Mục tiêu của đề tài là xác định thành phần hóa học chủ yếu của ba loài T. baviensis, T. anguina và T. kirilowii ở Việt Nam; đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư và hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được để tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học.
Trang 1HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
-
Hoàng Thị Yến
NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LOÀI Trichosanthes baviensis Gagnep (QUA LÂU BA VÌ), Trichosanthes anguina L (DƯA NÚI) VÀ Trichosanthes kirilowii Maxim (QUA LÂU NHÂN)
Chuyên ngành: Hóa Hữu cơ
Mã số : 9.44.01.14
TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC
Hà Nội - 2019
Trang 2Công trình được hoàn thành tại: Học Viện Khoa học và Công nghệ - Viện
Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
Người hướng dẫn khoa học 1: GS VS Châu Văn Minh
Người hướng dẫn khoa học 2: TS Nguyễn Xuân Nhiệm
Phản biện 1:
Phản biện 2:
Phản biện 3:
Luận án sẽ được bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp Học viện,
họp tại Học Viện Khoa học và Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học và
Công nghệ Việt Nam vào hồi giờ , ngày tháng năm 2019
Có thể tìm hiểu luận án tại:
- Thư viện Học Viện Khoa học và Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học và
Công nghệ Việt Nam
- Thư viện Quốc gia Việt Nam
DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ
1 Nguyen Xuan Nhiem, Hoang Thi Yen, Bui Thi Thuy Luyen, Bui Huu Tai, Pham Van Hoan, Nguyen Phuong Thao, Hoang Le Tuan Anh, Ninh Khac Ban, Phan Van Kiem,Chau Van Minh, Jang Hoon Kim, Jeon Mi Ni and Young Ho Kim Chemical components from the leaves of Trichosanthes baviensis and their tyrosinase inhibitory activity Bulletin of the Korean chemical society, 2015, 36 (2), 703-706
2 Nguyen Xuan Nhiem, Hoang Thi Yen,Phan Van Kiem, Chau Van Minh, Bui Huu Tai, Hoang Le Tuan Anh, SeonJu Park, Nanyoung Kim, and Seung Hyun Kim 1H and 13C NMR assignments of tricanguinas A -B, coumarin monoterpenes from Trichosanthes anguina L Magnetic Resonance in Chemistry,
2014, 53(2), 178-180
3 Chau Van Minh, Nguyen Xuan Nhiem, Hoang Thi Yen,Phan Van Kiem, Bui Huu Tai, Hoang Le Tuan Anh, Truong Thi Thu Hien, SeonJu Park, Nanyoung Kim,and Seung Hyun Kim Chemical constituents of Trichosanthes kirilowii and their cytotoxic activities Archives of Pharmacal Research, 2015, 38(8),
1443-1448
4 Hoang Thi Yen,Hoang Le Tuan Anh, Duong Thi Hai Yen, Pham Hai Yen, Duong Thi Dung, Do Thi Ha, Phan Van Kiem, Chau Van Minh, Nguyen Xuan Nhiem Phenolic glycosides from Trichosanthes baviensis Journal of Medicinal Materials, 2014, 19(5), 283-287
5 Hoang Thi Yen,Hoang Le Tuan Anh, Dan Thi Thuy Hang, Pham Hai Yen, Pham Thi Trang Tho, Do Thi Ha, Phan Van Kiem, Chau Van Minh, Nguyen Xuan Nhiem Megastigmane glycosides from Trichosanthes anguina L Journal of Medicinal Materials,
2014, 19(5), 299-303
Trang 3với IC50 tương ứng là 4,1 và 6,5 µM, mạnh tương đương
mitoxantrone (IC50 tương ứng là 3,1 và 8,4 µM) Trên dòng tế bào
A-549, hợp chất TK5 thể hiện hoạt tính ức chế sự phát triển rất mạnh
với IC50 là 2,7 µM, mạnh hơn cả mitoxantrone (IC50 là 7,2 µM) Hợp
chất TK1, TK6 và TK8 thể hiện hoạt tính ức chế yếu hơn với IC50
trong khoảng 14,7-49,4 µM Các hợp chất TK2 và TK3 thể hiện
hoạt tính yếu với dòng tế bào A-549 và HT-29 Hợp chất TK4 không
thể hiện hoạt tính ở nồng độ thử nghiệm
KIẾN NGHỊ
Từ các kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh
học của các loài T baviensis, T anguina và T kirilowii nhận thấy:
Các hợp chất triterpenoid TB6 phân lập từ T baviensis thể hiện
hoạt tính ức chế mạnh với enzym tyrosinase Do vậy, cần có những
nghiên cứu sâu về tác dụng làm trắng da của hợp chất này
Hợp chất TK7 phân lập từ T kirilowii thể hiện hoạt tính ức chế
sự phát triển 2 dòng tế bào HT-29 và OVCAR Vì vậy, cần có thêm
các nghiên cứu sâu hơn ở cấp độ in vivo
NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN
1 Lần đầu tiên nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh
học của ba loài T baviensis, T anguina, T kirilowii ở Việt Nam
2 Đã phân lập và xác định cấu trúc hóa học của 4 hợp chất mới và 26
hợp chất đã biết từ ba loài T baviensis, T anguina, T kirilowii Các
hợp chất mới được đặt tên là: 9,26-epoxymultiflorenol (TB1),
tricanguina A (TA1), tricanguina B (TA2), trichobenzolignan (TK1)
3 Lần đầu tiên các hợp chất phân lập được từ loài T baviensis được
đánh giá hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase
MỞ ĐẦU Việt Nam có vị trí địa lý nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, địa hình nhiều đồi núi chia cắt nên điều kiện khí hậu cũng rất đa dạng, có nhiều tiểu vùng khí hậu khá đặc trưng Những yếu tố trên đã tạo nên những điều kiện sinh thái, những thảm thực vật nhiệt đới rậm, ẩm, thường xanh, hoặc thưa, nửa rụng lá và cả các thảm thực vật mang tính cận nhiệt đới ở các khu vực núi cao
Theo ước tính của các nhà thực vật Việt Nam, nước ta có khoảng 12.000 loài, trong đó có khoảng 1/3 trên tổng số loài được nhân dân dùng làm thuốc Rất nhiều loài trong số đó từ xa xưa đến nay đã được sử dụng trong y học cổ truyền và các mục đích khác phục vụ đời sống của con người như mật nhân Eurycoma longifolia, bạc hà Mentha arvensis, khổ qua Momordica charantia, ngũ da bì hương Acanthopanax trifoliatus, đương quy Angelica sinensis, sâm Ngọc Linh Panax vietnamensis, thìa canh Gymnema sylvestre,… đã trở nên rất quen thuộc
Ngoài sự phong phú về thành phần chủng loại, nguồn dược liệu Việt Nam còn có giá trị to lớn trong việc điều trị các căn bệnh khác nhau trong dân gian Các cây thuốc được sử dụng dưới hình thức độc vị hay phối hợp với nhau tạo nên các bài thuốc cổ phương, đang tồn tại phát triển đến ngày nay Ngoài ra, hàng trăm cây thuốc
đã được khoa học y - dược hiện đại chứng minh về giá trị chữa bệnh của chúng
Trong vài thập kỉ qua, y học cổ truyền đã cung cấp cho thuốc Tây với hơn 40% tổng các loại thuốc Do đó, các nghiên cứu đã tập trung vào việc đánh giá khoa học của các loại thuốc truyền thống có nguồn gốc thực vật Trong số các loài thực vật kể trên, nhiều loài thuộc chi Qua lâu (Trichosanthes) được trồng rộng rãi và nhiều loài mọc tự nhiên ở nước ta và các nước trong khu vực Trong dân gian, một số loài thuộc chi Qua lâu được sử dụng làm rau ăn, một số loài được sử dụng làm thuốc chữa bệnh như: làm thuốc giải nhiệt, lợi tiểu, lợi sữa, giảm đường huyết hoặc chữa bệnh ngoài da, chữa bệnh đau đầu Nhằm mục đích nghiên cứu làm rõ thành phần hóa học và hoạt
Trang 4tính sinh học của một số loài thuộc chi Qua lâu (Trichosanthes), tôi
đã lựa chọn tên luận án: ‘‘Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt
tính sinh học của loài Trichosanthes baviensis Gagnep (Qua lâu
Ba Vì), Trichosanthes anguina L (Dưa núi) và Trichosanthes
kirilowii Maxim (Qua lâu nhân)”
Mục tiêu của luận án:
Xác định thành phần hóa học chủ yếu của ba loài T baviensis,
T anguina và T kirilowii ở Việt Nam
Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư và hoạt tính ức chế
enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được để tìm kiếm hợp
chất có hoạt tính sinh học
Nội dung luận án bao gồm:
1 Phân lập các hợp chất từ ba loài thuộc chi Trichosanthes
bằng các phương pháp sắc ký
2 Xác định cấu trúc hoá học các hợp chất phân lập được bằng
các phương pháp hoá lý
3 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư và hoạt tính ức
chế enzym tyrosinase của các chất phân lập được
Bố cục của luận án
- Phần mở đầu: 2 trang (1 → 2)
- Tổng quan: 26 trang (3→ 28)
- Thực nghiệm và kết quả: 22 trang (30 → 51)
- Thảo luận kết quả: 65 trang (52 → 116)
- Kết luận: 2 trang (118, 119)
- Tài liệu tham khảo: 86 tài liệu
CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN Bao gồm phần tổng quan về các nghiên cứu trong nước và quốc
tế về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các loài thuộc chi
Trichosanthes
1.1 Giới thiệu về chi Trichosanthes
1.1.1 Đặc điểm thực vật của chi Trichosanthes
Chi Qua lâu (Trichosanthes) là một chi lớn trong họ Bầu bí
(Cucurbitaceae), bao gồm khoảng 100 loài và đang được các nhà
5 hợp chất đã biết lần đầu tiên phân lập từ chi Trichosanthes: kaemferol 3-O-β-D-glucopyranoside (1→3) O-β-D-glucopyranoside (TA7), corchoionoside B (TA3), icariside B5 (TA4) và (3R,9S) 3,9-dihydroxymegastigman-5-ene 9-O-β-D-glucopyranoside (TA5), isopentyl 1-O-β-D-glucopyranoside (TA8); 1 hợp chất đã biết: icariside B1 (TA6)
3 Đã phân lập và xác định được cấu trúc hóa học của 8 hợp chất từ loài T kirilowii (TK1-TK8), cụ thể:
1 hợp chất mới: trichobenzolignan (hợp chất lignan) (TK1)
3 hợp chất đã biết lần đầu tiên phân lập từ chi Trichosanthes, arvenin I (TK8), ligballinol (TK2) và ehletianol C (TK4); 4 hợp chất đã biết: (-)-pinoresinol (TK3), luteolin-7-O-glucoside (TK5), chrysoeriol-7-O-β-D-glucoside (TK6) và 10α-cucurbita-5,24-dien-3β-ol (TK7)
4 Đã nghiên cứu hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được từ loài T baviensis Kết quả cho thấy, hợp chất TB6 thể hiện hoạt tính ức chế enzym tyrosinase rất mạnh với IC50 là 3,9 ± 1,5 µM Các hợp chất TB3, TB4 và TB10 thể hiện hoạt tính mạnh với IC50 tương ứng là 6,9 ± 2,2, 9,5 ± 3,1, 9,3 ± 2,1 µM Các hợp chất TB1, TB2, TB5, TB7, TB8 và TB9 thể hiện hoạt tính tương đối với
IC50 tương ứng là 14,5 ± 3,4, 11,4 ± 2,8, 10,3 ± 2,5, 11,5 ± 4,1, 16,7
± 2,1, 10,1 ± 3,1 µM Đây là lần đầu tiên các hợp chất phân lập từ loài T baviensis được nghiên cứu hoạt tính ức chế enzym tyrosinase
5 Đã nghiên cứu hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được từ loài T anguina Kết quả cho thấy hợp chất TA7 có hoạt tính ức chế mạnh hơn cả chất đối chứng dương kojic acid (IC50
là 14,6 ± 3,3 µM) với IC50 là 8,5±3,3 µM Các hợp chất từ TA1 đến TA6 thể hiện hoạt tính yếu hơn với giá trị IC50 trong khoảng 21,3 đến 46,7 µM Hợp chất TA8 không thể hiện hoạt tính ở nồng độ nghiên cứu
6 Đã tiến hành đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư người
A-549, HT-29, OVCAR và MCF-7 của 8 hợp chất (TK1 -TK8) Hợp chất triterpenoid TK7 thể hiện hoạt tính ức chế sự phát triển các tế bào ung thư mạnh nhất, đặc biệt là 2 dòng tế bào HT-29 và OVCAR
Trang 5Các hợp chất trên đã được đánh giá khả năng ức chế sự phát
triển một số dòng tế bào ung thư người bao gồm: tế bào ung thư phổi
A-549, tế bào ung thư ruột kết HT-29, tế bào ung thư buồng trứng
OVCAR và tế bào ung thư vú MCF-7 Hợp chất mitoxantrone, một
hợp chất chống ung thư được sử dụng để so sánh
Kết quả nghiên cứu cho thấy, hợp chất triterpenoid TK7 thể
hiện hoạt tính ức chế sự phát triển các tế bào ung thư mạnh nhất, đặc
biệt là 2 dòng tế bào HT-29 và OVCAR với IC50 tương ứng là 4,1 và
6,5 µM, tương đương mitoxantrone (IC50 tương ứng là 3,1 và 8,4
µM) Trên dòng tế bào A-549, hợp chất TK5 thể hiện hoạt tính ức
chế sự phát triển rất mạnh với IC50 là 2,7 µM, mạnh hơn cả
mitoxantrone (IC50 là 7,2 µM) Hợp chất TK1, TK6 và TK8 thể hiện
hoạt tính ức chế yếu hơn với IC50 trong khoảng 14,7-49,4 µM Các
hợp chất TK2 và TK3 thể hiện hoạt tính yếu với dòng tế bào A-549
và HT-29 Hợp chất TK4 không thể hiện hoạt tính ở nồng độ thử
nghiệm phù hợp với kết quả đã công bố [86]
KẾT LUẬN
1 Đã phân lập và xác định được cấu trúc hóa học của 14 hợp chất
(TB1-TB14) từ loài T baviensis, cụ thể:
1 hợp chất mới: 9,26-epoxymultiflorenol (triterpene) (TB1)
8 hợp chất đã biết lần đầu tiên phân lập từ chi Trichosanthes:
β-amyrin acetate (TB2), lup-20(29)-en-3β-ol (TB6),
ergosta-6,22-dien-3β,5α,8α-triol (TB3), nicotiflorin (TB12), (+)-lyoniresinol
9'-O-β-D-glucopyranoside (TB7), (-)-lyoniresinol
9'-O-β-D-glucopyranoside (TB8), demethoxybergenin (TB9), icariside F2
(TB11); 5 hợp chất đã biết: spinasterol (TB4),
4α,14α-dimethyl-9,19-cyclo-5α,9β-ergost-24(28)-en-3β-ol (TB5), bergenin (TB10),
(6S,9S)-roseoside (TB13) và thymidine (TB14)
2 Đã phân lập và xác định được cấu trúc hóa học của 8 hợp chất từ
loài T anguina (TA1-TA8), cụ thể:
2 hợp chất mới: tricanguina A (TA1) và tricanguina B (TA2)
(dẫn xuất coumarin)
khoa học trên thế giới rất quan tâm Theo thống kê và mô tả sơ bộ của GS Phạm Hoàng Hộ, Việt Nam có khoảng 12 loài Trichosanthes trong đó có 2 loài đặc hữu của Việt Nam là qua lâu Ba Vì (T baviensis) và qua lâu Pierre (T pierrei) [1]
1.1.2 Tình hình sử dụng trong y học cổ truyền các loài thuộc chi Trichosanthes
Một số loài trong chi Qua lâu (T ovigera Blume, T cucumerina L.) đã được trồng rộng rãi và sử dụng quả làm rau ăn Nhiều loài đã được dùng trong dân gian làm thuốc giải nhiệt, lợi tiểu, lợi sữa, giảm đường huyết, chữa bệnh ngoài da, bệnh đau đầu,
1.1.3 Tình hình nghiên cứu về thành phần hóa học của chi Trichosanthes
Trong những năm gần đây, cũng đã có nhiều nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học một số loài thuộc chi Trichosanthes Theo những công trình đã được công bố cho thấy, thành phần hóa học của chi Trichosanthes, bao gồm các nhóm chất chính như: triterpenoid, steroid, flavonoid, lignan, các hợp chất có nitơ và một số hợp chất khác Trong đó lớp chất triterpenoid, đặc biệt
là các hợp chất khung cucurbitane là các hợp chất khá phổ biến trong các loài thuộc chi Trichosanthes đã được nghiên cứu Các nghiên cứu thành phần hóa học chủ yếu tập trung ở 8 loài: T anguina, T cucumerina, T cucumeroides, T dioica, T fructus, T kirilowii, , T pericarpium và T tricuspidata Chi tiết các tổng quan về thành phần hóa học xem ở Luận án
1.1.3.1 Các hợp chất triterpenoid
Theo các công trình đã công bố, có 64 hợp chất triterpenoid 1-64 đã phân lập được từ bốn loài T cucumerina, T kirilowii, T tricuspidata, và T anguina
1.1.3.2 Các hợp chất steroid
Theo các công trình đã công bố, có 26 hợp chất steroid 65-90
đã phân lập được từ bốn loài T dioica, T kirilowii, T rosthornii và T tricuspidata
Trang 61.1.3.3 Các hợp chất flavonoid
Theo các công trình đã công bố, có 20 hợp chất flavonoid
91-110 đã phân lập được từ 2 loài T kirilowii và T pericarpium
1.1.3.4 Các hợp chất lignan
Theo các công trình đã công bố, có 5 hợp chất lignan
110-114 đã phân lập được từ loài T kirilowii
1.1.3.5 Các hợp chất có chứa nitơ
Theo các công trình đã công bố, có 17 hợp chất có chứa nitơ
115-131 đã phân lập được từ loài T kirilowii
1.1.4 Hoạt tính sinh học của chi Trichosanthes
Các nghiên cứu trên thế giới chủ yếu tập trung vào 8 loài
thuộc chi Trichosanthes và cho thấy các hợp chất phân lập từ các loài
thuộc chi Trichosanthes có hoạt tính mạnh Một số hoạt tính đáng
quan tâm như gây độc tế bào ung thư, kháng viêm, kháng khuẩn,
kháng nấm, chống oxy hoá …trong đó, nổi bật là hoạt tính gây độc tế
bào ung thư với khả năng ức chế mạnh trên nhiều dòng tế bào ung
thư khác nhau
1.1.4.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư
1.1.4.2 Hoạt tính kháng viêm
1.1.4.3 Tác dụng chống oxy hóa
1.1.4.4 Tác dụng kháng khuẩn và kháng nấm
Chi tiết các tổng quan về hoạt tính sinh học xem ở Luận án
1.1.5 Tình hình nghiên cứu về chi Trichosanthes ở Việt Nam
Theo các tài liệu đã công bố, chi Trichosanthes ở Việt Nam có
2 loài là T kirilowii và T tricuspidata đã được nghiên cứu về thành
phần hóa học và hoạt tính sinh học
1.2 Giới thiệu về loài T baviensis, T anguina và T kirilowii
1.2.1 Loài T baviensis
1.2.2 Loài T anguina
1.2.3 Loài T kirilowii
triển vọng ứng dụng trong ngành công nghiệp mỹ phẩm, bảo vệ da khỏi những tác nhân bên ngoài môi trường Các kết quả nghiên cứu
sẽ góp phần đưa đến cơ hội ứng dụng trong sản xuất thuốc điều trị những căn bệnh có liên quan về rối loạn sắc tố da
3.2.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư của các hợp chất phân lập được
từ loài T kirilowii Theo các nghiên cứu trước đây, các hợp chất phân lập từ loài
T kirilowii thể hiện nhiều hoạt tính lý thú đặc biệt là hoạt tính gây độc tế bào ung thư Các nghiên cứu trên dòng tế bào ung thư đã công
bố bao gồm: A-549, SK-OV-3, SK-MEL-2, XF-498, HCT-15,
UO-31, CCRF-CEM, SR, NCI-H460, NCI-H522, HCT-116, U251, OVCAR-3, OVCAR-6, SN12C, SK-Mel-2, B16F1, ung thư vú (SR-BR-3, MCF-7, T47D và MDA-MB-435), ung thư ruột kết (Caco-2) [4], [14], [37] Trong số các hợp chất được phân lập từ loài T kirilowii, hợp chất karounidiol (45) thể hiện hoạt tính mạnh trên rất nhiều dòng ung thư như ức chế ung thư biểu mô tế bào thận (UO-31 với IC50 là 1,98 μM), bệnh bạch cầu (CCRF-CEM với giá trị IC50
1,63 μM; SR (CRL-2262) với giá trị IC50 1,75 μM), ung thư phổi
(A-549 với giá trị IC50 1,76 μM; NCI-H460 với giá trị IC50 1,91 μM, NCI-H522 với giá trị IC50 3,56 μM), ung thư đại tràng (HCT-116 với giá trị IC50 2,01 μM), ung thư thần kinh trung ương (U251 với giá trị
IC50 2,02 μM), ung thư buồng trứng (OVCAR-3 với giá trị IC50 1,79 μM; OVCAR-6 với giá trị IC50 2,06 μM) và ung thư thận (SN12C với giá trị IC50 2,36 μM) [14] Theo một công bố khác, hợp chất isoetin 5'-methyl ether (93) phân lập được năm 2007 đã thể khả năng ức chế các dòng tế bào ung thư phổi A-549, ung thư da ác tính SK-Mel-2 và
tế bào ung thư chuột ác tính B16F1 với giá trị IC50 lần lượt là 0,92, 8,00, 7,23 µg/mL [29]
Trong số các hợp chất phân lập (TK1-TK8) từ loài T kirilowii, trichobenzolignan (TK1) là hợp chất mới, ligballinol (TK2), ehletianol C (TK4) và arvenin I (TK8) lần đầu tiên được phân lập từ loài này Các tra cứu về các hợp chất TK6, TK7 và TK8 cho thấy chưa có đánh giá nào về tác dụng gây độc tế bào ung thư
Trang 7Nghiên cứu của Khan và các cộng sự vào 2005 đã phân lập
được tám hợp chất cycloartane triterpenoid và tiến hành thử hoạt tính
ức chế enzym tyrosinase Kết qủa cho thấy bảy trong số tám chất có
khả năng ức chế tốt hơn chất đối chứng kojic acid (IC50 =
16,67±0,52); một chất có hoạt tính rất mạnh, IC50 = 1,32 ± 0,37 [84]
Năm 2014, Khan và các cộng sự đã phân lập được chất
β-amyrin acetate (TB2) từ quả của loài Madhuca latifolia và tiến hành
thử hoạt tính ức chế enzym tyrosinase Kết qủa cho giá trị IC50 =
23,12±0,07 [85] Trong một công bố của Park và các cộng sự năm
2017, hợp phần bergenin trong một số mỹ phẩm có khả năng ức chế
sự phát triển của enzym tyrosinase
Từ kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học của loài T
Baviensis-một loài đặc hữu tại Việt Nam, cho thấy tất cả các hợp chất
đều thể hiện hoạt tính ức chế mạnh enzym tyrosinase Các hợp chất
nghiên cứu có hoạt tính ức chế mạnh hơn cả chất đối chứng dương
kojic acid (IC50 là 14,6 ± 3,3 µM) Cụ thể: hợp chất TB6 thể hiện
hoạt tính ức chế enzym tyrosinase mạnh nhất với IC50 là 3,9 ± 1,5
µM Các hợp chất TB3, TB4 và TB10 thể hiện hoạt tính yếu hơn với
IC50 tương ứng là 6,9 ± 2,2, 9,5 ± 3,1, 9,3 ± 2,1 µM Các hợp chất
TB1, TB2, TB5, TB7, TB8 và TB9 thể hiện hoạt tính yếu nhất với
IC50 tương ứng là 14,5 ± 3,4, 11,4 ± 2,8, 10,3 ± 2,5, 11,5 ± 4,1, 16,7
± 2,1, 10,1 ± 3,1 µM Đây là lần đầu tiên các hợp chất phân lập từ
loài T baviensis được nghiên cứu hoạt tính ức chế enzym tyrosinase
Kết quả nghiên cứu về hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của
các hợp chất phân lập được từ loài T anguina, cho thấy hợp chất
TA7 có hoạt tính ức chế mạnh hơn cả chất đối chứng dương kojic
acid (IC50 là 14,6 ± 3,3 µM) với IC50 là 8,5±3,3 µM Các hợp chất từ
TA1 đến TA6 thể hiện hoạt tính yếu hơn với giá trị IC50 trong
khoảng 21,3 đến 46,7 µM Hợp chất TA8 không thể hiện hoạt tính ở
nồng độ nghiên cứu
Các hợp chất phân lập được từ loài T baviensis đã thể hiện
hoạt tính ức chế enzym tyrosinase mạnh sẽ gợi mở hướng nghiên
cứu, cơ chế tác dụng hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của loài T
baviensis Vì thế cần thiết có các nghiên cứu in vivo nhằm nâng cao
CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Đối tượng nghiên cứu
Thân lá T baviensis được thu tại Ba Vì, Hà Nội, Việt Nam (mẫu tiêu bản NCCT-TB1109); thân lá T anguina được thu tại Hòa Bình, Việt Nam (mẫu tiêu bản NCCT-TA1308); rễ củ T kirilowii được thu tại Hòa Bình, Việt Nam (mẫu tiêu bản NCCT-TK1209) Tên khoa học của 3 mẫu được giám định bởi PGS TS Ninh Khắc Bản, Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam Cả 3 mẫu tiêu bản được lưu trữ tại Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp phân lập các hợp chất 2.2.1.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC)
2.2.1.2 Sắc ký cột (CC) 2.2.1.3 Tinh chế các hợp chất 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc Cấu trúc hóa học của các hợp chất được xác định trên cơ sở
sử dụng các phép xác định thông số vật lý và các phương pháp đo phổ bằng các thiết bị hiện đại đồng thời kết hợp với phân tích và tra cứu tài liệu tham khảo
2.2.2.1 Phổ khối lượng phân giải cao (HR-ESI-MS) 2.2.2.2 Phổ cộng hưởng từ nhân (NMR)
2.2.2.3 Phổ lưỡng sắc tròn (CD) 2.2.2.4 Độ quay cực ([α]) 2.2.3 Phương pháp xác định hoạt tính sinh học 2.2.3.1 Phương pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư 2.2.3.2 Phương pháp đánh giá hoạt tính ức chế enzym tyrosinase 2.3 Phân lập các hợp chất
2.3.1 Các hợp chất phân lập từ loài T baviensis
Trang 8Hình 2.2 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài T baviensis
2.3.2 Các hợp chất phân lập từ loài T anguina
Hình 1.3 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài T anguina
Hình 3.65 Cấu trúc hóa học 8 hợp chất được phân lập từ loài T kirilowii
3.2 Hoạt tính của các hợp chất phân lập được 3.2.1 Hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được từ T baviensis và T anguina
Các vấn đề về sắc tố da thường gây nhiều áp lực về mặt thẩm
mỹ, đặc biệt là đối với phụ nữ Ức chế enzym tyrosinase có thể làm hạn chế việc sản sinh quá nhiều các sắc tố melanin từ đó giúp điều trị các rối loạn liên quan đến tăng sắc tố da Việc nghiên cứu, điều chế các sản phẩm từ thiên nhiên có tác dụng ức chế enzym này có ý nghĩa lớn trong khoa học y dược và mỹ phẩm Thành phần của những sản phẩm này thường chứa một số hợp chất chính như flavonoid, phenolic, polyphenolic, chalcol, stilbene và kojic acid [82] Tuy nhiên một số hợp chất phenolic như hydroquinone và artbutin thường
có mặt trong các sản phẩm làm trắng da hiện nay không an toàn và ít hiệu quả khi sử dụng [83]
Trang 9Hình 3.64 Cấu trúc hóa học 8 hợp chất được phân lập từ loài T anguina
2.3.3 Các hợp chất phân lập từ loài T kirilowii
Hình2.4 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài T kirilowii
2.4 Thông số vật lý và dữ liệu phổ của các hợp chất đã phân lập được
2.5 Kết quả đánh giá hoạt tính sinh học của các hợp chất 2.5.1 Hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của các hợp chất phân lập được từ T baviensis và T anguina
Bảng 2.1 Kết quả đánh giá hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của TB1-TB10
Hợp chất IC50 (μM) TB1 14,5 ± 3,4 TB2 11,4 ± 2,8 TB3 6,9 ± 2,2 TB4 9,5 ± 3,1 TB5 10,3 ± 2,5 TB6 3,9 ± 1,5 TB7 11,5 ± 4,1 TB8 16,7 ± 2,1 TB9 10,1 ± 3,1 TB10 9,3 ± 2,1 Kojic acid 14,6 ± 3,3
Trang 10Bảng 2.2 Kết quả đánh giá hoạt tính ức chế enzym tyrosinase của TA1-TA8
Hợp chất IC50 (μM)
Kojic acid 14,6 ± 3,3
2.5.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư của các hợp chất phân lập được
từ T kirilowii
Bảng 2.3 Kết quả đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư của
TK1-TK8
IC50 (µM) Hợp chất A-549 HT-29 OVCAR MCF-7
TK2 >100 45,5 >100 >100
TK3 52,4 60,9 >100 >100
TK4 >100 >100 >100 >100
3 Danh sách các hợp chất phân lập từ các loài thuộc chi Trichosanthes
Tổng số có 30 hợp chất đã được phân lập từ 3 loài T baviensis, T anguina và T kirilowii, trong đó có:
O O
O H
OH
H OH OH
HO OH HO
TB 9 R=H TB10 R=OMe R
TB1
1
3 5
8 10
11 14
17 18 20
23 24
25 26
27 28
29 30
O AcO
TB2
HO
TB4
HO
TB3 OH OH
TB6 OH
OGlc
H3CO
HO OCH 3
OH
OH OGlc
H 3 CO
HO OCH3
OH
Hình 3.63 Cấu trúc hóa học 14 hợp chất được phân lập từ loài T
baviensis
