(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền

(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền(Luận án tiến sĩ) - Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) trên bệnh nhân ung thư dạ dày lan tỏa di truyền

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH HƢƠNG NGHIªN CøU §éT BIÕN GEN CDH1 (E - cadherin) TR£N BƯNH NHÂN UNG THƯ Dạ DàY LAN TỏA DI TRUYềN LUN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI *** NGUYỄN TH THANH HNG NGHIêN CứU ĐộT BIếN GEN CDH1 (E - cadherin) TRÊN BệNH NHÂN UNG THƯ Dạ DàY LAN TáA DI TRUN Chun ngành : Hóa sinh y học Mã số : 62720112 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đặng Thị Ngọc Dung HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập thực luận án nhận nhiều giúp đỡ, bảo tận tình quan, đơn vị, Thầy cơ, đồng nghiệp, bạn bè, bệnh nhân gia đình thân u Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Đặng Thị Ngọc Dung, người thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt cho kiến thức, phương pháp nghiên cứu khoa học vô quý báu, người giúp đỡ, động viên tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình thực luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến: - Ban Giám hiệu, phòng Quản lý Đào tạo Sau đại học – Trường Đại học Y Hà Nội, Ban Giám đốc BV Phụ sản TW tạo điều kiện, giúp đỡ để học tập hoàn thành luận án - GS TS Tạ Thành Văn, Hiệu trưởng, Trưởng mơn Hóa sinh – Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện cho tơi q trình học tập thực luận án - TS Nguyễn Thúy Hương, Bộ môn Giải phẫu bệnh – Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận án - Tập thể cán nhân viên khoa Sinh hóa – BV Phụ sản TW chia sẻ, động viên tạo điều kiện cho tơi q trình công tác học tập - Tập thể cán nhân viên Trung tâm Kiểm chuẩn chất lượng – Xét nghiệm Y học, thầy mơn Hóa sinh trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ suốt trình làm nghiên cứu - Các em học viên bác sĩ nội trú Hóa sinh: Trần Đức Anh, Ngô Diệu Hoa, Đặng Thị Nga, Lê Thị Yến, Hàn Thị Thanh Thủy giúp đỡ, đồng hành với tơi q trình nghiên cứu - Tơi xin gửi lời cảm ơn đến bệnh nhân gia đình họ tin tưởng, giúp đỡ hợp tác với tơi q trình làm nghiên cứu để tơi hồn thành luận án - Xin cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp giúp đỡ q trình học tập, cơng tác nghiên cứu - Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc, tình cảm u q đến bố mẹ tơi, bố mẹ chồng, anh chị em gia đình ln yêu thương, động viên chia với thời gian qua Cảm ơn chồng yêu quý, người hi sinh nhiều cho nghiệp tôi, chỗ dựa vững động lực vơ to lớn để tơi hồn thành nhiệm vụ Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Nguyễn Thị Thanh Hƣơng LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Thị Thanh Hương, nghiên cứu sinh khóa 35, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa sinh Y học, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS.TS Đặng Thị Ngọc Dung Cơng trình không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Ngƣời viết cam đoan Nguyễn Thị Thanh Hƣơng DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt AJCC APC CDH1 EC EGFR EMT GAPPS GSK-3 GTT HMMD H.Pylori IGCLC MLPA NST Nu PCR SHPT SIFT SNP TNM UICC UTBM UTDD WHO Tên tiếng Anh American joint committee on cancer Adenomatous polyposis coli Cadherin-1 Extracellular Cadherin Epidermal growth factor receptor Tên tiếng Việt Ủy ban ung thư Hoa Kỳ Tiểu phần ngoại bào Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì Epithelial – mesenchymal transitions Chuyển đổi biểu mô-trung mô Ung thư tuyến dày hội chứng polyp đại tràng dày Glycogen synthase kinase 3 Giải trình tự Hóa mô miễn dịch Vi khuẩn Helicobacter Pylori International Gastric Cancer Linkage Hiệp hội liên kết ung thư dày giới Consortium Multiplex ligation-dependent probe amplification Nhiễm sắc thể Nucleotide Phản ứng chuỗi polymerase Polymerase Chain Reaction Sinh học phân tử Thuật tốn xếp khơng Sorting Intolerant from Tolerant dung nạp từ dung nạp sai Đa hình đơn nucleotide Single Nucleotide Polymorphisms Khối u nguyên phát - Hạch Tumor – Nodes – Metastasis bạch huyết - Di Hiệp hội kiểm soát ung thư Union for international cancer quốc tế control Ung thư biểu mô Ung thư dày Tổ chức y tế giới World Health Organization MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Ung thư dày lan tỏa di truyền 1.1.1 Lịch sử phát dịch tễ học 1.1.2 Các yếu tố nguy 1.1.3 Đặc điểm lâm sàng 12 1.1.4 Giải phẫu bệnh 13 1.1.5 Chẩn đoán ung thư dày lan tỏa di truyền 17 1.1.6 Chẩn đoán giai đoạn ung thư dày 18 1.1.7 Điều trị tiên lượng 20 1.2 Vai trò gen CDH1 ung thư dày lan tỏa di truyền 22 1.2.1 Cấu trúc chức gen CDH1 22 1.2.2 Cơ chế gây bệnh gen CDH1 ung thư dày lan tỏa di truyền 25 1.2.3 Đặc điểm di truyền ung thư dày lan tỏa di truyền 28 1.2.4 Tình hình nghiên cứu ung thư dày lan tỏa di truyền đột biến gen CDH1 giới Việt Nam 30 1.2.5 Quản lý bệnh ung thư dày lan tỏa di truyền đột biến gen CDH1 32 1.3 Các phương pháp phát đột biến gen CDH1 36 1.3.1 Khuếch đại gen kỹ thuật PCR 37 1.3.2 Kỹ thuật giải trình tự gen theo phương pháp Sanger 37 1.3.3 Dự đoán khả gây bệnh đột biến gen CDH1 phần mềm phân tích tin sinh học 38 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tượng nghiên cứu 40 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 41 2.3 Phương pháp nghiên cứu 41 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu: 41 2.3.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 41 2.3.3 Phương pháp thu thập mẫu 42 2.3.4 Các biến số nghiên cứu 43 2.3.5 Sơ đồ nghiên cứu 45 2.3.6 Phương tiện nghiên cứu 46 2.3.7 Quy trình kỹ thuật phân tích đột biến gen CDH1 48 2.3.8 Thử nghiệm Clo-Test chẩn đoán nhiễm H Pylori 51 2.3.9 Quy trình kỹ thuật nhuộm hóa mơ miễn dịch 52 2.4 Xử lý phân tích số liệu 53 2.5 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 53 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 55 3.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 55 3.1.1 Đặc điểm tuổi, giới, tiền sử bệnh yếu tố nguy 55 3.1.2 Đặc điểm lâm sàng 58 3.1.3 Đặc điểm tổn thương dày qua nội soi 60 3.1.4 Phân loại giai đoạn bệnh theo TNM 61 3.2 Kết phân tích gen CDH1 đối tượng nghiên cứu 61 3.2.1 Kết tách chiết DNA phản ứng PCR khuếch đại exon gen CDH1 61 3.2.2 Kết phát đột biến SNP gen CDH1 62 3.2.3 Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng đối tượng nghiên cứu mang đột biến SNP gen CDH1 72 3.3 Xác định đột biến gen CDH1 thành viên gia đình bệnh nhân mang đột biến gen CDH1 79 3.3.1 Phả hệ kết phát đột biến gen CDH1 thành viên gia đình 79 3.3.2 Đặc điểm phả hệ thành viên gia đình mang đột biến gen CDH1 87 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 91 4.1 Đặc điểm chung nhóm nghiên cứu 91 4.2 Đột biến gen CDH1 bệnh nhân UTDD lan tỏa di truyền 101 4.3 Đột biến gen CDH1 thành viên gia đình bệnh nhân mang đột biến gen CDH1 120 KẾT LUẬN 134 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại mô bệnh học ung thư biểu mô dày Tổ chức Y tế Thế giới năm 2010 so sánh với phân loại Lauren 15 Bảng 1.2 Phân loại TNM ung thư dày theo AJCC 8th 2017 19 Bảng 1.3 Phân loại giai đoạn bệnh UTDD theo TNM 20 Bảng 1.4 Ý nghĩa phương pháp đánh giá đột biến gen CDH1 37 Bảng 2.1 Thành phần phản ứng PCR 49 Bảng 2.2 Chu kỳ nhiệt phản ứng PCR 49 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng PCR cho giải trình tự 50 Bảng 2.4 Chu trình nhiệt phản ứng PCR cho giải trình tự 50 Bảng 2.5 Quy trình xử lý tiêu hóa mơ miễn dịch 52 Bảng 3.1 Phân loại đối tượng nghiên cứu theo tiêu chuẩn IGCLC 2015 55 Bảng 3.2 Phân bố tuổi giới bệnh nhân tham gia nghiên cứu 56 Bảng 3.3 Mối liên quan tuổi phát bệnh với giới tính 56 Bảng 3.4 Tiền sử cá nhân, gia đình số yếu tố nguy 57 Bảng 3.5 Lý vào viện đối tượng nghiên cứu 58 Bảng 3.6 Thời gian xuất triệu chứng đến vào viện 59 Bảng 3.7 Đặc điểm tổn thương dày qua nội soi 60 Bảng 3.8 Phân loại giai đoạn bệnh theo TNM 61 Bảng 3.9 Các SNP tìm thấy nghiên cứu 63 Bảng 3.10 Đột biến SNP gen CDH1 tìm bệnh nhân UTDD lan tỏa di truyền 64 Bảng 3.11 Dự đoán khả gây bệnh đột biến sai nghĩa 70 Bảng 3.12 Đặc điểm lâm sàng bệnh nhân mang đột biến gen CDH1 73 Bảng 3.13 Đặc điểm nội soi mô bệnh học bệnh nhân mang đột biến 74 Bảng 3.14 Phân bố SNP bệnh nhân tham gia nghiên cứu 77 ... nghiên cứu ung thư dày lan tỏa di truyền đột biến gen CDH1 giới Việt Nam 30 1.2.5 Quản lý bệnh ung thư dày lan tỏa di truyền đột biến gen CDH1 32 1.3 Các phương pháp phát đột biến gen CDH1. .. ung thư dày thể lan tỏa cần nghiên cứu thêm 1.1.2.2 Biến đổi gen di truyền ung thư dày lan tỏa di truyền  Đột biến gen Ung thư dày có tính chất gia đình chiếm khoảng 10%, – 3% UTDD lan tỏa di. .. Nam, nghiên cứu đột biến gen CDH1 bệnh nhân UTDD lan tỏa di truyền, xác định đột biến thành viên gia đình có nguy cao mẻ Với lý đề tài ? ?Nghiên cứu đột biến gen CDH1 (E-cadherin) bệnh nhân ung thư