Đang tải... (xem toàn văn)
Việc ấp dụng các kỹ thuật chần đoán sinh học phân tử là bắt buộc trong sàng lọc bệnh hay tư vần di truyền, tuy nhiên, các nghiên cứu vế gen đột biển gây bệnh thalassemia còn chưa đầy[r]
(1)NGHIÍN CỨU ĐĂC ĐIẾM GENE ĐỘT BIẾN TRONG NHÓM BỆNH NHĐN ĐIẾU TRỊ THIĨU MẪ TAN MÂU BẦM SINH TẠI KHÓA NHI BỆNH VIỆN ĐA KHOA TRUNG ƯƠNG THÂI NGUYÍN Nguyễn Văn Sơn, Nguyên Thị Hà Giảng viên Bộ m ôn N hi - Trường b i học Y D ược Thái Nguyên Nguyễn Kiều Giang Giàng viên Bộ môn Sinh lý học - Trường Đ ại học Y Dược Thái Nguyên Mai Anh Tuấn Giảng viên môn Y xã hội học - Trường Đ ại học Y Dược Thái Nguyên TÓM TẮT Đặt vấn đề: Thiếu máu tan máu (Thalassemia) bệnh di truyền nhiễm sắc thể thường phổ biến khu vực Đơng Nam Á Tại Việt Nam chưa có chương trình sàng lọc tư vấn di truyền phòng chống bệnh thalassemia Việc ấp dụng kỹ thuật chần đoán sinh học phân tử bắt buộc sàng lọc bệnh hay tư vần di truyền, nhiên, nghiên cứu vế gen đột biển gây bệnh thalassemia chưa đầy đủ đặc biệt khu vực miền núi phía Bắc Mục tiêu nghiên cứu: Xác định ịỷ lệ kiểu gen đột biển gây bệnh beta thalassemia trong nhóm bệnh nhân thalassemia Bệnh viện Đa khoa Trung ương Thải Nguyên Đoi tượng phương pháp nghiên cứu: 34 mẫu bệnh phầm máu ngoại vi đuợc sàng lọc đột biến gen HBB, HbA1, HbA1 kỹ thuật cấc kỹ thuật dựa PCR Kết quả: Trong 68 allele khảo sát, 11 kiểu đột biến gen phát trong phổ biến allele đột biến CD41/42, CD17, CD26 (HbÉ), cốc tỷ lệ lần luựt 35,29%; 25,10% 14,71% Còn lại cổc loại đột biến khác CD71.72 (7,35%); IVS1#1 (2,94%); CD-28 (2,94%); CD-90 (1,47%); IVS2#645 (1,47%) Tổng số đột biển gen alpha đuxỵc xác định -S E A (4,41%); -a3.7 (1,47%); -a ố s (2,94%) Kết luận: Trong 68 allele nghiên cứu, 11 kiểu đột biến gen phát hiền phố biến cấc allele đột biến CD41/42, CD17, CD26 (HbE) Có đột biến gen alpha xác định -aS E A (4,41%); - a3.7 (1,47%); aaCS (2,91%). Từ khoẩ: Thiếu màu tan máu bầm sinh; đột biến gen; bệnh nhân, Thối Nguyên. SUMMARY FEATURES OF MUTANT GENE AMONG THALASSEMIA PATIENTS TREATED IN PEDIATRICS DEPARTMENT OF THAI NGUYEN NATIONAL GENERAL HOSPITAL Nguyen Van Son (Lecturer, Department o f Pediatrics - Thai Nguyen University o f Medicine and Pharmacy) Nguyen Kieu Giang (Lecturer, Department o f Physiology - Thai Nguyen University o f Medicine and Pharmacy) Mai Anh Tuan (Lecturer, Department o f Medical Sociology - Thai Nguyen University o f Medicine and Pharmacy) Nguyen Thi Ha (Lecturer; Department o f Pediatrics - Thai Nguyen University o f Medicine and Pharmacy) Introduction: Thalassemia is a group o f autosomal recessive inhented disorder, this disease is very common in Southeast Asia In Vietnam, still lack o f research in molecular basic o f thalassemia, especially in the Northern Objectives: To analysis the hematological characteristics and its association with genotype among thalassemia pediatric patients in Thai Nguyen National General Hospital Methodology: Multiplex PCR and GAP PCR method were used for detection o f common alpha and beta thalassemia Results: Among 68 alleles was investigated, 11 type o f mutation were find out The prevalence o f CD41/42, CD17, CD26 (HbE) were 35.29%; 25.10% and 14.71%, respectively, o th e r rare mutation are also detected include CD71.71 (7.35%); IVS1#1 (2.94%); -28 (2.94%); -90 (1.47%); IVS2&645 (1.47%) For alpha thalassemia, mutans on HbA1 and HbA2 gen were “ SEA (4.41%); -a3.7 (1.47%); -aCS (2.94%) Conclusion: Identifying the mutant gene that causes thalassemia is necessary to find out the genotype and allele ratio o f the mutant gene type to cater for modeling gene carrier for screening and prenatal diagnosis, contributing to minimize children bom with thalassemia to enhance population quality. K eywords: Thalassemia, mutation, patient, Thai Nguyen. ĐẶT VÁN ĐÈ tiến hành chủ yếu tập trung khu vực Thiếu máu tan máu bẩm sinh (thalassemia) miền Nam miền Trung việt Nam, thông tin bệnh gây đột biến gen có tính chất di truyền, bệnh khu vực phía Bắc cịn thiếu, đặc biệt khu Các đột biến dẫn đến tinh trạng giảm không vực miền núi phía Bắc [2,4,5,6] Mặt khác nghiên tổng hợp chuỗi giobin phân tử hemoglobin hậu cứu cấp độ phân tử bệnh thalassemia Việt biểu thiếu máu nhiều mức độ từ nhẹ đến Nam chưa đầy đủ, việc xác định đột nặng lâm sàng Bệnh gây tử vong thời biến gen có ý nghĩa rẩt quan trọng cho công tác dự kỳ bào thai tình trạng thiếu máu thừa sắt mạn phịng mắc bệnh thalassemia [5,8,9] tính, để lại biến chứng nhiều quan Thái Nguyên !à trung tâm giáo dục kinh tế trị thề Tại Việt Nam, số nghiên cứu ve thalassemia vùng Đông Bắc, nơi tập trung nhiều dân tộc thiểu (2)số sinh sống Ngồi ra, Thái Ngun cịn trung tâm y tế tỉnh khu vực miền núi phía Bắc C ác bao cáo tại bệnh viện cho thấy tỷ lệ cao bệnh nhân thalassemia đến khám, đ ề u trị đứng đầu bệnh máu sổ này có xu hướng ngày gia tăng Các nghiên cứu về nhóm bệnh nhân cần thiet nhằm phục phụ công tác khám chữa bẹnh đồng thời cung cấp bang chứng cho chiến iược xây dựng trung tâm chẩn đoán tư vấn điều trị thalassemia khu vực Một số nghiên cứu tiến hành Thái Nguyên nhiên tập trung vào đặc điềm dịch tễ, iâm sàng đ ề u trị bệnh Các nghiên cứu dựa tiêu chuẩn chẩn đoán xác định bệnh !à điện di huyết sẳc tố [3,10,11] Chưa có nghiên cứu phân tích đặc điểm đột biến gen gây bệnh, chẩn đoán thalassmia cấp độ phân tử ià bắt buộc cho sàng lọc iàm sở cho tư vấn di truyền Nghiên cứu bệnh thalassem ia tiến hành khía cạnh sinh học phân tử, kết nghiên cứu góp phần bổ sung vào khoảng kien thức hạn chế cac nghiên cứu trước đó, đồng thời cung cấp thơng tin hữu ích cho việc phát triển kỹ thuật sancj lọc tư vấn di truyền phù hợp cho khu vực Đông Bac thời gian tới Chính vậy, chủng tiến hành nghiên nhằm mục tiêu: Xác định tỷ lệ kiểu gen đột biến gây bệnh beta thalassemia nhóm bệnh nhân thalassemia Bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên. ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 1 Đ ia điểm , th i gian ngh iên u : Nghiên cứu được tiền hành Bệnh viện Đ a khoa Trung ương Thái Nguyên thời gian từ tháng 1/2015 đến tháng 12/2015. 2~Đ ối tư ợ ng nghiên u 34 mẫu máu ngoại vi bệnh nhân chẩn điều trị bệnh thalassemia Bệnh viện Đ K T Ư Thái Nguyên tư tháng 1/2015 - tháng /2015. 3 P hư ng pháp nghiên u : Nghiên cứu mô tả loạt ca bệnh. 3.1 Chi tiêu nghiên u Các tiêu ve xét nghiệm huyết đồ điện di huyết sắc ìố: Hb, HCT, MOV, M C H, R D W , HbA, HbA2, HbF Hb bất thường khác. Các chĩ tiêu gen đột biến: Kiều gen đột biến, tỷ lệ gen đột biến. 3.2 Quy trình nghiên c ứ u Trong thời gian từ tháng 1/2015 đến tháng 5/2015, có tổng số 34 mẫu máu ngoại vị bệnh nhân thalassemia đưa vào nghiên cứu Tiểu chuẩn loại trừ: bệnh nhân truyền máu vòng tuần đến thời điểm nghiên cứu C ác kỹ thuật phát độí biến gen HBB, H bA 1, HbA2 tién hành Trung tâm nghiên cứu phát triển kỹ thuật y học Đại học Khon Kaen, Thái Lan . Xét nghiệm tổng phân tích máu để xem xét số huyết đồ đưực thực m áy phân tích tự động 18 thông số C eitaxa hãng Nihon Koden - Japan Trung tâm Huyết học - Truyền máu Thái Nguyên; X ét nghiệm điện di huyết sắc tố máy máy điện di mao quản Capỉlarys (Sebia - France) Trung tâm Huyết học - Truyền máu Thái Nguyên Kết quả bác sỹ chuyên ngành có kinh nghiệm đọc ghi kết vào mẫu bệnh án nghiên cứu. * Xác định đột biến gen: - Quy trinh tách D N A từ m áu toàn phần: D N A được tách từ nhân tế bào bạch cầu ly tâm phá màng sử dụng Pronase E (enzym ) cắt liên kếí protein giải phóng chuỗi D NA M NaCI sử dụng để làm protein bị biến tính lắng xuống D N A tinh chất hoà tan 150 Ịjl nươc cất để dùng cho các phản ứng PCR. - Quy trinh xác định đột biến gen beta thalassemia bằng kỹ thuật Multiplex P C R Dựa việc sử dụng mồi đặc hiệu để xốc định đột biến điểm gen beta thalassemia, multiplex P C R thiết kế để phát đồng thời loại đột biến gen phổ biến người Đông Nam Á. Mồi chung S1 (Sơ đồ 1) Với đột biến đơn alleíe mẫu chưa phát đột biến tiếp tục sàng iọc giai đoạn vớỉ loại gập khác Cuối cung mẫu dương tính với loại đọt biến chạy monoplex A S P C R để kiểm tra tinh trạng đồng hợp tử Nếu không phát đột biến các mẫu íàm giải trĩnh tự gen đế chẩn đoán xác định Trong nghiên cứu này, hầu hết đột biến xác đính bước 1. Sơ đồ 1: Các ioại mồi ỉhiết kế tương ứng đột biến thường gặp ỉrên gen beta thalassemia Các mồi đặc hiệu đưa vào dung dịch đệm trộn lẫn phản ứng P C R thiết kế íả 50ụ! (maxter mix tube) bao gồm 2ịjI sản phẩm D N A cùa người bệnh Taq D N A polymerase xúc tác cho phan ứng đưa vào sau maxter mix thiết kế M áy P C R ổược sử dụng để khuếch đại đoạn D N A đích lên hàng triệu lần nhờ các chu trình nhiệt tương ứng với nhiệt độ kích hoạt của ỉoại mồi sử dụng Sản phẩm P C R kiểm chứng điện di Agarose gel 1,5% , đoạn DNA phát máy chụp gen sau ngâm trung dung dịch Ethydium Bromide phút. Các đột biến xoá đoạn gen H B A 1, HBA2 xác định phương pháp G A P P C R gồm kiểu a (kiểu S EA T H A I) a + (kiểu -0 a4.2) Với đột biến khơng xố đoạn thư Constant spring (3)(a a /a a C S ) hay Pakse’ (a a /a a P S ), phương pháp sử dụng Multiplex PCR. Nghiên cứu thồng qua Hội đồng khoa học Trường Đ ại học Ỳ Dược Thảỉ Nguyên Ban giám đốc Bệnh viện Đ a khoa Trung ương Thái Nguyên. Phương pháp xử íý số liệu: Tần số tỷ lệ phần trám (% ) sử dụng cho thống kê mô tả với biến định lừợng, giá trị trung bình và độ íệch chuẩn dùng cho thống kê mô tả với biến định tính. Các số liệu xử lý phần mềm thống kê s tata phiên 12.0. K E T Q U Ả N G H IÊ N c ứ u V À B À N LUẬ N Bảng 1: Đ ặ c điểm huyết học đối tượng nghiên cứu * Số liệu chì số huyết học trình bày dạng số trung bình ± (độ lệch chuẩn) Kiểu gen 34 bẹnh nhân phân loại bảng Tổng sổ có kiểu gen tìm thấy có kiều gen thuộc the beta thalassemia, kiểu gen alpha thalassemia Chiếm tỷ lệ cao !à kiều gen dị hợp tử kép po/po dị hợp tử [30/pE, tiếp đến ỉa nhóm đong hợp tử (30/(30, thứ tự 29,41% , 29,41% , 23,53% C ác kiểu gen lại chiếm tỷ lệ thắp, iần lượt dị hợp tử Ị30/P+ thalassemia (5,88%); Dị hợp tử P+/Ị3+ (2,94% ) a ỏ /a + (8,82% ) C ác sơ hống cầu có thay đổi theo kiểu gen đột biến. Tình trạng thiếu máu nặng thể kiểu gen cồ góp mặt kiểu đột biến gây tình trạng po đong hợp tử Ị30, dị hợp tử Ị30, dị hợp íừ kểt hợp Ị30/Ị3+ dị hợp tử pO/pÈ. Bang 3: T ỷ íệ loại gen đột biến số allele được khảo sát Loại pen ổộí biến Số lượng Tỷ lệ % (30 Thalassemia Cd 41/42 (-TTCT) 24 35,29 Cd 17 (A->T) 17 25,10 Cd 71/72 (+A) 7,35 tvs 1#1 (G->T) 2,94 Chỉ số huyết học Giới Tổng Nam Nữ Rbc (x 1012/L) 2,70 ±1,08 2,48 ±0,87 2,6 ± 0,97 Hb (g/dl) 61,69 ±19,87 54,73 ±13,54 59,4 ±19,3 MCV (fl) 74,38 ±6,67 78,11 ±9,21 74,3 ±14,1 MCH (pg) 21,74 ±2,97 22,90 ±3,49 22,2 ± 4,63 RDW (%) 24,31 ±7,53 21,67 ±6,54 21,4 ±7,4 C ác số ve huyet đo xem xét bao gom sô lượng hồng cầu (Rbc), huyết sằc tố ÍHb), thề tích trung bỉnh hồng cầu (M C V ), huyết sắc tồ trúng bình hồng cầu (M C H ) phân phối rộng hồng cầu (R D W ) Giá trị trung binh số thể ờ Bảng So với giá trị tham chiếu Hb người binh thường (Hb>110g/dl), chĩ số máu cùa bệnh nhân huyết tán cho thấy tình trạng thiểu máu nặng với đặc điểm hồng cầu nhỏ nhược sắc (MCV<80fí; MCH<27pg). p+ Thalassemia -28 (A->G) 2,94 -90 (C->T) 1,47 IVS 2#645 (O T ) 1,47 Cd 26 (G->A) HbE 10 14,71 a0 thalassemia SEA 4,41 a+ thaỉassemia - a3,7 1,47 - aCS 2,94 Tông 68 100 Bảng cho thấy 11 kieu đột bien gen tìm ra, trong đỏ kiều gây bệnh p thalassemia, gây bệnh a thalassemia Trong allele khảo sát, allele ổộí biến C d.41/42 chiếm tỷ lệ cao (35.29% ) tiếp đến ià Cd.17 (25.1% ), loại đột biến khác chiếm tỷ lệ hơn Có 10 bệnh nhân (14.71% ) phát mang gen đột biến gây H bE trường hợp kết hợp với gen po tạo nên bệnh Ị3 thalassemia HbE V các trường hợp po/pE the tỉnh trạng thiếu máu nặng huyết đồ V i alpha thalassemia, có loại đột biến gen phát kiểu xố đoạn phổ biến khù vực Đong Nam Á đột biến mất gen HBA1 HbA2 ( SEA ) đột biến -3.7 một kieu khơng xố đoạn gây alpha Constant Spring Kiểu allele Cd.95 (+A) phát nghiên cứu trước xem loại đột biến Báng 2: Kiều gen đột biến gảy bênh thalassemia 34 đối tượng nghiên cửu Kiểu gen Tần số (%) Chĩ số huyết học Rbc Hb MCV MCH RDW ĐHT Ị30/Ị30 (341,42/ (341,42 (317/317 (23,53) 2,0 (0,56) 47,6 (9,59) 78,4 (5,31) 24,1 (2,24) 17,5 (3,35) DHT [30/(30 P41.42/Ị317 [371,72/1317 341,42/plVS l#1 10 (29,41) 2,6 (0,88) 62,4 (21,94) 79,1 (6,16) 24,1 <1.61) 19,2 ±3,20 DHT P+/Ị3+ P-28/Ị3IVS íí#645 (2,94) 2,3 50,0 77,1 21,6 21,1 DHT 00/3+ p41,42/(3-90 341,42/(3-28 (5,88) 2,2 (0,75) 50,1 (10,04) 81,9 (6.51) 23,6 (3,54) 27,9 (11,67) p 0-H b E Ị341.42 /ị3E (317/pE Ị371,72/(3E 10 (29,41) 2,8 (1,23) 60,6 (16,55) 68,7 (6,79) 19,3 (3,27) 29,5 (6,77) DHT a0/aỶ ~aSEA/-a3,7 aSEA/aaCS (8,82) 3,8 (0,38) 77,3 (7.75) 74,3 (3,45) 20,2 (0,36) 27,7 (4,35) (4)của người Việt Nam chưa phát nghiên cứu nằy [7]. Việc áp xác định ỉoại đột biến tần số gen độí biến nghiên cứu gián tiếp cho thấy tỷ lệ các loại gen đột biến gây tình trạng po iưu hành quần thể cao T ỷ iệ cao kiểu gen gây tình trạng thiếu máu nặng cho thấy tính cấp thiết việc sàng lọc người mang gen cộng đồng triển khai chương trĩnh tư vấn di ìruyền Thái Nguyên Mặc dù đa số người bị H bE gần không co biểu thiếu máu kề dạng đồng hợp tư nhưng dạng kếi hợp với p thalassemia lại biểu hiện tĩnh trạng thiếu máu vừ a đến nặng Trong nghiên cứu chúng tôỉ, kiểu gen đ ộỉ biến phát hiện phù hợp với biến đổi số huyết học trên bệnh nhân Tuy vậy, tinh ỉrạng thiếu máu đường như nặng nề so sánh VỚ! nghiên cứu khác trên kiểu gen bệnh Đ ặ c biệt có trường gặp trong nghiên cứu với kiểu hợp dị kết hợp ễ+, (3- 28/piVS ll#645, theo chế bệnh sinh ỳ văn thể thường có biểu thiếu m áu nhẹ trung bình [7], Tuy nhiên nghiên cứu này, bệnh nhân biểu hĩẹn thiếu máu nặng đến viện, tinh trang thiếu máu nặng dị hợp tử (30/Ị30 (Bảng 3) Điều được lý giải bệnh viện Đ K T Ư Thái Nguyên hệ thống y tế nói chung chưa có chướng trình quản lý bệnh nhân huyết tán Phần lớn người bệnh chi đưa đến viện tinh trạng thiếu máu trở nên nặng nề Sự tài bệnh viện, nguồn máu khan chưa có chế định danh HLA trước truyền, nguồn thuốc thải sắt xét nghiệm lệ thuộc vào bảo hiểm cộng ìhêm khoâng cách địa lý và đ ề u kiện kinh tế ià yểu tố cản trờ việc điều trị cho người bệnh Đôi bệnh nhân truyền máu không thải sắt ngược íại. Đ ây ỉà nghiên cứu Thái Nguyên áp dụng kỹ thuật sinh học phân tử xác định kiểu gen đột biến Do thalassemia có tỉnh đặc thù theo quần thể dân số vùng miền nên kết quà nghiên cứu sơ gợi ý cho chiến lược sàng lọc và tư vấn di truyền khu vực sau C ác đột biến có tỷ lệ cao cần ưu tiên sàng lọc trước, thứ tự lần lượỉ là, nhóm gổm đột biến C D 41/42; CD 17, C D 71/72 nhóm gồm đột biến C D -28, ỈVS l#1, IVS1#5, IVS!i#645 nhóm ià đột biến gặp Nghiên cứu cho thấy số bệnh nhân thaíassemia - HbE chiếm gần 1/3 số mâu nghiên cứu và có biểu tỉnh trạng thiếu m áu lâm sàng tương đương thể nặng H bE phải sàng lọc theo sau p thalassemia. Đ ây nghiên cứu Thái Nguyên phát hiện gen đột biến nhóm bệnh nhân thalassemia, điều cho thấy khả thi việc ảp dụng kỹ thuật chẩn đoán phân tử chan đoán xác định tình trạng mang gen bệnh, hồn tồn đáp ứng cho yêu cầu chẩn đoán trước sinh dịch vụ tư vấn di truyền bệnh thalassemia khu vực. KẾT LUẬN - Trong ailele nghiên cứu, 11 kiểu đột biến trên gen phát phổ biến ià aílele độỉ biến C D /4 2, C D 17, C D (HbE), tỷ lệ lần iượt 35,29% ; ,1 % 14,71% Còn iại ỉà loại đột biến khác C D71.71 (7,35% ); !VS1#1 (2,94% ); -28 (2,94% ); -9 (1,47% ); ỈV S # (1,47% ) Tổng số đột biến írên gen alpha xác định aSE A (4,41% ); -a (1,47% ); a a C S (2,91% ). KHUYẾN NGHỊ - Cần tiếp tục nghiên cứu với cỡ mẫu lớn hơn, mở rộng nghiên cứu nhóm thalassemia người lớn để co thêm thơng tin đột biến gen a thalassemia. TÀ! LIỆU THAM KHẢO 1 Vichinsky, E.P., Changing patterns of thalassemia woridwide Ann N Y Acad Sci, 2005.1054: p 18-24. 2 Nguyen, H.V., et a!., Thalassemia and hemoglobinopathies in Thua Thien Hue Province,' Centrai Vietnam Hemoglobin, 2013 37(4): p 333-42. 3 Ngọc, H.V., Nghiên cứu thực trạng bệnh beta Thalasemia số yếu tố liên quan trẻ em dân tộc Tày Dao huyện Định Hóa tỉnh Thái Nguyên Luận văn thạc sỹ, Y học dự phòng 2007. 4 O'Riordan, s., et aí., Large scale screening for haemoglobin disorders in southern Vietnam: implications for avoidance and management Br J Haematol, 2010 150(3): p 359-64. 5 Hoan, N.K.H., Nghiên cứu tầm soát chẩn đoán trước sính bênh alpha beta thalassemia 2013. 6 Triết, L.P.M., Nghiên cứu tần suất gene kiểu đột biến gene bệnh thalassemia hai huyện Nam Đông và A Lưới tỉnh Thừa Thiên Huế Tạp chí Y học Việt Nam, 2014 Tập 423 (Số đặc biệt): p 225 - 231. 7 Filon, D., et a!., Molecular analysis of beta- ihalassemia in Vietnam Hemoglobin, 2000 24(2): p 99- 104. 8 LyThj Thanh Hà, N.D.N, Áp dụng kỹ thuật arms-pcr trong chẩn đoán trước sau sinh bệnh beta thalassemia íại Bệnh viện Nhi Trung ương 2009. 9 Lý Thị Thanh Hà, N.D.N., ứng dụng kỹ thuậí sinh học phân tử chẩn đoán trước sau sinh bệnh alpha thalassemia Bệnh viện Nhi Trung ương Tạp chí Nhi khoa, 2010 3(3&4): p 337-342. 10 Vân, V.B., Nghiên cứu thực trạng mang gen bệnh b Thalassemia dân tộc Nùng Mông xã Tân Long Đồng Hỷ Thái Nguyên, Đại học Y Dược Thái Nguyên, Luận văn thạc sỹ y học, 2001. 11 Nguyễn Văn Sơn, Đ.V.T, Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng xét nghiệm bệnh huyết sắc tố trẻ em điều trị Bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên Tạp chí Y học thực hành, 2005 531: p 26-33.