Nghiên cứu sự ảnh hưởng của bã cà phê lên sự phát triển của nấm cordyceps militaris

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG o0o ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SỰ ẢNH HƯỞNG CỦA BÃ CÀ PHÊ LÊN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM Cordyceps militaris Giảng viên hướng dẫn : Th.S Văn Hồng Cầm Sinh viên thực : Bùi Thị Thúy Kiều Mã số sinh viên : 56136304 Khánh Hòa - 2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC o0o ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SỰ ẢNH HƯỞNG CỦA BÃ CÀ PHÊ LÊN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM Cordyceps militaris Giảng viên hướng dẫn : Th.S Văn Hồng Cầm Sinh viên thực : Bùi Thị Thúy Kiều Mã số sinh viên : 56136304 Khánh Hịa, tháng 7/2018 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đồ án tốt nghiệp “NGHIÊN CỨU SỰ ẢNH HƯỞNG CỦA BÃ CÀ PHÊ LÊN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM Cordyceps militaris” thành từ nghiên cứu hoàn toàn dựa sở số liệu thực tế thực theo hướng dẫn ThS Văn Hồng Cầm Đồ án thành riêng tôi, không chép theo đồ án tương tự Mọi tham khảo sử dụng đồ án trích dẫn nguồn tài liệu báo cáo danh mục tài liệu tham khảo Mọi chép không hợp lệ, vi phạm quy chế nhà trường, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Khánh Hòa, tháng năm 2018 Sinh viên Bùi Thị Thúy Kiều ii LỜI CẢM ƠN Trải qua thời gian thực tập suốt hai năm khu thí nghiệm Cơng nghệ cao – Trường Đại học Nha Trang, em học nhiều kỹ tích lũy kiến thức thực tế quý báu vô mẻ, tiếp thêm động lực để em vững vàng bước vào đời Để đạt thành ngày hôm nay, em xin chân thành cảm ơn Cô Văn Hồng Cầm tận tình hướng dẫn bảo em suốt trình thực đề tài viết Báo cáo tốt nghiệp Em tỏ lịng biết ơn đến Cơ Khúc Thị An tạo điều kiện giúp đỡ để em thực đề tài Bên cạnh đó, em xin cám ơn quý Thầy, Cô Viện Công Nghệ Sinh học Môi trường – Trường Đại học Nha Trang truyền đạt cho em kiến thức kinh nghiệm quý báu năm học tập trường Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Khu Công nghệ cao – Trường Đại học Nha Trang tạo điều kiện thuận lợi để em thực tập Trường Và cảm ơn bạn sinh viên Văn Tấn Thành, Nguyễn Thị Hoa sinh viên Khóa 57 ngành Cơng nghệ Sinh học – Trường Đại học Nha Trang nhiệt tình hỗ trợ giúp đỡ em trình thực đề tài Cuối em kính chúc q Thầy, Cơ dồi sức khỏe thành công nghiệp cao quý Em xin chân thành cảm ơn! iii TÓM TẮT ĐỀ TÀI Nghiên cứu thực nhằm khảo sát ảnh hưởng bã cà phê lên phát triển nấm Cordyceps militaris giai đoạn nuôi cáy khác nhau: i) Sự phát triển hệ sợi C militaris mơi trường agar có bổ sung dịch bã cà phê; ii) Sự phát triển hệ sợi C militaris mơi trường dịch lỏng có bổ sung dịch bã cà phê; iii) Sự phát triển hệ sợi C militaris môi trường gạo lứt thay bã cà phê Kết nghiên cứu cho thấy bổ sung dịch bã cà phê vào môi trường agar dịch lỏng làm ức chế phát triển hệ sợi nấm C militaris Sau ngày nuôi cấy, môi trường thạch PDA bổ sung 30% dịch bã cà phê đường kính hệ sợi nấm C militaris đạt 16,13 ± 1,13 mm, giảm 1,7 lần so với nghiệm thức đối chứng PDA (0% dịch bã cà phê) Sau 14 ngày nuôi cấy môi trường PDB khối lượng tơ ướt đạt 8.195,97 ± 147,907 mg, cao gấp 1,93 lần so với môi trường PDB bổ sung 20% dịch bã cà phê, cao gấp 2,05 lần so với môi trường dịch lỏng chứa 20% dịch bã cà phê Trên môi trường gạo lứt, tốc độ lan tơ nấm C militaris tốt nghiệm thức đối chứng (0% bã cà phê), thay bã cà phê nồng độ cao tốc độ lan tơ giảm Khi thu thể, khối lượng thể cao môi trường gạo lứt (0% bã cà phê) gấp 1,63 lần so với môi trường gạo lứt thay 10% bã cà phê (7,83 ± 1,12 g) Tuy nhiên, chiều dài thể cao nuôi cấy C militaris môi trường gạo lứt thay 10% bã cà phê (57,56 ± 9,37 mm) môi trường gạo lứt đối chứng (0% bã cà phê) đạt 44,38 ± 14,93 mm Đặc biệt, nuôi cấy C militaris môi trường gạo thay bã cà phê – 10%, thể có tượng bị trắng iv MỤC LỤC Đề mục Trang Lời cam đoan ii Lời cảm ơn iii Tóm tắt đề tài iv Mục lục v Danh mục hình vii Danh mục bảng viii Chữ viết tắt ký hiệu x Lời mở đầu xi CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Cordyceps militaris 1.1.1 Phân loại mô tả Cordyceps militaris 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Vòng đời nấm Cordyceps 1.1.4 Giá trị nấm Cordyceps militaris 1.1.5 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến nuôi trồng nấm C militaris 1.1.6 Tình hình nghiên cứu nấm Cordyceps 1.2 Bã cà phê phụ phẩm nông nghiệp nuôi trồng nấm 10 1.2.1 Các phụ phẩm nông nghiệp nuôi trồng nấm C militaris 10 1.2.2 Bã cà phê 11 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 15 2.1 Địa điểm thời gian thực đề tài 15 2.2 Nguyên liệu, vật liệu nghiên cứu 15 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 16 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Khảo sát sát ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường agar 16 2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường dịch lỏng 17 2.4.3 Khảo sát ảnh hưởng bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris giá thể gạo lứt .17 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 v 3.1 Sự ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường thạch .18 3.2 Sự ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường dịch lỏng 20 3.3 Sự ảnh hưởng bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris giá thể gạo lứt 22 3.3.1 Sự lan tơ nhú mầm thể C militaris giá thể gạo lứt có thay bã cà phê .22 3.3.2 Sự hình thành thể Cordyceps militaris giá thể gạo thay bã cà phê .23 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 18 Tài liệu tham khảo 288 Phụ lục 36 Phụ lục 1: Vật liệu thành phần môi trường 36 Phụ lục 2: Kết thí nghiệm 40 vi DANH MỤC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình 1.1: Nấm Cordyceps militaris tự nhiên Hình 1.2: a) Vịng đời trùng thuộc chi Hepialus; b) Q trình phát triển Cordyceps sinensis Hình 1.3: Cấu trúc hóa học cordycepin Hình 1.4: Cấu trúc hóa học adenosine Hình 1.5: Hình dạng hệ sợi Cordyceps militaris mơi trường PDA Hình 1.6: Nấm C militaris ký chủ nhộng tằm (B mori) Hình 1.7: Nấm C militaris giá thể gạo lứt 10 Hình 1.8: Bã cà phê 13 Hình 2.1: Giống Cordyceps militaris giữ ống thạch nghiêng 15 Hình 3.1: Đồ thị biểu diễn tốc độ lan tơ Cordyceps militaris mơi trường PDA có bổ sung dịch bã cà phê nồng độ khác 18 Hình 3.2: Hình thái hệ sợi Cordyceps militaris mơi trường PDA có bổ sung dịch bã cà phê nồng độ khác 19 Hình 3.3: Hình thái màng sau 14 ngày ni cấy lỏng 21 Hình 3.4: Đồ thị biểu diễn khối lượng chiều dài nấm C militaris môi trường bã cà phê thay gạo 24 Hình 3.5: Nấm Cordyceps militaris đến giai đoạn thu hoạch (60 ngày) 25 Hình 3.6: Quả thể tái phân lập sau thu hoạch 26 Phụ lục 1.1: Bã cà phê sau sấy 36 Phụ lục 1.2: Nhộng tằm tươi 36 Phụ lục 1.3: Tủ ấm vi sinh 37 Phụ lục 1.4: Nồi hấp tiệt trùng 37 Phụ lục 1.5: Tủ sấy dụng cụ 37 Phụ lục 1.6: Cân điện tử 39 vii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Phân loại khoa học Cordyceps militaris Bảng 1.2: Thành phần dinh dưỡng bã cà phê 12 Bảng 3.1: Sự ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm Cordyceps militaris môi trường dịch lỏng 20 Bảng 3.2: Tốc độ lan tơ hình thành thể C militaris môi trường gạo lứt thay bã cà phê 22 Phụ lục 1.7: Thành phần môi trường thạch nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng dịch bã cà phê đến lan tơ Cordyceps militaris 39 Phụ lục 1.8: Thành phần môi trường dịch lỏng nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng dịch bã cà phê đến lan tơ Cordyceps militaris 39 Phụ lục 1.9: Thành phần môi trường gạo lứt nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng bã cà phê đến phát triển Cordyceps militaris 39 Phụ lục 2.1: Sự ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường agar 40 Phụ lục 2.2: Sự ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường dịch lỏng (mg) 41 Phụ lục 2.3: Sự ảnh hưởng bã cà phê đến lan tơ nấm C militaris môi trường gạo lứt .42 Phụ lục 2.4: Sự ảnh hưởng bã cà phê đến chiều dài (mm) thể nấm C militaris môi trường gạo lứt 43 Phụ lục 2.5: Sự ảnh hưởng bã cà phê đến khối lượng (g) thể nấm C militaris môi trường gạo lứt 44 Phụ lục 2.6: Bảng xử lý số liệu ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường agar 45 Phụ lục 2.7: Bảng xử lý số liệu ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường dịch lỏng 45 Phụ lục 2.8: Bảng xử lý số liệu ảnh hưởng bã cà phê đến chiều dài (mm) thể nấm C militaris môi trường gạo lứt 45 Phụ lục 2.9: Bảng xử lý số liệu ảnh hưởng bã cà phê đến khối lượng (g) thể nấm C militaris môi trường gạo lứt 46 viii ix AND TECHNOLOGY, 44(2), 205–121 54 Leifa, F., & Soccol, C R (2005) Shiitake Cultivation (p 92) 55 Li, J., Guan, M., Li, Y (2015) Effects of cooking on the contents of adenosine and cordycepin in Cordyceps militaris Procedia Engineering, 102, 485–491 56 Li N., Song J.G., Liu J.Y., Z H (1995) Compared chemical composition between Cordyceps militaris and Cordycpes sinensis Journal of Jilin Agriculture University, 17, 80–83 57 Li S.P., Yang F.Q., T K W K (2006) Quality control of Cordyceps sinensis, a valued traditional Chinese medicine Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 41, 1571–1584 58 Liang, Z Q (2007) Cordyceps In Flora Fungorum Sinicorum 59 Lim, L., Lee, C., Chang, E (2012) Optimization of solid state culture conditions for the production of adenosine, cordycepin, and D- mannitol in fruiting bodies of medicinal caterpillar fungus Cordyceps militaris (L.:Fr.) Link (Ascomycetes) International Journal of Medicinal Mushrooms, 14, 181–188 60 Lin, Q., Long, L., Wu, L., Zhang, F., Wu, S., Zhang, W., Sun, X (2016) Evaluation of different agricultural wastes for the production of fruiting bodies and bioactive compounds by medicinal mushroom Cordyceps militaris Journal of the Science of Food and Agriculture, 97(10), 3476–3480 https://doi.org/10.1002/jsfa.8097 61 Liu, Y., Tu, Q., Knothe, G., & Lu, M (2017) Direct transesterification of spent coffee grounds for biodiesel production Fuel, 199, 157–161 https://doi.org/10.1016/j.fuel.2017.02.094 62 Lo, H.C., Chienyan H., Fang, Y.L., Hsu, T H (2013) A systematic review of the mysterious caterpillar fungus OphioCordyceps sinensis in Dong Chong Xia Xao and Related Bioactive ingredients Jourmal of Traditional and Complementary Medicine, 3(1), 16–32 63 Masuda, M., Urabe, E., Sakurai, A., & Sakakibara, M (2006) Production of cordycepin by surface culture using the medicinal mushroom Cordyceps militaris Enzyme and Microbial Technology, 39(4), 641–646 64 Oh, N.-S., Sung, N.-Y., Byun, E.-H., Kim, Y.-E., Cho, E.-J., & Oh, C.-H (2018) Changes in Mycelial Growth and Antioxidant Activities of Basidiomycetous Strains 33 Added with Hydrolysates of Spent Coffee Grounds as a Substrate Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition, 47(1), 90–95 65 Ohta, Y., Lee, J B., Hayashi, K., Fujita, A., Park, D K., & Hayashi, T (2007) In vivo anti-influenza virus activity of an immunomodulatory acidic polysaccharide isolated from Cordyceps militaris grown on germinated soybeans Journal of Agricultural and Food Chemistry, 55(25), 10194–10199 66 Olatunji, O.I., Tang, J., Tola, A., Auberon, F., Oluwaniyi, O., Ouyang, Z (2018) The genus Cordyceps: An extensive review of its traditional uses, phytochemistry and pharmacology Fitoterapia https://doi.org/10.1016/j.fitote.2018.05.010 67 Othman, N Z., Malek, R A., Elmarzugi, N A., Aziz, R A., & Enshasy, H El (2015) Medium Composition Effects on Growth Kinetic of Cordyceps militaris Cells Using Agar Plate Method Journal of Pharmacy and Biological Sciences, 10(1), 79–82 https://doi.org/10.9790/3008-10117982 68 Paul, M K., Paul, F C., David, W M., S J A (2008) Dictionary of the Fungi CABI 69 Pelupessy, W (2003) Environmental issues in the production of beverages: The global coffee chain In Environmentally-Friendly Food Processing (pp 95–115) Woodhead Publishing Limited, Cambridge https://doi.org/10.1533/9781855737174.2.95 70 Reis, F.S., Barros, L., Calhelha, R.C., Ćirić, A., van Griensven, L., Soković, M., Ferreira, I (2013) The methanolic extract of Cordyceps militaris (L.) Link fruiting body shows antioxidant, antibacterial, antifungal and antihuman tumor cell lines properties Food and Chemical Toxicology, 62, 91–98 71 Shashidhara, M.G., Giridhara, P., Udaya, S.K., Manohar, B (2013) Bioactive principles from Cordyceps sinensis: Apotent food supplement – A review Journal of Functional Foods, 5(3), 1013–1030 https://doi.org/10.1016/j.jff.2013.04.018 72 Shrestha B., Lee W.H., Han S.K., S J M (2006) Observations on Some of the Mycelial Growth and Pigmentation Characteristics of Cordyceps militaris Isolates Mycobiology, 34(2), 83–91 https://doi.org/10.4489/MYCO.2006.34.2.083 73 Shrestha, B., Choi, S.-K., Kim, H.-K., Kim, T.-W., & Sung, J.-M (2005) Genetic 34 Analysis of Pigmentation in Cordyceps militaris Mycobiology, 33(3), 125–130 74 Sung, J.M., Choi, Y.S., Shrestha, B., Park, Y J (2002) Investigation on artificial fruiting of Cordyceps militaris Korean Journal of Mycology, 30, 6–10 75 Tam, T T (2013) Vietnam’s coffee industry Ipsso Business Consulting 76 Ueitele, I., Kadhila, N.P.P., Matundu, N (2014) Evaluating the production of Ganoderma mushroom on corn cobs African Journal of Biotechnology, 13(22), 2215–2219 77 Vitez, T., Koutný, T., Šotnar, M., & Jan Chovanec (2016) On the Spent Coffee Grounds Biogas Production Acta Universitatis Agriculturae et Silviculturae Mendelianae Brunensis, 64(4) https://doi.org/10.11118/actaun201664041279 78 Wang, Y., Guo, Y., Zhang, L., Wu, J (2012) Characterizations of a new Cordyceps cicadae isolate and production of adenosine and cordycepin Brazilian Journal of Microbiology, 43(2), 449–455 79 Xie, C., Liu, G., Gu, Z., Fan, G., Zhang, L., & Gu, Y (2009) Effects of culture conditions on mycelium biomass and intracellular cordycepin production of Cordyceps militaris in natural medium Annals of Microbiology, 59(2), 293–299 https://doi.org/10.1007/BF03178331 80 Yahagi, N., Yahagi, R., Takano, F (2004) Growth of ascoscraps from cultured from cultured Cordyceps militaris (L.:Fr.) Fr and Cordyceps formicarum Kobayasi in an agar medium Nippon Kingakukai Kaiho, 45, 15–19 81 Yang, W.J., Guo, F.L., Wan, Z J (2013) Yield and size of oyster mushroom grown on rice/wheat straw basal substrate supplemented with cotton seed hull Saudi Journal of Biological Sciences, 20(4), 333–338 82 Zhang J.Y., Wu K.L., D J (2010) Influence of air permeability on growth of Cordyceps militaris Guangdong Agricultural Science, 4, 45–47 83 Zhang, P., Huang, C., Fu, C., Tian, Y., Hu, Y., Wang, B., … Song, E (2015) Cordycepin (3’-deoxyadenosine) suppressed HMGA2, Twist1 and ZEB1-dependent melanoma invasion and metastasis by targeting miR-33b Oncotarget, 6(12) https://doi.org/10.18632/oncotarget.3383 84 Zheng, P., Xia, Y.L., Xiao, C H (2011) Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional Chinese medicine Genome Biology, 23, 12 35 85 Zhou, X., Gong, Z., Su, Y., Lin, J., & Tang, K (2009) Cordyceps fungi: natural products, pharmacological functions and developmental products Journal of Pharmacy and Pharmacology, 61(3), 279–291 https://doi.org/10.1211/jpp/61.03.0002 36 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Vật liệu thành phần mơi trường a Hóa chất mơi trường - Một số hóa chất, mơi trường vi sinh thương mại: Peptone FP101 (Angel, Trung Quốc), Cao nấm men FM888 (Angel, Trung Quốc), agar (Hải Long, Việt Nam), succrose - Một số hóa chất khác: cồn 96o, cồn 70o, nước cất b Nguyên liệu - Khoai tây: tươi, không sâu bệnh, chưa nảy mầm - Bã cà phê thu nhận quán cà phê nguyên chất địa bàn Thành phố Nha Trang Sau sấy (BINDER ED 115) 700C, 24 bảo quản hộp nhựa điều kiện thường Phụ lục 1.1: Bã cà phê sau sấy - Nhộng tằm (B mori) tươi nguyên con, mua Đà Lạt Phụ lục 1.2: Nhộng tằm tươi 36 c Dụng cụ thiết bị - Các thiết bị bản: tủ cấy vi sinh (SANYO BIO CLEAN BENCH MODEL: MCV - 9BS0), tủ sấy (SANYO DRYING OVEN MODEL: MOV - 112), nồi hấp tiệt trùng (HIRAYAMA MODEL: HV-50), tủ ấm vi sinh (SANYO INCUBATOR), cân điện tử (SARTORIUS CP224S) Phụ lục 1.3: Tủ ấm vi sinh Phụ lục 1.4: Nồi hấp tiệt trùng Phụ lục 1.5: Tủ sấy dụng cụ Phụ lục 1.6: Cân điện tử 37 d Thành phần môi trường cách chuẩn bị môi trường - Môi trường PDA (Potato dextrose agar):  Khoai tây: 200 g/l  Dextrose: 20 g/l  Agar: 20 g/l  Cách chuẩn bị: rửa khoai tây, cắt khối vuông khoảng 1cm, cho nước vào, đun sôi khoảng nửa tiếng Lọc lấy phần dịch định mức lít nước cất, cân đường agar cho vào khuấy - Môi trường PDB (Potato dextrose broth)  Khoai tây: 200 g/l  Đường sucrose: 20 g/l  Cách chuẩn bị: rửa khoai tây, cắt khối vuông khoảng 1cm, cho nước vào, đun sôi khoảng nửa tiếng Lọc lấy phần dịch định mức lít nước cất, cân đường vào khuấy - Dịch bã cà phê: Cân khối lượng cà phê theo nghiệm thức, cho dịch khoai tây vào đun sôi lọc lấy dịch, sau định mức nước cất - Dịch dinh dưỡng:  Khoai tây: 200 g/l  Nhộng tươi: 100 g/l  Đường sucrose: 20 g/l  Peptone: g/l  Cao nấm men: g/l  Trứng: quả/l  Vitamin tổng hợp: 2,5 mg/l  Cách chuẩn bị: rửa khoai tây, cắt khối vuông khoảng 1cm, cho nước vào, đun sôi khoảng nửa tiếng Lọc lấy phần dịch định mức lít nước cất Cân thành phần lại, cho vào máy xay nhuyễn, trộn với dịch khoai tây chuẩn bị 38 Phụ lục 1.7: Thành phần môi trường agar nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng dịch bã cà phê đến lan tơ Cordyceps militaris Nghiệm thức Thành phần Khoai tây (g/l) 200 Đường (g/l) 20 Agar (g/l) 20 25 50 100 150 200 250 300 0% 2,5% 5% 10% 15% 20% 25% 30% Bã cà phê (g/l) Nồng độ dịch bã cà phê Phụ lục 1.8: Thành phần môi trường dịch lỏng nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng dịch bã cà phê đến lan tơ Cordyceps militaris Nghiệm thức Thành phần 200 Khoai tây (g/l) Đường (g/l) 20 100 200 100 200 0% 10% 20% 10% 20% Bã cà phê (g/l) Nồng độ dịch bã cà phê Phụ lục 1.9: Thành phần môi trường gạo lứt nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng bã cà phê đến phát triển Cordyceps militaris Nghiệm thức 20 17,5 15 12,5 10 Thành phần Gạo (g/bình) Dịch dinh dưỡng (ml/bình) 30 Bã cà phê (g/bình) 2,5 7,5 10 Nồng độ bã cà phê 0% 5% 10% 15% 20% 39 Phụ lục 2: Kết thí nghiệm Phụ lục 2.1: Sự ảnh hưởng dịch bã cà phê đến phát triển tơ nấm C militaris môi trường agar (mm) Nồng độ dịch bã cà phê 2,5 10 15 20 25 30 25 25 22 22 19 19 16 15 27 26 21 23,5 17 18 16 17 27 23 21 23 19 20 19 16 30 24 22 23 16 20 16,5 15 30 24 23 21 16 18 17 15 29 24 22 21 18 19 17 17 28 24,5 21 21,5 19 19 16 18 27 24 21 21,5 19 18 17 16 27,88 24,31 21,63 22,06 17,88 18,88 16,81 16,13 ± ± ± ± ± ± ± ± 1,73f 0,88e 0,74d 0,98d 1,36b/c 0,83c 1,00a/b 1,13a (%) n Trung bình Số liệu xử lý phần mềm STATGRAPHICS centurion XV.I (với P