Điều chế kháng huyết thanh thỏ kháng liên cầu khuẩn gây bệnh trên cá Rô Phi

Điều chế kháng huyết thanh thỏ kháng liên cầu khuẩn gây bệnh trên cá Rô Phi

I GIỚI THIỆU 1.1 Đặt Vấn Đề

Theo đề án phát triển nuôi cá rô phi 2003 – 2010 của bộ Thủy sản, sản lượng cá rô phi sẽ tăng từ 30.000 tấn năm 2003 lên 100.000 tấn năm 2005 và 200.000 tấn năm 2010 Giá trị xuất khẩu cá rô phi trong 6 năm tới dự kiến sẽ lên tới 160 triệu USD, tương đương 1.500 tỷ đồng

Với mục tiêu đưa diện tích nuôi cá rô phi sẽ tăng lên đến 10.000 ha và 1 triệu m3 lồng vào năm 2010, tổng mức đầu tư dành cho đề án phát triển nuôi cá rô phi ước tính cần 12.840 tỷ đồng Và theo nhận định, trước hết khâu đầu tư giống vẫn là quan trọng nhất Ước tính 250 triệu con giống cỡ 5 – 10 gam vào năm 2005 và 500 triệu con vào năm 2010

Để đạt được những mục tiêu trên cùng với sự mở rộng quy mô, áp dụng nhiều mô hình nuôi tiên tiến đó là việc tìm ra phương pháp phòng và trị bệnh hiệu quả là vấn đề cấp thiết hiện nay Bệnh trên cá rô phi gây tổn thất không nhỏ đến người

nuôi, đặc biệt là bệnh do vi khuẩn Streptococcus gây ra Vi khuẩn này gây bệnh với

tỷ lệ chết rất cao và làm kìm hãm sự phát triển của nghề nuôi thủy sản nói chung và nghề nuôi cá rô phi nói riêng Cùng với việc sử dụng thuốc điều trị không đạt hiệu quả cao, gây tốn kém và nghiên cứu dịch bệnh đòi hỏi phương pháp phức tạp, trang thiết bị hiện đại, việc tìm ra một phương pháp chẩn đoán tác nhân gây bệnh nhanh, chính xác là nhu cầu cần thiết hiện nay

Trước yêu cầu thực tế đó, được sự phân công của Khoa Thủy Sản trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh và được sự hướng dẫn tận tình của thầy

Nguyễn Hữu Thịnh – Chúng tôi đã tiến hành đề tài: “Điều chế kháng huyết thanh thỏ kháng liên cầu khuẩn gây bệnh trên cá rô phi”

1.2 Mục Tiêu Đề Tài

Điều chế kháng huyết thanh thỏ kháng vi khuẩn Streptococcus sp và chẩn

đoán nhanh bệnh này gây trên cá rô phi

II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Phân Loại Cá Rô Phi

Lớp phụ : Actenopterigii

Giống : Tilapia, Saratherodon, Oreochoromis

2.2 Nguồn Gốc và Phân Bố

Căn cứ vào đặc trưng về tập tính sinh sản và hình thái các loài, người ta phân loại cá rô phi thành 3 giống:

Giống Tilapia gồm những loài ấp trứng trên vật bám ( giá thể)

Giống Sarotherodon gồm những loài ngậm trứng và cá con trong miệng Giống Oreochromis cá tự đào tổ đẻ, chỉ có cá cái ấp trứng trong miệng

Hiện chúng ta đã biết có tới hơn 80 loài thuộc 4 giống và 10 giống phụ Cá rô

phi nhập vào nước ta trước đây thuộc giống Oreochromis là các loài O mosambica (nhập vào Việt Nam năm 1951) và O nilotica (nhập vào miền Nam Việt Nam 1973), và các loài cá rô phi đỏ có màu sáng hồng, nhập vào ta từ thập niên 90 Cá O nilotica (rô phi Đài Loan, rô phi vằn) có thể vóc lớn hơn cá rô phi O mosambica (rô

phi thường hay rô phi cỏ ) Cá rô phi vằn có thân màu hồng, vẩy sáng, có 9 - 12 sọc đen đậm song song từ lưng xuống bụng, vi đuôi có màu sọc đen, viền vi đuôi và vi lưng có màu hồng nhạt Cá rô phi thường thân có màu đen ở lưng, bụng có màu sáng Tốc độ tăng trưởng của cá tùy thuộc điều kiện nuôi và thức ăn Cá rô phi vằn lớn nhanh hơn cá rô phi thường Sau thời gian nuôi 4 – 5 tháng, cá rô phi vằn có thể đạt kích thước thương phẩm 200 – 400 gam Cá đực thường lớn nhanh hơn cá cái, nhất là sau khi thành thục sinh dục Vì vậy nên dùng cá đực để nuôi tăng sản Năm 1992, một công ty Đài Loan đã nhập cá rô phi đỏ vào Việt Nam để nuôi thử ở Bình Dương Sau đó cá được đưa tới các nhà hàng ở thành phố Hồ Chí Minh với tên gọi khá hấp dẫn là cá điêu hồng

2.3 Đặc Điểm Sinh Học 2.3.1 Đặc điểm dinh dưỡng

Giai đoạn đầu sau khi hết noãn hoàn cá ăn các thức ăn có kích thước nhỏ như phù du động, thực vật, … Sau một tháng cá có thể ăn được các thức ăn có kích thước lớn hơn, ăn được thức ăn chế biến, rau xanh bằm nhỏ, bèo tấm Các loại cá lớn và trưởng thành ăn tạp nhiều loại thức ăn như rau, bèo, mùn bả hữu cơ, tảo lắng ở đáy, ấu trùng côn trùng, thức ăn nhân tạo, chế biến, thức ăn công nghiệp, …

Phổ thức ăn của các loài cá rô phi khác nhau thay đổi rộng và có thể chia làm

3 nhóm chính: các loài ăn tạp và mùn bả hữu cơ như cá rô phi đen (Oreochoromis mossambicus) và cá rô phi vằn (O niloticus), các loài ăn tảo như O macrochir, Saratherodon esculentus và các loài ăn thực vật thượng đẳng như Tilapia zillii, T rendalli Ngoài ra cá rô phi còn có khả năng thích ứng với các loại thức ăn tổng hợp

do con người cung cấp

2.3.2 Đặc điểm sinh trưởng

Cá rô phi có tốc độ tăng trưởng khá nhanh Loài Oreochoromis nilotica (dòng

GIFT) có thể đạt trọng lượng trung bình 600 – 700 gam sau vụ nuôi 5 – 6 tháng, cao nhất có thể đạt tới 1,2 – 1,4 kg Cá đực thường lớn nhanh hơn cá cái

Loài cá rô phi vằn thích hợp nhất cho nuôi thịt bởi có cường độ tăng trưởng nhanh và khả năng sử dụng tốt thức ăn tự nhiên và bổ sung Cá rô phi vằn đòi hỏi hàm lượng đạm trong khẩu phần thức ăn từ 20 – 50% tùy theo kích thước

2.3.3 Đặc điểm sinh sản

Cá rô phi đỏ thành thục sinh dục chỉ sau 4 – 5 tháng tuổi Cá cái mỗi lần đẻ khoảng 1000 – 2000 trứng, trong buồng trứng có 4 – 5 lứa trứng, cá đẻ từng lứa một Cá có thể đẻ nhiều lần trong năm (8 – 11 lần) Cá rô phi vằn và rô phi đỏ thời gian thành thục chậm hơn, tới 6 – 8 tháng Khi thành thục cá bắt cặp và tự đào tổ ở đáy ao đẻ trứng, cá đực bảo vệ và giữ trứng đến khi cá bột nở ra Cá cái còn giữ cá con cho đến khi cá bột tiêu hết noãn hoàn và tự đi kiếm ăn được thức ăn bên ngoài Vì cá có tập tính đẻ sớm và đẻ nhiều nên khó kiểm soát được mật độ trong ao

Cá rô phi nói chung có tuổi thành thục sớm, dể thành thục và dể sinh sản Ta có thể phân biệt cá đực và cá cái khi cá lớn cỡ 6 – 7 cm bằng cách quan sát lỗ huyệt của chúng và theo đó cũng dễ dàng tách riêng cá đực, cá cái trong một đàn cá rô phi

Cá đực chỉ có 2 lỗ gồm lỗ hậu môn nằm ở phía trước và lỗ niệu sinh dục nằm ở phía sau

Cá cái có 3 lỗ, phía trước là lỗ hậu môn, tiếp đến là lỗ niệu nằm ở giữa và lỗ sinh dục nằm ở phía sau

Cá rô phi đỏ có thể đẻ nhiều lần trong năm, từ 10 – 12 lần và hầu như đẻ quanh năm Ở Đài Loan nuôi trong điều kiện chăm sóc tốt cá có thể đẻ trên 20 lần trong một năm Cá trên hoặc dưới một năm tuổi đẻ nhiều lứa hơn cá từ 2 năm tuổi trở lên

Khi bắt đầu sinh sản, cá rô phi đực và cái cùng hợp làm tổ bằng cách dùng đuôi quậy bùn và đào hố dưới đáy ao, hố có hình tròn, dốc thoai thoải, trơn nhẵn, không còn bùn lắng động, đường kính tổ từ 20 – 30 cm, độ sâu thích hợp 0,3 – 0,5 cm

Cá cái đẻ trứng vào hố và cá đực tưới tinh dịch để thụ tinh Sau khi trứng thụ tinh, cá cái sẽ hút và ngậm tất cả trứng để ấp cho tới khi cá con nở Ở nhiệt độ 300C thời gian ấp trứng từ 4 – 6 ngày Sau khi nở khoảng 3 – 4 ngày cá con hết noãn hoàn và bơi theo cá mẹ Khi gặp nguy hiểm cá mẹ há miệng thu cả đàn con vào trong miệng Khi thấy an toàn, cá mẹ há miệng cho đàn con chui ra Sau 4 – 5 ngày cá con tách khỏi mẹ và tự đi kiếm ăn, cá mẹ lại chuẩn bị cho chu kỳ sinh sản mới

Thời gian giữa 2 lứa đẻ tùy thuộc vào thức ăn, tuổi cá, nhiệt độ, … Trung bình cá đẻ từ 1000 – 2000 trứng, cá cỡ lớn có thể đẻ số lượng trứng nhiều hơn Vì vậy chúng ta nên chọn cá bố mẹ có thể trọng lớn để nâng cao năng suất sinh sản, cho số lượng cá con nhiều và khỏe mạnh

2.4 Yêu Cầu Về Các Yếu Tố Môi Trường Nước 2.4.1 Nhiệt độ

Theo Ballarin và Haller, 1982; giới hạn nhiệt độ nước cho sinh trưởng bình thường của các loài cá rô phi 20 – 350C Nhiệt độ tối hảo là 29 – 310C Ngưỡng nhiệt độ thấp nhất gây chết là 10 – 110C Phần lớn cá rô phi ngừng ăn hay sinh trưởng chậm ở nhiệt độ nước dưới 16 – 170C và không sinh sản hoặc ngưng phát triển ở nhiệt độ dưới 200C Giới hạn nhiệt độ tối hảo cho sinh sản từ 26 – 290C cho hầu hết các loài cá rô phi

2.4.2 pH

Cá rô phi có khả năng chịu đựng giới hạn pH rộng từ 4 – 11 Tuy nhiên khi pH < 5 tác động xấu đến sự kết hợp của máu với oxygen, cá bỏ ăn và ảnh hưởng đến sự phát triển

pH thích hợp cho sự phát triển của cá rô phi từ 6,0 – 8,5 (Wangead và ctv., 1988) Cá rô phi chết khi pH tăng cao đến 12

2.4.3 Hàm lượng oxy hoà tan (DO)

Cá rô phi dòng GIFT có khả năng chịu đựng được ở vùng nước có hàm lượng oxy thấp 1 mg/l, ngưỡng gây chết cá từ 0,1 – 0,3 mg/l, phát triển tốt trong khoảng 2 – 5 mg/l

2.5 Tình Hình Nghiên Cứu Dịch Bệnh ở Cá Rô Phi

Hiện nay, trên thế giới những công trình nghiên cứu về bệnh cá rô phi do vi khuẩn như:

Miyazaki và ctv (1984) nghiên cứu một số mô học cá bị nhiễm Pseudomonas flueorescens và Streptococcus sp Kaige và ctv (1996) nghiên cứu mô học của cá bệnh do Edwardsiella sp Lio – Po và Sanvictores (1987) nghiên cứu nguyên nhân

gây chết cá bột Chang và Plumb (1996) nghiên cứu mô học cá rô phi vằn nhiễm

Staphylococcus sp và ảnh hưởng của độ mặn lên quá trình nhiễm Staphylococcus của

cá rô phi vằn Bunch và Bejerano (1997) nghiên cứu ảnh hưởng của những yếu tố

môi trường lên sự nhạy cảm của cá rô phi lai đối với bệnh do Streptococcus sp Perera và ctv (1998) nghiên cứu mô học của cá rô phi lai bị nhiễm Streptococcus iniae Klesius và ctv (1999) nghiên cứu hiệu lực của một loại vaccine được bào chế từ tế bào Streptococcus iniae đã bị diệt bằng formol đối với cá rô phi Nghiên cứu của Evan và ctv (2000) cho thấy Streptococcus iniae có thể gây nhiễm cá rô phi qua

đường mũi Shoemake và ctv (2000) nghiên cứu mật độ cá thả và liều lượng

Streptococcus iniae có ảnh hưởng đến tỷ lệ chết của cá khi chúng tiếp xúc những vi

khuẩn này ( Trích bởi Nguyễn Tri Cơ, 2004)

Hiện nay ở Việt Nam các công trình nghiên cứu về bệnh cá rô phi chưa nhiều, chỉ có vài công trình nghiên cứu chủ yếu tập trung vào kí sinh trùng và hầu như chưa có hoặc có rất ít công trình có tầm cỡ nghiên cứu về tác nhân virus hay vi khuẩn gây bệnh trên cá rô phi Những công trình nghiên cứu ở Việt Nam như: nghiên cứu về kí sinh trùng trên một số dòng cá rô phi vằn ở Bắc Ninh và Quảng Ninh (Bùi Quang Tề và ctv., 1999) Kí sinh trùng ở những giai đoạn khác nhau trên ba dòng cá rô phi nuôi

(O niloticus) như dòng Thái, dòng Việt và dòng GIFT tại miền Bắc Việt Nam (Bùi

Quang Tề và Vũ Thị Lụa, 1999)

2.6 Một Số Bệnh Thường Gặp Trên Cá Rô Phi

2.6.1 Bệnh liên cầu khuẩn (do vi khuẩn Streptococcus)

Bệnh thường xảy ra với tỷ lệ cá chết rất cao, đặc biệt là vào các tháng cuối mùa hè và đầu mùa thu Đây là khoảng thời gian nhiệt độ nước cao nhất trong năm Tại các thời điểm khác trong năm cá chết rải rác, ngoại trừ những tháng mùa đông lúc nhiệt độ nước xuống thấp nhất ở các nước ôn đới không thấy bệnh xuất hiện Về độ tuổi cá thường nhiễm bệnh, hầu hết các báo cáo đều ghi nhận bệnh thường xảy ra trong giai đoạn nuôi thương phẩm

Đường truyền bệnh: cá sống trong môi trường nước có tác nhân vi khuẩn này hoặc sống chung với cá bệnh Bệnh càng dễ dàng xảy ra thông qua vết thương ở da hay các yếu tố môi trường nuôi không tốt đối với cá (Woo và ctv., 2002; trích bởi Nguyễn Tri Cơ, 2004)

Dấu hiệu bệnh lý: cá bệnh thường có triệu chứng chung khá điển hình trên nhiều loài Cá bơi lờ đờ trên mặt nước, mất khả năng định hướng, bụng căng phồng, vùng da quanh miệng và hậu môn xung huyết, mắt lồi một hoặc hai bên, một số cá bị đục giác mạc, xuất huyết ở vây lưng và vây ngực, gan, lách và thận vừa tái nhạt vừa sưng phồng (Perera và ctv 1998; trích bởi Nguyễn Hữu Thịnh, 2004) nghiên cứu hệ

thống bệnh tích vi thể của cá rô phi lai (O niloticus x O aureus) nhiễm Streptococcus iniae Kết quả cho thấy sự xâm nhập của vi khuẩn vào tế bào ở mắt, màng não gây

viêm hạt màng não Các ổ viêm với rất nhiều vi khuẩn trong nhu mô thận là bệnh tích thường quan sát được Vi khuẩn phát triển quanh mao tĩnh mạch và tạo bệnh tích viêm hạt ở nhu mô gan Nhu mô lách nhiễm khuẩn rất nặng Một số trường hợp có thể quan sát được viêm bao tim và cơ tim

Phòng trị bệnh: các biện pháp phòng bệnh như giảm mật độ nuôi, tránh cho ăn dư thừa, thường xuyên vệ sinh hệ thống nuôi, tránh đến mức tối đa việc chuyển đàn hay phân cỡ cá trong thời gian dịch bệnh thường xảy ra Trị bệnh bằng cách sử dụng các loại kháng sinh có phổ kháng khuẩn rộng hay các loại kháng sinh có tác dụng diệt khuẩn gram dương trộn vào thức ăn cho cá ăn Liều lượng như sau:

- Enrofloxacin: 5 mg/kg cá, cho ăn liên tục trong 10 ngày (Stoffregen và ctv., 1996)

- 100 mg Erythromycine + 70 mg Doxycycline trên kg cá, cho ăn liên tục trong 6 ngày (Tung và ctv., 1985)

Theo Kitao và Aoki (1979) thì có thể sử dụng thêm một số loại kháng sinh khác như Kitasamycine, Lincomycine, Alkyl – trimethyl – ammonium – calcium – oxytetracycline, Oleandomycine trong điều trị bệnh do liên cầu khuẩn trên cá

2.6.2 Bệnh nhiễm khuẩn huyết do Aeromonas

Tác nhân gây bệnh: nhóm vi khuẩn gây bệnh chủ yếu thuộc giống

Aeromonas: A hydrophila, A caviae, A sobria Vi khuẩn hiện diện trong môi trường

nước, đặc biệt khi nước có nhiều chất hữu cơ Các loài vi khuẩn này có thể không gây bệnh khi cư trú trong ruột cá

Đối tượng nhiễm bệnh: các loài cá nuôi nước ngọt: cá tra, cá điêu hồng, cá basa, cá trê, … Cá con dễ mẫn cảm hơn cá trưởng thành, có thể gây chết đến 80%

Dấu hiệu bệnh lý: cá bệnh bị sẫm màu từng vùng ở bụng Xuất hiện từng mảng đỏ trên cơ thể Hoại tử đuôi, vây, xuất huyết các vết thương trên lưng, các khối u trên bề mặt cơ thể, vẩy dễ rơi rụng Mắt lồi, mờ đục và phù ra Xoang bụng chứa nhiều dịch, nội tạng hoại tử

Phòng trị:

Tránh tạo ra các tác nhân cơ hội như nhiễm ký sinh trùng ( nhóm nguyên sinh động vật), tránh làm xây xác cá, vệ sinh không đúng quy định, nước giàu chất hữu cơ (môi trường nuôi nhiễm bẩn), mật độ nuôi quá dày, hàm lượng oxy thấp, ô nhiễm từ nguồn nước thải công nghiệp, …

Dùng thuốc tím (KMnO4) tắm cá, liều dùng là 4 ppm (4 g/m3 nước) đối với cá nuôi ao và 10 ppm (10 g/m3 nước) đối với cá nuôi bè Xử lý lập lại sau 3 ngày, định kỳ tắm cá một tuần, hai tuần hoặc một tháng/lần tùy thuộc vào tình trạng sức khoẻ cá

Dùng thuốc trộn vào thức ăn: Oxytetracylin 55 – 77 mg/kg thể trọng cá nuôi, cho ăn 7 – 10 ngày (nên hạn chế sử dụng) Enrofloxacin 20 mg/kg thể trọng cá nuôi, cho cá ăn 7 – 10 ngày Streptomycin 50 – 70 mg/kg thể trọng cá nuôi, cho ăn 5 – 7 ngày Kanamycin 50 mg/kg thể trọng cá nuôi, cho ăn 7 ngày Nhóm Sulfamid 100 – 200 mg/kg thể trọng cá, cho ăn 10 – 20 ngày

2.6.3 Bệnh nhiễm khuẩn do Pseudomonas (bệnh đốm đỏ)

Tác nhân gây bệnh bao gồm: Pseudomonas fluorescens, P anguilliseptica, P chlororaphis, …

Đối tượng nhiễm bệnh: các loài cá nuôi nước ngọt như cá tra, cá basa, cá trê, cá bống tượng, cá tai tượng, …

Dấu hiệu bệnh lý: xuất huyết từng đốm đỏ trên da, xung quanh miệng và nắp mang, phía mặt bụng Bề mặt cơ thể có thể bị chảy máu, tuột nhớt nhưng không xuất

huyết vây và hậu môn, … Pseudomonas spp gây nhiễm khuẩn huyết thường liên

quan đến stress, các thương tổn da, vẩy do các tác nhân cơ học, nuôi với mật độ cao,

dinh dưỡng kém, hàm lượng oxy giảm Pseudomonas spp xâm nhập vào cơ thể cá

qua các đường thương tổn ở mang, da, …

Phòng trị: dùng vaccin phòng bệnh, giảm mật độ nuôi Cung cấp nguồn nước tốt Tắm 3 – 5 ppm (KMnO4) không quy định thời gian Có thể dùng các loại kháng

sinh để điều trị như trong bệnh nhiễm khuẩn huyết do Aeromonas

2.6.4 Bệnh nhiễm khuẩn huyết do Edwardsiella (edwarsiellosis)

Tác nhân gây bệnh: bệnh do vi khuẩn Edwardsiella tarda

Đối tượng nhiễm bệnh: các loài cá nuôi nước ngọt như cá tra, cá điêu hồng, cá basa, cá trê, cá rô phi, …

Dấu hiệu bệnh lý: xuất hiện những vết thương nhỏ trên da (phía mặt lưng), đường kính khoảng 3 – 5 mm, những vết thương này sẽ phát triển thành những khối u bên trong cơ thể, da bị mất sắc tố Cá mắc bệnh sẽ mất chức năng vận động do vây đuôi bị tưa rách Có thể xuất hiện những vết thương bên dưới biểu bì, cơ, khi ấn vào sẽ phát ra khí có mùi hôi, các vết thương này sẽ gây hoại tử vùng cơ chung quanh Bệnh thường xảy ra trên cá lớn trong ruột một vài loài rắn, cá và một số loài bò sát,

ếch nhái có thể là nguồn lây nhiễm mầm bệnh E tarda Bệnh xuất hiện khi chất

lượng nước trong môi trường nuôi xấu, nuôi với mật độ dày, nhiệt độ thích hợp để bệnh phát triển khoảng 300C Tuy nhiên bệnh cũng xuất hiện khi nhiệt độ nước thấp hơn và dao động bình thường

Phòng trị: cải tiến chất lượng nước trong môi trường nuôi Giảm thấp mật độ nuôi Dùng vaccine phòng bệnh, có thể dùng kháng sinh để điều trị như trong bệnh

nhiễm khuẩn huyết do Aeromonas

Dấu hiệu bệnh lý: đa số cá bệnh không có dấu hiệu bệnh lý bên ngoài rõ ràng, vài trường hợp thấy mắt lồi, những thương tổn ở da và vây, bụng căng chứa nhiều dịch, cá sắp chết lờ đờ và bơi lội quay vòng trên mặt nước hoặc đáy ao, lá lách sưng to, thận trước và lá lách xuất hiện những khối u trắng hay vàng Ngoài ra cá nhiễm nặng còn thấy những vết thương hình tròn ở gan, thận giữa, tuyến sinh dục, dạ dày và ruột Không có thương tổn ở tim và não Nhiều trường hợp thấy có khối u ở mang

Phòng trị: qua kiểm tra kháng sinh đồ cho thấy S epidermidis nhạy cảm với

Ampicilline (10 mg), Erythromycine (15 mg), Gentamycine (10 mg), Kanamycine (30 mg), Lincomycine (2 mg), Oxaccillin (1 mg), Oxytetracyline (30 mg), Penecilline G (10 UI), Streptomycine (10 mg) và đề kháng với sulfadiazine (300 mg), (Huang và ctv.,1998), Sulfonamide, Clortetracycline (Vũ Thị Tám và ctv., 1993)

2.6.6 Một số bệnh do ký sinh trùng

2.6.6.1 Bệnh trùng bánh xe

Tác nhân gây bệnh: một số loài trong họ trùng bánh xe như: Trichodina centrostrigata, T domerguei, T heterodentata, T nigra, T orientalis, Trichodinella epizootica, Tripartiella bulbosa, T clavodonta

Dấu hiệu bệnh lý: khi mới mắc bệnh, trên thân, vây cá có nhiều nhớt màu hơi trắng đục, ở dưới nước thấy rõ hơn so với khi bắt cá lên cạn Da cá chuyển màu xám, cá cảm thấy ngứa ngáy, thường nổi từng đàn lên mặt nước Một số con tách đàn bơi quanh bờ ao Khi bệnh nặng trùng bám dày đặc ở vây, mang, phá hủy các tơ mang khiến cá bị ngạt thở, những con bệnh nặng mang đầy nhớt và bạc trắng Cá bơi lội mất phương hướng Cuối cùng cá lật bụng mấy vòng, chìm xuống đáy ao và chết

Phân bố lan truyền bệnh: trùng bánh xe gây bệnh chủ yếu ở giai đoạn cá giống, là bệnh ký sinh đơn bào nguy hiểm nhất của giai đoạn này Trùng bánh xe ít gây bệnh ở giai đoạn cá thịt Khi ương cá trong nhà, bệnh gây ảnh hưởng nghiêm trọng tỷ lệ chết cao (70 – 100%) Bệnh thường phát vào mùa xuân, mùa thu, khi nhiệt độ nước 25 – 30oC

2.6.6.2 Bệnh trùng quả dưa

Tác nhân gây bệnh: trùng quả dưa Ichthyophthyrius multifiliis

Dấu hiệu bệnh lý: da, mang, vây của cá bệnh có nhiều trùng bám thành các hạt lấm tấm rất nhỏ, màu hơi trắng đục (đốm trắng), có thể thấy rõ bằng mắt thường (người nuôi cá còn gọi là bệnh vẩy nhớt) Da, mang cá có nhiều nhớt, màu sắc nhợt nhạt

Cá bệnh nổi đầu trên tầng mặt, bơi lờ đờ yếu ớt Lúc đầu cá tập trung gần bờ, nơi có cỏ rác, quẫy nhiều do ngứa ngáy Trùng bám nhiều ở mang, phá hoại biểu mô mang làm cá ngạt thở Khi cá yếu quá chỉ còn ngoi đầu lên để thở, đuôi bất động cắm xuống nước

Phân bố lan truyền bệnh: bệnh gặp ở nhiều loài cá nuôi Cá rô phi lưu qua đông ở miền Bắc hoặc nuôi trong nhà, thường bị bệnh trùng quả dưa làm cá chết hàng loạt Bệnh phát vào mùa xuân, mùa đông

2.6.6.3 Bệnh sán lá đơn chủ

Tác nhân gây bệnh: sán lá đơn chủ Cichlidogyrus tilapiae, C sclerosus, Gyrodactylus niloticus

Dấu hiệu bệnh lý: Cichlidogyrus, Gyrodactylus ký sinh trên da và mang cá,

làm cho mang và da cá tiết ra nhiều dịch nhờn ảnh hưởng đến hô hấp cá Tổ chức da và mang có sán ký sinh bị viêm loét tạo điều kiện cho vi khuẩn, nấm và một số sinh vật xâm nhập gây bệnh

Phân bố lan truyền bệnh: cá có thể bị bệnh khi ương giống với mật độ dày và có thể gây chết hàng loạt trong giai đoạn bể ương Bệnh phát vào mùa xuân, mùa thu, mùa đông

2.6.6.4 Bệnh rận cá

Tác nhân gây bệnh: rận cá Caligus sp

Dấu hiệu bệnh lý: rận cá thường ký sinh ở vây, mang cá rô phi, làm cho da cá bị viêm loét tạo điều kiện cho vi khuẩn, nấm, ký sinh trùng khác xâm nhập, vì vậy nó thường cùng lưu hành với bệnh đốm trắng, bệnh đốm đỏ, lở loét nên dẫn đến cá chết

hàng loạt Cá bị Caligus ký sinh có cảm giác ngứa ngáy, vận động mạnh trên mặt

nước, bơi lội cuồng dại, cường độ bắt mồi giảm

Phân bố lan truyền bệnh: rận cá ký sinh ở nhiều loài cá nuôi Cá rô phi nuôi mật độ dày, rận cá ký sinh đã gây chết hàng loạt ở các đầm nước lợ hoặc nước ngọt

2.7 Phương Pháp Phòng Bệnh Chung

Phòng trị bệnh cá là một vấn đề rất quan trọng, nhiều địa phương và hộ gia đình nuôi cá cần nhận rõ vai trò của công việc này

Phát hiện được bệnh cá đã khó, chữa bệnh cho cá lại càng khó hơn Vì cá sống trong môi trường nước không thể tiêm cho hàng ngàn, hàng vạn con cá hoặc rất

khó cấp thuốc qua thức ăn với đủ liều điều trị Nhưng với liều lượng bao nhiêu thì có tác dụng khỏi bệnh mà không làm cho cá bị ngộ độc thuốc cũng là vấn đề không dễ Vì vậy việc phòng bệnh cho cá hết sức quan trọng Nếu khi cá đã mắc bệnh phải phát hiện kịp thời và chuẩn đoán đúng bệnh thì việc điều trị mới có hiệu quả

Phòng bệnh cho cá

Bệnh cá thường phát sinh do những nguyên nhân sau:

− Do môi trường nước, thức ăn và điều kiện nhiệt độ không thích hợp cho đời sống của cá

− Do việc nuôi dưỡng chăm sóc không tốt để cá gầy yếu, sức đề kháng với bệnh tật kém

− Do thân thể cá bị xây xác, vi khuẩn có điều kiện xâm nhập vào vết thương − Khi thời tiết thay đổi đột ngột, oi bức rồi chuyển sang mưa giông làm môi trường nước thay đổi, thiếu oxy và xuất hiện nhiều khí độc làm cá nổi đầu chết hàng loạt

− Đối với cá nuôi bè với mật độ dày đặc khi có một vài con bệnh sẽ lây lan nhanh chóng làm cá chết hàng loạt

Nắm được những nguyên nhân nêu trên, ta cần thực hiện một số biện pháp phòng bệnh sau đây:

- Cải tạo và xử lý ao, bè thật kỹ trước khi nuôi - Tạo miễn dịch cho cá bằng vaccine

- Loại những con cá giống đã bị xây xác yếu sức trước khi thả

- Trước khi vận chuyển xuất nhập cá từ nơi khác cần phải kiểm tra dịch bệnh

2.8 Liên Cầu Khuẩn Streptococcus Iniae Gây Bệnh Trên Cá Rô Phi

2.8.1 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa

S iniae có dạng hình cầu, có thể đứng riêng lẻ, thành từng cặp hay tạo thành

chuỗi dài Vi khuẩn bắt màu gram dương

Vi khuẩn phát triển tốt trên các môi trường thạch Tryptic Soy, Brain Heart Infulsion, Muller – Hinton agar và thạch máu cừu Nhiệt độ nuôi cấy thích hợp 25 – 28 0C Sau 48h nuôi cấy, vi khuẩn tạo thành khuẩn lạc nhỏ màu trắng đục Một số chủng khuẩn lạc trong suốt có tính nhầy sau 24h nuôi cấy Trên môi trường thạch máu, khuẩn lạc tạo vòng dung huyết beta nhỏ, trong suốt, rìa không rõ Vi khuẩn không phát triển ở điều kiện pH 9,6; NaCl 6,5%; nhiệt độ 10 0C và 45 0C (Nguyen và Kanai, 1999)

S iniae thủy phân esculin và tinh bột, không thủy phân gelatin Vi khuẩn lên

men đường glucose, maltose, mannitol, không lên men arabinose, lactose, raffinose

và xylose Về đặc điểm sinh hóa khác, S iniae cho phản ứng catalase oxydase, VP,

indol và H2S âm tính, MR và DNase dương tính (Nguyen và Kanai, 1999)

2.8.2 Triệu chứng và bệnh tích

Thường xảy ra với tỷ lệ cá chết rất cao vào các tháng cuối mùa hè và đầu mùa thu Đây là khoảng thời gian nhiệt độ nước cao nhất trong năm Tại các thời điểm khác trong năm cá chết rải rác, ngoại trừ những tháng mùa đông lúc nhiệt độ nước xuống thấp nhất ở các nước ôn đới không thấy xuất hiện bệnh Về độ tuổi cá thường có bệnh, hầu hết báo cáo đề cập bệnh xảy ra trong giai đoạn nuôi thương phẩm

Cá bệnh có triệu chứng chung khá điển hình trên nhiều loài Cá bơi lờ đờ hay mất định hướng gần mặt nước Bên ngoài, cá bị trướng bụng do tích tụ dịch viêm xoang bụng, xuất huyết điểm, đốm đỏ ở vùng quanh miệng và hậu môn, xuất huyết nặng ở vây lưng và ngực, xuất huyết, viêm có mủ, lồi một hoặc cả hai mắt Bên trong gan, lách, thận nhạt màu và sưng to

2.8.3 Phương pháp phòng trị bệnh do liên cầu khuẩn gây ra

Phòng bệnh:

Các biện pháp như giảm mật độ nuôi, tránh cho ăn thức ăn thừa, vệ sinh bể nuôi cần được thực hiện thường xuyên Tránh đến mức tối đa chuyển đàn, chia đàn, phân cỡ cá trong thời gian dịch bệnh thường xảy ra

Trị bệnh:

Kháng sinh diệt khuẩn phổ rộng hay diệt khuẩn gram dương với tác dụng toàn thân có hiệu quả điều trị tốt, Erythromycin và một số kháng sinh khác như doxycyline, kitasamycin, ankil – trimethil – ammonium – calcium – oxytetraciline, josamycin, oleandomycin và lincomycin cũng thường được sử dụng trị bệnh do liên cầu khuẩn ở Nhật Bản (Kitao và Aoki, 1979)

2.8.4 Nghiên cứu huyết thanh học

Pier và ctv (1978) điều chế kháng huyết thanh thỏ kháng S iniae Kháng

huyết thanh thỏ này không cho phản ứng ngưng kết với bất kỳ loài vi khuẩn thuộc

giống Streptococcus nào khác

Theo kinh nghiệm chung của tác giả bài viết, các chủng S iniae phân lập tại

Nhật Bản có hai dạng khuẩn lạc khác nhau sau 24h ủ trên các môi trường thạch thích hợp Một loại khuẩn lạc có tính nhầy, trong và một dạng không nhầy, đục Khuẩn lạc nhầy có thể chuyển thành khuẩn lạc không nhầy khi kéo dài thời gian ủ nhưng không xảy ra trường hợp ngược lại Kháng huyết thanh thỏ điều chế từ tế bào vi khuẩn của chủng khuẩn lạc nhầy sẽ cho phản ứng ngưng kết với cả hai khuẩn lạc nhầy và không nhầy Kháng huyết thanh thỏ điều chế từ tế bào vi khuẩn của chủng khuẩn lạc không nhầy sẽ chỉ cho phản ứng ngưng kết với dạng khuẩn lạc đó Vi khuẩn tạo khuẩn lạc nhầy có độc lực mạnh hơn vi khuẩn tạo khuẩn lạc không nhầy

2.9 Cơ Chế Hình Thành Kháng Huyết Thanh 2.9.1 Các định nghĩa

Chất sinh miễn dịch là chất khi đưa vào cơ thể động vật ở điều kiện thích hợp có khả năng gây đáp ứng miễn dịch

Kháng nguyên là chất có khả năng liên kết với kháng thể Tất cả các chất sinh miễn dịch đều là kháng nguyên

Kháng thể là các globulin có trong huyết thanh của động vật có khả năng liên kết đặc hiệu với kháng nguyên đã kích thiùch sinh ra nó Kháng thể theo định nghĩa trên đây được gọi là kháng thể miễn dịch hay kháng thể đặc hiệu

Kháng thể chủ yếu được tìm thấy trong huyết thanh của động vật, do vậy huyết thanh chứa kháng thể kháng kháng nguyên được gọi là kháng huyết thanh

2.9.2 Liều lượng và đường vào của kháng nguyên

Liều lượng và cách đưa kháng nguyên vào cơ thể ảnh hưởng lớn đến khả năng sinh kháng thể Khi đưa liều quá ít sẽ không đủ kích thích đáp ứng miễn dịch, còn quá nhiều có thể dẫn đến trạng thái tê liệt miễn dịch Ở tình trạng tràn ngập kháng nguyên sẽ không đáp ứng miễn dịch Khi đưa lượng nhỏ kháng nguyên vào cơ thể sẽ kích thích mạnh tế bào T, tạo trí nhớ miễn dịch và dẫn đến đáp ứng miễn dịch Nhưng nếu tiêm nhắc lại thì đáp ứng miễn dịch dịch thể sẽ tăng lên, tạo khả năng miễn dịch cao và bền vững Đó là nguyên lý tiêm vacxin

Trong tự nhiên kháng nguyên có thể vào cơ thể qua nhiều con đường khác nhau như qua niêm mạc đường hô hấp, sinh dục, qua da (do côn trùng đốt hoặc do xây xác) Người ta có thể chủ động tiêm kháng nguyên vào trong da, dưới da, trong bắp thịt hay tĩnh mạch, giúp kháng nguyên nhanh chóng tiếp cận với hệ thống miễn dịch

2.9.3 Tính đặc hiệu của kháng nguyên

Sự liên kết của kháng nguyên và kháng thể hay giữa kháng nguyên và tế bào lympho luôn mang tính đặc hiệu cao Không phải toàn bộ kháng nguyên tham gia vào kích thích hệ thống miễn dịch mà chỉ có một phần nhất định của kháng nguyên gọi là quyết định kháng nguyên hay epitop mới liên kết với kháng thể hoặc tế bào lympho Phần tương ứng với quyết định kháng nguyên nằm trên mỗi kháng thể gọi là vị trí kết hợp kháng nguyên hay paratop, còn phần tương ứng với tế bào lympho là thụ thể, thụ thể của tế bào T (TCR) Mỗi epitop chỉ gắn đặc hiệu với một paratop hoặc TCR và chỉ sinh ra một dòng kháng thể đặc hiệu

2.9.4 Các loại kháng nguyên

Kháng nguyên trong tự nhiên rất đa dạng, tuỳ theo quan điểm và mức độ quan tâm mà có sự phân loại khác nhau Một vài loại kháng nguyên điển hình:

Kháng nguyên vi khuẩn: thành phần kháng nguyên của vi khuẩn rất phức tạp, có thể coi tế bào vi khuẩn như là một túi chứa kháng nguyên Có hai loại: kháng nguyên hòa tan – là các enzym ngoại bào, ngoại độc tố tiết ra bên ngoài và loại kháng nguyên không hòa tan – là thành phần của tế bào

Kháng ngyên virut: có hai nhóm chính đó là kháng nguyên V – là một phần hoặc toàn bộ hạt virut nguyên vẹn có khả năng kích thích sinh kháng thể trung hòa virut và kháng nguyên S là kháng nguyên hòa tan Kháng nguyên S cấu trúc khuếch tán từ hạt virut, có thể là glycoprotein vỏ ngoài hoặc acid nucleic Kháng nguyên S không cấu trúc tách từ tế bào chủ đã bị nhiễm virut

Kháng nguyên protein: là kháng nguyên mạnh nhất vì có trọng lượng phân tử lớn và có cấu trúc đa dạng do các acid amin sắp xếp thay đổi theo các tổ hợp khác nhau Tính đặc hiệu phụ thuộc rất nhiều vào trình tự acid amin cũng có thể tạo nên một dòng kháng thể khác Khi dùng enzym phá vỡ các cấu trúc lập thể (bậc 2, 3, 4) của protein sẽ làm thay đổi tính kháng nguyên Các polypeptic có trọng lượng phân tử thấp, có tính kháng nguyên yếu do cấu trúc đơn điệu

Kháng nguyên polysaccarite: đa số polysaccarite là kháng nguyên yếu vì cấu trúc lặp đi lặp lại, thiếu sự đa dạng về mặt hóa học và khi vào cơ thể chúng bị phân giải Kháng nguyên polysaccarite điển hình là kháng nguyên nhóm máu A, B Tuy nhiên thông thường trong cơ thể polysaccarite thường tham gia vào các thành phần phức tạp hơn như glycoprotein màng vi khuẩn, vỏ capxit của vi khuẩn, …

Kháng nguyên lipit: bản thân lipit không phải là chất sinh miễn dịch, nhưng khi gắn với protein ( lipoprotein) thì trở thành kháng nguyên

Kháng nguyên acid nucleic: acid nucleic (ADN, ARN) là kháng nguyên yếu, nhưng khi gắn với protêin (nucleoprotein) hoạt tính sinh miễn dịch sẽ tăng lên

2.9.5 Các tế bào tham gia vào đáp ứng miễn dịch

Tế bào B (Bone): tiền thân của tế bào Plasma ( tương bào) sản xuất kháng thể

Tế bào T ( Thymus): quần thể tế bào lympho biệt hóa trong tuyến ức

Tế bào T hỗ trợ: tế bào T hỗ trợ tế bào B biệt hóa thành tế bào plasma sản xuất kháng thể

Interluekin (IL 1 – IL 10): do bạch cầu tiết ra có tác dụng kích thích hoạt hóa và biệt hóa tế bào lympho

Trí nhớ miễn dịch: sau khi tiếp xúc với kháng nguyên lần 1 một số tế bào B và T có khả năng lưu trữ thông tin để khi gặp lại KN có khả năng sản xuất KT

Biệt hóa tế bào B: sự biến đổi tế bào nguồn thành tế bào B tăng trưởng trong tủy xương, giai đoạn không cần kích thích của kháng nguyên sau đó biến đổi thành tế bào plasma (cần sự kích thích của kháng nguyên)

Epitop: phần kháng mang tên quyết định kháng nguyên được nhận bởi Paratop của KT hoặc TCR của tế bào T

Paratop: vị trí kết hợp của KT (nơi gắn với quyết định KN)

Thụ thể đặc hiệu tế bào T (TCR: T – cell receptor) là protein màng cắm sâu vào màng sinh chất giúp tế bào T nhận diện được kháng nguyên

Phân tử phức hợp phù hợp tổ chức chính (MHC: Major Histocompatibility Complex) hoạt động như điểm trung chuyển giúp tế bào T phân biệt kháng nguyên lạ hay quen

2.9.5.1 Tế bào lympho

Tế bào lympho phân tán khắp cơ thể trong tuần hoàn máu và bạch huyết Có hai loại tế bào lympho: lympho B (gọi tắt là tế bào B) và lympho T ( gọi tắt là tế bào T) Tuy cả hai đều có nguồn gốc chung là tế bào nguồn trong tủy xương nhưng tế bào T được biệt hóa và trưởng thành trong tuyến ức ( Thymus, nên ký hiệu là T) còn tế bào B biệt hóa và trưởng thành trong tủy xương (Bone marrow nên ký hiêïu là B) Bảng 2.1 Tỷ lệ phân bố của các tế bào lympho T và B

Tuyến ức Nhiều Rất hiếm

Kháng nguyên sau khi xử lý sẽ được đại thực bào dùng để bắt đầu giai đoạn sớm của quá trình tổng hợp kháng thể Ở đây đại thực bào đóng vai trò tế bào trình diện kháng nguyên, gọi tắt là APC (Antigen presenting cell) Có nghĩa là chúng sẽ đẩy kháng nguyên lạ ra bề mặt, tạo điều kiện cho kháng nguyên tiếp cận tế bào T

2.9.6 Tá chất

2.9.6.1 Nguyên lý tác dụng của tá chất

Tá chất là chất phụ gia khi trộn với kháng nguyên sẽ tăng cường đáp ứng miễn dịch với kháng nguyên đó Khi gắn với tá chất, kháng nguyên bị phân giải chậm hơn, phóng thích dần dần trong cơ thể tương tự như khi tiêm kháng nguyên liều nhỏ nhiều lần Tá chất tăng cường đáp ứng miễn dịch bằng cách kích thích đại thực bào làm nhiệm vụ thực bào hoặc kích thích tế bào T và B Tá chất là những chất trơ khó phân giải như dầu, paraphin, hydroxyt nhôm, …

Cơ chế tác động của tá chất dùng trong vacxin được giải thích như sau:

Tá chất có tác dụng gây viêm, kích thích quá trình thực bào giúp quá trình đáp ứng miễn dịch xảy ra mạnh hơn

Tá chất hấp thu kháng nguyên và thải kháng nguyên ra từ từ ở chỗ tiêm Tá chất còn có tác dụng lên tế bào lympho T hỗ trợ

2.9.6.2 Các loại tá chất thông dụng a Nhóm muối nhôm

Nhôm hydroxit Al(OH)3 – keo phèn Nhôm phosphat AlPO4

Nhôm kali sulphat AlK(SO4)2.12H2O – phèn chua

Trong nhóm muối nhôm thì dung dịch phèn chua và keo phèn thường được dùng nhất trong sản xuất vacxin

Dung dịch phèn chua dùng làm chất bổ trợ được điều chế khá đơn giản, được pha thành dung dịch, hấp tiệt trùng và cho vào canh trùng đã diệt bằng formol

Dung dịch keo phèn dùng làm chất bổ trợ được điều chế phức tạp hơn

b Nhóm nhũ dầu

Ở dạng nhũ nước trong dầu thì kháng nguyên nằm trong hạt nước trong dung dịch dầu sẽ có hiệu lực tốt hơn khi kháng nguyên nằm tự do trong nước ở dạng nhũ

dầu trong nước Các hạt nhũ cũng di chuyển từ chỗ tiêm vào hạch lympho và đôi khi còn xa hơn

Montanide là dung dịch nhũ tương, được sản xuất dưới nhiều dạng để phù hợp làm chất bổ trợ cho các loại vaccine: dạng nhũ tương nước trong dầu (water in oil), dạng nhũ tương dầu trong nước (oil in water) hoặc dạng nước trong dầu trong nước (water in oil in water) Về nguồn gốc Montanide có thể là dầu khoáng (mineral oil), dầu không khoáng (nonmineral oil) hoặc trộn lẫn

Dạng nhũ tương Montanide nước trong dầu là chất bổ trợ cho hiệu quả cao, có tác dụng kéo dài miễn dịch Dạng này là nhũ tương có tính ổn định cao và độ nhớt thấp Sử dụng dạng nhũ tương nước trong dầu còn cho phép giảm liều vaccine hoặc giảm nồng độ kháng nguyên trong một liều vaccine

Dạng nhũ tương Montanide dầu trong nước rất dễ thay đổi, dạng này dùng làm chất bổ trợ cho vaccine có đáp ứng miễn dịch ngắn

2.9.7 Cơ chế hình thành kháng thể

Kháng nguyên được đưa tới mọi nơi trong cơ thể nhờ hệ máu và hệ bạch huyết Kháng thể được tạo thành ở cả lách và hạch lympho nhưng không được tạo thành ở gan Nếu ta tiêm kháng nguyên vào tĩnh mạch thì lách là nơi tạo nhiều kháng thể nhất, ngược lại nếu ta tiêm dưới da, trong da hay màng bụng thì kháng thể sẽ được tạo thành nhiều trong hạch lympho

Sau khi có sự xâm nhập đầu tiên của kháng nguyên là thời kỳ tiềm ẩn, lúc này không thấy bất kỳ kháng thể nào xuất hiện trong máu Sau đó nồng độ kháng thể tăng dần rồi lại giảm xuống Phản ứng với muỗi tiêm thứ nhất gọi là đáp ứng kháng thể nguyên phát Khi tiêm kháng nguyên lần hai sau vài ngày hay vài tuần, nồng độ kháng thể tăng lên nhanh chóng, đạt đến 10 – 100 lần nhiều hơn nồng độ tiêm lần thứ nhất Sự tăng nhanh chóng nồng độ kháng thể này được gọi là đáp ứng kháng thể thứ phát Nồng độ kháng thể giảm dần theo thời gian, nhưng ở các lần tiêm sau nữa nó sẽ lặp lại

Sơ đồ 2.1 Sự biệt hóa tế bào B thành tế bào plasma sản xuất kháng thể

2.9.8 Bản chất và tính chất của kháng thể

Trong huyết thanh của người và động vật có vú chứa albumin, α, β, γ - globulin, thì γ - globulin là kháng thể Vì bản chất của kháng thể là protein, nên các tác nhân hóa, lý như nhiệt độ, axit, kiềm làm biến tính protein thì cũng có thể phá hủy kháng thể

Hoạt tính kháng thể phụ thuộc vào pH môi trường và nhiều yếu tố khác Amon sulfat, natri sulfat, cồn ở 50C có thể làm kết tủa kháng thể nhưng không làm mất tính chất của chúng, do đó người ta lợi dụng tính chất này để tinh khiết kháng thể

Hai đặc tính sinh học quan trọng của kháng thể là khả năng phản ứng đặc hiệu với kháng nguyên và khả năng biểu hiện như một kháng nguyên, tức là kích thích sinh kháng thể chống lại chính nó Kháng thể chống lại kháng thể là kháng kháng thể

MHC - II

Tế bào TH

Tế bào B Kháng nguyên Sinh interleukin

2.9.9 Phản ứng ngưng kết

Khi cho kháng thể đặc hiệu phản ứng với kháng nguyên hòa tan ở điều kiện chuẩn sẽ xuất hiện kết tủa có thể nhìn thấy bằng mắt thường Phản ứng này được dùng phổ biến để phát hiện kháng nguyên khi đã có sẵn kháng thể đặc hiệu hoặc để phát hiện kháng thể khi đã có sẵn kháng nguyên hoà tan đặc hiệu Phản ứng kết tủa bị ức chế khi có quá thừa kháng nguyên hoặc kháng thể Sự kết tủa tối ưu khi có nồng độ kháng nguyên – kháng thể thích hợp

Ở phản ứng kết tủa đòi hỏi phải có kháng nguyên hòa tan, còn ở phản ứng ngưng kết lại cần các kháng nguyên hữu hình Đó là các kháng nguyên có kích thước lớn như hồng cầu và tế bào vi sinh vật Phản ứng ngưng kết nhạy hơn phản ứng kết tủa nên được dùng để định tính và bán định lượng kháng thể trong huyết thanh

Đầu tiên cho kháng nguyên hữu hình vào dãy ống nghiệm có độ pha loãng kháng thể tăng dần (ống 1 – 1/20, ống 2 – 1/40, ống 3 – 1/80, …) Hiệu giá kháng thể là độ pha loãng cao nhất mà vẫn xảy ra ngưng kết Chẳng hạn ở ống thứ 3 có độ pha loãng lớn nhất mà vẫn quan sát thấy ngưng kết thì ta nói hiệu giá của kháng huyết thanh là 80

III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời Gian và Địa Điểm Thực Hiện Đề Tài

Thời gian thực hiện đề tài từ tháng 4/2005 đến tháng 8/2005

Địa điểm thu mẫu: khu vực nuôi cá bè tại sông Cái Tắc, phường Long Phước, Quận 9

Địa điểm phân tích mẫu: phòng thí nghiệm Khoa Thủy Sản Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh

3.2 Vật Liệu Và Trang Thiết Bị Dùng trong Nghiên Cứu 3.2.1 Dụng cụ nghiên cứu

Ống nghiệm, đĩa pechi, que cấy, đèn cồn, kéo, hộp đựng bông, bình tam giác, pippet, lam, lamella, …

3.2.2 Trang thiết bị máy móc

Gồm: Tủ lạnh, tủ cấy vi sinh, tủ khử trùng dụng cụ, kính hiển vi độ phóng đại 100 lần, máy chụp ảnh, máy ly tâm 6000 vòng/phút, máy lắc, nồi hấp áp lực

3.2.3 Môi trường nuôi cấy và bảo quản giống vi khuẩn

Môi trường thạch: Nutrient Agar (NA), Muller Hinton Agar (MHA) Môi trường canh: Nutrient Broth (NB)

Môi trường giữ giống vi khuẩn gồm Nutrient Broth (NB) và glycerol