Liệu pháp gen nguyên lý và ứng dụng khuất hữu thanh

THƯ VIỆN ĐẠI HỌC NHA TRANG TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NẢM XÂY DỰNG VÀ PHÁT TRIỂN M 660.65 Kh 504 Th 50 TS KHUẤT HŨU THANH THU VIEM DAI HOC NHA ■RANG 3000010834 f \_ J ٠ f ٠ / ٣١٠٠١ f‫؟‬ẾA X٧ Ấl ٠r ١ i٠i TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI TS KHUẤT HỮU THANH LIỆU PHÁP GEN NGUYÊN LÝ VÀ ỨNG DỤNG ■ c NHÀ XUẤT BẢN KHOA HỌC VÀ KỸ HÀ NỘI m ٩ /١ ‘٠r ■٠ ,٠ Ầ ٠ ١ íi،،ốk٠c'i~٠٥‫؛‬،‫؛‬ iv M o ‫ ؛؛‬3 5-57-57.040 ΚΗΚΤ-04 06-210-04 l Ờ K í I Ớ I iH I Ệ U Lìệii plìtìp цог ‫\ﺃ(ﺍﺍ‬١٠ π ρ ١١۵ρ()ρ 1\ιι٠(٠‫ﺃﺍﺍ‬١ ‫ﺃ‬٠ ‫()ﺍ ﺃﺍ‬٠‫ ﺍﺍﺍﺍ‬Ьинц чей Ici ‫ﺍ'ﺍ‬١()‫ﺍﺍﺍﺍ ﺍ‬٠ (')٠ ‫ﺍﺍ‬4 chrrcí bỘHỈi c٠‫ﺍ‬١c‫ﻻ ﺍ‬- vSinli ‫ﺍ‬١(.)‫؛‬ lììện clcti Lìệu ‫ﻵﺍ‬١‫ ﺯﺍﺍﲦﺎ‬4‫ ﻻﺃﺃﺍ ﺍﺍﻻ‬٠ ί cl()η ١(١ )٠ i١ ‫ﺍ'ﺍﺍﺍﺍﺍﺍ‬cia c'a ٦4 ‫ﺍﺍ‬1‫ﺍﻣﺎ‬٠ ‫ﺍ‬kêỵ c ١4‫ﺍﺍﺍ‬l lot'ci rc٦‫ﺍﺍ)ﺍ‬٠ (')‫ 'ﻻ‬cUiii, so 1‫ﺃﺃ‬٠ (/‫ﺍ‬١4 ‫ﺍﺍ ﺍﺍﺍﺍ؛ﺯﺍ‬1‫ ﺍﺍﺍﲦﺎ‬cl‫ﺍﺍ‬٠ c‫ﺭ‬dieu c٠ ١‫ ﺍ'ﺍ‬с.Гиіч ‫ﺍﺍ‬1‫ﺍﺍﺍ‬٠so 1()‫ ﺍﺍﺍﺍ؛)ﺍ ؛ﺍﺍ‬cbfpc' с٠ 1\Г(а ‫ ﺍ'ﺍﺍ‬1)‫ﺍﺍﺍ ؛‬4 ‫ﺓﺍﺍﺯﺍ ﺍﺍ؛؛ﺍ‬٤‫ ﺯﺍ‬чей ‫ﺍﺍ‬4‫ ﻻﺇ ؛‬С.СПІЧ ‫ﺍﺍﺓﺍ‬4 ٠ ‫ﺍ‬-‫ﺩ‬٠ ‫ ﺍﺍ ؛ﺍ‬pl ‫ﺍ‬c١p че.г cldc' bìệì c'a ‫ ﺍﺍ؛؛ﺍﺍ‬c‫ﺍﺍﺇ‬a CCI() VỚ.I s b b(adt di ‫ﻻﺍﺍ'ﺍﺃ‬١ ‫ ﺍﺍﺥ‬.ttlai bệnti tlììeu ‫ ﺃﺇﺍﺍﺍ‬mien dic'lt SCID, tltiídt mcai 1‫ ﺍﺍﺍﺍﺃﺍ‬l.iêm, xc; ηαι \ 4١ ‫ﺍﺍﺍﺍ‬4 ‫ﺀﺍﺍﺍﺍ‬٠ ٠١'.١' Ί ) ι\ nhicn, clicii iri hiỡli liỗii 4Cè cCii (\) mt S(Ạ)Ίίίΐίΐ c'iti'!tltdt ditilt, kltieit cbc) 1‫ ﺍﺍ ؛ ؛‬íc' plt.)pl ١c١p чет c٠lui٠ ü cbt٠ (١1‫ﺍ 'ﺍﺍﺝ ؛ﻵ‬٠()‫ﺍﺍ‬t'a 4‫؛‬ Such α٧ έιι pỉiáp gen - N guyen lý VCI ling dụiigỹỳ (lia rps Khiiấì НГаГПитИ C'ntt4 c.ct'p ‫ﺃ\ﺍﺍﺃ‬٦٠!‫ﺃ‬kiếtt tlttíc' c 4'(‫ ؛‬bcitt, c'(tp tdt(n \‫ﺍ ﺓﺃ‬١1‫ﺍﺍ‬٦'‫ﺍﺍ‬tltdttlt tmt c٠l ١a N'CMI tt٠()l()c.ti bệtdt di tt.n^ểit, b tt4 dieu tri VCI cl١a'a cc١c٠ ‫ ؛‬tdt ‫ﺍﺃ‬٠‫ﻻﺍﺍ‬١‫ ﺍﺍﺓ‬ttltiCm l ‫ ؛ ؛‬.it pltCtp чеп sCtclt 4(١‫ﺃ‬٦‫ﺏ ﺁ‬cl١tt’(ín4١t cdcb hợp()edit trdc n ١ ‫؛ﺍ‬١tíf ‫ ؛‬٠ệu i \c)'t tt ‫ ﺍﺍﺍﺍﺍ‬١4 \١ ề cdc ctticdt ln'(٠íc cc)' bcitt 1‫ﺍ‬٠()‫ \ﺍ‬c'.td'a l)(mlt cdct ‫ ﺍﺍ؛؛ﺍ‬pltdp чеп (‫ﲤﺎ‬ ;‫ ﺍﺍ‬cdc ‫ﺍ‬١4 ‫؛ﺍ \ﺍﺀﻻﺃﺃ‬١vcì к>١tỉmạt c't’ta 1‫ ﺍﺍ ؛ ؛‬t sốtltdnlt tmt btf(')’c ddtt cda()pltdp чеіе vcì n ١ t١a !‫ﺍ‬٠()‫ﺍﺍ‬4 ‫ﺍﺍﺍ'()ﺍ‬١١ СІС١ПЧ ‫(ﺍﺍﺃ‬١ )'‫ ؛‬١dtt de a\ cltfa t'a‫ ﺍﺍ‬t()dtt C٠dtt4 ‫ﺃﺍﺍﺍﺍﺍ‬٠triCtt ١١(٠)‫ﺍﺍ‬c't١a Hệu plicip Ỵ^en ĩrì tii'(/ng lai Scich иЦ ёи ρΐιάρ gerim N guyen ly vci Iifig diirigjy Ici rnơỵ ỵùỵ liệiỉ tbant kbdc) ь а icit cltc) sittlt ١١‫؛‬cdc tt4 dttlt C٠att4 í t ١ ‫ﺍﺍ‬4 ‫ ﺍﺍﺍﺍ؛ﺓ ﺯ(ﺍﺍ‬l١c.)c'١ ‫ ﻻ‬lt(٠) c ttltCmt ddp ‫ أ‬١٠‫ ا ا‬c' t(tp C'da sittlt(.)4 ttlttt c٠c١it l١ ١١‫؛‬c٠tt ‫ﺍﺃ‬4 ‫ﺍﺍ ؛‬١‫ﺍ‬١ Catt4 ‫ﺍﺍ‬4 ‫ ؛ﺍﺍ‬c(sinlt ltc٠ cdc ٢١١١٠‫ﺍﺍ‬٠ (١ )’‫ﺍ‬f)c٠n ١4 ‫(ﺍﺍ‬٠)‫ ' ﺍ‬Bdcli klt()ct١١ ^lt()ct l ١(٠)c' tij' ‫ﺍ‬١‫ﺍﺍ'( ؛ﺍﺍ‬١с'аі^ч ttltit' sittlt ١١١‫ ﺍﺍﺀ‬ectc dc.ỉi lt t١4ctttl١(٠).c' Idtdc Xin tìiUi ίΐ'()Π4 ЧІО'І ỉlìiệu cu(Ạ)'ỉì scich cùỉig hctn d()c GS TSKH l è Văn Nhirong CI11J ncil ttộl CƠNCì ngỉiệ sinh họg ٧ iệ i nam LỜI NÓI ĐẦU Liệu pháp geiì hay phương pháp chữa bệnh gen “íhuốc gcf! " phương pháp chữa bệnh mới, dã góp phần diều trị chữa khỏi ìnột số bệnh rối loạn di truyền, bệnh nan y như: thiếu máu hồng cẩu liềm, ung thư, máu khó dơng, xơ nang Tính đến cuối năm 2003 dcĩ có hùng nghìn bệnh nhân dược diều trị liệu pháp gen Trong dó, gần Ố9 % chữa bệnh ung thư, ỉ 8% diều trị bệỉìlì rối loạ/ì di truyền, % diêu tri cho bệnh nhcìn mắc C i'ic bệnh truyền nhiễm bệnh nhản HNIAIDS Liệu pháp gen trở thành lĩnh vực thu hút quan tủm nghiên cứu nhiêu nhà khoa học, hác sỹ ngày dược sử dụng nhiêu diều trị chữa bệnh cho người Liệu pháp gen ? Điểu trị chữa bệnh liệu phấp gen có an tồn khơng ? Tụi diều tri liệu pháp gen chưa dược phổ biết ì ? nưó'c ta ứng dụng liệu pháp gen chữa bệnh hay không ? Để góp phần làm sáng tỏ vấtỉ dể trên, đồng thời dấp úng nhu cầu học tập siỉìh viêỉì, chúng tơi biên soạn sách Liệu pháp gen - Nguyên lý ứng dụng Cuốn súclì nhằm mục đích cung cấp kiến thức CO' cùa k y thuật gen, sở khoa học liệu pháp gen chữa bệnh cho nụtời Sách dược sử dụng làm tài liệu học tập thaììi kììâo cho sinh viên, học viên cao học, nghiên cửu sinh thuộc ngành Cơng nghệ sinh học, Sình học, Y học, Nông nghiệp bạn dọc quan tâm dến lĩnh vực ứng dụng "thuấc gen '٠ ٠'‘viên gen " chữa bệnh Chúng xin chán thành câm ơn GS TSKH, Lê Văn Như(fng, PGS.TS Đặng Hữu Lanh, PGS Lê Ngọc Tú dã nhận xét dóng góp ỷ kiến quỷ bấu Xin chân thành cám ơn hạn dóng nghiệp tạo diều kiện hồn thành cuon sách Trong q trình biên soạn chắn khỏìì^ thể tránh khói ỉìlìững thiếu sót Chúng tơi mong muốn nhận dược nhiều ý kiâìì dóng góp bạn dọc dồng nghiệp Xin chân thành cảm ơn ỷ kiến đỏng góp bạn dọc TS Khuất Hữu Thanh TRƯỜNG ĐAI HOC BÁCH KHOA HÀ NỒI LỈỆLI PHÁP G í-N - NGUYÊN l.Ý VÀ Ỉ>JG DỤNG MỤC LỤC Trang Lời giới thiệu Lời nói đẩu Mục lục Chương LIỆU PHÁP GEN I Liệu pháp gen ? 11 Khái niệm liệu pháp gen Ngiivén tắc bán ciia điều trị bệnh liệu pháp gen 11 , II Các lĩnh vực ứng dụng chủ yếu liệu pháp gen 14 16 Liệu pháp gen điều trị bệnh rối loạn di truyền (inherited disorders) Liệu pháp gen chữa bệnh nhiểm trùng 16 17 III Các chiến lược cỉia liệu pháp gen 17 IV Lược sỉr nghiên cứu phát triển liệu pháp gen 18 Chương NGUYÊN L Ý VÀ KỸ THUẬT c BẢN CỦA LIỆU PHÁP GEN I Nguyên lý liệu pháp gen 21 Gen liệu pháp tách dòng gen liệu pháp 21 Các loại vectơ thường sử dụng liệu pháp gen 23 2.1 Vectơ chuyến gen có chất virus 2.1.1 Vecto adenovirus 24 26 a Đặc điểm cấu tạo di truyền adenovirus 26 b Nguyên lý thiết kế vectơ adenovirus 27 c Cơ chế hoạt động vecio adenovirus 28 2.1.2 Vecto retrovirus 3.0 a Đặc điểm cấu tạo di truyền retrovirus 30 b Nguyên lý thiết kế vectơ retrovirus 32 c Co chế hoạt động vectơ retrovirus 34 Mực LỤC Veclơ Adcno -Associated Virus (AAV) 35 a Đặc diêm cấu tạo di truyền vectơ AAV 35 b Nguyên lý thiết kế vecto AAV 36 c Cư chế hoạt động vecíơ AAV 38 1.4 Vectư Herpes Simplex Virus (HSV) a Đặc diem cấu tạo di truyền vectơ HSV 39 39 b Nguyên lý thiết kế vectơ HSV 40 c Cơ chế hoạt dộng veclơ HSV 41 Các loại vcclơ liệu pháp có nguồn gốc từ loại virus khác 2.2 Cấc veciư khơng có chất virus 2.2 làposom vectơ liệu pháp gen 42 43 43 a Uposom 43 b Nguyên lý thiết kế vectơ liệu pháp gen liposom 45 c Cơ chế hoạt dộng veclơ liposom 47 2 DNA trán vectơ liệu pháp gen 48 a Đặc diểm veclơ DNA trần 48 b ứng dụng vectơ DNA trần liệu phấp gen 49 2 Phới tír-DNA vectơ liệu pháp gen 49 a Đặc diếm veclơ phối tĩr-DNA 49 b Hoạt dộng ứng dụng cùa veclơ phối lử-DNA 50 c u u diếm hạn chế vectơ phối lử-DNA 52 2 Vectơ liệu pháp ^en oligonucleotid 53 a Đặc diêm vcclơ oli«onuclcolid 53 b I loạt dộng ứng dụng cùa vcclơ oligonuclcolid 53 2.2.5 Một số loại vectơ liệu pháp gcn khác 11 Các kỹ thuật bán liệu pháp gen Các phương pháp chuyến gen íhườn٤>sử dụim liệu pháp gen 55 56 57 1.1 Phương pháp chuyến ٤٢en sống (c.v vivo) 57 1.2 Phương pháp chuyển gen trực liếp vào thể sống (/٠ // vivo) 59 Một số kỹ thuật thường sử dụng liệu pháp gen 60 [ЛЁи PIIAP GPN - NGUYÊN 1/Ѵ VA IJNG I')ỤNG 2.1 Ку ihLiật vi liêiĩì (micro-injcclion) 60 2.2 Ку thuật điện xung (eleciroỊX)raiion) 60 2.3 Kỹ Ihưật bán gen (genc giin) 61 2.4 Kỹ ihuậl Ііро.^от (liposom technique) 63 2.5 Kỹ thuật eiẻn gen (genepil!) 64 Một số kỹ thuặt khác tronu liệu pháp gen 65 Một số >.11 hnớng chira bệnh I‫؛‬ệu phtíp gen 66 3.1 ٠4١ hay ‫أ‬1)‫ 'ج‬een liệu phtíp vào \'ị tií gen hỏng 66 3.2 lan g ^ường hỗ ti.ợ hoạt động gen 66 3.3 Stha chữa gen 67 3.4 Lie chế tế bào đích 68 3.5 l ١Jêu c.iệt tế bào đích 69 Chươììg3 ÚNG DỤNG LIỆU РНЛР GEN TRONÍÍ CHỮA BỆNH I Liệu phtip gen chữa bệnh thiếu htJt miền tlịch tổ hợp trầm trọng (SCID) 71 1(0‫ ؛‬loạn chtrc nang gen la nguyên nhàn cha bệnh SCID 71 I^iệu ρΐΐφ gen chữa bệnh Α19Α- SCID 72 Liệu pháp gen chữa bệnh X- SCID 74 II 1.‫ ااي؛د‬phhp gen chữa bệnh ung ihtt Cơ sO Oi truyền cha bệnh t-ing llitr I^iệu ph٤p gen chữa bệnh ung Ihtr 75 76 79 Vài ‫ أﻟﻤﺎا‬vể tinh hình mắc bÇith ttng ihtt пцігОі 79 2.2 síí Ot.iig liệu phhp gen li.ong 0‫؛‬ều trị b‫ ؛‬nh ung thtt 80 2.2.1 Các logi ١.'ectơ liÇtt phhp sh dt.tng Oỉều ‫ اﻷ‬t!ng thtt 81 2.2.2 Các xu htrOng bhn Oỉéu trỊ ttng ihit bhng lỉệtt phhp gen 83 2.2.3 Diều trị ung thu nguOi ١.۶ cclơ !)aramyxovirus 8.5 2.2.4 Liệu phhp gen OiCu tri ttng thtr ngttOi gen p53 85 III Liệt! !^hhp gen chữa bệnh ihỉếti mtìii hOng cầu liềm 86 Ngiiyennhan gay bệnh thiếu máu hồng cầu liềiĩi 86 Che xu l.uớng chhta bệnh thiếu máu hOng cẩu liềm 89 Chita bệ:ih thíếu n٦átJ liOng cẩti liềm liệu phhp gen 91 MỤC LỤC 3.1 Vectơ liệu pháp ,sử dụng trons diều trị bệnh SCA 91 3.2 Các bước điều trị bệnh SCA bang liệu pháp gen 92 IV .Liệu pháp gen chữa bệnh xơ nang 93 1·; Khái niệm bệnh xơ nang (CF) 93 Đạc điểm di truyền bệnh xơ nang 94 Liệu pháp gen điều trị bệnh xơ nang ỏ người 96 3.1 Các liệu pháp sử dụng điều trị bệnh xơ nang 96 3.2 Các loại vectơ sử dụng dit ii trị bệnh xơ nang 97 3.3 Xu hướng điều trị bệnh CF imirời tương lai 99 V Liệu pháp gen chữa HIV/AIDS , 99 Virus HIV hội chứng suy giảm inién dịch mắc phảiAIDS 99 Các xu hướng điều trị nhiễm HIV/AIl )S liệu pháp gen 102 103 Một ·Số liệu pháp gen điều trị F1IV/A1DS 3.1 Phòng chống HIV/AIDS gây ức chế hoạt động gen ciu HIV, biến đổi gen cỉia 111V 103 3.1.1 Vectơ liệu pháp phùng va chữa HIV/AIDS 103 3.1.2 Sừ dụng Oligo-antisen ribo/.ym phòng chống F]1V 10.٩ 3.2 Phòng chống HIV/AIDS tăng cường miền dịch tế bào 3.2.1 Chiến lược sử dụng gen đột biẽh Rev 10 108 108 3.2.2 Chiến lirợc sử dụng gen tăng cirừng hoạt dộng g‫؛‬n cytokin 3.2.3 Chiến lược sỉr dụng gen tự lỉr gen dộc tố 3.3 Vaccin DNA diều trị HIV/AIDS VI Liệu pháp gen chữa số bệnh khác Liệu pháp gen chữa bệnh teo (DMD) 108 109 110 111 111 l Cơ sở di truyền bệnh teo cư 111 1.2 Liệu pháp gen chữa bệnh teo co’ 112 Liệu pháp gen chữa bệnh máu khó dơng (Hemophilia) 113 2.1 Cơ sở di truyền cỉia bệnh máu khó dơng 113 2.2 Liệu pháp gen chữa bệnh máu khó dơng 114 iJÈlJ Ρ11ΛΡ GIN - NGUYEN EÝ VA lN(j Í^ỤNG Í3ệnh rcii loan cluiyen lioa Cliolesierol ‫ا‬١ ‫اا؛‬ clinh cli truyen (Е'ап٦і1‫؛‬а1 llyi)ercholeslerolcmia) 114 Chưoĩỉg4 VAN ĐỂ AN l ١()^N GỦA IỆI PHAP GEN I Vai n^t \'ể an to^n ^І1)І1 hoc 16 II Viììì (le an loan Clia liệu phap «en 118 Eliệịi trang Vei nhiìng rủi ι'ο cha dieu ‫اأ‬-‫ إ‬líệu phdp gen 118 ٠Ví dt-.t \'ề trrrOng hợp rhi ro ^au diều trị liệu phhp gen vấn đề an tohn cíia liệu phdp gen 2.1 Cái chết cha Je.‫؟‬e.Gel.‫؛؟‬nger ^‫ااا‬ ٤ đỉỂ ii III 119 ‫ﺍﺃ‬٠‫ ﺍ‬liệu phhp en 119 2.2 1‫ك‬ 1‫ ااا‬phhp gen có an tohn khơn.? 119 Một số diem hgn chế cha liệu phhp gen 120 ! Tại hiệtì 1‫ ااؤ؛‬phhp gen 0‫ا‬١‫'اا‬:‫ ا‬dux)’c hrng dpng I.ộng rhi ti'ong chhiibệnh? 120 rprieii 121 cha liệu phhp gen ỏ' Vi('t Niim TÀI E ltu THAM KHAO í ١HÍNI1 122 110 ữMG DỤNG LIỆU PHÁP GEN TRONG CHÙA BỆNH bào co lại chết dần Tế bào nhiễm HIV bị chết, hạn chê' lây lan HIV thể Các gen độc tố (toxic gene) cùa số loại vi khuẩn Pseiidonioiias exotoxin, sử dụng liệu pháp gen chống HIV/AIDS Thiết kế vectơ CD4 - Pseudomonas exotoxin chuyển vào tế bào, độc tố tạo thành gây biến đổi cấu trúc thụ thể, làm hạn chế khả xâm nhiễm HIV (Berger cộng 1988 ; Ashorn cộng ,1991) Các liệu pháp sử dụng toxin gen dừng thử nghiệm in vitro, nghiên cứu tiếp tục 3 Vaccin DNA điều trị HIV/AIDS Vaccin DNA xem chiến lược hiệu liệu pháp gen phòng chống HIV/AIDS Những nghiên cứu vaccin DN.A thử nghiệm chống bệnh lao chuột nhà khoa học Anh (1986) DNA lừ vi khuẩn lao để sản xuất vaccin DNA, tiêm vào chuột nhắt tạo nên chuột nhắt miễn dịch với vi khuẩn lao Hàng loạt vaccin DNA chống viêm gan B, ung thư thử nghiệm tế bào người động vật thử nghiệm Hình 15 Sơ đồ vai trò vaccin DNA liệu pháp gen phòng chống HIV/ADS lỆLi FMAP GEN - NGUYÊN l.Ý VÀ ÚNG DỤNG 111 Vaccin DNA khác với loại vaccin khác chỗ vaccin DNA phức hợp gen (ONA), dưa vào tế bào gcn dirợc lái hán, phiên m،ã dịch mã tê' bào tạo nén loại protein liệu pháp tương ứng Protein liệu pháp có tác dụng ngãn cản ‫؛‬sự xâm nhập HIV, ức chế phát triển nhân lẽn cùa HIV tế bíào Các loại vaccin khác (vaccin vi khuẩn, virus giảm độc tố; vaccin mánh pept id, vaccin tái tổ hợp ) dều protein kháng nguyên, dưa protein kháng nguiyé.n vào gây dáp ứng miễn dịch tế bào, kích thích loại tế bào tương ứng vởi kháng nguyên sản sinh kháng thể đặc hiệu Hiiện vaccin DNA HlV-1 dã dang thử nghiệm phòng chống HIV/AIDS chuột có hiệu cao Bản chất vaccin DNA HIV-1 vectơ liệu pháp gen, cải tiến từ gen HIV-1 Một số loại vaccin DNA, thử nghiệrm phòng chống HIV/AIDS dược tạo thành từ plasmid tái tố hợp, gồm plasmid pTXGE gen đặc hiệu cho hệ thống miễn dịch người gen IL-2, gen IFN-y gen GM- CSF Plasmid tái tổ hợp pTXGE tạo thành từ plasmid pTX (4,5 ;5 kb) cài thêm gen HIV-1 biến đổi (dã xoá bỏ số vùng gen HIV nhưgen pol, gen vpii, vpr, un bị xoá vài vùng nhỏ) Sủr dụng vaccin DNA HIV-ỉ tiêm cho chuột thí nghiệm cho kết tốt Đối tượng thử nghiệm chuột Buffalo 4-5 tuần tuổi, trung tâm B & K Universal Group cung cấp Mỗi chuột liêm vaccin HIV-1 với liều 400 pg lần tron; tuần Sau tuần tính từ lần tiêm cuối chuột thí nghiệm kiêm tra k.hii miễn dịch với HIV, kết chuột thí nghiệm có khả miền dịchi cao với HIV Thí nghiệm thử nghiệm vaccin DNA phịng chống HIV/AIDS chuột thành cơng, mở triển vọng điểu trị HIV/AIDS cho người vaccin DNA VI UỆLI PHÁP GEN CHỮA MỘT s ố BỆNH KHÁC Liệu plnáp gen chữa bệnh teo (Duchene Muscular Dystrophy) / / Cơ sứ di truyền bệnh teo DMD Bệnh teo hay gọi loạn dưỡng DMD (Duchene Muscular Dy.strophy) bệnh rối loạn di truyền dơn gen, gây triệu chứng khả 112 ữ ٠ JG DỤNG LIỆU PHÁP GLN TRONG ('HŨA BỆNH co dãn dẫn đến bị teo cơ, khả vận động ciia chi Một số trường hợp gây khả co dãn số cha hệ tiên hoá, hệ tim mạch gây ngiiy hiểm đến tính mạng người Eỉệnh DMD đột biến lặn cha gen dystrophin gây nên Gen dystrophin gen nằm locus thứ 21 cánh ngắn cha nhiễm sắc thể giới tính X người ký hiệu Xp21 (Davies cộng 1983), dó bệnh DMD thường gặp đàn ơng với tí lệ khoảng 3500 người , phụ nữ gặp (khi đồng hợp tử lặn gen đột biến này) Gen dystrophin có kích thước tương dối lớn, khoảng 2400 kb, có 79 exon (79 đoạn mang mã di truyền) phần gen không mang mã gọi intron chiến 99,4% kích thước gen Gen dystrophin người phiên mã tổng hợp mRNA có kích thước 14 kb, mã hố protein dystrophin bình thường 427 kDa Do bị đột biến mức độ khác nhau, biểu mức độ bệnh DMD khác làm xuất loại protein dystrophin khác thể bệnh nhân DMD Có bơn mức độ bệnh DMD dystrophin khác nhan: bệnh dystrophin thường gập tạo protein dystrophin dột biến dạng R-Dystrophin (260 kDa) dạng B-Dystrophin (1400 kDa); bệnh Apo-dystrophin -1 có S-Dystrophin (71 kDa); bệnh Apo - dystrophin-2 có protein dystrophin đột biến dạng G-Dystrophin (114 kDa) bệnh Apo- distrophin-3 có protein dystrophin đột biến dạng G-Dystrophin (40 kDa) Bệnh DMD không chi gãy liệt vận động, mà gãy liệt cư trơn hệ tiêu hóa hệ tuần hoàn, gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khoẻ người tử vong (Lidov cộng sự, 1995) I Liệu pháp geiĩ chữa bệnh teo DMD Liệu pháp gen chữa bệnh teo DMD thực theo nhiều phương pháp khác nhau, có kết khác tuỳ theo mức dộ bệnh Một số chiến lược liệu pháp gen chủ yếu điều trị bệnh teo DMD là: - Chiến lược chuyển vectơ liệu pháp mang cDNA dystrophin bình thường vào thể bệnh nhân, nhằm thay cho gen dystrophin bị đột biến (Dicksson cộng 1991) 113 UỆU РИЛР GI‫؛‬N - NGUN LÝ vA líNCì UỤN(„Ỉ - Chiêìì lưọc sir diing ị)hi'rc hơị) gcii dystrophin - glycoprotein (DAGC - dystrophití nssoctnted glycoprotein complex) (l^eckmnn Bushby١1996) - Chicn lirợc \'í tiCm tri.rc tiCp cDNA mã 1‫ ا‬0‫ اا‬dystrophin diro'c bao gói bOi chc l‫؛‬posorì٦, clìo kCt qiicí cO tr^n 1()‫ك‬:‫ ﻛﺮ‬Citc tẻ' b‫؛‬to t٤ ٠ io thể tái tổ hợp Iiìang gen cDN/\ dystr()pLin binh ihtrOng (‫\ر‬1‫أ‬0‫ل‬١\'à cộng si.r١1993) - Chiên Itrợc str dt.tng rctro١'irns mang gen dvstrophin binh thirờng dirợc sir di.tng Ii.ong tlitre ngtiiệm in vitro \'à in ‫'ا‬/‫^(رﻧﻢ'ا‬liller V1‫ ؛‬cộng sir 199‫ﻻ‬: Diinckley cộng sir ١1993: Ucconinck V1‫ ؛‬cộng sir, 1996) - ChiCn lirợc si.r dụng oligo-antisen nham líc chế hoạt dộng bíểit ctíc gen dysttOfihin đột biến (Blake \'à cộng sir, 1993: Parrish cộng sir, 1996.) ỉliện thirc ngliiệni chửa bệnh leo co DMD in viíro V1‫ ؛‬in vivo clinột s,.ố ngirOl, tny Iihien CÍÍC liẹii pháp gcn chữa bệnh DMl) cho ngirOi chira thirc sir có hỉệit cao ٠ liiệu pháp geii cliila bệnh mail khó d()iig (Heinoph‫؛!؛‬a) Co sỏ (li triiyéìì ciia bệnh máu khó (ỉỏng (Hemophilia) Bệnli lìiấLi khó dơng bệnh gity nén loạn di truyền don gen Có hai » loại bệnh niiíu kliO dOng hemophilia A vă hemophilia B Bệnli hemophilia A bỊ dột biê'n١g٤i:y mâ't clitrc nàng gen nit li()á ‫ا‬0‫ ذاأ‬protein dặc hiệu gọi yếu tố Vlll (factor VIII ký hiệu F.VI1I) b‫ ؟‬nh chh veil d‫؛‬m Ong lần số trung bìnli lO.OOO ngirOi Bệnh hemophilia B g(iy nCn rOi lottn chiíc nang gen ma hot yếu tố IX, tần sO mắc bệnh klioảng trCn 30.000 ngirOi Klii ctc loại protein Р'.ѴІІІ protein Г.ІХ bỉị n٦ấl cliức nàng, làm gitni sir hìnli ihtnh yếu tố gây dOng máu làm cl'10 mtii dOng ch(im lioặc ktiOng dOng Geti mã hot protein F.VIIl nằm nhiCm stc thể X cíia ngirOi, kích thirOc khotng 186 0.00 bp, mt hot protein F.VIII cO trọng lirợng phtn ti’r khotng 300 kDa ٢٢rên nhiiẻni sắc thể X сі'іа ngirOi c6n mang gen m t tiot protein F IX kích tliirO'c 33 000 Ibp, m t hot protein F IX có trọng lining phtn tír kliotng 55 KDa Do ctc gen F VIII vt gcn F IX nằm trCn nhi۵m stc thể X, nCn bộnh mtu khó dOng 114 ÚNG ĐỤNG LIỆU PI 1ÁP GEN RONG GllỬA BỆNII (hường gặp ỏ đàn Ortg, nhiễm sắc thể Y khOng mang gen tương ứng Do C ííc đột biến lặn, nên trường hợp phụ nữ bl bệnh máu khó đơng ttrong dối hiếm, bộnh biểu dồng hợp tír gen dột biến 2, Liệu pháp geu chữu bẹ„h ‫ ﺃﺃﺓﺍﺍﺍ‬khó đỏng (Hetnophihu) người binh thường hàm lượng F.VI1I máu khoảng 10٥-200ng/ml, hàm lượng dirOi lOng/ml làm máu kltOng dOng Tír năm 1987 nliững thirc nghiệm dầu t‫؛‬ên chữa bệnh mdu khó dOng chuột dă dirợc ihi'r nghiệm (Connelly ١'à cộng sir, 1995: Fallaux cộng sự, 1996; Palmer cộng ,sir, 1989, 1991) Các thử nghiệm dùng adenoviral vecto mang gen F.VII1 cDNA (vecio Av 1ALH81, Avl ALAPH81) chuyển vào chuột nhắt bỊ máu khó dOiig, hàm lượng F Ill ‫ ﺓ‬chuột dirợc điểu trị dạt 3٥0ng/ml, có trường hợp tăng cao dến 2٥00ng/ml (Yang cộng sir, 1994; Connelly ١'à cộng si.r, 1995) Sử dụng retroviral vecto dể chuyển gen F.IX, năm 1993 Lu cộng sir dă điểu trị có hiệu cho trường hợp bệnh hemophilia B thi nghiệm'chuyển Adenoviral vecto mang gen F.IX cDNA người dược vào chuột, làm tăng hàm lượng protein F.IX người mốu chuột' dạt 4٥0ng/ml ( Smith cộng sir, 1993) Các thirc nghíệm sử dụng AAV vecto diều trị bệnh máu khó dOng người cQng dược nhicu nghiên cứu thử nghiệm chuột, chó Bệnh rối loạn chuyển hố cholesterol gia dinh di truyền (Familial Hypercholesterolemia) Bệnh Familial Hjrpercholeslerolemia bị gen mă hố Ciíc thụ thể kíểm sốt cholesterol tế bào gan, mâ't khả lọc cholesterol làm cho hàm lượng cholesterol máu tăng cao, gây bệnh tim nặng dột quy Bệnh Familial Hypercholesterolemia di truyền qua hệ, ị hệ sau bíểu bệnh thường nặng Năm 1993 thử nghiệm diều trl liệu pháp gen dầu tiên cho bộnh nhân bỊ bệnh Familial Hypercholesterole.mia bàng kỹ thuật ex vivo, da mang lại sOng LIHLJ PỈỈÁPC3HN - NGIJYHN LÝ VÀ Lls^G DlJNCi 115 bìnlì thường jho người hộnh Liệu ptiấỊ) gcn dã sử cliing i٠etro٧i٢ưl \'ectơ mang gen l‫؛‬٩nl١chu٧ếi١\'ào ١2 X 10" lế bào gan người bệnh (kh.Ung 15% khbi lượng gan CLia bệnh nhốn), nuôi ca vivo chp !١lọc chc tc bào Vdì tổ hợp gen lành ١rồi dưa ti'ỏ 1‫ إاا‬người bỌnh ،Saii thời gian 2-3 thhng Itgười bc !ih có liến li'iên (ốt١gan pháĩ ١ tiiCn bJnh th‫ﻣﺎ‬ờng ١hhm lượng cholesieiol ư.ong inhu g‫؛‬hn٦ 25%, người bệnh có sức khoẻ binh ih.f(١ng ٠Cho dến nay, có ihẻm nhiCu người bệnh dưực diều (‫ ا'ل‬bệnh Fan٦‫؛‬l‫؛‬al lIy ۴ i'cholestetOlemia liệu phhp gcn Một sổ bệnh rối loạn di ttuyền dơn gen khác bệnh Gauche, bệnh Patkinson (lã dược điều t٢ị thử nghiệm lỉộu phhp gen I^nh Gauche bị hOng gen n٦‫؛‬ hoh enzym GilucocerebiOsidase, ga٧ hiộn tượng 1'un rẩy khOng chít dộng lànì ch() hogl dộng cha người nìất chinh xhc Bệnh Parkinson bị hỏng gen ũopa Dccarboxylasse (DDC) dẫn dến rối logn chuyển hoá Dopamin giảm trinh tổng liợp Dopamin não gây giam tri nhớ, tri nhớ Nhiều, thír nghiệm sử dting liệu pháp gen chữa bệnh Pitrkinson, bệnh Gauche cho kết tổt, gihp bệnlt nhhn giảm n٦úrc độ bỉểti bệnh, sức khoẻ dư(.c١phi-ỊC hồi Tổn٦1‫ ا؛اا‬với sơ khoa học thhnh tttu bước dầu cha liệu pháp gen Chtíng la tin tưởng n١ột tương lai gổn, liệu phhp gen trở thành phương phhpchữa bệnh plìOng chống bệnh tật cho người hiệu 116 VẤN ĐỂ AN TOÀN CỦA I.IỆU PHÁP GF.N Chương VẤN ĐỂ AN TOÀN CỦA LIỆU PHÁP GEN I VÀI NÉT VỂ AN TOÀN SINH HỌC An tồn sinh học vấn đề quan tâm khơng chí nước phát triển, mà hầu hết quốc gia vùng lãnh thổ giới Có nhiều quy ước, quy định quốc tế an tồn sinh học, Cơng ước Đa dạng Sinh học (Convention of Biodiversity) Nghị định thư Catragena (Catragena Protocol) Vấn đề an toàn sinh học ý nhiều tác động sinh vật biến đổi gen (GMO- Genetically Modified Organism) đến sức khoẻ người, ngồi tác động mơi trường - người- môi trường mối quan tâm thứ an toàn sinh học Trong năm cuối kỷ 20 đến nay, hàng loạt cãy trồng biến đối gen, động vật chuyển gen đời đem lại lợi ích đáng kê’ cho người suất cao, chất lượng sản phâm tốt, giảm thiếu sử dụng thuốc trừ sâu phân bón hố học, hạ giá thành sản phẩm Tuy nhiên, sinh vật biến đối gen nói chung thực phẩm biến đổi gen nói riêng, đưa đến nghi ngại độ an toàn với sức khoẻ người Các hội chứng dị img, đau gia tãng Mỹ số nước châu Âu năm 90 cho nguyên nhân sử dụng khoai tây biến đổi gen, sử dụng ngô đậu tương biến đổi gen Mặi khác, người ta lo ngại trồng chuyển gen truyền gen sang dại, thông qua thụ phấn chéo hoạc lai xa gây trở ngại cho sản xuất sau Chẳng hạn, lúa ngơ chuyển gen chống cỏ dại, có thế’ gây nguy tạo “siêu cỏ dại” số ‫ ﻻل!ا‬PlIAP GFvN - NGIJYBN LÝ VẢ L/>4Ci Ị)ỤN(i gen virus chiiyen \'àü động vậl ihirc \'à Ị 17 có the ‫ا‬٤ ‫ )(ا‬nên nlìCrng biến chbng virus gây bộ!ih !Iguy hiến٦cho người l^ang llurc tế nghiCn cfrii \'Í\ kicin nghi‫! ؛‬n khoa học nh‫؛‬ề ‫ اا‬lổ chức giF)'i WHO L7\0 ١UNLP, co quan quan Iv thtrc phẩm dược phấm Mỹ (‫ﻻ‬.‫ ﻵ‬I^üod and Orug Admini.s‫؛‬ratÌ0n )١(rung lâm kiểm tra d‫؛‬ch bệnh Mỹ CDC (Gentcr for Oisca.se Conlrol) Người la dã di dến kết luận: GMO klìOng gây anh hưởng dCn sức khoẻ ngtrời, ^.khOng có chtíng cho thấy thtrc phẩm chuyển gen dang có thj trường, gây bất ch lo ngại sirc khoẻ người hay có khía cạnh kénì an tồn so ١'ớỉ trồng tạo dược nhờ lai giOng truyền thống١١(Jane E Henney, Uy vịẻn Cơ quan Quản lý Thirc phám Dược phẩn٦Mỹ) đánh gia cha LrXOẠVHO iKìm 2000: u٧ ý ban tư ١,'â'n thoa man với nhirng chch danh giá độ an tohn C iíc tht.rc phẩm chuyến gen da dược phe chuẩn cho thương mại hoa١١ Với Itlìhng kết qua rO rệt cha (iMO, xu htrOng tồn cầu vể phat triển thực phhnì chtiyển gen, chấp nhận síf dting chc thttc pha’n٦chuyển gen ngày chng nhiều Lien minh chau Âu (L:U) da bai bO lệnh ca'n٦ nhập va ban sản phẩm chuyển gen, thtrc thi quy dinh dán nhan sản phâ.rn, thực phẩm có chứa ọc/c nguyCn liệu từ GMO Diện tích phai triển cày trồng chuyển gen toàn cầu ngày lăng, Ciíc loại dộng vật chuyển gen, ١ ٠ ‫ ؛‬sinh vặt biến đổí gen dược st'r dụng cOiìg nghiệp dược phẩm, nOng nghiệp \’k dời sOng ngày phát triển mạnh Nam 2003 tổng diện lích trồng cl)uyẻ'n gen toàn cầu la 67,7 triệu tang !5% so \'ơì năm 2002, tang 40 lần so với nanì 1996 (1,7 triệu ha) Số loại trồng biến dOi gen dược trồng ngày nhiều: dậu tương, bOng, ngỏ, cải dầu, cà chua, Iha, mía ch cải dương, bắp cải nhỉỂu loại hoa plìong lan, hoa hồng, hoa chc dO, có loại, trồng cỏ diện tícli trồng trọt lớn la dậu tương biến dổi gen chiếm 61%, ngô 23% bOng 11%, ca‫ ؛‬dầu 5% Ngoài trồng, nhiều loại dộng vật chttyển gen, vi sinh vật biến dổi gen dược dưa vào sản xuất da dem lại nguồn lợi lo lớn cho người Với vài dản chứng mặt có lợi tác dộng bất lợi cíta sinh vật chuyển gen dối với sức khoẻ người, chUng ta yên tâm lợi ích 18 LIỆU PHÁP GEN GMO, lo ngại mức độ an toàn GMO ngirời dirơc loai bỏ II VÂN ĐỂ AN TOÀN CỦA LIỆU PHÁP GEN Hiện trạng rủỉ ro điều trị liệu pháp gen Thực chất liệu pháp gen chuyển gen vào thể người, nhằm mục đích chữa bệnh cho người Liệu pháp gen trường hợp đặc biệt chuyển gen, lo ngại mức độ an toàn liệu pháp gen đổi với người bệnh tất nhiên Trong liệu pháp gen người, phải tuân thủ quy định quốc tế, quy định pghiêm ngặt cụ thể quốc gia an toàn sinh học nói chung, phải tuân thủ nguyên tắc chặt chẽ y-sinh học phân tử đê giảm thiểu rủi ro, hạn chế tác hại đến sức khoẻ người Liệu pháp gen có hiệu cao hay thấp phụ thuộc nhiều vào tồn ổn định, khả hoà nhập gen liệu pháp (DNA) vào gen tế bào người, phân chia bình thường tế bào sau thực liệu pháp gen Hiệu liệu pháp gen, cịn phụ thuộc nhiều vào kích thước, tính chất gen liệu pháp loại vectơ sử dụng, phụ thuộc vào lựa chọn đúng, chuẩn xác phù hợp kỹ thuật liệu pháp Những rủi ro thường gặp liệu pháp gen thường gen liệu pháp không hoạt động biểu hiện, gen liệu pháp gắn sai vị trí gây đột biến gen, gen liệu pháp biểu khơng bình thường tạo protein bị sai lệch gây dáp írng miễn dịch bất lợi tế bào Nguy tiềm ẩn lớn liệu pháp gen sử dụng nhiều vectơ có chất virus, mức độ định vectơ virus biến đổi, trở thành tác nhân gây bệnh, kích hoạt oncogen gây nên ung thư, tạo đột biến gen gen người bệnh Một thực khác liệu pháp gen đời muộn so với nhiều ngành khoa học khác Với 10 năm tuổi (tính từ thành cơng nãm 1990, chữa bệnh thiếu hụt miễn dịch tố hợp trầm trọng ADA- SCID)١liệu pháp gen ngành khoa học mẻ, trình độ hiểu biết người chế gây bệnh ‫ ﻻا!ا‬PíiAP GEN - NGUYEN I^Ý VÀ L^NG d ụ n g Ciici 119 nìí)i so gen độl bien chira day dll, ninh độ kỹ thucU chi có dirc;c Ở mộl số nif()’c tiên tiến Do dó, hiộn qiní cao, thi.rc liệii pháp gen tiong điền ti٠ị chữa bệnỉì clio i١gní)'i cịi١‫ ﺓ‬ttong tnong lai nhữt١g năn٦tới V‫ ؛‬í!ụ vể (ruờìig hiyp rủỉ ro sau diều trị l‫؛‬ệu pháp gen vấn dề an tồn cUa ‫ ﻻ ؛اا‬pháp geiì 2.7 Cííi chết ciìa Jesse Gelsinger sau điều trị liệu pháp gen Jesse Gelsingei sinh năm 1981, sinh dã mắc bệnh rối loạn Ornithin (0 ٦١c - ornithine transcarbamylase deficiency), gây nên dột biến gen nhiém sắc thể X Ngày 13 thing năm 1999, vừa 18 tuổi Jesse Gelslnger dược điển trị !iện pháp gen Viện Dại học Tổng hợp Pennsylvania, Mỹ Jesse Gelsinger dược chnyển vào co thể tnột lượng lớn vecto adenovirus mang gen liệu pháp ٢l٦c Ngày 14/9/1999 bị hôn mê, ngày 17 tháng 1999 Jesse Gelsinger bl chet suy hơ hiíp nặng mê s Sau chết ciia Jesse Gelsinger có nhiều lo ngại stt an t.oàn liệu phílp gen Một số ý kiến cho liệu pháp gen dã gây nên chết cíia Jesse ٢Jelsii)ger7 Idệu pháp gen khOng an tồn? 2 Liệu phcíp gen có an tồn khơng? 13ệnh o r c gồy nên dột biến gen ٦'٦c nằm nhiễm sắc thể giới tinh X cha người, làm rối logn chuyển hố amoniac, gây hậu nghiêm trọng tiVvong ttgay sau sinh Bệnh OTC thiíOng gặp ‫ ﺓ‬con trai với tỉ lệ 10 00() người, bệnh có tí lệ tử vong cao, khoảng 50% trẻ so sinh tử vong tháng tuổi dầu tỉèn, số lại thirOng tử vong trước tuổi, tỉ lệ sống sót vớỉ diều kiện sử dụng thuốc thường xuyên ٠ Trong thời gian sống, Jesse Gelsinger phải thường xuyên sử dụng thuốc hỗ trợ cUa y tế, sử dụng chế độ ãn kiêng protein uống loại nước khOng có protein Một số lần Jesse Gelsinger bị hOn mê nồng độ amoniac vượt miíc, dù dã sử dụng nhiều thuốc giUp thể chống lại hàm lượng amoniac 120 LIỆU PHÁP GEN tăng cao Sức khoẻ ngày giảm sút, 13/9/1999 Jesse Gelsinger tình nguyện thử nghiệm điều trị liệu pháp gen Trên sở tính chất nguy hiểm bệnh OTC ١trường hợp Jesse Gelsinger sống đến 18 tuổi tiến lớn y học, liệu pháp gen điều trị cho Jesse Gelsinger hôi cuối mong manh với mạng sống cưa anh Do vậy, chết Jesse Gelsinger kết luận nguyên nhân liệu pháp gen khơng an tồn Liệu pháp gen chữa khỏi bệnh cho số bệnh nhân SCID, máu khó đơng, ung thư Tuy nhiên, số bệnh nhân sau điều trị có đáp ứng miễn dịch khơng mong muốn, có thay đối nhỏ chức ỏ số nội quan gan, thận, Do vậy, vấn đề an toàn liệu pháp gen cần nghiên cứu liếp tục để liệu pháp gen phương pháp chữa bệnh hữu hiệu cho người III MỘT số ĐIỂM HẠN CHÊ CỦA LIỆU PHÁP GEN Tại lỉệu pháp gen chưa úiig dụng rộng răi chữa bệnh ? Trên sở luận khoa học phương pháp điều trị chữa bệnh liệu pháp gen phần trước, thành tựu chữa bệnh cho người liệu pháp gen, khẳng định liệu pháp gen phương phấp chữa bệnh dại khoa học Liệu pháp gen giúp cho người chữa dược inột số bệnh hiểm nghèo, mà khả y học đại nhiều hạn chế bệnh SCID, SCA, HIV/AIDS, bệnh máu khó đơng Hiện nay, liệu pháp gen điều trị khỏi bệnh cho nhiều bệnh nhân nước tiên tiến, nhiên liệu pháp gen chưa sử dụng phổ biến điều trị cho bệnh nhân, nhiều nguyêninhân khác nhau: - Liệu pháp gen đòi hỏi phương tiện kỹ thuật đại, chi phí tốn nên nước phát triển, nước nghèo chưa đủ tiềm lực phương tiện kỹ thuật, đội ngũ chuyên viên kinh phí để thực chữa bệnh liệu pháp gen UỆU PHÁP GEN - NGƯYẼN LÝ VẬ ÚNG ĐỤNG - ljịệ L i 121 pháp gen !à ngành khoa học- y học h ‫إ‬ện đại cịn q mẻ, trinh độ h‫؛‬c ٧ biết cíia nguời chưa đầy đủ đặc điếm gen bệnh, vai trò hoạt động cha gen !‫؛‬ệư pháp Do dó, dến phần lớn liệu pháp gen chữa bệnh mang tinh chất thử nghiệm - Do tinh chất chữa bệnh dến chất cuối bệnh gen bl hOng, bị lổi Tinh da dạng cùa gen người vô cUng lớn, cUng loại bệnh dột biCn gen, ‫ ن‬cac ngườ‫ ؛‬bệnh khác có mức độ dột bỉến, mức độ b‫؛‬ểu bệnh khác ٧١! vậy, diều trị liệu pháp gen khOng thể áp dụng dồng loạt cho bệnh nhân - Trong diều trl liệu pháp gen, ،sử dụng vecto chuyển gen chất virus khOng có chất virus dể dưa gen liệu pháp vào thể người bệnh, số trtrờng hợp cLÌru dược sOng người nhtrng gây số hiệu ứng phụ khônề lợ‫ ؛‬cho thể người Do số mặt hạn chế liệu pháp gen, nên diều trj chữa bệnh liệu pháp gen chưa dược phổ biến Con người cần tiếp tục nghiên cứu nhiều nữa, dể tương lai gần liệu pháp gen có hiệu chữa bệnh tuyệt dối, góp phần bảo vệ Stic khoẻ ngườ^ Triển vong cua lìẹu pháp gen Việt Nam nước ta ds dang có Số nghiên cứu diều tr ‫ﻻ ا‬ng thư liệu pháp miên dịch nghiên ciru sản xuất Interferon, IL2 diều trị bệnh ung thtt Chtìng ta dược quan tám cUa Nhà nước với chương trinh nghiên ciru ti.ọng điểm, da sản xuất thành cOng vaccin viêm gan tái tổ hợp, nhiều viện nghiên cứu trường dại học có chuyên gia giOi sinh học phân tử kỹ thuật gen Mặt khác, hướng liên doanh liên kết ١.'ớì bệnh viện dại nước ngoai, nhtr số bệnh viện 100 % vốn nước ngày nhiểu Việt Nam Chtìng ta cỏ ihể tin tường rằng, troiìg tương lai khOng xa liệu pháp gen chữa bệnh cho người dược phát triển tímg bước nước ta 22 TÀI LIỆU THAM KHAC TÀI LIỆU THAM KlIAO CHIn H Đủi Duy Ban c()ng 2002) '‫)ﻟﻢ('د‬ Sinli học phân tír cii،\ 11112 thư vòm lining Ị ^h ۵ ١ h y v^ ‫ام‬٦‫'ا‬,‫آ؛‬ ١ Đổ Ni^()c Liên (1999) Miền cỉịcli học co ^0 NXB Đại liọc Qtiốc giii llíi Nộl Lê Đìỉilỉ Lương, Qiiycn Đìnli Thi (200.١) Hỹ thưột di litiyền ứng (‫اا‬.‫ااا‬٤ ‫ذ‬ NXB Đại liọc Qưổc glit HÍI Nội Kliiícứ hinu Tliaiìlì (20()3) Cơ sở di tl ‫ا‬ιyềl١phần tử \'à Lỹ thưột gen NXB Khot liọc v ^ ihtiật, Hà Nội Tgp chi AIDS \'à cộng dồng 7/2004 Alan Cantwell JR (2004) Âni mưư dipt chLiiig bí mật A.IDS NXB TliOiig tấn١Hà Nội (Ban dlch) CaroHtìe (2004) Stiicide gene theiapy: Methods and leviews Spiingei Chailes Bienner {2004) Onco-gennomics: Molectilaì Appioaches lo Cancel Willey London UK Jocheii Deker, IJclo Reis dll (2004) .^iolectilai diagnosis of infeclions di.seases Cjailand Science UK 10 Kahn D.B et al., (2003) Natnie Revie١vs Cancel 3:477-488 11 7? F Weaver (2002) Molecular Biol()gy١International Edition USA 12 Anthony Meager (1999) Gene therapv lecliiiologies applications itnd regtiJalions: from laboratoiy to clinic ‫ل‬0‫ااا‬١Wiley & Sons LLD LJK 13 N.R Leinoine (2000) Understanding Gene Therapy BIOS &ientific p ‫ا‬lblisher.s UK 14 1998 )٠.7 /‫ر‬17،‫ر‬،/‫ك;ا(ا‬ ‫)ر‬ The molectilar bio!()gy (')f cytokines Jolin Wiley & Sons, Nev^ York, USA 13 Salima Hacein- BeV‘ Ahiiia (2002) Sustained Correction of X-Linked Severe Combined Immtiiiodeficiency !ly ex Vivo Gene Therapy ^Ilie New England journal of medicine 346: 193 ‫ إ‬83- ‫ا‬, Ntimbei 16 16 Cavazzana-Calvo M et ah, ( 2001) Gene therapy of human sex'ere combined iiiimtiitodeficiency (SCID)-Xl disea.se Uihi 429, Gene ITerapy Laboratory, Hospital Neckei., 75743 Paris Cedex 15, L'l.ance 17 Flint et ah, (2000) Principles of Virology i٠ \SM Press, 2000 18 Rosenberg, S.A (2001) Progress in ht!maj١tnn٦or immunology attd in٦mrmotherapv Nature 411, 380-384 LIKU PIIAP GFi ٠ J - NGUYRN LY VA L NG DUNG 23 19 Hyde el ai, (20()0) Gt.nc Therapy 7:! 1,٦(> 20 Lenny,, /.anrence I K (2002) Hemalologv: Hemophilia A ،Scientific American Medicine 1: 14-1,٩, 21 Coiiric, ■loliii M (1984) “Hemophilia ha.s ‫)؛‬iiilasied (he czars”.FDA Consumer Health, 18 22 ■Pacheco Maria (1998) Hemophilia A McGill’s Medical Guide II: 813-816 23 Blae.se R.M el a/ ( 199.٩) T lymphocyte- detected gene therapy for ADA-S(HD: initial trial result after \ ears Science, 270: 475-480 Tir lieu fiT mot so tranj Web ht Ip://w w\v.vvi1ey.CO uk/ge ntn ed htlp://www.aidsmeds.com/nevvs http://wwvv.expasy.cl'i/cgi-bin/niceprot.pl'.'Pp0451 http://vvvvvv3.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-posl 0mim/dispmim?306700 http://wvvvv.ncbi.nlm.nih.gov/cgi bin/!:ntrez/getfeat http://www.sciam.com/0996issue/0996olilTdiagram 1.html http://www.rvc.ac.uk/hxtianet/DNA_ I/1)N A _ljntro.htm http://library.ihinkquest.org/24355/daia'light/details/media/recombinantani m.html http://www.organoninc.com/products/consumer/ http://wwvv.sciam.eom/0996issue/0996olilTdiagraml html http:// w.vv.w gcnotnc.ou.edu/ protocol book http:// w.vv.w ktimc.edu/biochemistry/bioc 800 http://web4.infotrac.galegroup.com/itw/inlomark/ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI TS KHUẤT Hũl THANH LIỆU PHÁP GEN NGUYÊN LÝ VÀ ỨNG DỤNG Chịu trách nhiệm xuất hãn Biên tập sửa h i : PGS TS TÔ ĐẢNG HẢI ThS NGUYỄN HUY TIẾN NGỌC LINH Trình bày bìa : HƯƠNG LAN NHÀ XUẤT BẢN KHOA HỌC VÀ KỸ THUẬT 70, TRẦN HUNC ĐAO - HÀ NỘI In 1000 cuốn, khổ 16x24 cm Nhà in KH&CN Giấy phép xuất số: 06-210 - Cục Xuất cấp ngày 05/1/2004 In xong nộp lưu chiểu tháng nãm 2005 ... UỆU PHÁP GP;N - NGUYÊN l.Ý VẢ L‫؛‬NG DỤNG Chương LIỆU PHÁP GEN I LIỆU PHÁP GEN LÀ GÌ ? Khái niệm liệu pháp gen Uệu pháp gen (Gene therapy - GT) thực chất phương pháp chữa bệnh gen, hay “thuốc gen" ... khác liệu pháp gen, hiểu C ckh chung nhất: liệu pháp gen tập hợp biện pháp để sử dụng gen cần thiết (còn gọi gen liệu pháp) nhằm mục đích chữa bệnh cho người l l Khái niệm gen liệu pháp Gen liệu. .. thuật đưa vectơ mang gen liệu pháp vào lê' bào chủ thể, dồng thời theo dõi hoạt dộng biểu gen liệu pháp (ỉcn liệu pháp tách dòng gen liệu pháp Geii liệu pháp (Therapeutic gene) gen (hay doạn DNA,