động bền vững tiêm chủng

2 Phân loại huyết

Người ta sử dụng loại huyết thanh:

- Huyết khác loài cổ điển, nguồn gốc động vật chủ yếu ngựa Những huyết đặc hiệu bệnh nhiễm trùng định đặc biệt mà động vật cho miễn dịch hóa trước Loại huyết có lợi điểm rẻ có bất lợi dung nạp kém, gây mẫn tức thời shock phản vệ mẫn chậm bệnh huyết thanh, hiệu lực lại ngắn hạn kéo dài đến hay tuần lễ sau lần tiêm thứ nhất, vài ngày sau lần tiêm Sử dụng huyết khác loài phải nên hạn chế phải tránh tiêm lại người

- Huyết đồng loài nguồn gốc người, sử dụng gần Đó chế phẩm globulin miễn dịch chủ yếu  globulin người tinh chế, loại tất nguy nhiễm trùng virus viêm gan, HIV Đối với huyết đồng loài người ta phân biệt globulin miễn dịch đa giá (bình thường) lấy từ máu người khoẻ mạnh từ máu rau thai globulin miễn dịch đặc hiệu bào chế từ máu người có miễn dịch người lành bệnh nhiễm trùng tiêm chủng Trong globulin miễn dịch đặc hiệu, nồng độ kháng thể chống lại vi sinh vật, nguyên bệnh nhiễm trùng, thường cao gấp hàng chục lần globulin miễn dịch đa giá

3 Nguyên tắc sử dụng huyết thanh

Các nguyên tắc phải thực sử dụng huyết là: - Đúng đối tượng

- Đúng liều lượng - Đúng đường

- Đề phòng phản ứng - Phối hợp sử dụng vaccine 3.1 Đối tượng

Huyết sử dụng nhiều để chữa dự phòng bệnh nhiễm trùng Ngồi cịn sử dụng cho số mục đích khác điều trị thiếu hụt miễn dịch, dị ứng dự phòng bệnh tan máu sơ sinh

- Những huyết chống nhiễm trùng có hiệu lực với bệnh mà chế bảo vệ chủ yếu nhờ miễn dịch dịch thể Kinh điển huyết kháng uốn ván (SAT) huyết kháng bạch hầu (SAD) Huyết kháng ho gà, kháng sởi tiêm cho trẻ chưa tiêm chủng có tiếp xuc với bệnh nhân Huyết kháng dại tiêm cho người bị chó dại cắn nghi dại cắn với vết thương nặng gần đầu Ngồi cịn có huyết kháng virus viêm gan, vius quai bị, rubêon Globulin miễn dịch tiêm cho bệnh nhân viêm đường hô hấp tái phát nhiều lần

- Globulin miễn dịch người đa giá thường sử dụng trường hợp sau: + Điều trị suy giảm miễn dịch thể bẩm sinh thu hoạch

+ Một vài hồn cảnh bệnh lý có nguy nhiễm trùng trầm trọng bỏng + Phòng ngừa vài bệnh nhiễm trùng phổ biến sởi, viêm gan A

- Globulin miễn dịch kháng D dùng cho người mẹ có nhóm máu Rh (-) sinh có Rh (+) có tác dụng ngăn cản hình thành kháng thể kháng Rh tránh nguy tan máu sơ sinh cho đứa trẻ sau Cơ chế tượng globulin miễn dịch kháng D phá huỷ hồng cầu Rh (+) đứa trẻ xâm nhập vào dịng tuần hồn người mẹ sinh Do chế này, việc tiêm globulin kháng D có hiệu thời gian 72 sau sinh

Globulin miễn dịch người trung hịa hiệu lực vài vaccine sống, nên tránh tiêm vaccine sởi tháng sau tiêm globulin miễn dịch người

3.2 Liều lượng

Liều lượng huyết sử dụng tuỳ thuộc vào tuổi cân nặng bệnh nhân, trung bình từ 0,1 đến ml/kg cân nặng tuỳ theo loại huyết mục đích sử dụng Huyết kháng uốn ván tính theo đơn vị, trung bình 250 đơn vị cho trường hợp Nếu vết thương bẩn tiêm chậm sau 24 liều lượng phải tăng gấp đôi

3.3 Đường đưa huyết vào thể

Huyết thường đưa vào thể đường tiêm bắp Đối với loại huyết tinh chế đạt tiêu chuẩn cao, tiêm tĩnh mạch nên hạn chế Tuyệt đối không tiêm tĩnh mạch huyết có nguồn gốc từ động vật (dù tinh chế) huyết người chưa đạt độ tinh chế cao

3.4 Đề phòng phản ứng

- Trước hết phải hỏi xem bệnh nhân tiêm huyết ngựa lần chưa? Trường hợp bệnh nhân tiêm huyết cần phải cân nhắc cẩn thận Nếu thấy thật cần thiết tiêm lại lần thứ tỷ lệ phản ứng cao nhiều so với lần thứ

- Làm phản ứng giải mẫn cảm (phản ứng Besredka) trước tiêm: pha loãng huyết 10 lần với nước muối sinh lý 0,85 %, tiêm 0,1 ml da Nếu khơng có mẫn đỏ sau 30 phút tiêm lượng huyết cần thiết Nếu có mẫn đỏ mà khơng có huyết đồng lồi để tiêm tình trạng bệnh nhân bắt buộc phải sử dụng huyết phải tiêm từ liều nhỏ đến liều lớn cách 20-40 phút tiêm hết liều cần thiết

- Trong trình tiêm huyết cần theo dõi bệnh nhân liên tục để kịp thời can thiệp có phản ứng xảy ra, đặc biệt phải chuần bị đầy đủ điều kiện để xử trí sốc phản vệ

3.5 Tiêm vaccine phối hợp

Kháng thể tiêm huyết phát huy hiệu lực sau tiêm, tồn thời gian ngắn Hiệu giá kháng thể giảm nhanh ngày đầu, giảm chậm bị loại trừ hết sau khoảng 10 - 15 ngày, phản ứng với kháng nguyên vi sinh vật bị thể chuyển hoá giống số phận protein lạ khác Việc tiêm vaccine phối hợp nhằm kích thích thể tạo miễn dịch chủ động thay lúc miễn dịch thụ động tiêm huyết hết hiệu lực

4 Các phản ứng tiêm huyết thanh

Nói chung loại globulin miễn dịch có nguồn gốc từ người tinh chế cao đưa vào thể đường tiêm bắp gây phản ứng nguy hiểm Tuy nhiên cần phải lưu ý rằng, tỷ lệ phản ứng tiêm huyết cao nhiều so với phản ứng tiêm chủng vaccine Những phản ứng tiêm huyết hai chế chính:

- Do thể phản ứng với thành phần kháng nguyên lạ, huyết chưa tinh chế cao

- Do thể sản xuất kháng thể chống lại globulin miễn dịch Các phản ứng tiêm huyết chỗ toàn thân 4.1 Phản ứng chỗ

Nơi tiêm bị đau, mẩn đỏ Những phản ứng thường nhẹ, không gây nguy hiểm hết sau ngày

4.2 Phản ứng tồn thân

Bệnh nhân bị sốt, rét run, khó thở, đau khớp, số trường hợp bị nhức đầu nôn Sốc phản vệ phản ứng nguy hiểm Nếu tiêm huyết lần đầu, phản ứng thường xuất sau 10 - 14 ngày Nếu tiêm huyết lần thứ hai, phản ứng xảy sau tiêm đến sau vài ngày, tuỳ thuộc vào lượng kháng thể lần tiêm trước cịn nhiều hay

Các triệu chứng sốc phản vệ khó thở phù nề đường hô hấp co thắt quản; ngứa toàn thân; mề đay ban sẩn khắp người, sưng mắt Bệnh nhân đau bụng bí đái trơn bị co thắt

VI SINH VẬT TRONG TỰ NHIÊN VÀ KÝ SINH Ở NGƯỜI

CÁC ĐƯỜNG TRUYỀN BỆNH Mục tiêu học tập

1.Trình bày phân bố vi khuẩn đất, nước không khí các yếu tố ảnh hưởng đến phân bố đó

2 Trình bày vi khuẩn ký sinh thể người vai trò chúng 3 Trình bày đường lây truyền bệnh

Vi sinh vật phân bố khắp nơi tự nhiên Người ta thấy chúng đất, nước, khơng khí, cỏ, thức ăn, nhiều dụng cụ khác thể người động vật Mối quan hệ vi sinh vật môi trường ngoại cảnh chặt chẽ gọi sinh thái học Đó mối quan hệ thích ứng, có nghĩa vi sinh vật có khả thích ứng để tồn điều kiện ngoại cảnh định Nhiệm vụ quan trọng vi sinh vật y học nghiên cứu vi sinh vật gây bệnh có ngoại cảnh để tìm phương pháp phòng ngừa chúng, đồng thời nghiên cứu phân bố vi sinh vật thể người để có biện pháp phịng bệnh thích hợp

I VI SINH VẬT TRONG TỰ NHIÊN

1 Vi sinh vật đất

Đất chứa nhiều vi sinh vật mơi trường thích hợp cho phát triển vi sinh vật, đất có nước, có khơng khí, có chất vơ chất hữu tạo thành mơi trường thiên nhiên thích hợp cho vi sinh vật

Tùy theo tính chất thành phần đất nơi có khác khí hậu có khác mà số lượng chủng loại vi sinh vật phân bố khác Ví dụ: Ở bề mặt đất tác dụng ánh sáng mặt trời khô ráo, số lượng vi sinh vật Ở độ sâu 10 - 20 cm số lượng vi sinh vật nhiều, chủng loại đa dạng Nhưng đến độ sâu mét trở số lượng chủng loại vi sinh vật giảm dần có số vi sinh vật tồn mà thơi độ sâu này, thiếu ôxy chất hữu nên vi sinh vật hiếu khí khơng phát triển

Đất cịn bị ô nhiễm phân chất tiết người động vật với mức độ khác nên số lượng thành phần vi sinh vật khác Tuy đất có nhiều vi sinh vật khác người ta phân chia thành loại:

- Loại thứ nhất: vi sinh vật tự dưỡng: tự tổng hợp chất cần thiết để sống

- Loại thứ hai: vi sinh vật dị dưỡng vi sinh vật làm thối rữa xác động vật, thực vật đất

2 Vi sinh vật nước

Nước mơi trường tự nhiên vi sinh vật phát triển được, vi sinh vật sinh sản điều kiện ẩm ướt Vi sinh vật vào nước từ đất, bụi, khơng khí từ chất thải bỏ người động vật Số lượng chủng loại vi sinh vật thay đổi tuỳ theo độ bẩn nước Nước sông, hồ gần chỗ dân cư đơng đúc có nhiều vi sinh vật, nước biển hồ lớn vi sinh vật

Nước có khả tự làm tác dụng khuẩn ánh sáng mặt trời cạnh tranh sinh tồn vi sinh vật nước

Ngoài vi sinh vật sống nước, cịn có vi sinh vật gây bệnh người động vật làm ô nhiễm Do nước nguồn truyền bệnh nguy hiểm bệnh đường ruột, vi khuẩn Salmonella, Shigella, Vibrio cholerae Các vi sinh vật gây bệnh tồn nước thời gian định gây bệnh cho người thời kỳ nhất định Nếu nguồn nước bị nhiễm phân thường thấy xuất E.coli - vi khuẩn thường dùng việc đánh giá ô nhiễm phân nước Ngồi nguồn nước có mặt vi khuẩn Clostridium perfringens chứng tỏ nguồn nước bị nhiễm phân từ trước

3 Vi sinh vật khơng khí

Khơng khí khơng phải mơi trường thuận lợi cho vi sinh vật phát triển khơng có chất dinh dưỡng, thêm vào lại có ánh sáng mặt trời Tuy nhiên khơng khí có vi khuẩn theo bụi đất người tiết ho, hắt

Vi sinh vật khơng khí có nhiều chủng loại, loại có bào tử, có sắc tố nấm chịu độ khô hanh ánh sáng mặt trời tồn Số lượng vi sinh vật khơng khí tùy thuộc vùng Ở vùng dân cư đơng đúc khơng khí có nhiều vi sinh vật, núi cao đại dương khơng khí có vi sinh vật Ở thành thị khơng khí chứa nhiều vi sinh vật nông thôn

Trong không khí, ngồi tạp khuẩn, nấm, nấm mốc, người ta thường gặp vi sinh vật gây bệnh là: trực khuẩn lao, trực khuẩn bạch hầu, liên cầu tan máu, tụ cầu gây bệnh, trực khuẩn ho gà, virus cúm, sởi từ bệnh nhân từ người lành mang trùng tiết khơng khí làm lây lan từ người sang người khác chủ yếu hình thức gián tiếp thông qua hạt nước bọt nhỏ mang vi sinh vật Trong khơng khí lưu thơng, hạt tồn không lâu nên khả nhiễm bệnh giảm xuống, mặt phịng bệnh cần lưu ý vấn đề lưu thơng khơng khí nơi buồng bệnh nơi công cộng

II VI SINH VẬT TRÊN CƠ THỂ NGƯỜI

Da, niêm mạc ổ tự nhiên nuôi dưỡng nhiều chủng loại vi sinh vật, vi sinh vật xếp vào nhóm :

- Khuẩn chí bình thường: gồm chủng lọai vi khuẩn tương đối cố định, tìm thấy đặn vùng định, lứa tuổi định, bị phá hủy tự thiết lập lại cách nhanh chóng

- Khuẩn chí tạm thời: gồm vi sinh vật có khơng có khả gây bệnh, cư ngụ da, niêm mạc khoảng thời gian giới hạn, phát sinh từ môi trường xung quanh, không phát sinh chứng bệnh, không tự định cư thường xuyên bề mặt thể

Thành phần khuẩn chí tạm thời thường khơng có ý nghĩa khuẩn chí binh thường cịn ngun vẹn Tuy nhiên khuẩn chí bình thường bị phá hủy khuẩn chí tạm thời phát triển phát sinh chứng bệnh

1 Vai trò khuẩn chí bình thường

- Khuẩn chí bình thường da niêm mạc: hàng rào ngăn cản cản trở trình xâm nhiễm vi sinh vật theo chế cạnh tranh sinh tồn giao hoán vi khuẩn

- Thành phần khuẩn chí bình thường ruột giúp thể tổng hợp số vitamin K, B1, B6 góp phần thuận lợi cho việc nuôi dưỡng thể

Tuy nhiên thành phần khuẩn chí bình thường gây nên bệnh số hồn cảnh vi sinh vật thích nghi với kiểu sống khơng xâm nhiễm, bị bắt buộc rời khỏi chỗ cư ngụ bình thường đưa vào máu mơ chúng trở nên gây bệnh Ví dụ : + Streptococus viridans thường ký sinh đường hô hấp trên, vào máu nhổ răng cắt amygdales gây nên bệnh viêm màng tim bán cấp (bệnh Osler)

+ Xoắn khuẩn trực khuẩn hình thoi : bình thường khoang miệng, mơ bị hủy hoại chấn thương, thể suy dinh dưỡng nhiễm trùng nặng chúng phát triển mạnh mẽ biểu mô hoại tử gây viêm họng (goi viêm họng Vincent)

2 Những vi sinh vật ký sinh thể người

2.1 Các vi sinh vật da

Chủng loại vi sinh vật sống da niêm mạc thay đổi, chúng phụ thuộc vào hồn cảnh, tình hình vệ sinh cá nhân nghề nghiệp Vì da tiếp xúc thường xuyên với môi trường xung quanh, da chứa đựng nhiều vi sinh vật tạm thời, nhiên khuẩn chí bình thường khơng đổi tìm thấy vùng giải phẫu khác Các vi sinh sinh vật bình thường thường thấy da :

- Staphylococcus coagulase âm tính, streptococcus viridans, coliformes, loại trực khuẩn Gram dương (bacilli gram positive)

- Nấm men : thường thấy lằn da

- Các Mycobacteria không gây bệnh: thường thấy da vùng sẵn chất xuất tiết, quan sinh dục, ống tai

- Trên da có vi sinh vật gây bệnh Staphylococcus aureus,

Pseudomonas aeruginosa

Chủng loại vi sinh vật sống da thay đổi theo vùng: vùng có nhiều vi khuẩn da đầu, mặt, kẽ ngón tay Vùng có vi khuẩn mặt chi, bàn tay, da bụng Những yếu tố phá hủy vi sinh vật thường thấy da là: pH thấp, axit béo chất xuất tiết nhầy lysozym Số lượng vi sinh vật bề mặt giảm bớt cách chà sát mạnh trường hợp vệ sinh da trước mổ, khuẩn chí nhanh chóng lập lại từ tuyến nhờn mồ sau

2.2 Vi sinh vật đuờng hơ hấp

- Ở mũi có nhiều trực khuẩn giả bạch hầu (diphteroides) chủ yếu tụ cầu, đáng ý có nhiều tụ cầu vàng mũi trước từ 20 - 50 % người lành mang tụ cầu vàng mũi

- Ở họng mũi: số lượng chủng loại vi sinh vật phong phú Họng thường vô khuẩn lúc sinh, lây nhiễm sinh Sau sinh vịng - 12 giờ Streptococcus viridans xuất thành phần chủ yếu tồn suốt đời Sau lồi thuộc Diphteroides, Lactobacilus, Staphylococci, Neisseria sớm được thêm vào

- Ở tuyến hạnh nhân (amygdales): có liên cầu nhóm A tan máu  Đây vi khuẩn chủ yếu gây viêm họng (80 -90%) gây bệnh thấp tim tiến triển

- Ở khí quản, phế quản: cấu tạo sinh lý có niêm dịch, đại thực bào nên đường hô hấp thường vi sinh vật

Lúc sinh ống tiêu hóa vơ khuẩn, vi sinh vật nhanh chóng đưa vào theo thức ăn

2.3.1 Ở người trưởng thành: vi sinh vật ống tiêu hóa đa dạng thay đổi

- Ở miệng thực quản: Ở miệng có cân sinh thái vi khuẩn với Phần lớn vi khuẩn sống chung, có số có khả gây bệnh định tình trạng nhiễm khuẩn, ví dụ nhiễm khuẩn chỗ tai mũi họng, răng, đơi gây bệnh cho tồn thân độc tố vi khuẩn xâm nhập vào máu Thường thấy miệng cầu khuẩn Gram (+), cầu khuẩn Gram (-), trực khuẩn Gram (+), vi khuẩn kỵ khí

Clostridium, xoắn khuẩn Ngồi cịn thấy vi khuẩn đường ruột, trực khuẩn mũ xanh

trong trường hợp đặc biệt địa yếu sử dụng kháng sinh phổ rộng, kéo dài - Ở dày: bình thường pH thấp (pH=2) nên có vi sinh vật, đa số vi sinh vật từ miệng nuốt vào Vì dày có pH axit nên có vi khuẩn lao tồn Nhiều cơng trình nghiên cứu chứng minh có loại xoắn khuẩn Helicobacter có khả phát triển mơi trường axit dày đặc biệt hang vị Trong giống có Helicobacter

pylori nguyên viêm loét dày, tá tràng Trong số trường hợp ung thư,

lóet dày, tá tràng pH thay đổi nên có tụ cầu nấm - Ở ruột:

+ Ở ruột non: pH kiềm có enzyme li giải vi sinh vật nên cịn vi sinh vật sống sót qua dày Chỉ có số liên cầu, tụ cầu, loài thuộc Lactobacilus tại ruột non Ở người bị lóet dày - tá tràng, viêm ruột, xơ gan thấy E.coli ruột non + Ở ruột già: có nhiều vi sinh vật, có 1011 vi sinh vật gam chất chứa tạo nên

10 - 20 % khối lượng phân khô Các vi sinh vật ruột già chủ yếu vi khuẩn kị khí (99%) bao gồm loài thuộc Bacteroides, Clostridium spp., Lactobacilus , vi khuẩn hiếu khí chỉ có 1% gồm E.coli, liên cầu D, tụ cầu, Proteus

2.3.2 Ở trẻ em: Sau sinh vài có vi sinh vật phát triển Ở trẻ em nuôi sữa mẹ, vi sinh vật có loại hình thể - chủ yếu 99% Bifidobacterium bifidum, sau là

E.coli, cịn trẻ em ni sữa bị có loại vi sinh vật người lớn.

Ở người vi sinh vật ruột tương đối ổn định, thay đổi do: chế độ ăn uống, tuổi: người già tăng E.coli lồi Clostridium Trong số điều kiện định có thay đổi lớn đội ngũ vi sinh vật ruột ỉa chảy, táo bón Sử dụng kháng sinh làm đảo lộn đội ngũ vi sinh vật, làm giảm số lượng khuẩn chí bình thường vi sinh vật kháng thuốc từ vào

2.4 Vi sinh vật đường sinh dục- tiết niệu

Trong điều kiện bình thường, bên ngồi máy sinh dục có vi sinh vật Ở nam giới có Mycobacterium smegmatis, lỗ niệu đạo có tụ cầu, trực khuẩn Gram âm Ở nữ giới lỗ niệu đạo có tụ cầu, trực khuẩn giả bạch hầu, vi khuẩn đường ruột Sau sinh thì Lactobacilus (trực khuẩn Doderlin) xuất quan sinh dục tồn suốt đời chừng pH axit Lúc pH trở nên trung tính có vi khuẩn khác cầu khuẩn trực khuẩn Ở tuổi dậy thì, Lactobacilus giảm lúc bị phá hủy điều trị kháng sinh thì

Candida albicans vi khuẩn khác phát triển gây nên bệnh.

III NGUỒN GỐC VÀ CÁC ĐƯỜNG TRUYỀN BỆNH NHIỄM TRÙNG

1 Nguồn truyền bệnh

Bao gồm bên bên thể 1.1 Nguồn gốc bên

- Người truyền cho người: chiếm đa số, bao gồm người bệnh người lành mang trùng Người bệnh từ trước lúc thấy rõ triệu chứng sau khỏi bệnh thời gian mang vi khuẩn

- Động vật truyền sang cho người: nhiều bệnh truyền nhiễm động vật truyền sang cho người: bệnh dịch hạch (chuột), bệnh dại (chó)

1.2 Nguồn gốc bên

Có số vi sinh vật bình thường sống da, niêm mạc hay ổ tự nhiên (khuẩn chí bình thường) Lúc có yếu tố thuận lợi: thể suy yếu, sử dụng kháng sinh chúng phát triển mạnh mẽ gây nên bệnh, ví dụ : E.coli từ đại tràng đến đường tiết niệu gây bệnh.

2 Phương thức truyền bệnh

2.1 Truyền bệnh tiếp xúc

Người khỏe tiếp xúc với người ốm hay động vật ốm qua hình thức cọ xát, giao hợp, bú, liếm, cắn, qua thai, qua sử dụng đồ đạc, dụng cụ nhiễm vi sinh vật hay dụng cụ y tế, thuốc, máu, huyết người bệnh hay người lành mang trùng nhiễm vi sinh vật 2.2 Truyền bệnh qua ăn uống

Đa số bệnh đuờng ruột lây truyền ăn uống phải thức ăn, nước uống bị nhiễm khuẩn người bệnh người lành mang trùng tiết tả, lỵ, thương hàn, bại liệt qua môi giới nước, ruồi nhặng, gián, tay chân bẩn

2.3 Truyền bệnh côn trùng tiết túc

Đa số bệnh nhiễm trùng theo đường máu côn trùng tiết túc truyền bệnh muỗi, rận, bọ chét

3 Đối tượng truyền bệnh

Đối tượng truyền bệnh thể cảm nhiễm Khi có nguồn bệnh đường lây truyền thích hợp khơng có thể cảm nhiễm khơng thể phát sinh bệnh Do thể cảm nhiễm khâu quan trọng trình lây truyền bệnh nhiễm trùng Cơ thể cảm nhiễm đối tượng lý dinh dưỡng, bệnh tật mà khả đề kháng (bao gồm miễn dịch thụ động, miễn dịch không đặc hiệu miễn dịch chủ động đặc hiệu) bị suy giảm gặp vi sinh vật xâm nhiễm dễ dàng mắc bệnh nhiễm trùng Cơ thể cảm nhiễm thường gặp trẻ em, người già, người mắc bệnh mãn tính, phụ nữ có thai

NHIỄM TRÙNG BỆNH VIỆN Mục tiêu học tập

1 Nêu định nghĩa nhiễm trùng bệnh viện (NTBV).

2 Mô tả tầm quan trọng NTBV, vi sinh vật gây nhiễm trùng, ổ chứa, phương thức lây truyền, yếu tố ảnh hưởng đến NTBV.

3 Trình bày NTBV thường gặp.

I ĐỊNH NGHĨA

Nhiễm trùng hội xảy bênh nhân mà chế bảo vệ bị suy giảm thường gây nên tác nhân nhiễm trùng bình thường khơng gây bệnh người khỏe mạnh Nhiễm trùng hội gây nên vi khuẩn khuẩn chí người bệnh thường khơng tránh khỏi liên quan đến tổn thương rào cản niêm mạc chế bảo vệ khác người bệnh II CĂN NGUYÊN VÀ DỊCH TỄ HỌC

1.Tỷ lệ bệnh

NTBV xảy từ đến 10 % (trung bình 5%) nguời bệnh điều trị bệnh viện Tỷ lệ NTBV thay đổi tùy theo bệnh viện, thường cao bệnh viên trung ương; điều phản ánh tình trạng nặng chứng bệnh người bệnh việc sử dụng nhiều phương tiện chẩn đoán điều trị dễ gây chấn thương

NTBV nghiêm trọng dẫn đến tử vong Trung bình NTBV có tỷ lệ tử vong 1%, phí tổn điều trị NTBV lớn Hơn NTBV làm giảm suất lao động người bệnh phải điều trị thêm thời gian

2 Vi sinh vật gây NTBV

Thường gặp vi khuẩn hiếu khí Gram âm, tụ cầu, liên cầu ruột

- Trực khuẩn Gram âm quan trọng vi sinh vật gây NTBV chúng tác nhân nhiễm trùng đường tiểu cịn gây bệnh vị trí khác Những trực khuẩn đường ruột E coli, Klebsiella thường tìm thấy NTBV bệnh nhân mà chế bảo vệ bị suy giảm Nhiều trực khuẩn Gram âm Pseudomonas Klebsiella có nhu cầu dinh dưỡng tối thiểu nên tạo nên ổ bệnh môi trường bệnh viện người bệnh Các trực khuẩn Gram âm phát triển đề kháng thuốc nhanh cầu khuẩn Gram duơng, trực khuẩn Gram âm trở nên kháng thuốc qua thu hoạch plasmid R Ngồi Enterobacter, Pseudomonas Serratia cịn có chế đột biến nhiễm sắc thể đề kháng penicillin cephalosporin

- Trong cầu khuẩn Gram dương S aureus tác nhân gây bệnh quan trọng Nó thường gây nhiễm trùng vết thương phẩu thuật, bỏng thông tĩnh mạch Tụ cầu vàng tìm thấy khắp nơi, da, tóc, tị hầu người bệnh nhân viên bệnh viện, tay nhân viên bệnh viện, dụng cụ hầu hết đồ vật tìm thấy bệnh viện Nhiều chủng S.

aureus kháng thuốc tìm thấy nhiều bệnh viện, chúng gây nên vụ dịch

nhiễm trùng đơn vị chăm sóc tích cực Chúng đề kháng với erythromycin, clindamycin aminoglycoside Những chúng tụ cầu kháng methicillin (MRSA: methicillin

resistant S aureus ) tác nhân gây nhiễm trùng bệnh viện gặp phổ biến nhiều nơi

trên giới: Đan Mạch gặp với tỷ lệ 0,1%, Thuỵ Điển 0,3%, Hà Lan 1,5%, Thuỵ Sĩ 1,8%, số nước khác tìm thấy cao 20% chủng tụ cầu kháng methicillin Áo 21,6%, Begium 25,6%, Tây Ban Nha 30,3%, Pháp 33,6% Những chủng S epidermidis mang những gen đa đề kháng truyền gen cho S aureus.

- Liên cầu ruột biết từ lâu tác nhân NTBV quan trọng đường tiểu, tác nhân có ý nghĩa vết thương người bệnh điều trị với cephalosporin Đặc biệt nhiều chủng enterococci đề kháng aminoglycoside gentamicin vancomycin

- Danh sách vi sinh vật quan trọng NTBV tăng lên đáng kể Những nhiễm trùng hội gây nên vi khuẩn độc lực thấp ( S epidermidis) nấm (Aspergillus, Candida) thường gặp Viêm ruột kết Clostridium difficile hậu của biến đổi khuẩn chí đường ruột điều trị kháng sinh

trò đáng kể NTBV, tác nhân gây nhiễm trùng bệnh viện người suy miễn dịch, bệnh nhân ghép quam

3 Ổ chứa

Nhân viên y tế, bệnh nhân người đến thăm ổ chứa

Hầu hết nhiễm trùng bệnh viện xuất phát từ vi khuẩn sống thể người bệnh Các vi khuẩn gây bệnh thường cư trú vị trí gồm: hốc mũi tụ cầu vàng, tụ cầu kháng methicillin; da S epidermidis; đường tiêu hoá enterococci, vi khuẩn họ đường ruột, loài Candida Ở đường sinh dục tiết niệu enterococci, vi khuẩn họ đường ruột

Những bệnh nhân bị nhiễm trùng hay tình trạng mang vi khuẩn đề kháng

enterococci đề kháng thuốc, tụ cầu kháng methicillin, Clostridium difficile làm nhiễm bẩn

môi trường Và môi trường bị nhiễm bẩn lại trở thành ổ chứa thứ phát Một số môi trường ổ chứa số vi khuẩn gây bệnh như: nước chứa vi khuẩn Legionella, loài

Pseudomonas; thức ăn chứa vi khuẩn đường tiêu hoá 4 Sự lây truyền vi sinh vật NTBV

4.1 Lây trực tiếp

Trong bệnh viện, tay nhân viên y tế thường bị nhiễm bẩn tạm thời thường môi giới truyền vi khuẩn từ người đến người khác Những nhân viên y tế khoẻ mạnh thường mang vi khuẩn gây bệnh tụ cầu vàng, Streptococcus pyogenes, Salmonella enteritidis truyền vi khuẩn cho người bệnh

4.2 Lây qua dụng cụ

Các dụng cụ nhiệt kế điện tử, thuốc men, loai dịch chuyền tĩnh mạch, thức ăn, sữa, loai dung dịch uống truyền vi khuẩn gây nhiễm trùng bệnh viện cho người bệnh

4.3 Lây qua khơng khí

Khơng khí bệnh viện, hệ thống thơng khí truyền tác nhân M.

tuberculosis, virus varicella-zoster, virus corona gây SARS, loài nấm Aspergillus Bụi

nước bị nhiễm bẩn truyền vi khuẩn Legionella

5 Những yếu tố ảnh hưởng đến NTBV

Cũng phần lớn nhiễm trùng, NTBV hậu tương tác nhân tố

5.1 Yếu tố vi sinh vật: Độc lực khả lan tràn vi sinh vật gây bệnh,

5.2 Sự đề kháng người bệnh: Tuổi, chứng bệnh, toàn vẹn niêm mạc da tình trạng miễn dịch nhân tố định tỷ lệ bệnh hậu NTBV Những chế bảo vệ thể: vật lý (suy giảm trường hợp bỏng chấn thương), hóa học (thiếu HCl dịch vị, cắt dày làm giới hạn axit dịch vị) miễn dịch (bệnh Hodgkin, hóa liệu pháp chống ung thư.v.v ) ảnh hưởng mạnh mẽ đến NTBV

Ngoài người bệnh vi sinh vật, nhân tố khác liên quan đến NTBV bao gồm biện pháp chẩn đoán thăm dò chức năng, phương thức điêu trị, bệnh nhân nhiều nguy NTBV bệnh nhân suy giảm miễn dịch, bệnh nhân điều trị với thuốc làm giảm sức bảo vệ (corticosteroid v.v ) bệnh nhân trình điều trị đối tượng với nhiều lần can thiệp Sử dụng ngày nhiều phương pháp chân đoán gây chấn thương làm tăng xác suất NTBV

III NHỮNG NHIỄM TRÙNG BỆNH VIỆN THƯỜNG GẶP

1 Nhiễm trùng đường tiểu

Nhiễm trùng đường tiểu chiếm khoảng 40% NTBV thường đưa dụng cụ vào niệu đạo, bàng quang thận yếu tố thuận lợi cho nhiễm trùng ngược dịng đặt ống thơng niệu đạo làm bất hoạt rào cản bình thường Khảo sát cho thấy 10-15% bệnh nhân người lớn thơng niệu đạo, nhiều trường hợp không cần thiết đặt Đường tiết niệu tiêu điểm nhiễm trùng thuờng gặp đưa đến nhiễm khuẩn huyết vi khuẩn Gram âm

2 Nhiễm trùng vết thương

Phần lớn nhiễm trùng vết thương gây nên vi khuẩn trực tiếp đưa vào mô thời gian phẫu thuật Thơng thường vi khuẩn có nguồn gốc khuẩn chí người bệnh, nhiên nhân viên phẫu thuật có thê nguồn gốc nhiễm trùng, đặc biệt với liên cầu A S.

aureus Những yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ nhiễm trùng vết thương bao gồm loại phẫu thuật,

thời gian phẫu thuật, kỹ thầy thuốc sức khỏe người bệnh Phẫu thuật vị trí bị nhiễm bẩn ruột, quan sinh dục nữ thường dễ bị nhiễm trùng vị trí vơ trùng trước mổ Phẫu thuật thời gian dài phẫu thuật mô chết, vật thể lạ bướu máu lấy thường tăng tỷ lệ nhiễm trùng vết thương Những nhân tố thuận lợi khác bao gồm người lớn tuổi, tình trạng dinh dưỡng kém, diện tiêu điểm nhiễm trùng đâu đó, bệnh đái đường, suy thận điều trị corticosteroid

Những vết thương không mổ gồm bỏng, loét nằm, loét da tắc ngẽn tĩnh mạch động mạch vị trí NTBV Những vi khuẩn gây nhiễm trùng tương tự như vết thương mổ trừ nhiễm trùng bỏng thường P aeruginosa nhiễm trùng lóet ở vùng chậu chi thường khuẩn chí ruột

3 Viêm phổi

Nhiễm trùng đường hô hấp thường nguyên nhân đưa đến tử vong NTBV tỷ lệ đứng thứ ba sau nhiễm trùng đường tiểu nhiễm trùng vết thương Những vi khuẩn gây bệnh chủ yếu trực khuẩn Gram âm S aureus, vi khuẩn này thường đến đường hô hấp từ họng qua đường máu Viêm phổi bệnh viện thường xảy đối tượng sau:

- Người bệnh trớ mà phản xạ nôn ho khơng hiệu - Người bệnh có chứng bênh phổi suy tim xung huyết - Người bệnh cần dùng dụng cụ hỗ trợ thơng khí

Sự lây truyền virus đường hô hấp bệnh viện hay gặp đặc biệt khoa nhi, trừ trường hợp cúm, hợp bào đường hô hấp, gần virus corona gây viêm phổi cấp suy hô hấp cấp tính nặng có tỷ lệ tử vong cao 10% bệnh nhân bị nhiễm trùng Nhân viên bệnh viện thường nhiễm virus hô hấp người bệnh lây lan hit phải tiếp xúc trực tiếp qua niêm mạc giọt chất tiết có virus từ bệnh nhân săn sóc , tiếp xúc với người bệnh Các phương thức lây khác dùng dụng cu hổ trợ hơ hấp, qua tay Biện pháp phịng ngừa lây nhiễm virus hô hấp SARS gồm phát cách ly bệnh sớm, sử dụng biện pháp bảo vệ dùng trang có lọc, mang găng trang phục bảo vệ mắt, đầu săn sóc người bệnh

4 Nhiễm khuẩn huyết

Mặc dù nhiễm khuẩn huyết xảy NTBV nào, canuyn huyết quản bị nhiễm bẩn ngun nhân thơng thường dễ phịng ngừa nhiễm khuẩn huyết tiên phát bệnh viện Nhiễm trùng điều trị tĩnh mạch chiếm khoảng 5% tổng số NTBV 10% tổng số cấy máu dương tính Những vi khuẩn gây bệnh thường gặp S.

ống thơng Candida tác nhân quan trọng Vi khuẩn vào vị trí khi có đường chuyền dịch, thường vị trí vào da lúc đặt Canuyn thủ thuật sau vi sinh vật theo canuyn vào máu dịch truyền bị nhiễm khuẩn gây nên nhiễm khuẩn huyết do vi khuẩn độc lực Enterobacter, Serratia, Citrobacter freundii, vi khuẩn phát triển dịch truyền chứa 5% glucose

Nhiễm khuẩn huyết tạm thời sau thao tác chẩn đoán điều trị miệng, đường hơ hấp, đường tiêu hóa, đường sinh dục thường người bệnh dung nạp tốt Tuy nhiên người có bệnh tim van tim bẩm sinh có nguy viêm màng tim lúc chịu thao tác nói cần phịng ngừa kháng sinh

5 Nhiễm trùng virus viêm gan B, C HIV

Nhiễm trùng virus viêm gan B virus HIV liên quan người bệnh nhân viên y tế săn sóc bệnh nhân thao tác mẫu máu người bệnh Người bệnh nhiều nguy người bệnh nhận chuyền máu chế phẩm máu bệnh nhân qua thẩm phân lọc máu Việc xét nghiệm sàng lọc để loại trừ người cho máu bị nhiễm trùng virus với việc xử lý máu trước chuyền để loại trừ HIV làm giảm tỷ lệ viêm gan virus B C HIV sau truyền máu Sự lây nhiễm HIV xảy cho nhân viên y tế tai biến kim tiêm hoăc dụng cụ sắc nhọn đâm vào tay trình lấy máu, mỗ xẽ Nhiễm trùng HIV nhổ từ bác sĩ đến người bệnh đề cập

Những biện pháp phòng ngừa nhiễm trùng virus viêm gan HIV bao gồm:

5.1 Cần phổ biến ý thức phòng bệnh để giới hạn lây truyền kim tiêm tiếp xúc trực tiếp

5.2 Dán nhãn hiệu thao tác cẩn thận tất mẫu máu mô người bệnh 5.3 Khuyến cáo nhân viên có nguy nhiễm trùng nên tiêm phòng vacxin

5.4 Cần lưu ý trường hợp nhiễm trùng HIV giai đoạn sớm xét nghiệm sàng lọc tìm kháng thể sè cho kết âm tính Những mẫu máu nghi ngờ cần kiễm tra kỷ tìm khánh nguyên axit nucleic virus

5.5 Tiêm globulin miễn dịch viêm gan B vacxin viêm gan B cho nhân vien người bệnh có nguy đặc biệt viêm gan B bị kim tiêm người bệnh viêm gan B đâm vào da IV KIỂM TRA NHIỄM TRÙNG BỆNH VIỆN

1 Mục tiêu

Kiểm tra NTBV bao gồm mục tiêu : 1.1 Làm giảm nguy NTBV người bệnh

1.2 Chăm sóc đầy đủ người bệnh bị nhiễm trùng lây truyền mạnh 1.3 Giảm đến mức tối thiểu nguy nhiễm trùng nhân viên bệnh viện

Phần lớn bệnh viện thành lập ban kiểm tra NTBV Ban có nhiệm vụ : - Tìm biện pháp thích hợp để xử lý bệnh nhiễm trùng

- Xác định theo dõi người bệnh bị bệnh truyền nhiễm

- Phòng ngừa lây truyền bệnh nhiễm trùng người bệnh nhân viên

- Theo dõi việc sử dụng kháng sinh mức độ nhạy cảm với kháng sinh vi sinh vật thường gây NTBV

2 Biện pháp

Những biện pháp phịng ngừa khơng áp dụng với người bệnh mà với nhân viên bệnh viện