Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide bài giảng môn hóa phân tích ppt dành cho sinh viên chuyên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn hóa phân tích bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI (Electrophoresis) Bài giảng pptx môn ngành Y dược hay có “tài liệu ngành dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916 Phương Pháp Điện Di Mục tiêu Hiểu nguyên tắc hoạt động điện di mao quản Dàn Lịch sử Định nghĩa Phân loại Điện di mao quản Lịch sử 1791 Faraday Laws of Electrolysis 1877 Helmholtz Charged Solvent Layer Closed to Surface of a Wall 1897 Nernst Properties of Small Ions 1897 Kohlrausch Kohlrausch Function describing the Order of Migration of Ions and their Concentration 1923 Kendall, Crittenden Rare Earth Metal Separation by "Ion Migraion Method" 1930 Tiselius Thesis: Moving Boundary Method for Electrophoresis of Proteins (Nobel Price 1948) 1939 Svenson Development of Zone and Displacement Electrophoresis 1950 Haglund, Tiselius Electrophoresis Tube filled with Glass Beads and Glass Powder 1955 Smithies Gel Electrophoresis 1958 Hjertén Electrophoresis in Free Solution 1967 Martin, Everaerts Displacement Electrophoresis in Glass Tube with Hydroxyethylcellulose 1967 Hjertén Elimination of Electroosmosis by Coating of Glass Tubes 1969 Giddings Non-Diffusional Model of Concentration Distribution in Free Zone Electrophoresis 1969 Virtanen Glass Capillaries 0.2 - 0.5 mm I.D 1970 Everaerts, Capillary Isotachophoresis 1970 Arlinger, Routs UV-Detection 1972 Verheggen Conductivity Detection 1979 Mikkers Use of High Voltage and TEFLON Capillaries 1981 Jorgenson Use of 75 µm I.D Open Tubular Glass Capillaries: "High Performance Capillary Electrophoresis – HPCE" 1984 Terabe Combination of electrophoretic and chromatographic Separation: "Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography – MECC" 1991 Jandik, Jones Use of Surface Active Electrolyte Additives for Reversal of Electroosmotic Flow 1991 Knox "Capillary Electrochromatography – CEC" Anion hữu vô Standard thiosulfate 16 phosphite bromide 17 chlorite chloride 18 galacturate sulfate 19 carnonate nitrite 20 acetate 21 ethanesulfonate 13 10 nitrate 10 14 16 17 20 18 15 11 22 propionate azide tungstate 23 propanesulfonate 24 butyrate 22 24 26 21 19 12 1.5min molybdate 23 28 25 30 27 89 seconds 29 3.1min 10.fluorophosphate 25 butyrsulfonate 11 chlorate 12 citrate 26 valerate 27 benzoate 13 fluoride 14 formate 28 glutamate 29 pentanesulfonate 15 phospahate 30 D-gluconate Định nghĩa Quá trình tách tiểu phân ion hóa hịa tan hay phân tán dung dịch điện giải tác dụng điện trường Độ dịch chuyển điện di (linh độ điện di: electrophoretic mobility, μEP) phụ thuộc: Bản chất tiểu phân: hình dạng, kích thước, điện tích Dung dịch điện giải: chất, nồng độ, pH, độ nhớt,… Định nghĩa Chiều chuyển dịch ion phụ thuộc vào điện tích µ B ep (A) A ep(C) + + D µ ep (B) + C + ep(D) Phân loại Điện di dung dịch tự (Moving Boundary Electrophoresis) Không dùng chất mang μEP phụ thuộc vào điện trường E, chất tiểu phân Xác định chất có PTL lớn khuếch tán Kiểm tra độ tinh khiết protein - Moving Boundary Electrophoresis + Phân loại Điện di vệt (điện di vùng: Zone Electrophoresis) Sử dụng chất mang: giấy, cellulose acetat, gel agar, gel polyacrylamid μEP phụ thuộc vào E, chất tiểu phân, dòng bay (nhiệt Joule), dung dịch điện giải Tách chất có nhỏ PLT kích thước nhỏ, lượng mẫu Điện di gel Điện di mao quản (Capillary Electrophoresis) Capillary o.d 200-400µm i.d 5-100µm Detector (2µm) Fused Silica, Teflon coated (RP, Ion exchange) UV, Fluorescence (direct, indirect); or filled (RP, ) electrochemical conductometric MS Pt Electrodes Separation Electrolyte Salt solution (borate, phosphate); pH 1-12 organic solvent Injection (0-100%) hydrostatic, vacuum, electromigrative 0-±30 kV 5-150 µA Data Processing High Voltage Power Supply Điện di mao quản 363µm a) 50µm 12µm b) Fused Silica Capillary I [µA] 300 Liquid cooling 10m/s air 250 cooling w/o cooling 200 Hydrodynamic flow profile and chromatographic 150 peak form a) pressure driven b) electroosmosis 100 50 0 10 Ohm's Law: U=R.I 20 30 U [kV] Group 3: Statin derivatives • Optimized electrophoretic conditions mAU ATOR LOV 10 SIM 240 260 280 300 320 340 nm Electrophoretic conditions: 15% methanol in 15 mM borate buffer at pH 8.0 containing 50 mM SDC; fused-silica capillary (57 cm x 50 µm i.d., 48.5 cm); injection: 5s at 50 mbar; 30 kV; 30oC; detection wavelength: 237 nm Application – Natural products Analyte Additives Ref Flavonoid (rutin, isoquercitrin, quercitrin, 50 mM SDS P.G Pietta, et al; J Chromatogr (549) kaempferol, quercetin, etc) Opium alkaloids (6 mixture) 367 12 mM SDS + 25 I Bjornsdottir, et al; J Pharm Biomed mM Tween 20 Anal (13) 687 Amphetamines and related 25 mM CTAB + 11% V.C Trenerry, et al; J Chromatogr A substances DMSO + 1% ethanol (708) 169 Cocaine and related substances 50 mM CTAB + V.C Trenerry, et al; 7.5% ACN Electrophoresis (15) 103 40 mM SDS M Korman, et al; J Chromatogr (645) Codeine and its by products 366 Application – • Optical purity testing of drugs Use area percentage method for purity testing of drugs as in HPLC • Normalize peak areas with migration times • Identify impurities above apparent levels of 0.1% Application – Dexchlorpheniramine maleate 14 12 10 14,469 18,393 mAU Pseudoephedrine HCl (IS) Levochlorpheniramine maleate Dexchlorpheniramine maleate 17,994 2.5 7.5 10 12.5 15 17.5 Optical purity testing of dexchlorpheniramine maleate by CE with β-CD Conditions: Capillary: 76.5 cm (68 cm effective length) x 50 µm I.D.; Background electrolyte: 0.05 M Tris buffer pH 3.5 + mM β-CD; Detection: 214 nm; Applied voltage: 20 kV; Injection: 50 mbar x 10 sec.; Temperature: 25oC Chemical structure of drug substances CH3 O NH2 N1 O O F NCH3 OH * * CH3OOC COOCH 2CH3 Cl 10 N N N * 1O CH3 CH3 Nefopam Ofloxacin Amlodipine Cl N Cl 1O N * O * * O N O N * O N 2'' 4' CH3 4'' 2' Cl O Cl Cl Cl N Brompheniramine Miconazole Ketoconazole CH3 CH3 N * OH * O N 10 CH3 CH3 N CH3 S Propranolol Promethazine Effect of the CD types and their concentrations on Rs Rs Electrophoretic conditions: 50 – 100 mM tris-phosphate buffer pH 2.5 – 3.0, 20% methanol (for propranolol) nefopam); capillary (63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm); λ = λmax of each compound; 25oC; 20 kV; injection: 5s at 50 mbar or 25% acetonitrile (for Electropherograms for the chiral separation of enantiomers Miconazole mAU mAU mAU 6 mM β-CD mM HP- mM HB- β-CD β-CD 3 2 1 0 10 15 10 15 10 15 Optimized electrophoretic conditions: 50 mM tris-phosphate buffer pH 2.5; capillary (63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm); λ = 228 nm, 25oC; 20 kV; injection: 5s at 50 mbar Electropherograms for the chiral separation of enantiomers Brompheniramine 10 mM β- CD 25 mM HP- 15 mM HB- β-CD β-CD Optimized electrophoretic conditions: 50 mM tris-phosphate buffer pH 3.5; capillary (63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm); λ = 230 nm, 25oC; 20 kV; injection: 5s at 50 mbar Electropherograms for the chiral separation of enantiomers Nefopam 30 mM 30 mM HP-β- 20 mM β-CD CD HB-β-CD Optimized electrophoretic 2.5, 25% MeCN; conditions: 50 mM tris-phosphate buffer pH (63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm); capillary 25oC; 20 kV; injection: 5s λ = 275 nm, at 50 mbar Electropherograms for the chiral separation of enantiomers Amlodipine Ofloxacin mAU mAU 8 10 mM HPβ- CD 10 mAU 30 mAU mM HP-β- mM HB- 30 mM HB-β- CD β- CD CD 4 4 2 2 0 10 15 20 25 10 15 20 25 10 Optimized elect rophoretic conditions: 15 20 25 10 15 20 Optimized electrophoretic conditions: 50 mM tris-phosphate buffer pH 50 mM tris-phosphate buffer pH 2.5; capillary (63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm); λ = 360 2.5; capillary (63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm); λ = 294 nm, 25oC; 20 kV; injection: 5s at 50 mbar nm, 25oC; 20 kV; injection: 5s at 50 mbar Electropherograms for the chiral separation of enantiomers Ketoconazole Propranolol mAU mAU 30 Promethazine mAU mAU 10 mM HP-β- CD 6 15 mM 20 mM HB-β-CD HB-β-CD 30 mM HB-β-CD 4 4 2 0 2 10 20 30 40 10 20 30 40 2.5, 20% tris-phosphate MeOH; 10 15 20 25 35 15 Optimized electrophoretic conditions: Optimized ele ctrophoretic conditions: mM min 50 0 buffer capillary pH (63.5 Tris-phosphate; 63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm; 25oC; 20 kV; injection: cm x 50 µm i.d., 54 cm); λ = 288 nm, 25oC; 20 kV; 5s at 50 mbar KET: 50 mM BGE pH injection: 5s at 50 mbar 3.0; λ BGE pH 2.5, 30% MeOH; = 227 nm PRM: 100 λ mM = 254 Application Amlodipine racemic spiked R-amlodipine mAU mAU mAU 30 10 20 S-amlodipine S-amlodipine tablet S-amlodipine drug substance 10 amlodipine R-amlodipine S- S-amlodipine R-amlodipine -5 10 15 20 25 15 25 10 15 Electrophoretic conditions: 50 mM tris-phosphate buffer pH 2.5, 10 mM HP-β-CD; capillary (63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm); λ = 360 nm, 25oC; 20 kV; injection: 5s at 50 mbar Application Ofloxacin racemic Levofloxacin tablet spiked levofloxacin mAU mAU 16 16 Ofloxacin Levofloxacin 12 Levofloxacin 12 0 10 15 20 10 15 20 Electrophoretic conditions: 50 mM tris-phosphate buffer pH 2.5, 30 mM HB-β-CD; capillary (63.5 cm x 50 µm i.d., 54 cm); λ = 294 nm, 25oC; 20 kV; injection: 5s at 50 mbar Conclusion CZE and MEKC can be used for drug analysis as a complementary or alternative method to HPLC Conclusion Advantage • One-run cationic, separation neutral of and every kind anionic is of drug, including possible within a relatively short time • MEKC is especially powerful for the separation of complex mixtures because of its high resolution • Direct enantiomer separation also can be successful using chiral selectors Disadvantage • For much wider use it is still desirable for the precision in quantitative analysis to be improved to be comparable to those in HPLC ... tách tiểu phân ion hóa hòa tan hay phân tán dung dịch điện giải tác dụng điện trường Độ dịch chuyển điện di (linh độ điện di: electrophoretic mobility, μEP) phụ thuộc: Bản chất tiểu phân: hình.. .Phương Pháp Điện Di Mục tiêu Hiểu nguyên tắc hoạt động điện di mao quản Dàn Lịch sử Định nghĩa Phân loại Điện di mao quản Lịch sử 1791 Faraday Laws of... Application Amlodipine racemic spiked R-amlodipine mAU mAU mAU 30 10 20 S-amlodipine S-amlodipine tablet S-amlodipine drug substance 10 amlodipine R-amlodipine S- S-amlodipine R-amlodipine -5 10