Trong nghiên cứu thử nghiệm đối với ba loại chiết xuất từ thảo dược (Houttuynia cordata, Polygonum cuspidatum và Astragalus spp.) nhằm khảo sát khả năng ảnh hưởng đến sự biểu hiện gen trên tế bào GK của cá mú bông. Thí nghiệm được tiến hành với 3 nồng khác nhau ở thảo dược Houttuynia cordata và Polygonum cuspidatum (1μL; 5μL và 10μL), 2 nồng độ với Astragalus spp..
VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA BA LOẠI CHIẾT XUẤT THẢO DƯỢC ĐẾN SỰ BIỂU HIỆN GEN CỦA TẾ BÀO CÁ MÚ Epinephelus coioides Võ Bích Xồn1*, Ming Wei-Lu1 TĨM TẮT Trong nghiên cứu thử nghiệm ba loại chiết xuất từ thảo dược (Houttuynia cordata, Polygonum cuspidatum Astragalus spp.) nhằm khảo sát khả ảnh hưởng đến biểu gen tế bào GK cá mú bơng Thí nghiệm tiến hành với nồng khác thảo dược Houttuynia cordata Polygonum cuspidatum (1μL; 5μL 10μL), nồng độ với Astragalus spp Kết biểu gen IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx, TNF α, MHC-I, C3 IL6 tế bào GK có khác loại thảo dược nồng độ khác Đối với hai loại thảo dược Huottuynia cordata Polygonum cuspidatum, gen phân tích khả biểu sau 24 thí nghiệm cho kết tương đương chủ yếu với gen IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx, TNF α gene Ở thí nghiệm Astragalus spp, kết miêu tả có loại gen biểu IgD, IgM, MHC-II, IL1-β Mx Trong gen biểu IgD cao so với gen khác Từ khố: Cá mú bơng, Epinephelus coioides, thảo dược, gen I ĐẶT VẤN ĐỀ Cá mú loài ăn thịt, tăng trưởng nhanh, chất béo tốt nên quan tâm đặc biệt nhóm cá biển ni trồng thuỷ sản Cá mú xem số đối tượng hản sản có giá trị cao Châu Á chất lượng thịt chúng Ở Châu Á, cá mú chấm cam, Epinephelus coioides loại hải sản phổ biến với giá thương phẩm cao lồi ni biển có giá trị kinh tế cao khơng Đài Loan mà số nước khác Trung Quốc, Indo Thái Lan (Pierre ctv., 2008; Chen ctv., 2007) Nuôi cá mú Đài Loan có lịch sử ba mươi năm hầu hết hình thức ni ao khu vực Đài Trung Đài Nam hình thức nuôi bè chủ yếu Bành Hồ Đài Loan Có khoảng mười lồi ni thương mại bảy lồi có sản lượng ni lớn Đài Loan có lồi cá mú chấm cam Lồi nuôi thành công vào năm 1981 Năm 1991, sản xuất giống hàng loạt trở thành loài cá biển quan trọng Đài Loan Tổng sản lượng nuôi cá mú Đài Loan năm 2013 đạt 25,749 có giá trị 6.825 tỉ Đài tệ (Liu ctv., 2015; Young ctv., 2015) Tuy nhiên, nuôi cá mú thâm canh dẫn đến tỷ lệ mắc bệnh truyền nhiễm không lây nhiễm (Chua ctv., 1994; Fukada ctv., 1999) dẫn đến tổn thất kinh tế nghiêm trọng (Lee, 1995; Yet ctv., 2008 ) trang trại trại sản xuất giống Các bệnh vi-rút, vi khuẩn ký sinh trùng dường rào cản quan trọng ảnh hưởng đến nuôi cá mú Đài Loan Sự tổn thất kinh tế ngày tăng dịch bệnh cho thấy cần thiết phải phát triển chiến lược phịng kiểm sốt bệnh Các loại thảo mộc Trung Quốc đóng vai trị quan trọng phòng trị bệnh bệnh thủy sản Có số nghiên cứu để sử dụng loại thảo mộc Trung Quốc bệnh cá mú Lợi ích việc sử dụng loại thảo mộc Trung Quốc chi phí thấp khơng ảnh hưởng xấu đến mơi trường Trong năm gần đây, nhiều thí nghiệm thực với chiết xuất thảo dược nhiều loài cá quan trọng mặt kinh tế, chiết xuất thảo dược chất kích thích miễn dịch truyền thống áp dụng nuôi cá để thay thuốc kháng sinh hóa trị liệu Theo Yin ctv., 2008, loại thảo mộc sử dụng làm thuốc chống lại số bệnh Các loại thảo mộc có chứa nhiều thành phần hoạt tính Phân viện Nghiên cứu Thủy sản Nam sông Hậu, Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II * Email: xoangiang@gmail.com TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 12 - THÁNG 12/2018 29 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II miễn dịch polysaccharides, axit hữu cơ, alkaloids, glycosides dầu dễ bay hơi, tăng cường chức miễn dịch chống lại vi sinh vật gây bệnh (Yin ctv., 2008; Dhayanithi ctv., 2013, Novriadi ctv., 2014) Trong nuôi trồng thủy sản thương mại, kháng sinh sử dụng để phịng ngừa kiểm sốt bệnh, chi phí tốn Một số nghiên cứu thực để tìm hợp chất từ nguồn thực vật với giá rẻ tốt để ngăn chặn bệnh gây sinh vật nuôi trồng thủy sản Nhiều loại thảo mộc sử dụng biện pháp khắc phục nhà số số có tính chất virus tiềm Một số sản phẩm thực vật tìm thấy có hoạt tính chống virus hiệu chống lại bệnh virus Tuy nhiên, khơng có tài liệu tìm thấy thảo dược Trung Quốc để chống lại cá mú iridovirus, cần thiết để giúp nhà nghiên cứu xác định loại thảo mộc Trung Quốc cho bệnh Mục đích nghiên cứu: Khảo sát ảnh hưởng ba loại chất chiết xuất từ thảo dược Houttuynia cordata, Polygonum cuspidatum Astragalus membranaceus lên khả biểu gen tế bào thận GK cá mú đốm cam (Epinephelus coioides) II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu nghiên cứu Nghiên cứu thực khoa thuỷ sản trường đại học Hải Dương quốc gia Đài Loan Các hoá chất dùng nghiên cứu: tế bào thận cá mú GK, virus gây bệnh buồn ngủ cá mú GIV, ba loại chiết xuất từ thảo dược (Houttuynia cordata, Polygonum cuspidatum Astragalus spp.), môi trường dinh dưỡng cho nuôi tế bào cá mú, môi trường trizol reagent, 70% alcohol, chloroform, isopropanol, dung dịch PBS số dung dịch dùng ly trích RNA DNA… Dụng cụ dùng nghiên cứu: kính hiển vi điện tử, máy PCR, tủ vô trùng, đĩa peptri nhựa, micro pipet loại … 2.2 Phương pháp phân tích Chuẩn bị thảo dược Các chiết xuất từ thảo dược tiến hành kiểm tra với nồng độ khác tế bào cá mú trước thí nghiệm với thảo dược Đối với loại thảo dược, thử nghiệm nồng độ nhằm kiểm tra độc tố thảo dược lên tế bào 1; 5; 10 50μg/ml Các loại mồi tiến hành nghiên cứu biểu gen tế bào cá mú thử nghiệm với nồng độ khác loại thảo dược Có loại mồi tiến hành thí nghiệm IgM, MHC-II, IL1-β, Mx, TNF α, MHC-I, C3 IL6, trình tự mồi thể Bảng Bảng 1: Các loại mồi sử dụng nghiên cứu biểu gen tế bào cá mú thử nghiệm với loại thảo dược Tên mồi IL-1β IL-6 TNF-α Mx C3 IgD IgM MHC Iα MHC IIα β-actin 30 Mồi xuôi AgCTCTgCCTCCACAgAgA CCTCCAACTTCAgCAAggAg gAATggAggAgTCAggTggA gCTgCgAgAAggAgCTAgAA gCTggAgAAAgTCgTCTTgg ATTTTgACgCCAAgTTgACC CTATCTgCTgggCAggTgTT ACCACgATggATCCTTTCAg ggAgAAgACTCAgCCCAgTg gTTgCACTggACTTTgAgCA Mồi ngược CTCAAgCTgTgCCAgAACCT CCTAGACAgCCAGgACTTCCTC CTCCTCACAAggCAAACACA TCTCTCCATCAggATCCACC gTgggTTgCTgTggAACTTT TgCCAgCTTgAAAAgTgATg gCAgCAgAATCTTCAgTCTTCA TgCgCCTACAATCACAgAAg CTgAAgCCTgACCAACACAA ACATCTgCTggAAggTggAC TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 12 - THÁNG 12/2018 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Phương pháp PCR: Phương pháp PCR truyền thống sử dụng phân tích khả biểu gen tế bào cá mú thử nghiệm với chiết xuất thảo dược nồng độ khác Mồi β-actin chọn làm gen đối chứng III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Biểu gen IgD, IgM, MHCII, IL1-β, Mx, TNF α, MHC-I, C3 IL6 Kết kiểm tra cho thấy, sau 24 tỷ lệ sống tế bào hai loại Houttuynia cordata Polygonum cuspidatum cho kết tốt nghiệm thức đối chứng nồng độ 1; 5; 10µg/ml Tuy nhiên nghiệm thức Astragalus spp cho kết tốt so với nghiệm thức đối chứng nồng độ µg/ml Tế bào GK nghiên cứu thu để phân tích biểu gen sau 24 thí nghiệm phương pháp PCR Kết biểu IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx, TNF α, MHC-I, C3 IL6 tế bào GK cá mú với ba loại chiết xuất thảo dược Huottuynia cordata, Polygonum cuspidatum Astragalus spp thể qua Hình 1; Đối với Huottuynia cordata cho kết biểu gen IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx, TNF α gen mức độ biểu TNF α xuất nồng độ thảo dược 10µg/ml (Hình 1) Đặc biệt, IgD gen biểu mức độ cao so với gen lại ba nồng độ thảo dược Tuy nhiên, MHC-I, C3 IL6 gene khơng phát thí nghiệm tất nghiệm thức Hình Mức độ biểu gen tế bào GK cá mú nghiên cứu chiết xuất thảo dược Huottuynia cordata qua phân tích PCR sau 24 thí nghiệm Tương tự thảo dược Polygonum cuspidatum, kết phân tích PCR cho thấy IgD, IgM, MHC-II, IL1-β Mx phát tất nghiệm thức Ở TNF-α gen phát nghiệm thức thí nghiệm với thảo dược không xuất nghiệm thức đối chứng Có ba gen khơng phát MHC-I, C3 IL6 tất nghiệm thức TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 12 - THÁNG 12/2018 31 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Hình Mức độ biểu gen tế bào GK cá mú nghiên cứu chiết xuất thảo dược Huottuynia cordata qua phân tích PCR sau 24 thí nghiệm Cuối nghiệm thức với thảo dược Astragalus spp., tiến hành với hai nồng độ 1µg/ml 5µg/ml Hình cho thấy IgD, IgM, MHC-II, IL1-β Mx biểu nghiệm thức nghiệm thức đối chứng Trong IgD có biểu cao so với gen lại Đặc biệt loại chiết xuất thảo dược cho biểu TNF α MHC-I nghiệm thức thảo dược không biểu nghiệm thức đối chứng Đối với hai gen IL6 C3 không phát nghiên cứu tất nghiệm thức Hình Mức độ biểu gen tế bào GK cá mú nghiên cứu chiết xuất thảo dược Astragalus spp qua phân tích PCR sau 24 thí nghiệm 32 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 12 - THÁNG 12/2018 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II IV KẾT LUẬN Kết nghiên cứu biểu gen tế bào GK cá mú cho kết tương ứng với loại gen nồng độ thảo dược khác Đối với Houttuynia cordata cho kết biểu loại gen IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx Trong thí nghiệm với thảo dược Polygonum cuspidatum cho kết biểu loại IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx TNF α Riêng thảo dược Astragalus spp cho kết biểu loại gen nồng độ µg/ml loại gen biểu nồng độ µg/ml TÀI LIỆU THAM KHẢO Brown, D L., Dorling, K., 2006 Encyclopedia of herbs and their uses Chakraborti, S., Sinha, S., Sinha, R.K, 2006 Highfrequency induction of multiple shoots and clonal propagation from rhizomatous nodal segments of Houttuynia Cordata Thunb An ethnomedicinal herb of India In vitro cellular & developmental biology - plant 42:394–8 Chao, C.B., Yang, C.S., Tsai, Y.H., Chen, C.Y., Lin, C.S., Huang, H.T., 2016 A nested PCR for the detection of grouper iridovirus in Taiwan (TGIV) in cultured Hybrid grouper, Giant seaperch, and Largemouth bass Journal of aquatic animal health 14: 104-113 Chen, X., Wang, Z., Yang, Z., Wang, J., Xu, Y., Tan, R.X., 2011 Houttuynia cordata blocks HSV infection through inhibition of NF-κB activation Antiviral Res 92: 341–5 Chen, Y.M., Kuo, C.E., Chen, G.R., Kao, Y.T., Zou, J., Secombes, C.J., Chen, T.Y., 2014 Functional analysis of an orange-spotted grouper (Epiephelus coioides) interferon gene and characterization of its expression in response to nodavirus infection Developmental and comparative immunology 46: 117-128 Chen, L.M., Wang, F., Song, W., Hew, C.L., 2006 Temporal and differential gene expression of Singapore grouper iridovirus Journal of general virology 87: 2907-2915 Chinese Pharmacopoeia Commission, 2015 Chinese Pharmacopoeia, Section on Chinese medicine, Notes for clinicians China Medical Science Press, Beijing, pp 302-303 Chinese Pharmacopoeia Committee Chinese Pharmacopoeia Commission: Part I Beijing, China: China Medical Science and Technology Press; 2010 Choi, H.J, Song, J.H., Park, K.S., Kwon, D.H., 2009b Inhibitory effects of quercetin 3-rhamnoside on influenza A virus replication Eur J Pharm Sci 37: 329–33 Chou, S.C., Su, C.R., Ku, Y.C., Wu, T.S., 2009 The constituents and their bioactivities of Houttuynia cordata Chem Pharm Bull (Tokyo) 57: 1227–30 Editorial Committee of Chinese Materia Medica, 1998 Chinese Materia Medica Shanghai, China: Shanghai Science and Technology Press Fu, J., Wang, Z., Huang, L., Zheng, S., Wang, D., Chen, S., Zhang, H., Yang, S., 2014 Review of the botanical characteristics, phytochemistry, and pharmacology of Astragalus membranaceus (Huangqi) Phytother Res 28: 1275-1283 Goshi, K., Hidehiro, K., Takashi, A., Ikuo, H., 2010 BBC vaccine confers adaptive immunity against Mycobacterium sp Infection in fish Developmental and comparative immunology 34: 133-140 Harley, C B., Liu, W., Blasco, M., Vera, E., Andrews, W H., Briggs, L A., Raffaele, J M., 2011 A Natural Product Telomerase Activator as Part of a Health Maintenance Program Rejuvenation Research 14 (1): 45-56 Hynniewta, S.R and Kumar, Y., 2008 Herbal remedies among the Khasi traditional healers and village folks in Meghalaya Indian J Tradit Knowl 7: 581-6 Infante, F., Garcıa, A., Moyano, R., 1991 Toxicolog´ıa del g´enero Astragalus In Libro homenaje al Profesor Doctor Don Rodrigo Pozo Lara, ed by A Rodero and R Jordano, pp 2157 Ed Universidad de Co´ rdoba, Spain James, J.E., Molyneux, R.J., and Panter, K.E., 1990 The potential for the toxic principles of Astragalus and related plants to appear in meat and milk Vet Hum Toxicol 32 (suppl.): 104-109 Kai, Y.H., Wu, Y.C., Chi, S.C., 2014 Immune gene expressions in grouper larvae (Epinephelus coioides) induced by bath and vaccinations with inactivated betanodavirus Fish & shellfish immunology 40: 563-569 Kanjilal, P.C., Dev, R.N., 1937 III New Delhi: Omsons Publishers Flora of Assam: 113 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 12 - THÁNG 12/2018 33 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Ketut, M., Haryanti, A.M., Teruo, M., 2008 Histopathological and ultrastructural features of enlarged cells of humpback grouper Cromileptes altivelis challenged with Megalocytivirus (family Iridovidae) after vaccination Diseases of aquatic organisms 79: 163-168 Kim, G.S., Kim, D.H., Lim, J.J., Lee, J.J., Han, D.Y., Lee, W.M., 2008 Biological and antibacterial activities of the natural herb Houttuynia cordata water extract against the intracellular bacterial pathogen Salmonella within the RAW 264.7 macrophage Biol Pharm Bull 31: 2012–7 Lau, K.M., Lee, K.M., Koon, C.M., Cheung, C.S., Lau, C.P., Ho, H.M., 2008 Immunomodulatory and anti-SARS activities of Houttuynia cordata J Ethnopharmacol 118: 79–85 Leardkamolkarn, V., Sirigulpanit, W., Phurimsak, C., Kumkate, S., Himakoun, L., Sripanidkulchai, B., 2012 The inhibitory actions of Houttuynia cordata aqueous extract on dengue virus and dengue-infected cell J Food Biochem 36: 86-92 Leu, Y.L., Hwang, T.L., Hu, J.W., Fang, J.Y., 2008 Anthraquinones from Polygonum cuspidatum as tyrosinase inhibitors for dermal use Phytother Res 22(4): 552-6 Lin, L.Z., He, X.G., Lindenmaier, M., Nolan, G., Yang, J., Cleary, M., Qiu, S X., Cordell, G.A., 2000 “Liquid Chromatography-Electrospray Ionization Mass Spectrometry Study of the Flavonoids of the Roots of Astragalus mongholicus and A membranaceus” Journal of Chromatography A 876 (1–2): 87-95 Lu, H.M., Liang, Y.Z., Yi, L.Z., Wu, X.J., 2006 Anti-inflammatory effect of Houttuynia cordata injection J Ethnopharmacol 104: 245-9 Lu, L., Zhou, S.Y., Chen, C., Weng, S.P., Chan, S.M., He, J.G., 2005 Complete genome sequence analysis of an iridovirus isolated from the orange-spotted grouper, Epiephelus coioides Virology 339: 81-100 Matsuda, H., Shimoda, H., Morikawa, T., Yoshikawa, M., 2001 Phytoestrogens from the roots of Polygonum cuspidatum (Polygonaceae): structure-requirement of hydroxyanthraquinones for estrogenic activity Bioorganic Medicinal Chemistry Letters 11(14): 39-42 Mei, J., 2012 Analysis on medication rule in diabetes Ⅱ patients treated with Traditional Chinese Medicine Zhongguo Shi yan Fang Ji 34 Xue Za Zhi v.18: 290-291 Ren, X., Sui, X., Yin, J., 2011 The effect of Houttuynia cordata injection on pseudorabies herpesvirus (PrV) infection in vitro Pharm Biol 49: 161-6 Shangliang, T., Hetrick, F.M, Roberson, B.S Baya, A., 1990 The antibacterial and antiviral activity of herbal extracts for fish pathogens J Ocean Univ Qingdao 20: 53-60 Sivasankar, P., Anix, V., Santhiya, A., Kanaga, V.A., 2015 Review on plants and herbal extracts against viral diseases in aquaculture JMPS 3(2): 75-79 Tutupalli, L.V., Chaubal, M.G., Saururaceae, V., 1975 Composition of essential oil from foliage of Houttuynia cordata and chemo systematics of Saururaceae Lloydia 38: 92-106 Uphof, J.C.T., 1968 Dictionary of Economic Plants, p 591 J Cramer, Lehre (Germany) Xu, D., Wei, J., Cui, H., Gong, J., Yan, Y., Lai, R., Qin, Q., 2010 Differential profile of gene expression in grouper Epiephelus coioides, infected with Singapore grouper iridovirus, revealed by suppression subtractive hybridization and DNA microarray Journal of fish biology 77: 341-360 Xu, Q., Ma, X., Liang, X., 2007 “Determination of Astragalosides in the Roots of Astragalus spp Using Liquid Chromatography Tandem Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mass Spectrometry” Phytochemical Analysis 18 (5): 419-427 Yeh, C.H., Chen, Y.S., Wu, M.S., Chen, C.W., Yuan, C.H., Pan, K.W., Chang, Y.N., Chuang, N.N., Chang, C.Y., 2008 Differential display of grouper iridovirus-infected grouper cells by immunostaining Biochemical and biophysical research communications 372: 674-680 Zhang, C., Wang, X., Zhang, X., Zhang, Y., Xiao, H., Liang, X., 2009 Bioassay-guided separation of citreorosein and other oestrogenic compounds from Polygonum cuspidatum Phytother Res 23(5): 740-751 Zhang, H., Zhang, Q.W., Wang, L., Zhang, X.Q., Ye, W.C., Wang, Y.T., 2012 Two new anthraquinone malonylglucosides from Polygonum cuspidatum Nat Prod Res 26 (14): 23-27 Zhang, K., Pugliese, M., Pugliese, A., Passantino, A., 2015 Biological active ingredients of traditional Chinese herb Astragalus membranaceus on treatment of diabetes: a systematic review Mini Rev Med Chem 15: 315-329 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 12 - THÁNG 12/2018 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II EVALUATION OF FUNCTION OF THREE DIFFERENT HERBS ON GENE EXPRESSION IN GROUPER Epinephelus coioides Vo Bich Xoan1*, Ming Wei-Lu ABTRACT In this study, we examined the effect of three Chinese herbal extracts (Houttuynia cordata, Polygonum cuspidatum and Astragalus spp.) applied on GK cells of orange-spotted grouper to evaluate gene expression The experiment was conducted at concentrations (1 µg/ml, 5µg/ml and 10µg/ml) for Houttuynia cordata, Polygonum cuspidatum and two concentration (1μL; μL ) for Astragalus spp In this experiment, the result of gene expression of IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx, TNF α, MHC-I, C3 and IL6 in GK cells infected with three Chinese herbs namely Huottuynia cordata, Polygonum cuspidatum and Astragalus spp were different at three concentrations IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx, TNF α gene expression were observed GK cells infected with Huottuynia cordata and Polygonum cuspidatum after 24 hours of herb treatment At Astragalus spp treatment, the result indicated that five genes namely IgD, IgM, MHC-II, IL1-β and Mx were detected and the expression of IgD was highest compared to others Keywords: orange-spotted grouper, Epinephelus coioides, herbal extracts, iridovirus Người phản biện: TS Lê Hồng Phước Ngày nhận bài: 20/12/2018 Ngày thông qua phản biện: 27/12/2018 Ngày duyệt đăng: 31/12/2018 Research sub-Institute for Southern Hau River Fisheries, Research Institute for Aquaculture No * Email:xoangiang@gmail.com TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 12 - THÁNG 12/2018 35 ... pipet loại … 2.2 Phương pháp phân tích Chuẩn bị thảo dược Các chiết xuất từ thảo dược tiến hành kiểm tra với nồng độ khác tế bào cá mú trước thí nghiệm với thảo dược Đối với loại thảo dược, thử... nồng độ nhằm kiểm tra độc tố thảo dược lên tế bào 1; 5; 10 50μg/ml Các loại mồi tiến hành nghiên cứu biểu gen tế bào cá mú thử nghiệm với nồng độ khác loại thảo dược Có loại mồi tiến hành thí nghiệm... µg/ml Tế bào GK nghiên cứu thu để phân tích biểu gen sau 24 thí nghiệm phương pháp PCR Kết biểu IgD, IgM, MHC-II, IL1-β, Mx, TNF α, MHC-I, C3 IL6 tế bào GK cá mú với ba loại chiết xuất thảo dược