Nghiên cứu tạo hoạt chất Mangostin Phytosome và đánh giá khả năng chống oxi hóa trên động vật thực nghiệm

Nghiên cứu tạo hoạt chất Mangostin Phytosome và đánh giá khả năng chống oxi hóa trên động vật thực nghiệm Nghiên cứu tạo hoạt chất Mangostin Phytosome và đánh giá khả năng chống oxi hóa trên động vật thực nghiệm luận văn tốt nghiệp thạc sĩ

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - HOÀNG MAI LINH NGHIÊN CỨU TẠO HOẠT CHẤT MANGOSTIN PHYTOSOME VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG OXI HÓA TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN HOÀNG MAI LINH NGHIÊN CỨU TẠO HOẠT CHẤT MANGOSTIN PHYTOSOME VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG OXI HÓA TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS ĐỖ THỊ TUYÊN PGS.TS NGUYỄN QUANG HUY Hà Nội - 2020 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, tơi xin gửi lời cảm lịng biết ơn chân thành tới TS Đỗ Thị Tun, Trưởng phịng Cơng nghệ sinh học Enzyme thuộc Viện công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam định hướng nghiên cứu hướng dẫn, tạo điều kiện trang thiết bị, hóa chất để tơi hồn thành đề tài Tơi xin cảm ơn PGS.TS Nguyễn Quang Huy cho hội thực luận văn phịng Cơng nghệ sinh học Enzyme, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Luận văn thực kinh phí đề tài cấp Bộ quốc phòng “Nghiên cứu bào chế viên nang chứa phytosome mangostin chiết xuất từ vỏ măng cụt dùng cho đội làm việc điều kiện độc hại” Thiếu tá, Ths Đoàn Thanh Huyền chủ nhiệm Tôi xin cảm ơn tập thể phịng Cơng nghệ sinh học Enzyme, Viện Cơng nghệ sinh học bảo, giúp đỡ chia sẻ tận tình cho tơi kinh nghiệm chun mơn q trình làm thực nghiệm Tơi xin gửi lời cảm ơn lịng biết ơn tới thầy Khoa sinh học, Trường đại học Khoa học tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội tạo điều kiện cho tơi q trình học tập Tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè ln động viên tinh thần để tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng 12 năm 2020 Học viên Hoàng Mai Linh i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC BẢNG vi CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hoạt chất α- mangostin 1.1.1 Giới thiệu chung 1.1.2 Cấu trúc hóa học .3 1.1.3 Hoạt tính sinh học 1.2 Phytosome 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Thành phần phytosome 1.2.3 Phân loại, vai trò phospholipid phytosome .9 1.2.4 Ưu nhược điểm phytosome .10 1.2.5 Một số phương pháp bào chế phytosome 11 1.2.6 Một số phương pháp đánh giá tương tác hoạt chất phospholipid phytosome 11 1.3 Peroxidase 12 1.4 Peroxy hóa lipid .13 1.5 Giới thiệu số vi sinh vật gây bệnh ngƣời 14 1.5.1 Staphylococcus aureus .14 1.5.2 Candida albicans .15 1.6 Tình hình nghiên cứu phytosome .15 1.6.1 Trên giới .15 1.6.2 Ở Việt Nam 17 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 19 2.1 Nguyên liệu hóa chất 19 ii 2.1.1 Nguyên liệu 19 2.1.2 Hóa chất 19 2.2 Các thiết bị thí nghiệm 21 Các thiết bị sử dụng thí nghiệm đƣợc liệt kê bảng 21 2.3 Động vật thí nghiệm 22 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.4.1 Tách chiết tinh α-mangostin 23 2.4.2 Sắc ký cột (Column chromatography - CC) 24 2.4.3 Sắc ký mỏng .25 2.4.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 25 2.4.5 Phương pháp điều chế mangostin phytosome 26 2.4.6 Phương pháp đánh giá khả tạo phức hoạt chất phospholipid 27 2.4.7 Xác định hoạt tính kháng khuẩn 28 2.4.8 Xác định hoạt độ peroxidase 29 2.4.9 Xác định làm lượng malondialdehyde .30 2.4.10 Xác định hàm lượng protein 31 2.4.11 Xác định hàm lượng -SH tự 31 2.4.12 Xử lý số liệu 32 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Tách chiết thu nhận hoạt chất α-mangostin .33 3.2 Điều chế mangostin phytosome 37 3.3 Đánh giá tƣơng tác hoạt chất phospholipid phytosome .39 3.3.1 Phân tích phổ hồng ngoại IR 39 3.3.2 Phân tích quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS .41 3.4 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn phytosome mangostin 42 3.5 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa động vật thực nghiệm 43 3.5.1 Ảnh hưởng mangostin phytosome lên hoạt độ peroxidase gan 43 iii 3.5.2 Ảnh hưởng mangostin phytosome lên hàm lượng MDA gan chuột 45 3.5.2 Ảnh hưởng mangostin phytosome lên hàm lượng nhóm -SH gan chuột 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 KẾT LUẬN 50 KIẾN NGHỊ .50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc Chromono Hình 1.2 Cấu trúc khung xương phân tử xanthone Hình 1.3 Cấu trúc hóa học α- mangostin Hình 1.4 Cấu tạo phytosome .8 Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo phosphatidylcholin 10 Hình 1.6 Cấu trúc nhân hem peroxidase 13 Hình 1.7 Hình dạng vi khuẩn Staphylococcus aureus 14 Hình 1.8 Hình dạng nấm Candida albicans .15 Hình 2.1 Quy trình tinh α-mangostin từ vỏ măng cụt Garcinia mangostana L .23 Hình 2.2 Sơ đồ bào chế mangostin phytosome .27 Hình 2.3 Đường chuẩn peroxidase có sử dụng chuẩn peroxidase horce 30 Hình 2.4 Đường chuẩn Bradford sử dụng BSA làm chuẩn .31 Hình 3.1 Tách chiết thu nhận hoạt chất α-mangostin 33 Hình 3.2 Ảnh chạy sắc kí mỏng sản phẩm tinh α-mangostin 34 Hình 3.3 Hoạt chất α-mangostin dạng tinh thể 36 Hình 3.4 Phổ HPLC hoạt chất - mangostin 36 Hình 3.5 Quá trình bào chế mangostin phytosome 39 Hình 3.6 Phổ hồng ngoại mẫu - mangostin 40 Hình 3.7 Hấp thụ huỳnh quang phức mangostin phytosome 41 Hình 3.8 Hoạt tính kháng khuẩn α-mangostin mangostin phytosome nấm Candida albicans (A) vi khuẩn Staphylococcus aureus (B) .42 Hình 3.9 Hoạt độ peroxidase gan chuột tác dụng mangostin phytosome 44 Hình 3.10 Sự thay đổi hàm lượng MDA gan tác dụng mangostin phytosome 46 Hình 3.11 Sự thay đổi hàm lượng nhóm -SH gan tác dụng mangostin phytosome 48 v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách hóa chất sử dụng thí nghiệm .20 Bảng 2.2 Thành phần loại đệm dung dịch 20 Bảng 2.3 Thành phần môi trường nuôi cấy vi sinh vật .21 Bảng 2.4 Các thiết bị thí nghiệm 21 Bảng 2.5 Các nhóm chuột xử lí hóa chất 22 Bảng 3.1 Tỷ lệ sản phẩm tách chiết so với nguyên liệu thô .35 Bảng 3.2 Số liệu phân tích phổ HPLC mẫu - mangostin tinh .37 Bảng 3.3 Hiệu suất trình điều chế mangostin phytosome 38 Bảng 3.4 Hoạt độ peroxidase gan chuột 44 Bảng 3.5 Hàm lượng MDA gan chuột tác dụng phytosome mangostin 46 Bảng 3.6 Hàm lượng nhóm -SH gan chuột tác dụng phytosome mangostin 48 vi CÁC CHỮ VIẾT TẮT H-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân DMSO Dimethyl sulfoxide DSC Phân tích nhiệt vi sai ĐC Đối chứng EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid EP Ether petroleum EtOAC Ethyl acetate EtOH Ethanol FTIR Quang phổ hồng ngoại chuyển đổi HPLC High-performance liquid chromatography HSPC Phosphatidylcholin đậu nành hydrogen hóa (Hydrogenated Soy Phosphatidylcholin) LB Luria broth LDL Low density lipoprotein MDA Malondialdehyde MeOH Methanol MIC Minimum inhibitory concentration OD Optical density PC Phosphatidylcholin PDI Chỉ số phân bố KTTP Rf Retention factor SD Standard deviation SDA Sabouraud dextrose agar SDS Sodium dodecyl sulfate -SH Nhóm sulfhydryl SEM Kính hiển vi điện tử quét SKD Sinh khả dụng SOD Superoxide dismutase vii TB Trung bình TBA Thiobarbituric acid TL Trọng lượng TLC Thin layer chromatography TMB 3,3´-5,5´-tetramethyl benzidine TN Thí nghiệm TT Thể trọng XRD Nhiễu viii xạ tia X (XRay diffraction) 26 Josephy, P D., Eling, T., Mason, R P (1982), "The horseradish-peroxidase catalyzed oxidation of 3,5,3'5'-tetramethylbenzidine Free radical and chargetransfer complex intermediates", J Biol Chem, 257: pp 3669-3675 27 Jaleh, V., Naser, T., Farid, D., Mohammad, R.Z (2007), “Development and validation of a simple HPLC method for simultaneous in vitro determination of amoxicillin and metronidazole at single wavelength’’, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43(1), pp.325- 329 28 Jun, J.K., Qiu, S., Zou, H., Rajamani, L., Li, J Zhou, X., Tang, C, Saraswathi, P., Verma, C., Tan, D.T.H., Tan, A.L., Liu, S., Roger W.B (2013), “Rapid bactericidal action of alpha-mangostin against MRSA as an outcome of membrane targeting”, Biochimica et Biophysica Acta, 1828 (2): pp 834–844 29 Kealey, D., Haines, P.J (2002), Analytical Chemistry Printed in the United States of America 30 Kim, H.M., Kim, Y.M., Hub, J.H., Lee, E.S., Kwon, M.H., Lee, B.R., Ko, H.J., Chung, C.H (2017) “α-Mangostin ameliorates hepatic steatosis and insulin resistance by inhibition C-C chemokine receptor 2”, Plos One 12 (6) 31 K Ohkawa, H., Ohishi, N., Yagi, K (1979), "Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction", Anal Biochem, 95(2): pp 351-358 32 Liu, T., Duan, W., Nizigiyimana, P., Gao, L., Liao, Z., Xu, B., Liu, L., Lei, M (2018), “Alphamangostin attenuates diabetic nephropathy in association with suppression of acid sphingomyelianse and endoplasmic reticulum stress”, Biochemical and Biophysical Research Communications, 496(2): pp 394-400 33 Malay K Das, Bhupen Kalita (2014), “Design and Evaluation of PhytoPhospholipid Complexes (Phytosomes) of Rutin for Transdermal Application", Journal of Applied Pharmaceutical Science, 4(10), pp 51-5734 Mahlen, S.D (2011), “Serratia infections: from military experiments to current practice”, Clinical microbiology reviews, 24 (4): pp 755-791 35 Mahabusarakam, W., Proudfoot, J., Taylor, W., Croft, K (2000), "Inhibition of lipoprotein oxidation by prenylated xanthones derived from mangostin", Free Radic Res, 33(5): pp 643-659 36 Misra, H., Dwivedi, B.K., Mehta, D., Mehta, B.K., Jain, D.C (2009), “Development and validation of high performance thin-layer chromatographic method for determination of alpha-mangostin in fruit pericarp of mangosteen plant (Garcinia mangostana L.) using ultraviolet visible detection”, Records of Natural Products, (4): pp 178-186 37 Nakatani, K., Atsumi, M., Arakawa, T., Oosawa, K., Shimura, S., Nakahata, N., Ohizumi, Y (2002) “ Inhibition of histamine release and protaglandin E2 synthesis by mangosteen, a Thai medicinal plant” Biol Pharm Bull, 25 (9): pp, 1137-1141 38 Patel Amit, Tanwar Y.S, Suman Rakesh, Patel poojan (2013),“Phytosome: Phytolipid Drug Dilivery System for Improving Bioavailability of Herbal Drug”, Journal of Pharmaceutical Science and Bioscientific Research, 3(2), pp 51-57 39 Pimchan, T., Maensiri, D., Eumkeb, G (2017), “Synergy and mechanism of action of α‐mangostin and ceftazidime against ceftazidime‐resistant Acinetobacter baumannii” Applied Microbiology 65 (4) 40 Pereira-Lachataignerais J., Pons R., Panizza P (2006), "Study and formation of vesicle systems with low polydispersity index by ultrasound method", Chem Phys Lipids, 140(1-2), pp 88-97.41 Pothitirat, W., Chomnawang, T.M., Gritsanapan, W (2009), “ Anti-acne inducing bacteria activity and alphamangostin content of Garcinia mangostana fruit rind extracts from different provenience”, Songklanakarin J Sci Technol, 31 (1): pp 41-47 42 Sakagami, Y., Iinuma, M., Piyasena, K.G., Dharmaratne, H.R (2005)“Antibacterial activity of alpha-mangostin against vancomysin resistant Enterococci (VRE) and synergism with antibiotics”, Phytomedicine, 12 (3): pp 203-208 43 Szymonik-Lesiuk, S., Czechowska, G., Stryjecka-Zimmer, M., Slomka, M., Madro, A., Celinski, K., Wielosz, M (2003), "Catalase, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase activities in various rat tissues after carbon tetrachloride intoxication", J Hepatobiliary Pancreat Surg, 10(4): pp 309-315 44 Shibata, M A., Iinuma, M., Morimoto, J., Kurose, H., Akamatsu, K., Okuno, Y., Akao, Y., Otsuki, Y (2011), “ Alpha- Mangostin extracted from the pericarp of the mangosteen (Garcinia mangostana Linn) reduces tumor growth and lymph node metastatic mammary cancer carying a p53 mutation”, BMC Med, 9: pp 69 45 Sineewan, P., Mullika, C., Kittipot, S., Benjawan, D., Glyn, H., Griangsak, E (2016), “Synergism and the mechanism of action of the combination of αmangostin isolated from Garcinia mangostana L and oxacillin against an oxacillin-resistant Staphylococcussaprophyticus”, BMC Microbiology, 16: pp 195 46 Solmaz Rasaie, Saeed Ghanbarzadeh, Maryam Mohammadi, Hamed Hamishehkar, (2014), “Nano Phytosomes of Quercetin: A Promising Formulation for fortification of Food Products with Antioxidants”,Pharmaceutical sciences, 20, pp 96-101 47 Sivaranjani, M., Prakash, M., Gowrishankar, S., Rathna, J., Pandian, S.K., Ravi, A.V (2017), “In vitro activity of alpha-mangostin in killing and eradicating Staphylococcus epidermidis RP62A biofilms” Applied Microbiology and Biotechnology, 101 (8): pp 2249-3359 48 Sun, D., Zhang, S., Wei, Y., Yin, L (2009), “ Antioxidant activity of mangostin in cell-free system and its effect on K562 leukemia cell line in photodynamic therapy” Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 41 (12): pp 309-315 49 Semalty, A., Semalty M., Singh D., Rawat M S M (2010), “ Preparation andcharacterization of phospholipid complexes of naringenin for effective drug delivery”, J Incl Phenom Macrocycl Chem, 67(3), pp 253-260 50 Werayut, P., Gritsanapan, W (2008), "Quantitative analysis of total mangostins in Garcinia mangostana fruit rind", J Health Res, 22(4): pp 161-166 51 Wang, F., Ma, H., Liu, Z., Huang, W., Xu, X., Zhang, X (2017), “ α Mangostin inhibits DMBA/TPA-induced skin cancer through inhibiting inflammation and promoting autophagy and apoptosis by regulating PI3K/Akt/mTOR signaling pathway in mice”, Biomedicine & Pharmacotherapy, 92: pp 672–680 52 Willets, K.A, Van Duyne, R.P (2007), “Localized surface plasmon resonance spectroscopy and sensing” Physical Chemistry, 58: pp 267‐297 53 Williams, P., Ongsakul, M., Proudfoot, J., Croft, K., Beilin, L (1995), “Mangostin inhibits the oxidative modification of human low density lipoprotein”, Free Radic Res, 23 (2): pp 175-184 54 Yuichi, Y., Yoshiaki, N., Mikimoto K., Koji N., Nobuhiro H., Yoshiki N (2014), “Function of Chemokine (CXC Motif) Ligand 12 in Periodontal Ligament Fibroblasts”, Plos One, (5) 55 Zhang, J., Chen, Q., Wang, S., Li, T., Xiao, Z., Lan, W., Huang, G., Cai, X (2017), “α-Mangostin, A Natural Xanthone, Induces Apoptosis and ROS Accumulation in Human Rheumatoid Fibroblast-Like Synoviocyte MH7A Cells”, Current Molecular Medicine (2017), 17 (5): pp 375-380 Website Chromone 56 Pubchem Pubchem │ C H6 O2 https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/chromone, 08/04/201857 Pubchem Acetaminophen │ accessed: C 8H9NO2 Pubchem https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/acetaminophen#section=Pharmac ology-and-Biochemistry, accessed: 02/04/2018 58 Pubchem Mangostin │ C24H26O6 Pubchem https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Mangostin#section=InformationSources accessed: 02/04/2018 59 Fineartamerica SEM Serratia marcescens Bacteria https://fineartamerica.com/featured/1-serratia-marcescens-bacteria-sem- scimat.html accessed: 02/04/2018 60 Pubchem Xanthone │ C13H8O2 Pubchem https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/xanthone#section=Top, accessed: 08/04/2018 PHỤ LỤC Hình P1 Hình ảnh chuột trước xử lý hóa chất nhóm chuột Hình P2 Hình ảnh chuột sau xử lý hóa chất (14 ngày) Bảng P1 Số liệu quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS mangostin phytosome mangostin Mangostin phytosome Wavelength Abs nm Wavelength α-mangostin Abs nm Wavelength Abs nm Wavelength Abs nm 220 2.5985 510 0.0025 220 2.1592 510 0.0078 221 2.6262 511 0.0027 221 2.1251 511 0.0079 222 2.6524 512 0.0024 222 2.0846 512 0.0081 223 2.7451 513 0.0024 223 2.0535 513 0.0082 224 2.7322 514 0.0023 224 2.0332 514 0.008 225 2.7583 515 0.0026 225 2.0231 515 0.0078 226 2.7104 516 0.0027 226 2.0406 516 0.0078 227 2.7555 517 0.0028 227 2.0693 517 0.0079 228 2.7676 518 0.0027 228 2.1046 518 0.008 229 2.7954 519 0.0024 229 2.137 519 0.0079 230 2.8185 521 0.0022 230 2.176 521 0.0079 231 2.8844 522 0.0021 231 2.232 522 0.0078 232 2.9701 523 0.0022 232 2.2833 523 0.0079 233 3.0479 524 0.0025 233 2.3403 524 0.0078 234 3.0916 525 0.0026 234 2.4023 525 0.0075 235 3.1256 526 0.0026 235 2.4834 526 0.0069 236 3.1293 527 0.0025 236 2.5538 527 0.0067 237 3.1606 528 0.0024 237 2.6184 528 0.0067 238 3.1864 529 0.0023 238 2.6864 529 0.0069 239 3.2954 530 0.0023 239 2.7752 530 0.0069 240 3.3662 531 0.0024 240 2.8525 531 0.007 241 3.3912 532 0.0022 241 2.9265 532 0.0068 242 3.3393 533 0.0022 242 2.9928 533 0.0068 243 3.3568 534 0.0023 243 3.0591 534 0.007 244 3.3951 535 0.0025 244 3.0713 535 0.0073 245 3.4912 536 0.0025 245 3.0765 536 0.0076 246 3.5301 537 0.0022 246 3.0715 537 0.0074 247 3.6055 538 0.0023 247 3.0763 538 0.0075 248 3.5726 539 0.0026 248 3.0442 539 0.0074 249 3.523 540 0.0027 249 2.9857 540 0.0076 250 3.5028 541 0.0025 250 2.9455 541 0.0077 251 3.559 542 0.0023 251 2.9084 542 0.008 252 3.5709 543 0.0023 252 2.8558 543 0.0084 253 3.6044 544 0.0025 253 2.793 544 0.0085 254 3.5946 545 0.0026 254 2.7385 545 0.0085 255 3.6317 546 0.0028 255 2.715 546 0.0083 256 3.6143 547 0.0028 256 2.6867 547 0.0082 257 3.6242 548 0.0028 257 2.6688 548 0.0082 258 3.5792 549 0.0027 258 2.6629 549 0.008 259 3.5436 550 0.0027 259 2.6534 550 0.0081 260 3.5071 551 0.0026 260 2.6422 551 0.0081 261 3.5583 552 0.0025 261 2.6172 552 0.0082 262 3.5584 553 0.0021 262 2.5775 553 0.0079 263 3.5141 554 0.0021 263 2.5047 554 0.0076 264 3.4033 555 0.0021 264 2.3976 555 0.0076 265 3.2616 556 0.0023 265 2.2595 556 0.0079 266 3.1001 557 0.0024 266 2.1082 557 0.0082 267 2.8757 558 0.0024 267 1.9401 558 0.0084 268 2.643 559 0.0023 268 1.7774 559 0.0084 269 2.4121 560 0.0023 269 1.6195 560 0.0085 270 2.2165 561 0.0025 270 1.4776 561 0.0085 271 2.0385 562 0.0027 271 1.349 562 0.0085 272 1.8782 563 0.0027 272 1.2364 563 0.0085 273 1.7355 564 0.0028 273 1.1398 564 0.0086 274 1.6091 565 0.0027 274 1.0577 565 0.0085 275 1.5012 566 0.0025 275 0.9854 566 0.0084 276 1.4107 567 0.0022 276 0.9216 567 0.0083 277 1.3334 568 0.002 277 0.8678 568 0.0081 278 1.2679 569 0.0021 278 0.8227 569 0.0081 279 1.2113 570 0.0022 279 0.786 570 0.0081 280 1.1694 571 0.0024 280 0.759 571 0.0083 281 1.1399 572 0.0024 281 0.7401 572 0.0083 282 1.1249 573 0.0023 282 0.7306 573 0.0083 283 1.1218 574 0.0022 283 0.7282 574 0.0083 284 1.1295 575 0.0022 284 0.7328 575 0.0081 285 1.1486 576 0.0023 285 0.7446 576 0.008 286 1.1753 577 0.0022 286 0.7628 577 0.0079 287 1.2083 578 0.0019 287 0.7857 578 0.008 288 1.2498 579 0.0018 288 0.8128 579 0.0079 289 1.2977 580 0.002 289 0.8427 580 0.0079 290 1.3518 581 0.0021 290 0.8766 581 0.0077 291 1.4107 582 0.0022 291 0.9143 582 0.0076 292 1.4718 583 0.0023 292 0.9538 583 0.0075 293 1.5384 584 0.0024 293 0.9969 584 0.0076 294 1.6048 585 0.0024 294 1.0392 585 0.0077 295 1.6762 586 0.0024 295 1.0851 586 0.0078 296 1.7504 587 0.0021 296 1.1313 587 0.0077 297 1.8234 588 0.0023 297 1.1789 588 0.0078 298 1.8968 589 0.0023 298 1.2268 589 0.008 299 1.9743 590 0.0024 299 1.2782 590 0.0081 300 2.0568 591 0.0022 300 1.3325 591 0.0082 301 2.1412 592 0.0021 301 1.3877 592 0.0081 302 2.2308 593 0.0019 302 1.4465 593 0.008 303 2.3309 594 0.0018 303 1.5089 594 0.0078 304 2.4386 595 0.0017 304 1.5792 595 0.0077 305 2.5581 596 0.0017 305 1.651 596 0.0077 306 2.6626 597 0.0017 306 1.7226 597 0.0078 307 2.778 598 0.0019 307 1.794 598 0.0079 308 2.8854 599 0.0021 308 1.867 599 0.008 309 3.0029 600 0.0021 309 1.944 600 0.008 310 3.1179 601 0.0019 310 2.0129 601 0.008 311 3.2279 602 0.0018 311 2.0783 602 0.0081 312 3.2914 603 0.0018 312 2.1395 603 0.0081 313 3.338 604 0.0018 313 2.1984 604 0.008 314 3.3729 605 0.0017 314 2.2462 605 0.0077 315 3.4901 606 0.0018 315 2.2903 606 0.0077 316 3.5806 607 0.002 316 2.3222 607 0.0075 317 3.6691 608 0.0023 317 2.3501 608 0.0075 318 3.7142 609 0.0024 318 2.3603 609 0.0076 319 3.7052 610 0.0024 319 2.3555 610 0.0078 320 3.6791 611 0.0023 320 2.3378 611 0.0079 321 3.6133 612 0.0021 321 2.2983 612 0.008 322 3.5653 613 0.002 322 2.2575 613 0.0079 323 3.4626 614 0.0019 323 2.1954 614 0.0078 324 3.3437 615 0.002 324 2.1273 615 0.0077 325 3.2169 616 0.0022 325 2.0463 616 0.0079 326 3.099 617 0.0023 326 1.9607 617 0.008 327 2.953 618 0.0023 327 1.8648 618 0.0081 328 2.7982 619 0.0025 328 1.7606 619 0.0083 329 2.6325 620 0.0026 329 1.6522 620 0.0082 330 2.4795 621 0.0025 330 1.5494 621 0.0081 331 2.3299 622 0.0023 331 1.4512 622 0.0078 332 2.1899 623 0.0023 332 1.3605 623 0.0077 333 2.0581 624 0.0024 333 1.2796 624 0.0076 334 1.9419 625 0.0025 334 1.2051 625 0.0075 335 1.8394 626 0.0025 335 1.1407 626 0.0073 336 1.7479 627 0.0024 336 1.0822 627 0.007 337 1.6701 628 0.0021 337 1.0335 628 0.007 338 1.6018 629 0.002 338 0.9916 629 0.0069 339 1.5462 630 0.002 339 0.9568 630 0.007 340 1.4975 631 0.0022 340 0.9288 631 0.007 341 1.4601 632 0.0021 341 0.9051 632 0.0071 342 1.4303 633 0.0021 342 0.8878 633 0.0073 343 1.4071 634 0.0021 343 0.8723 634 0.0074 344 1.3894 635 0.0021 344 0.8619 635 0.0075 345 1.375 636 0.0017 345 0.8521 636 0.0072 346 1.3641 637 0.0014 346 0.846 637 0.007 347 1.3531 638 0.0013 347 0.8407 638 0.0066 348 1.346 639 0.0015 348 0.8377 639 0.0068 349 1.3403 640 0.0019 349 0.8346 640 0.0069 350 1.3339 641 0.0022 350 0.8315 641 0.0072 351 1.3273 642 0.0022 351 0.8276 642 0.0074 352 1.3201 643 0.002 352 0.8234 643 0.0075 353 1.3127 644 0.0016 353 0.8181 644 0.0074 354 1.302 645 0.0014 354 0.8123 645 0.0071 355 1.2885 646 0.0012 355 0.8055 646 0.0069 356 1.2729 647 0.0013 356 0.7976 647 0.0069 357 1.2558 648 0.0011 357 0.7884 648 0.0068 358 1.2376 649 0.0009 358 0.7775 649 0.0067 359 1.2187 650 0.0005 359 0.7657 650 0.0065 360 1.1964 651 0.0008 360 0.7519 651 0.0066 361 1.171 652 0.0009 361 0.7364 652 0.0065 362 1.1432 653 0.001 362 0.72 653 0.0061 363 1.1136 654 0.0009 363 0.7022 654 0.0057 364 1.0818 655 0.0007 364 0.6839 655 0.0052 365 1.0489 656 0.0008 365 0.6634 656 0.0052 366 1.0144 657 0.0006 366 0.6425 657 0.0051 367 0.9791 658 0.0007 367 0.6207 658 0.0055 368 0.9411 659 0.0006 368 0.598 659 0.0057 369 0.9015 660 0.0005 369 0.5743 660 0.0058 370 0.8612 661 0.0003 370 0.5503 661 0.0057 371 0.822 662 0.0001 371 0.5262 662 0.0056 372 0.7781 663 0.0002 372 0.4995 663 0.0053 373 0.7333 664 0.0002 373 0.4715 664 0.0051 374 0.6864 665 0.0001 374 0.4432 665 0.0051 375 0.6448 666 375 0.4172 666 0.0054 376 0.6046 667 0.0001 376 0.3922 667 0.0058 377 0.5656 668 0.0001 377 0.3677 668 0.006 378 0.5281 669 0.0004 378 0.3443 669 0.0065 379 0.4917 670 0.0005 379 0.3212 670 0.0065 380 0.4579 671 0.0006 380 0.2988 671 0.0067 381 0.4251 672 0.0008 381 0.2768 672 0.0066 382 0.3935 673 0.0009 382 0.2564 673 0.0066 383 0.3635 674 0.0008 383 0.2374 674 0.0069 384 0.3352 675 0.0008 384 0.2194 675 0.0071 385 0.3091 676 0.0009 385 0.2028 676 0.0074 386 0.2841 677 0.0012 386 0.187 677 0.0072 387 0.2609 678 0.0011 387 0.1723 678 0.007 388 0.2389 679 0.0015 388 0.1582 679 0.0069 389 0.2182 680 0.0017 389 0.145 680 0.0069 390 0.1989 681 0.002 390 0.1328 681 0.0072 391 0.181 682 0.002 391 0.1217 682 0.0073 392 0.1648 683 0.0021 392 0.1113 683 0.0074 393 0.1495 684 0.0023 393 0.1018 684 0.0074 394 0.1357 685 0.0022 394 0.0928 685 0.0074 395 0.1229 686 0.0021 395 0.0848 686 0.0073 396 0.1112 687 0.002 396 0.077 687 0.0071 397 0.1005 688 0.0022 397 0.0701 688 0.0072 398 0.0906 689 0.0024 398 0.0638 689 0.0074 399 0.0817 690 0.0025 399 0.0583 690 0.0076 400 0.0738 691 0.0026 400 0.0536 691 0.0077 401 0.0664 692 0.0026 401 0.0491 692 0.0076 402 0.0597 693 0.0026 402 0.045 693 0.0075 403 0.0535 694 0.0025 403 0.0406 694 0.0073 404 0.048 695 0.0023 404 0.037 695 0.0073 405 0.0435 696 0.0025 405 0.034 696 0.0076 406 0.0397 697 0.0027 406 0.0315 697 0.0076 407 0.0364 698 0.0027 407 0.0292 698 0.0078 408 0.0333 699 0.0025 408 0.027 699 0.0076 409 0.0301 700 0.0023 409 0.0249 700 0.0076 410 0.0273 701 0.0025 410 0.0232 701 0.0076 411 0.025 702 0.0025 411 0.0219 702 0.0076 412 0.0232 703 0.0024 412 0.0206 703 0.0077 413 0.0215 704 0.0025 413 0.0196 704 0.0078 414 0.0195 705 0.0024 414 0.0183 705 0.0076 415 0.0181 706 0.0027 415 0.0173 706 0.0076 416 0.0167 707 0.0026 416 0.0161 707 0.0076 417 0.0155 708 0.0026 417 0.0151 708 0.0077 418 0.0143 709 0.0022 418 0.0141 709 0.0074 419 0.0132 710 0.0022 419 0.0132 710 0.0074 420 0.0121 711 0.0021 420 0.0127 711 0.0075 421 0.0114 712 0.0024 421 0.0123 712 0.0081 422 0.0106 713 0.0028 422 0.0118 713 0.0083 423 0.0102 714 0.003 423 0.0113 714 0.0085 424 0.0095 715 0.0031 424 0.0106 715 0.0085 425 0.0089 716 0.0028 425 0.0101 716 0.0084 426 0.0083 717 0.0026 426 0.0097 717 0.0083 427 0.0078 718 0.0026 427 0.0096 718 0.0087 428 0.0076 719 0.0028 428 0.0094 719 0.0091 429 0.0074 720 0.0032 429 0.0091 720 0.0093 430 0.007 721 0.0031 430 0.0088 721 0.0089 431 0.0066 722 0.0029 431 0.0087 722 0.0088 432 0.0063 723 0.0027 432 0.0088 723 0.0088 433 0.0064 724 0.0028 433 0.0088 724 0.0089 434 0.0064 725 0.0029 434 0.0089 725 0.009 435 0.0064 726 0.003 435 0.0086 726 0.0092 436 0.0061 727 0.0031 436 0.0087 727 0.0092 437 0.0062 728 0.0031 437 0.0088 728 0.0089 438 0.0062 729 0.003 438 0.0088 729 0.0084 439 0.0065 730 0.003 439 0.009 730 0.0084 440 0.0063 731 0.0028 440 0.0087 731 0.0085 441 0.0063 732 0.0026 441 0.009 732 0.0087 442 0.0064 733 0.0025 442 0.009 733 0.0085 443 0.0065 734 0.0023 443 0.0089 734 0.0084 444 0.0065 735 0.0024 444 0.0085 735 0.008 445 0.0062 736 0.0023 445 0.0082 736 0.0078 446 0.0059 737 0.0029 446 0.0083 737 0.0077 447 0.0059 738 0.003 447 0.0084 738 0.0077 448 0.0062 739 0.0032 448 0.0087 739 0.0077 449 0.0063 740 0.0028 449 0.0086 740 0.0078 450 0.0061 741 0.0028 450 0.0084 741 0.008 451 0.0056 742 0.0027 451 0.0082 742 0.0079 452 0.0055 743 0.0029 452 0.0081 743 0.0076 453 0.0052 744 0.0031 453 0.0081 744 0.0076 454 0.0052 745 0.0034 454 0.0083 745 0.0078 455 0.0049 746 0.0035 455 0.0082 746 0.0079 456 0.0047 747 0.0031 456 0.0079 747 0.0077 457 0.0046 748 0.0031 457 0.0078 748 0.0076 458 0.0046 749 0.0031 458 0.008 749 0.0075 459 0.0044 750 0.0032 459 0.008 750 0.0076 460 0.0041 751 0.0034 460 0.0074 751 0.0077 461 0.0035 752 0.0034 461 0.0067 752 0.008 462 0.0034 753 0.0035 462 0.0067 753 0.0082 463 0.0034 754 0.0034 463 0.0068 754 0.0082 464 0.0037 755 0.0033 464 0.0071 755 0.0081 465 0.0039 756 0.003 465 0.007 756 0.0081 466 0.0038 757 0.0028 466 0.0072 757 0.008 467 0.0035 758 0.003 467 0.0072 758 0.0081 468 0.0034 759 0.0031 468 0.0074 759 0.0078 469 0.0034 760 0.0033 469 0.0076 760 0.008 470 0.0036 761 0.0033 470 0.0078 761 0.0081 471 0.0035 762 0.0035 471 0.0076 762 0.0083 472 0.0036 763 0.0033 472 0.0076 763 0.0082 473 0.0034 764 0.0032 473 0.0077 764 0.0084 474 0.0034 765 0.0035 474 0.0078 765 0.0086 475 0.0031 766 0.0035 475 0.0076 766 0.0085 476 0.0032 767 0.0037 476 0.0076 767 0.0085 477 0.0029 768 0.0036 477 0.0075 768 0.0087 478 0.0029 769 0.0034 478 0.0075 769 0.0088 479 0.0028 770 0.003 479 0.0075 770 0.0085 480 0.0028 771 0.0027 480 0.0076 771 0.0081 481 0.0027 772 0.0027 481 0.0077 772 0.0078 482 0.0028 773 0.003 482 0.0077 773 0.0079 483 0.003 774 0.003 483 0.0078 774 0.0081 484 0.003 775 0.0032 484 0.0078 775 0.0086 485 0.0029 776 0.0032 485 0.0077 776 0.0085 486 0.0029 777 0.0032 486 0.0077 777 0.0083 487 0.003 778 0.0032 487 0.0079 778 0.008 488 0.0028 779 0.0029 488 0.0079 779 0.0078 489 0.0023 780 0.0029 489 0.0079 780 0.0079 490 0.0019 781 0.003 490 0.0076 781 0.008 491 0.0018 782 0.0029 491 0.0077 782 0.0083 492 0.0021 783 0.0029 492 0.0077 783 0.0082 493 0.0025 784 0.0026 493 0.0079 784 0.0079 494 0.0025 785 0.0026 494 0.0079 785 0.0078 495 0.0024 786 0.0027 495 0.0079 786 0.0078 496 0.0025 787 0.0027 496 0.0081 787 0.0082 497 0.0028 788 0.0026 497 0.0084 788 0.0081 498 0.0031 789 0.0025 498 0.0087 789 0.0081 499 0.0031 790 0.0028 499 0.0086 790 0.008 500 0.003 791 0.0032 500 0.0082 791 0.0082 501 0.0029 792 0.0035 501 0.008 792 0.0086 502 0.0028 793 0.0035 502 0.0079 793 0.0085 503 0.0024 794 0.0034 503 0.0078 794 0.0088 504 0.0021 795 0.0031 504 0.0078 795 0.0084 505 0.0019 796 0.0027 505 0.0079 796 0.0086 506 0.0023 797 0.0029 506 0.0083 797 0.0086 507 0.0027 798 0.003 507 0.0085 798 0.0089 508 0.0029 799 0.0033 508 0.0083 799 0.0091 509 0.0026 800 0.0032 509 0.0081 800 0.0093 510 0.0025 510 0.0078 ... thực tế trên, tiến hành thực đề tài ? ?Nghiên cứu tạo hoạt chất mangostin phytosome đánh giá khả chống oxi hóa hoạt chất động vật thực nghiệm? ?? với mục tiêu sau: (1) Nghiên cứu tách chiết hoạt chất. .. NHIÊN HOÀNG MAI LINH NGHIÊN CỨU TẠO HOẠT CHẤT MANGOSTIN PHYTOSOME VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG OXI HÓA TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN... tách chiết hoạt chất mangostin sạch; (2) Nghiên cứu công nghệ tạo hoạt chất mangostin phytosome; (3) Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hoạt chất mangostin phytosome động vật thực nghiệm CHƢƠNG TỔNG