Phương pháp phân loại nấm men
Nấm menA. PHÂN LOẠI NẤM MENB - CÁC PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM DÙNG ĐỂ ĐỊNH TÊN NẤM MEN1. Quan sát hình thái tế bào nấm men và đo kích thước2. Nhuộm màu tế bào nấm men: - Thuốc nhuộm soudan III: - Thuốc nhuộm đen Soudan B (theo Burdon): - Thuốc nhuộm safranin: - Dung dịch nhuộm nhân tế bào: - Dung dịch lục malachit:3. Quan sát quá trình nảy chồi của tế bào nấm men - Môi trường mạch nha - cao nấm men - glucoza - pepton:4. Quan sát khuẩn ty giả: - Môi trường khoai tây - glucoza: - Môi trường ngô:5. Quan sát bào tử bắn (Ballistoconidium, Ballistospore): - Môi trường bột ngô:6. Quan sát bào tử túi (ascospore): a. Môi trường miếng thạch cao: b. Môi trường miếng thạch cao cải tiến: c. Môi trường Gorodkowa (1908) d. Xử lý với tia tử ngoại: e. Môi trường thạch nước f. Môi trường Amano (1950) g. Môi trường dịch tinh bột khoai tây 0,5% (Almeida và Lacaza) h. Môi trường Kleyn:6. Quan sát đặc tính nuôi cấy7. Thí nghiệm xác định khả năng lên men các loại đường8. Thí nghiệm xác định khả năng đồng hoá các hợp chất cacbon khác nhau: 8.1. Phương pháp đánh giá khả năng sinh trưởng trên môi trường dịch thể: 8.2. Sinh trưởng trên môi trường thạch 8.3. Phương pháp dùng con dấu9. Thí nghiệm xác định khả năng đồng hoá các nguồn nitơ 10. Thí nghiệm xác định khả năng hình thành hợp chất loại tinh bột:11. Thí nghiệm xác định nhu cầu vitamin cho sinh trưởng của nấm men:12. Đánh giá sự sinh trưởng trên môi trường có nồng độ đường cao13. Đánh giá sự phát triển khi có mặt Cycloheximit14. Xác định hoạt tính phân giải Urea (hay hoạt tính Ureaza)15. Thí nghiệm làm đổi màu Diazonium blue B (DBB test) 1. Môi trường Acetat (g/l) (M.C. Clary et al., 1959) 2. Môi trường thạch Gorodkowa (Dodder và Kreger - van Rij, 1952) (g/l) 3. Môi trường cao ngô (Lodder và Kreger - van Rij, 1952) 4. Môi trường thạch V-8 (Wicketam và cộng sự, 1946) 5. Môi trường pepton - cao men - glucoza (Vander Walt và Codder, 1970) 6. Thành phần môi trường tổng hợp (tinh khiết về thành phần hoá học) 7. Môi trường quan sát hình thái tế bào nấm men: 8. Môi trường nitơ cơ sở: 9. Môi trường carbon cơ sở: 10. Môi trường không có vitamin A. PHÂN LOẠI NẤM MENThuật ngữ Nấm men (yeast, levure) chỉ là tên chung để chỉ nhóm vi nấm thường có cấu tạo đơn bào và thường sinh sôi nảy nở bằng phương pháp nẩy chồi (budding). Nấm men không thuộc về một taxon phân loại nào nhất định, chúng có thể thuộc ngành Nấm túi (Ascomycota) hoặc ngành Nấm đảm (Basidiomycota). Nảy chồi là cách sinh sản vô tính điển hình của nấm men. Khi đó thành tế bào mở ra để tạo ra một chồi (bud). Chồi phát triển thành tế bào con và có thể tách khỏi tế bào mẹ ngay từ khi còn nhỏ hoặc cũng có thể vẫn không tách ra ngay cả khi lớn bằng tế bào mẹ. Nhiều khi nhiều thế hệ vẫn dính vào một tế bào đầu tiên nẩy chồi và tạo thành một cành nhiều nhánh tế bào trong giống như cây xương rồng. Chồi có thể mọc ra theo bất kỳ hướng nào (nẩy chồi đa cực- multilateral budding) hoặc chỉ nẩy chồi ở hai cực (nẩy chồi theo hai cực- Bipolar budding) hoặc chỉ nảy chồi ở một cực nhất định (nẩy chồi theo một cực – monopolar budding). Nấm men còn có hình thức sinh sản phân cắt như vi khuẩn. Có thể hình thành một hay vài vách ngăn để phân cắt tế bào mẹ thành những tế bào phân cắt (fission cells). Điển hình cho kiểu phân cắt này là các nấm men thuộc chi Schizosaccharomyces. Ở một số nấm men thuộc ngành Nấm đảm, có thể sinh ra dạng bào tử có cuống nhỏ (sterigmatoconidia) hoặc bào tử bắn (ballistoconidia hay ballistospore). Bào tử có cuống nhỏ thường gặp ở các chi nấm men Fellomyces, Kockovaella và Sterigmatomyces, khi đó chồi sinh ra trên một nhánh nhỏ và tách ra khi nhánh bị gẫy. Bào tử bắn được sinh ra trên một gai nhọn của tế bào nấm men và bị bắn ra phí đối diện khi thành thục. Nếu cấy các nấm men sinh bào tử bắn thành hình zich zắc trên thạch nghiêng hoặc trên đĩa Petri thì sau một thời gian nuôi cấy sẽ thấy xuất hiện trên thành ống nghiệm hoặc nắp đĩa Petri có một hình zích zắc khác được hình thành bởi các bào tử bắn lên. Bào tử bắn là đặc điểm của nấm men thuộc các chi Bensingtonia, Bullera, Deoszegia, Kockovaella, Sporobolomyces Một số nấm men còn có một hình thức sinh sản vô tính nữa, đó là việc hình thành các bào tử đốt (arthroconidia hay arthrospore). Khi đó sẽ hình thành các vách ngăn ở đầu các nấm men dạng sợi, sau đó tách ra thành các bào tử đốt. Loại này gặp ở các nấm men thuộc cả hai ngành: Nấm túi và Nấm đảm. Thường gặp nhất là ở các chi nấm men Galactomyces, Dipodascus (dạng vô tính là Geotrichum) và Trichosporon. Nấm men còn có thể tạo thành dạng tản (thallus) dưới dạng khuẩn ty (sợi nấm- hyphae) hay khuẩn ty giả (giả sợi nấm – pseudohyphae). Dạng sinh sản hữu tính ở nấm men là dạng các bào tử túi (ascospore) được sinh ra từ các túi (asci). Có thể xảy ra sự tiếp hợp (conjugation) giữa hai tế bào nấm men tách rời hoặc giữa tế bào mẹ và chồi. Còn có cả sự biến nạp trực tiếp trong 1 tế bào sinh dưỡng (vegetative cell), tế bào này biến thành túi không qua tiếp hợp (unconjugated ascus). Thường trong mỗi túi có 4 hay đôi khi có 8 bào tử túi. Trong một số trường hợp lại chỉ có 1-2 bào tử túi. Bào tử túi ở chi Saccharomyces có dạng hình cầu, hình bầu dục; ở chi Hanseniaspora và loài Hansenula anomala có dạng hình mũ ; ở loài Hansenula saturnus bào tử túi có dạng quả xoài giữa có vành đai như dạng Sao Thổ. Một số bào tử túi có dạng kéo dài hay hình xoắn…Bề mặt bào tử túi có thể nhẵn nhụi, có thể xù xì hoặc có gai… Bào tử màng dày (hay bào tử áo- chlamydospore) là dạng bào tử giúp nấm men vượt qua được điều kiện khó khăn của ngoại cảnh, chứ không phải là hình thức sinh sản. Một số nấm men còn có thể sinh vỏ nhày.Bên cạnh rất nhiều nấm men có ích như là các loại nấm men dùng để sản xuất rượu trắng, rượu vang, bia, làm nở bột mỳ, tạo sinh khối giàu protein và vitamin, sản xuất enzym, sản xuất acid citric từ khí thiên nhiên, sản xuất riboflavin (vitamin B2)… còn có những loại nấm men có thể gây bệnh. N= nhân; M= ty thể; Va= không bào; ER= mạng lưới nội chất; Ves= bào nang Bào tử bắn Phân cắt tế bào Nảy chồi Bào tử túiBào tử màng dàyBào tử đốt Vỏ nhày ở nấm men Một vài loài nấm men gây bệnh ở người: Candida albicansCryptococcus neoformansĐể phân loại nấm men người ta phải tiến hành nghiên cứu các đặc điểm sau đây: *Đặc điểm hình thái: tế bào, khuẩn lạc, kiểu nẩy chồi, các dạng bào tử vô tính và hữu tính, [...]... chồi của tế bào nấm men (sử dụng cho tế bào nấm men dinh dưỡng không có dạng sợi - non filamelletous vegetative cells) Cấy một vòng que cấy tế bào nấm men một ngày tuổi vào bình nón loại 100ml chứa 30ml môi trường dịch thể (môi trường nước chiết mạch nha, môi trường cao nấm men- pepton-glucoza hay môi trường mạch nha - cao nấm men - glucoza - pepton) - Môi trường mạch nha - cao nấm men - glucoza - pepton:... giải trình tự ADN và lai ADN B - CÁC PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM DÙNG ĐỂ ĐỊNH TÊN NẤM MEN 1 Quan sát hình thái tế bào nấm men và đo kích thước Khi xác định hình thái và kích thước tế bào nấm men người ta thường nuôi cấy nấm men trong môi trường thạch - mạch nha và môi trường mạch nha dịch thể Nếu sử dụng các môi trường khác thì hình thái và kích thước tế bào nấm men có thể thay đổi, không phù hợp với... tiến hành đầu tiên bằng glucoza Nếu nấm men có khả năng lên men glucoza thì hãy làm tiếp thí nghiệm với các loại đường khác Mỗi ngày quan sát kết quả lên men một lần, quan sát trong 10 ngày liền 8 Thí nghiệm xác định khả năng đồng hoá các hợp chất carbon khác nhau: Đây là đặc điểm sinh lý quan trọng dùng trong phân loại Có 2 phương pháp chủ yếu được dùng là phương pháp đánh giá khả năng sinh trưởng... dịch tự phân nấm men vô trùng Cấy nấm men và nuôi cấy 250C trong 1-2 tuần Sau đó dùng thuốc thử Lugol để kiểm tra xem có hình thành hợp chất loại tinh bột hay không Nếu có thì vết cấy sẽ xuất hiện màu xanh Phương Tâm Phương (Trung Quốc) đề nghị sử dụng môi trường dịch thể sau đây: (NH4)2SO4: 5g KH2PO4: 1g MgSO4.7H2O: 0,5 g CaCl2.2H2O: 0,1 g NaCl: 0,1 g Cao nấm men: Glucoza: 1g 30 g Nước: 1000 g Phân vào... tính nuôi cấy của nấm men người ta thường cấy nấm men lên môi trường dịch thể, môi thường thạch nghiêng và môi trường thạch đĩa (hoặc dùng chai Roux) Cấy nấm men vào các ống nghiệm đựng 3ml môi trường mạch nha 10-150 Baling (xem phần “Quan sát hình thái tế bào nấm men và đo kích thước”) Nuôi cấy ở 250C rồi sau 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ và 198 giờ lấy ra quan sát Cần quan sát xem nấm men có phát triển... nhung hay gai, có nếp nhăn hay không? - Màu sắc khuẩn lạc 7 Thí nghiệm xác định khả năng lên men các loại đường Khả năng lên men các loại đường là một trong những chỉ tiêu quan trọng được sử dụng để phân loại nấm men Trong thí nghiệm này người ta thường sử dụng môi trường nước chiết giá đậu hay môi trường chiết nấm men 0,5% - Cách làm môi trường nước chiết giá đậu: cân 200g giá đậu thêm 1000ml nước Đun... dạng tương tự như vậy nhưng bề mặt có gai Một số loại nấm men lại có bào tử túi dài, có khi hình xoắn Thường thường nấm men tạo thành bào tử túi sau 5-10 ngày nuôi cấy trên môi trường thạch mạch nha Muốn quan sát chỉ việc lấy một ít nấm men làm tiêu bản soi tươi không cần nhuộm màu Mục đích việc quan sát bào tử túi phải trả lời ba câu hỏi sau đây: 1 Nấm men có hình thành bào tử túi hay không 2 Bào tử... dụng Để quan sát tế bào nấm men có thể dùng dung dịch nigrozin 5% Khi đó tế bào sẽ không bắt màu, có thể phân biệt rõ trên một nền màu lam đen Để quan sát bào tử túi (tránh lầm với các không bào) có thể sử dụng một số các phương pháp nhuộm bào tử đã được giới thiệu trong chương IV (phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học tập 1 NXB KHKT 1971) Cũng có thể nhuộm bào tử túi bằng phương pháp sau đây: Rỏ 1 giọt... thước tế bào nấm men người ta thường sử dụng trắc vi thị kính) Số tế bào nấm men được đo không ít hơn 20 Chú ý là phải đo các tế bào trưởng thành chứ không đo các chồi mới nảy sinh Tế bào nấm men có hình thái và kích thước khác nhau tuỳ loài, tuỳ chi Chúng có thể có hình cầu, hình bầu dục, hình trứng, hình quả chanh châu Âu, hình ống v.v Khi quan sát tế bào nấm men dưới kính hiển vi có thể phân biệt... biết nấm men có hay không có khả năng lên men từng nguồn đường Có nấm men chỉ có thể phát triển ở bề mặt dịch huyền phù và chúng có khả năng đồng hoá các nguồn đường này - Chú ý: Theo phương pháp này một số trường hợp CO 2 tạo ra thấp phải xác định bằng điện cực CO 2 hay dùng áp kế Warburg Trong điều kiện có quá ít lượng đường dùng làm thí nghiệm còn có thể hút môi trường chứa đường (và cấy nấm men) . Nấm menA. PHÂN LOẠI NẤM MENB - CÁC PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM DÙNG ĐỂ ĐỊNH TÊN NẤM MEN1 . Quan sát hình thái tế bào nấm men và đo kích thước2.. bào nấm men: 8. Môi trường nitơ cơ sở: 9. Môi trường carbon cơ sở: 10. Môi trường không có vitamin A. PHÂN LOẠI NẤM MENThuật ngữ Nấm men