Thử nghiệm hiệu quả bảo vệ của thức ăn bổ sung kháng thể kháng E. ictaluri đối với bệnh gan thận mủ trên cá tra Pangasianodon hypophthalmus

Bệnh gan thận mủ do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây ra là một trong những bệnh quan trọng trên cá tra nuôi ở ĐBSCL. Nghiên cứu này nhằm thử nghiệm hiệu quả của thức ăn bổ sung kháng thể gà IgY kháng đặc hiệu E. ictaluri trong phòng và trị bệnh gan thận mủ.

VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ BẢO VỆ CỦA THỨC ĂN BỔ SUNG KHÁNG THỂ KHÁNG E ictaluri ĐỐI VỚI BỆNH GAN THẬN MỦ TRÊN CÁ TRA Pangasianodon hypophthalmus Nguyễn Thị Hiền1, Lê Hồng Phước1, Ngơ Thị Bích Phượng1, Nguyễn Phạm Hồng Huy1, Võ Hồng Phượng1, Chung Minh Lợi1, Dương Thị Hương Giang2 TÓM TẮT Bệnh gan thận mủ vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây bệnh quan trọng cá tra nuôi ĐBSCL Nghiên cứu nhằm thử nghiệm hiệu thức ăn bổ sung kháng thể gà IgY kháng đặc hiệu E ictaluri phòng trị bệnh gan thận mủ Cá tra khỏe có trọng lượng khoảng 15-20 g/con cho ăn với thức ăn bổ sung 1,25%, 3% 5% lòng đỏ trứng gà chứa IgY kháng E ictaluri trước sau gây bệnh thực nghiệm phương pháp ngâm tự nhiên, tương ứng với thí nghiệm phịng trị bệnh Kết cho thấy hai thí nghiệm, nghiệm thức cá cho ăn IgY kháng E ictaluri có tỉ lệ chết thấp đáng kể so với nghiệm thức đối chứng cá cho ăn với lòng đỏ trứng gà khơng có IgY kháng E ictaluri Nghiệm thức cho ăn với tỉ lệ 1,25% lòng đỏ trứng gà chứa IgY kháng E ictaluri đạt giá trị RPS cao hai thí nghiệm phịng trị bệnh, 95% 87% Như vậy, IgY kháng đặc hiệu E ictaluri có khả bảo vệ thụ động cá tra bệnh gan thận mủ thông qua đường cho ăn Kết cho phép người nuôi hy vọng tiếp cận với phương pháp an toàn, đơn giản, hữu hiệu dễ thực kiểm sốt bệnh cá tra Từ khóa: bệnh gan thận mủ, cá tra, Edwardsiella ictaluri, kháng thể IgY lòng đỏ trứng gà I ĐẶT VẤN ĐỀ Cá tra Pangasianodon hypophthalmus đối tượng ni Đồng sơng Cửu Long Nuôi cá tra đem lại sản lượng lớn với kim ngạch xuất cao Trong năm 2011 xuất cá tra nước đạt 1,8 tỉ USD, tăng 26,5% so với năm 2010 chiếm 30% tổng giá trị xuất thủy sản nước Tuy nhiên, việc ni cá tra cịn số vấn đề khó khăn giống chất lượng, môi trường nuôi suy thối, dịch bệnh xảy nhiều, cá khơng đạt chất lượng xuất Một số bệnh thường gặp cá tra bệnh xuất huyết bệnh gan thận mủ Bệnh gan thận mủ bắt đầu xuất cá tra nuôi Việt Nam vào cuối năm 1998 (Ferguson ctv., 2001) Tác nhân bệnh gan thận mủ vi khuẩn Edwardsiella ictaluri (Crumlish ctv., 2002) Bệnh xuất tất giai đoạn phát triển cá Bệnh gây thiệt hại lớn ao nuôi, đặc biệt giai đoạn cá giống (Lý Thị Thanh Loan, 2009) Lớp kháng thể IgY tạo gà (Gallus domesticus) bên cạnh hai lớp kháng thể IgM IgA Ngồi ra, IgY cịn tạo lồi chim, bị sát, lưỡng cư cá thở mang phổi (lungfish) (Narat, 2003) IgY tổng hợp gà mái nhằm truyền cho gà bảo vệ hiệu mầm bệnh thông Trung tâm Quốc gia Quan trắc Cảnh báo Mơi trường & Phịng ngừa Dịch bệnh Thủy sản khu vực Nam bộ, Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản Email: nguyenhien05@gmail.com Viện Nghiên cứu & Phát triển Công nghệ Sinh học, Đại Học Cần Thơ 118 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN thường gà hệ miễn dịch gà phát triển đầy đủ IgY thường gặp máu (5-7 mg/ml huyết thanh) lòng đỏ trứng gà (100 mg/lòng đỏ) (Dias da Silva ctv., 2010) Cấu trúc tổng quát IgY, giống với lớp IgG động vật hữu nhũ, gồm có hai chuỗi nhẹ (L chain – 25 kDa chuỗi) hai chuỗi nặng (H chain – 67-70 kDa chuỗi) Điểm khác biệt IgG IgY số lượng vùng định (C – constant region) chuỗi nặng: IgG có vùng C IgY có vùng C Điểm khác biệt dẫn đến khối lượng phân tử IgY lớn so với IgG (lần lượt 180 150 kDa) (Narat, 2003) IgY bền lưu giữ điều kiện đặc biệt Dung dịch IgY giữ 4°C từ vài tháng vài năm Dạng khô IgY giữ hoạt tính kháng thể giữ 4°C 5-10 năm, nhiệt độ phòng tháng 37°C tháng (Xu ctv 2011) Gần đây, IgY ý nghiên cứu liên quan đến kiểm soát bệnh động vật IgY có nhiều ưu điểm bật so với IgG động vật hữu nhũ giá thành rẻ, tiện lợi tạo với lượng lớn (Xu ctv 2011) Trong kiểm soát bệnh động vật thông qua miễn dịch thụ động, chế xác IgY trung hịa hoạt tính mầm bệnh chưa xác định Tuy nhiên, nhiều chế khác đề xuất nhằm giải thích cách IgY đặc hiệu trung hịa hoạt tính mầm bệnh gồm: (i) Ngưng kết; (ii) Bám dính & khóa; (iii) Opsonin hóa theo sau thực bào; (iv) Trung hòa độc tố (Xu ctv 2011) Arasteh ctv (2004) sử dụng IgY để gây miễn dịch thụ động cá hồi vân (Oncorhynchus mykiss) kháng lại bệnh vibriosis vi khuẩn Vibrio anguillarum gây Gần nghiên cứu Li ctv (2006) sử dụng IgY để phòng trị bệnh cá giếc (Carassius auratus Gibelio) vi khuẩn Aeromonas hydrophila Ngoài cịn có số nghiên cứu ứng dụng IgY để gây miễn dịch thụ động vi rút Kim ctv (2004) sử dụng TrVP28:19 chất kháng nguyên tiêm vào gà sau tách chiết IgY sử dụng vaccine để phịng bệnh đốm trắng tôm Penaeus chinensis, cho thấy sử dụng IgY hiệu giá bảo vệ đột ngột tăng lên so sánh với kháng nguyên khác dùng để tạo IgY II VẬT LIỆU & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Vi khuẩn: Sử dụng chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri (Gly09M) Phòng vi khuẩn thuộc Trung tâm Quốc gia Quan trắc Cảnh báo Môi trường Phòng ngừa Dịch bệnh Thủy sản Khu Vực Nam Cá tra giống: khỏe trọng lượng đồng khoảng 15-20 g/con mua từ Trung tâm Quốc gia Giống Thủy sản Nước Nam (Cái Bè – Tiền Giang) thuộc Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản Lòng đỏ trứng gà chứa kháng thể IgY kháng đặc hiệu vi khuẩn E ictaluri; lòng đỏ trứng gà không chứa IgY kháng đặc hiệu E ictaluri dùng để trộn thức ăn cho nghiệm thức đối chứng; Maltodextrin: cung cấp Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học thuộc Đại Học Cần Thơ 2.2 Phương pháp nghiên cứu Cá thí nghiệm điều kiện ni Cá tra giống từ Trung tâm Quốc gia Giống Thủy sản Nước Nam chuyển TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 119 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN ni bể composite phịng thí nghiệm ướt Viện Nghiên cứu Ni trồng Thủy sản II Gị Vấp 30 ngày Sau đó, cá phân bố ngẫu nhiên vào bể kính 100 L (20-25 cá/bể) ni tuần trước tiến hành thí nghiệm Sử dụng trực tiếp nguồn nước sinh hoạt (được bơm chứa bể composite hai ngày trước sử dụng) làm nước nuôi cá, nhiệt độ nước từ 28-30°C Hệ thống ni bể kính dạng bán tuần hoàn, nước lọc liên tục thay 50% nước hàng tuần Sử dụng thức ăn viên thương mại (GB 628, hạt có đường kính mm, Grobest & I-Mei Industrial, Đồng Nai) cho cá ăn hai lần ngày vào lúc sáng chiều với lượng thức ăn tương đương 2% trọng lượng cá/ngày Cá thu mẫu kiểm tra để đảm bảo không bị nhiễm Edwardsiella ictaluri trước tiến hành gây nhiễm Chuẩn bị thức ăn bổ sung kháng thể thức ăn đối chứng Cân tất thành phần thức ăn chứa kháng thể gà thức ăn cho nghiệm thức đối chứng, gồm: viên thức ăn (100 gram/ lần trộn), lòng đỏ trứng gà chứa kháng thể IgY kháng E ictaluri (1,25 gram, gram gram tương ứng với tỉ lệ 1,25%, 3% 5% IgY 100 gram thức ăn), lòng đỏ trứng gà không chứa IgY kháng E ictaluri (3 gram), Maltodextrin (2 gram /1 lần trộn) Trước tiên, chuẩn bị hỗn hợp lòng đỏ trứng gà: hòa tan lượng lòng đỏ trứng gà nước cất vừa đủ, sau cho gram maltodextrin vào làm tan Sau đó, trộn hỗn hợp với thức ăn cá sau: rải phần hỗn hợp lòng đỏ trứng gà chuẩn bị lên thức ăn, lắc nhanh để thức ăn thấm với hỗn hợp lòng đỏ trứng; tiếp tục lặp lại 3-4 lần hết hỗn hợp lòng đỏ maltodextrin chuẩn 120 bị Thức ăn chuẩn bị bảo quản lạnh 4°C giữ vòng tuần Chuẩn bị vi khuẩn cho gây bệnh thực nghiệm Vi khuẩn cấy từ ống giống giữ âm 70°C lên môi trường thạch máu cừu, ủ 24 30°C Tiến hành chọn khuẩn lạc điển hình tăng sinh môi trường BHIB thời gian 17-18 30°C, lắc 150 vòng/phút Đo mật độ quang OD550nm, giá trị tin cậy từ 0,1 đến 1, giá trị OD550nm = E ictaluri tương đương 1,2×109 CFU/ml Tính thể tích dịch ni cấy vi khuẩn cần thêm vào bể cá chứa sẵn 20 L nước để nồng độ cuối 2,5 x106 CFU/ml Chuyển thể tích vi khuẩn vào lọ đựng vơ trùng mang gây bệnh thực nghiệm, giữ lạnh 4°C trước gây bệnh thực nghiệm Xác định hiệu phòng bệnh gan thận mủ thức ăn bổ sung kháng thể Thí nghiệm gồm nghiệm thức đối chứng âm, nghiệm thức cho ăn thức ăn bổ sung lịng đỏ trứng gà khơng chứa kháng thể kháng E ictaluri nghiệm thức cho ăn thức ăn bổ sung kháng thể với nồng độ khác (1,25, 5% lòng đỏ trứng gà chứa IgY kháng E ictaluri) Mỗi nghiệm thức lặp lại lần (20 cá/bể kính) Cá từ bể composite chuyển lên bể kính tuần Khi cá ổn định, bắt đầu cho cá ăn với thức ăn bổ sung kháng thể, cho cá ăn lần ngày vào sáng chiều Sau tuần cho ăn với thức ăn bổ sung kháng thể, tiến hành gây bệnh thực nghiệm cho nghiệm thức thí nghiệm (trừ nghiệm thức đối chứng âm) phương pháp ngâm tự nhiên với liều 2,5×106 CFU/ml liều gây chết khoảng 50% cá thí nghiệm Nước ni cá lọc tuần hồn khơng thay nước sau gây TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN bệnh thực nghiệm Theo dõi ghi nhận số cá chết 14 ngày sau gây nhiễm Xác định hiệu trị bệnh gan thận mủ thức ăn bổ sung kháng thể Thí nghiệm gồm nghiệm thức đối chứng âm, nghiệm thức cho ăn thức ăn bổ sung lịng đỏ trứng gà khơng chứa kháng thể kháng E ictaluri nghiệm thức cho ăn thức ăn bổ sung kháng thể với nồng độ khác (1,25, 5% lòng đỏ trứng gà chứa IgY kháng E ictaluri) Mỗi nghiệm thức lặp lại lần (20 cá/bể kính) Cá từ bể composite chuyển lên bể kính tuần Khi cá ổn định, bắt đầu tiến hành gây bệnh thực nghiệm với liều 2,5×106 CFU/ml phương pháp ngâm cho nghiệm thức thí nghiệm (trừ nghiệm thức đối chứng âm) Đồng thời, cho cá ăn với thức ăn bổ sung kháng thể, cho cá ăn lần ngày vào sáng chiều Nước ni cá lọc tuần hồn khơng thay nước sau gây bệnh thực nghiệm Theo dõi ghi nhận số cá chết 14 ngày sau gây nhiễm Gây bệnh thực nghiệm phương pháp ngâm tự nhiên Trước thí nghiệm, hạ nước ni cá xuống 20 L nước bể Đối với bể thí nghiệm, từ từ cho vi khuẩn vào bể để nồng độ gây nhiễm mong muốn, thời gian ngâm 60 phút Đối với bể đối chứng âm, cho thể tích mơi trường BHI vơ khuẩn (bằng với thể tích dịch vi khuẩn bể thí nghiệm) vào ngâm 60 phút Sau đó, thêm nước vào bể để tổng thể tích nước ni 40 L Theo dõi ghi nhận số cá chết 14 ngày sau gây nhiễm Kiểm tra vi khuẩn trước sau gây bệnh thực nghiệm Trước gây bệnh thực nghiệm, cấy ria thận cá môi trường BA (2% tổng số cá thí nghiệm) để kiểm tra diện vi khuẩn E ictaluri số vi khuẩn khác có cá, ủ đĩa thạch 30°C 24-48 Sau gây bệnh, ngày cá chết mạnh tiến hành cấy thận cá chết (1 con/bể) môi trường BA để khẳng định cá chết vi khuẩn E ictaluri Phương pháp xử lý thống kê Lưu trữ, quản lý số liệu phần mềm Microsoft Excel Tỉ lệ bảo hộ (%) hay RPS (Relative percent survival) tính theo cơng thức Amend (1981): Xử lý thống kê phần mềm SPSS 16.0, trắc nghiệm one-way Anova Sử dụng phép thử Duncan để so sánh khác kết trung bình tất nghiệm thức III KẾT QUẢ 3.1 Hiệu phòng bệnh gan thận mủ thức ăn bổ sung kháng thể Kết kiểm tra vi khuẩn trước thí nghiệm gây bệnh thực nghiệm cho thấy cá hồn tồn khơng mang mầm bệnh vi khuẩn E ictaluri Cá bể kính tuần, sau cho ăn với thức ăn bổ sung kháng thể tuần trước gây bệnh thực nghiệm Cá khỏe ổn định suốt thời gian cho ăn với thức ăn bổ sung kháng thể, không xuất cá chết Trong ngày gây bệnh thực nghiệm, cá tất nghiệm thức ăn bình thường lần cho ăn ngày Sau gây bệnh thực nghiệm, cá bắt đầu chết vào ngày thứ 5, chết nhiều từ ngày thứ đến ngày thứ ngưng chết vào ngày thứ 10 (Bảng 1) Tỉ lệ chết nghiệm thức đối chứng TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 121 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN ăn có tỉ lệ IgY bổ sung tăng dần Nghiệm thức (cho ăn thức ăn không bổ sung kháng thể) đạt 65%, cao đáng kể so với tỉ lệ chết nghiệm thức cho ăn thức ăn bổ sung kháng thể Một điều thú vị nghiệm thức cho ăn thức ăn bổ sung kháng thể, kết cho thấy tỉ lệ chết cá tăng dần cho cá ăn với thức thức ăn bổ sung 1,25% IgY có tỉ lệ chết thấp (3,3%) khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với hai nghiệm thức cho ăn với thức ăn bổ sung 3% 5% IgY Bảng Số cá chết theo ngày thí nghiệm xác định hiệu phòng bệnh thức ăn bổ sung kháng thể Tên nghiệm thức TAIgY1,25% TAIgY3% TAIgY5% Đối chứng Tổng số cá TN N5 N6 N7 N8 N9 0 10 0 15 40 10 35 40 N10 20 20 1 20 20 20 1 20 1 20 20 20 20 5 20 11 20 Đối chứng âm Tổng Tỉ lệ chết (%) Số cá chết theo ngày sau GBTN 1 15 13 65 14 70 12 60 20 0 20 0 20 0 Trung bình TLC (%) RPS Trung bình RPS 100,0 3,3 ± 5,8 84,6 a 94,9 ± 8,9 a 100,0 76,9 21,7 ± 16,1 b 38,5 66,7 ± 24,7 ab 84,6 46,2 30,0 ± 13,2 b 38,5 53,8 ± 20,4 b 76,9 65,0 ± 5,0 c - 0,0 ± 0,0 a - Ghi chú: TN: thí nghiệm; GBTN: gây bệnh thực nghiệm; N: ngày sau GBTN; TLC: tỉ lệ chết; RPS: (Relative percent of survival) Tỉ lệ bảo hộ (%); Thống kê sử dụng phép so sánh Duncan Khi xét đến giá trị tỉ lệ bảo hộ (RPS – Relative percent of survival), nghiệm thức 1,25% IgY có tỉ lệ bảo hộ cao 94,9%, nghiệm thức 3% IgY 5% IgY với tỉ lệ bảo hộ 66,7% 53,8% Trong đó, tỉ lệ bảo hộ nghiệm thức 1,25% IgY khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức 5% IgY, hai nghiệm thức khơng khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức 3% IgY Trong suốt thời gian thí nghiệm, không xuất cá chết nghiệm thức đối chứng âm cho thấy thí nghiệm diễn điều kiện tốt ổn định 122 3.2 Hiệu trị bệnh gan thận mủ thức ăn bổ sung kháng thể Ở thí nghiệm này, sau thời gian cá ổn định, tiến hành gây bệnh thực nghiệm trước cho cá ăn với thức ăn bổ sung kháng thể Cá cho ăn thức ăn bổ sung kháng thể bắt đầu vào buổi chiều ngày gây bệnh thực nghiệm Cá tất nghiệm thức ăn bình thường Diễn biến cá chết theo ngày sau gây bệnh thực nghiệm tương đồng với thí nghiệm phịng bệnh, cá chết kéo dài từ ngày thứ đến ngày thứ (Bảng 2) Không xuất cá chết nghiệm thức đối chứng âm TAÏP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Bảng Số cá chết theo ngày thí nghiệm xác định hiệu trị bệnh thức ăn bổ sung kháng thể Tên nghiệm thức TAIgY1,25% TA-IgY3% TA-IgY5% Đối chứng Tổng số cá âm N5 N7 N8 Trung bình TLC (%) RPS Tổng 1 4 13 14 5 15 20 20 45 10 20 65 70 12 60   20 20 0 0     20 0 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 N6 chết N9 TN 20 Đối chứng Tỉ lệ Số cá chết theo ngày sau GBTN 1 2 2 1 11 5 1 2 1 1 1 (%) 8,3 ± 5,8 ab 15,0 ± 8,7 ab 25,0 ± 18,0 b 65,0 ± 5,0 c 0,0 a 92,3 92,3 76,9 69,2 69,2 92,3 30,8 84,6 69,2     Trung bình RPS 87,2 ± 8,9 a 76,9 ± 13,3 a 61,5 ± 27,7 a - -   Ghi chú: TN: thí nghiệm; GBTN: gây bệnh thực nghiệm; N: ngày sau GBTN; TLC: tỉ lệ chết; RPS: (Relative percent of survival) Tỉ lệ bảo hộ (%); Thống kê sử dụng phép so sánh Duncan Tỉ lệ chết trung bình nghiệm thức cho ăn bổ sung 1,25%, 3% 5% 8, 15 25%, khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) so với tỉ lệ chết nghiệm thức đối chứng 65% (Bảng 2) Giá trị RPS cho thấy loại thức ăn bổ sung kháng thể cho tỉ lệ bảo hộ cao khơng có khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05) thức ăn bổ sung với tỉ lệ 1,25% IgY cho giá trị RPS cao nhất, thức ăn bổ sung 3% 5% IgY Cá chết sau gây bệnh thực nghiệm có dấu hiệu đặc trưng bệnh gan thận mủ quan nội tạng gồm thận, lách gan sưng to xuất vô số đốm trắng hay nốt hoại tử (Hình 1) Phân tích vi khuẩn cách cấy trực tiếp từ nốt hoại tử thận lên môi trường thạch máu cừu (sBA), ủ 30°C, sau 36-48 xuất khuẩn lạc đặc trưng vi khuẩn E ictaluri Hình Cá tra giống bệnh gan thận mủ thông qua gây bệnh thực nghiệm Thận, lách gan sưng to có nhiều nốt hoại tử màu trắng TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 123 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN IV THẢO LUẬN Lee ctv (2000) nghiên cứu khả bảo vệ thụ động IgY kháng đặc hiệu vi khuẩn Yersinia ruckeri cá hồi vân chứng tỏ hoạt tính IgY bền với acid pepsin Đồng thời nhóm nghiên cứu cho thấy tiêm trực tiếp IgY vào khoang bụng hay cho cá ăn cho kết giảm tỉ lệ chết sau gây nhiễm cá với Y ruckeri phương pháp ngâm Gutierrez ctv (1993) có kết tương tự cho cá chình ăn thức ăn chứa IgY kháng đặc hiệu E tarda giúp giảm tỉ lệ chết Ngoài ra, Gutierrez ctv (1993) cho thấy cho ăn IgY với lượng 400 mg/cá có khả làm trung hịa vi khuẩn E tarda ruột cá vòng 24 sau gây nhiễm với liều 105-6 CFU/cá Hơn nữa, cho ăn IgY giúp ngăn chặn E tarda xâm nhập vào gan thận cá thông qua tổn thương ruột Tương tự, nghiên cứu chúng tôi, việc cho cá tra ăn thức ăn bổ sung IgY kháng đặc hiệu E ictaluri trước sau gây bệnh thực nghiệm giúp giảm tỉ lệ chết đáng kể nghiệm thức bổ sung, nghiệm thức bổ sung 1,25% lòng đỏ trứng gà chứa IgY vào thức ăn cho hiệu tốt Giá trị RPS nghiệm thức cho ăn thức ăn bổ sung 1,25% lịng đỏ trứng gà hai thí nghiệm cao, 95% 87% thí nghiệm phòng trị bệnh Kết kết hợp với tính dễ thực phương pháp cho ăn cho thấy thức ăn bổ sung lòng đỏ trứng gà chứa kháng thể kháng E ictaluri có khả áp dụng vào thực tiễn Ngoài ra, điều thú vị nghiên cứu áp dụng phương pháp ngâm tự nhiên để gây bệnh thực nghiệm cho cá tra đánh giá hiệu phòng hay trị bệnh 124 thức ăn bổ sung kháng thể Trong nghiên cứu xác định hiệu phòng hay trị bệnh thức ăn cho cá tra, điều quan trọng không gây sốc cá tiến hành gây bệnh thực nghiệm, cho cá ăn bình thường ngày gây bệnh thực nghiệm Để thỏa mãn điều kiện này, phương pháp ngâm phương pháp tiêm áp dụng cá tra Trước tiên cá tra nhạy cảm, cho cá ăn trước thao tác với cá thức ăn trào ngược ngoài; ngược lại cho ăn sau thao tác cá cá biếng ăn bỏ 1-2 lần ăn Hai phương pháp phải thao tác với cá, để tránh làm sốc cá cá phải nhịn đói trước sau tiêm hay ngâm ngày gây bệnh thực nghiệm Điều ảnh hưởng đến kết thí nghiệm xác định hiệu việc cho ăn Khi áp dụng phương pháp tiêm phương pháp ngâm, tỉ lệ chết nghiệm thức thí nghiệm đối chứng khơng có khác biệt đáng kể (Kết không công bố) V KẾT LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy, thức ăn bổ sung kháng thể IgY có hiệu tốt phịng trị bệnh gan thận mủ cá tra ba tỉ lệ phối trộn 1,25%, 3% 5% lòng đỏ trứng gà chứa IgY kháng đặc hiệu E ictaluri Trong đó, tỉ lệ phối trộn 1,25% IgY cho hiệu phòng trị bệnh tốt Tỉ lệ bảo hộ thức ăn bổ sung 1,25% IgY thí nghiệm phịng bệnh 95% thí nghiệm trị bệnh 87% Kết cho phép người nuôi hy vọng vào phương pháp phòng bệnh trị bệnh gan thận mủ cho cá tra an toàn, đơn giản, rẻ, hữu hiệu dễ thực TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu nằm khuôn khổ đề tài “Nghiên cứu phòng chữa bệnh mủ gan cá tra kháng thể đặc hiệu chống vi khuẩn Edwardsiella ictaluri” TS Dương Thị Hương Giang (Đại Học Cần Thơ) làm Chủ nhiệm đề tài Sở Khoa học Cơng nghệ tỉnh Đồng Tháp cấp kinh phí TÀI LIỆU THAM KHẢO Lý Thị Thanh Loan, 2009 Quan trắc, cảnh báo môi trường dịch bệnh thủy sản số vùng nuôi thủy sản tỉnh Đồng sông Cửu Long miền Đông Nam Bộ năm 2008 Báo cáo tổng kết nhiệm vụ thường xuyên, Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản Amend D.F., 1981 Potency testing of fish vaccines International Symposium on Fish Biologics: serodiagnostics and vaccines Developments in Biological Standardization, 49, 447–454 Arasteha N., Aminirisseheib A.H., Yousif A.N., Albrightb L.J., Durance T.D., 2004 Passive immunization of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) with chicken egg yolk immunoglobulins (IgY) Aquaculture, 231, 23 – 36 Crumlish, M., T Dung, J Turnbull, N Ngoc and H Ferguson, 2002 Identification of E ictaruli from the diseased freshwater catfish Pangasius hypophthalmus Sauvage, cultured in the Mekong Delta, Vietnam Journal of Fish Diseases, 25, 733 – 736 Dias da Silva W., Tambourgi D.V., 2010 IgY: A promising antibody for use in immunodiagnostic and in immunotherapy Veterinary Immunology and Immunopathology, 135, 173–180 Ferguson, H.W., Turnbull, J.F., Shinn, A., Thompson, K., Dung, T.T and Crumlish, M., 2001 Bacillary necrosis in farmed Pangasius hypophthalmus (Sauvage) from the Mekong Delta, Vietnam Journal of Fish Diseases, 24, 509 – 513 Gutierrez M.A., Miyazaki T., Hatta H., Kim M., 1993 Protective properties of egg yolk IgYcontaining anti-Edwardsiella tarda antibody against paracolo disease in the Japanese eel, Anguilla japonica Temminck & Schlegel Journal of Fish Diseases, 16, 113–22 Kim D.K., Jang I.K., Seo H.C., Shin S.O., Yang S.Y., Kim J.W., 2004 Shrimp protected from WSSV disease by treatment with egg yolk antibodies (IgY) against a truncated fusion protein derived from WSSV Aquaculture, 237, 21 – 30 Lee S.B., Mine Y., Stevenson R.M.W., 2000 Effects of hen egg yolk immunoglobulin in passive protection of rainbow trout against Yersinia ruckeri Journal of Agriculture and Food Chemistry, 48, 110–115 Li X., Shuai J., Fang W., 2006 Protection of Carassius auratus Gibelio against infection by Aeromonas hydrophila using specific immunoglobulins from hen egg yolk Journal of Zhejiang University SCIENCE B7, 11, 922 – 928 Narat M., 2003 Production of Antibodies in Chickens Food Technology and Biotechnology, 41 (3), 259– 267 Xu Y., Li X., Jin L., Zhen Y., Lu Y., Li S., You J., Wang L., 2011 Application of chicken egg yolk immunoglobulins in the control of terrestrial and aquatic animal diseases: A review Biotechnology Advances, 29, 860–868 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 125 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN PROTECTION EFFICACY OF FEED SUPPLEMENTED WITH antiEdwardsiella ictaluri IgY AGAINST BACILLARY NECROSIS ON STRIPED CATFISH (Pangasianodon hypophthalmus) Nguyen Thi Hien1, Le Hong Phuoc1, Ngo Thi Bich Phuong1, Nguyen Pham Hoang Huy1, Vo Hong Phuong1, Chung Minh Loi1, Duong Thi Huong Giang2 ABSTRACT Bacillary necrosis caused by Edwardsiella ictaluri has been one of the most important diseases of striped catfish (Pangasianodon hypophthalmus) cultured in the Mekong Delta, Vietnam The aim of this study is to evaluate the efficacy of feed supplemented with egg yolk IgY specific against E ictaluri in prevention and treatment of bacillary necrosis The healthy striped catfish, which were 15-20 g/fish, were fed with feed coated by 1.25%, 3% and 5% egg yolk containing IgY against E ictaluri before and after challenging by natural immersion, corresponding to prevention and treatment experiment The results showed that the mortalities of three groups fed with egg yolk containing anti-E ictaluri IgY were significantly lower than that of the control group fed with egg yolk without anti-E ictaluri IgY in both experiments The highest RPS values were obtained in the group fed with 1.25% egg yolk containing anti-E ictaluri IgY, which were 95% and 87% in the prevention and treatment experiment, respectively In conclusion, the egg yolk enriched with anti-E ictaluri IgY had the ability to protect striped catfish from bacillary necrosis via oral administration These results allow the aquaculturists to approach a safe, simple, effective and practical method in controlling this type of diseases in striped catfish Keywords: bacillary necrosis, Edwardsiella ictaluri, egg yolk IgY, striped catfish Người phản biện: TS Nguyễn Thị Ngọc Tĩnh Ngày nhận bài: 5/9/2013 Ngày thông qua phản biện: 20/9/2013 Ngày duyệt đăng: 15/10/2013 Southern Monitoring Center for Aquaculture Environment & Epidemic, Research Institute for Aquaculture No Email: nguyenhien05@gmail.com Biotechnology Research & Development Institute, Can Tho University 126 TAÏP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 ... bệnh gan thận mủ thức ăn bổ sung kháng thể Thí nghiệm gồm nghiệm thức đối chứng âm, nghiệm thức cho ăn thức ăn bổ sung lòng đỏ trứng gà không chứa kháng thể kháng E ictaluri nghiệm thức cho ăn thức. .. 3.2 Hiệu trị bệnh gan thận mủ thức ăn bổ sung kháng thể Ở thí nghiệm này, sau thời gian cá ổn định, tiến hành gây bệnh thực nghiệm trước cho cá ăn với thức ăn bổ sung kháng thể Cá cho ăn thức ăn. .. cho cá ăn với thức ăn bổ sung kháng thể, cho cá ăn lần ngày vào sáng chiều Sau tuần cho ăn với thức ăn bổ sung kháng thể, tiến hành gây bệnh thực nghiệm cho nghiệm thức thí nghiệm (trừ nghiệm thức