Bài viết trình bày việc thực hiện kiểm tra lại các mô hình này trên sáu mẫu thức ăn chế biến trong phòng thí nghiệm. Kết quả kiểm tra cho thấy tất cả các mô hình dự đoán đều cho số dư dự đoán và độ chệch cao chứng tỏ các mô hình này không phù hợp để dự đoán giá trị độ tiêu hóa protein protein, cần thiết phải xây dựng lại mô hình hồi quy phù hợp, không đi qua điểm 0.
VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN KIỂM CHỨNG MƠ HÌNH TƯƠNG QUAN GIỮA ĐỘ TIÊU HĨA PROTEIN IN VIVO VÀ IN VITRO TRÊN THỨC ĂN TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (Litopenaeus vannamei) Nguyễn Thị Lan Chi1*, Lê Thị Lâm1 TÓM TẮT Các nhà quản lý chất lượng thức ăn thủy sản tìm kiếm cơng cụ nhằm kiểm tra độ tiêu hóa protein thức ăn Đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đạm tiêu hóa thức ăn thủy sản” thực Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản bước đầu xây dựng mơ hình hồi quy mơ tả mối tương quan độ tiêu hóa in vitro độ tiêu hóa in vivo với hệ số tương quan cao (R2 > 0,9) Tuy nhiên, để đạt hệ số tương quan này, mơ hình dự đoán phải đường cong phi tuyến qua điểm Đây giả định khó xảy thực tế khơng thể có mẫu cho độ tiêu hóa protein in vivo in vitro Chính vậy, chúng tơi thực kiểm tra lại mơ hình sáu mẫu thức ăn chế biến phịng thí nghiệm Kết kiểm tra cho thấy tất mơ hình dự đốn cho số dư dự đoán độ chệch cao chứng tỏ mơ hình khơng phù hợp để dự đốn giá trị độ tiêu hóa protein protein, cần thiết phải xây dựng lại mơ hình hồi quy phù hợp, khơng qua điểm Từ khóa: độ tiêu hóa protein, phương pháp in vitro, phương pháp in vivo, thức ăn tôm thẻ chân trắng I MỞ ĐẦU Do tính tiện dụng, nhanh chi phí thấp nên ngày có nhiều nhà khoa học ngành thực phẩm thức ăn thủy sản nghiên cứu tìm cách sử dụng phương pháp in vitro nhằm dự đoán giá trị độ tiêu hóa protein in vivo sản phẩm Trong đó, phương pháp pepsin phương pháp nhà nghiên cứu lĩnh vực thực phẩm quan tâm Phương pháp sử dụng để đánh giá độ tiêu hóa protein nguyên liệu đạm động vật bột cá, bột xương thịt, … chuẩn hóa thành phương pháp tiêu chuẩn AOAC 971.09, ISO 6655:1997, 72/199/EEC TCVN 9129:2011 Các phương pháp sử dụng dung dịch pepsin mạnh (0,2%) nên cho kết độ tiêu hóa cao khơng phân biệt chất lượng khác loại bột cá (Miller et al., 2002) Đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đạm tiêu hóa thức ăn thủy sản” sử dụng phương pháp AOAC 971.09 với dung dịch pepsin pha loãng (0,0002%) để xác định độ tiêu hóa pepsin Vì theo Siccardi III (2006), có mối tương quan tuyến tính (R2 = 0,55) giá trị độ tiêu hóa protein in vivo độ tiêu hóa pepsin sử dụng pepsin với nồng độ 0,0002% Tuy nhiên, thực xác định độ tiêu hóa protein phương pháp pepsin tiêu hóa với nồng độ pepsin 0,2% tác giả khơng tìm thấy tương quan giá trị protein tiêu hóa in vivo in vitro Trung tâm Công nghệ sau thu hoạch, Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản * Email: lanchiria2@yahoo.com.vn 116 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN Ngồi phương pháp pepsin, đề tài áp dụng phương pháp pH drop phương pháp pH stat với hệ hệ ezyme Kết cho thấy xem xét mối tương quan phương pháp in vitro phương pháp in vivo thức ăn tôm thẻ chân trắng, tất phương pháp cho mối tương quan không đáng kể thực xử lý số liệu với mơ hình hồi quy tuyến tính với mơ hình hồi quy phi tuyến (R2 < 0,3) Tuy nhiên, chuyển sang xử lý số liệu với mơ hình hồi quy phi tuyến kết hợp với giả định đồ thị qua điểm tất phương pháp cho mối tương quan đáng kể (R2 > 0,9) Các mối tương quan mơ tả phương trình hồi quy phi tuyến hàm hữu tỷ [y = (a + bx)/(1 + cx + dx2)], hàm đa thức [y = a + bx + cx2 + dx3 hay y = a + bx + cx2] hàm mũ [y = a (1 – e-bx)] Trong đó, phương pháp pepsin phương pháp dự đốn độ tiêu hóa protein in vivo tốt với hệ số xác định cao (R2 = 0,93) (Trần Thị Lệ Trinh & Nguyễn Thị Lan Chi, 2013) Tuy nhiên, chưa thể sử dụng phương pháp phương pháp chuẩn để kiểm tra độ tiêu hóa protein thức ăn thương mại, giả định qua điểm giả định khó chấp nhận xét mặt sinh học Chính vậy, chúng tơi thực kiểm tra lại mơ hình số mẫu thức ăn chế biến phịng thí nghiệm Việc kiểm tra thực cách xác định độ tiêu hóa protein dự đoán giá trị in vitro vào mơ hình, so sánh giá trị với độ tiêu hóa protein xác định phương pháp in vivo II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Thức ăn chuẩn bị PTN: mô hình tương quan thực kiểm chứng thơng qua mẫu thức ăn chế biến phịng thí nghiệm có thành phần thay bột cá bánh dầu đậu nành tăng dần (gồm mẫu thức ăn đối chứng, thức ăn thay 20%, 40%, 60%, 80% 100%) Tôm thẻ chân trắng: tôm nuôi thương phẩm (trọng lượng tôm từ 8–10g/con) thu Trung tâm Quốc gia giống thủy hải sản Nam Bộ, Bà Rịa Vũng Tàu (Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II) sau kiểm tra khơng có mầm bệnh nguy hiểm Enzyme: enzyme tinh khiết hỗn hợp enzyme chiết tách từ vi sinh vật hãng Himedia (Ấn Độ), Sigma-Aldrich (Mỹ) Novozyme (Đan Mạch): Pepsin tinh khiết, hoạt độ 1:10000 (RM1251, Himedia); Trypsin từ tụy heo, loại IX-S, hoạt độ: 13.000 - 20.000 (T0303, Sigma-Aldrich); α-chymotrypsin từ tụy bò, loại II, hoạt độ: ≥ 40.000 (C4129, SigmaAldrich); Protease từ Streptomyces griseus, loại XIV, hoạt độ ≥ 3,5 (P5147, Sigma-Aldrich); Flavourzyme® 500 mg (Novozyme) Các thí nghiệm thực từ tháng 10 năm 2013 đến tháng 03 năm 2014, phịng thí nghiệm Hóa sinh, Vi sinh phịng thí nghiệm dinh dưỡng động vật ni thủy sản thuộc Trung tâm Công nghệ sau thu hoạch (Viện Nghiên cứu nuôi trồng thủy sản II) 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp chuẩn bị mẫu thức ăn có cơng thức thiết lập Với mục đích tạo thức ăn có thành phần khác nhau, chất lượng khác nhằm kiểm chứng độ phù hợp mô hình, sáu phần thiết lập có mức đạm khoảng 40% tỷ lệ protein thô/năng lượng (P/E) khoảng 102 mg P/Kcal gồm: phần đối chứng - TĐC, phần thay 20%, 40%, 60%, 80% 100% bột cá Chi lê bánh dầu đậu nành (T20, T40, T60, T80 T100, tương ứng) (Bảng 1) Thành phần nguyên liệu tham khảo từ dự án nghiên cứu Nguyễn Văn Nguyện (2012) TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 117 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN Quy trình chuẩn bị: nguyên liệu thô từ khoảng 25% nước cất đun sôi vào; xay mịn, rây qua rây 0,5mm trước trộn nhồi thức ăn thành phối trộn Cân nguyên liệu khô trước (gồm hỗn hợp đặc, sệt; nén, bóp lại thành cục bột cá, bột gan mực, bánh dầu đậu nành, wheat Sử dụng máy xay thịt (Meat mincing machine gluten, bột mì, dicalcium phosphate (CaHPO4), TJ12-B) để ép 02 lần cho trộn trước premix khống/vitamin, cholesterol, ép thành viên thức ăn có đường kính lỗ khuôn methionine, lysine, choline chloride, stay 2mm Sau đó, sấy khơ 60oC 24 giờ, C, chất hấp dẫn, chống mốc, chống oxi hóa, mở cửa tủ sấy Trong trình Cr2O3), trộn nguyên liệu với sấy, kiểm tra nhanh độ ẩm viên thức ăn, khoảng 10 phút, xay lại hỗn hợp độ ẩm < 10% đạt Cuối thức ăn nguyên liệu cho mịn trước cho lecithin cắt nhỏ thành viên có kích thước khoảng dầu gan mực vào Tiếp tục trộn thêm phút mm Thức ăn bảo quản -20oC Thêm khoảng 30% nước cất vào, nhào đều, sử dụng đem hấp 30 phút Sau hấp, thêm từ Bảng Thành phần nguyên liệu thức ăn thí nghiệm Nguyên liệu (%) TĐC T20 T40 T60 T80 T100 Bột cá Chilê 65% 33,00 26,40 19,80 13,20 6,60 0,00 Bột gan mực 1,00 1,50 3,00 4,00 5,00 6,00 Bánh dầu đậu nành 45% 24,00 33,00 41,20 48,60 54,70 58,70 Wheat gluten 4,00 4,00 4,00 5,00 6,00 8,00 Bột mì 29,85 26,80 23,55 19,30 17,40 13,75 2,00 2,00 2,00 3,00 3,00 6,00 Premix khoáng/vitamin 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 Dầu gan mực 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 Lecithin 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 Cholesterol 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 Lysine 0,05 0,05 0,1 0,45 0,75 0,95 Methionine (Met) 0,10 0,25 0,35 0,45 0,55 0,60 Choline chloride 60% 0,65 0,65 0,65 0,65 0,65 0,65 Chất hấp dẫn** 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 Stay C 35% 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 Chống mốc 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 Chống oxi hóa 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 Cr2O3 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 Dicalcium phosphate * * Premix khoáng/vitamin (Bauer et al., 2012): Vitamin A (500.000 UI/kg), Vitamin D3 (250.000 UI/kg), Vitamin E (5.000 mg/kg), Vitamin K3 (500 mg/kg), Vitamin B1 (1.000 mg/kg), Vitamin B2 (1.000 mg/kg), Vitamin B6 (1.000 mg/kg), Vitamin B12 (2.000 μg/kg), Niacin (2.500 mg/kg), Calcium pantothenate (4.000 mg/kg), Folic acid (500 mg/kg), Biotin (10 mg/kg), Vitamin C (10.000 mg/kg), Choline (100.000 mg/kg), Inositol (1.000 mg/kg), Selen (30 mg/kg), Sắt (5.000 mg/kg), Đồng (1.000 mg/kg), Mangan (5.000 mg/kg), Kẽm (9.000 mg/kg), Cobalt (50 mg/kg), Iodine (200 mg/kg) ** Chất hấp dẫn Aquatrac công ty GePro (Đức) cung cấp 118 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN Bảng Thành phần hóa học nguyên liệu sử dụng tạo thức ăn thí nghiệm Nguyên liệu Ẩm (%) Protein (%) Lipid (%) Tro (%) Xơ (%) Bột cá Chilê 65% 7,95 ± 0,01 65,37 ± 0,52 7,17 ± 0,61 16,09 ± 0,01 0,98 ± 0,24 Bột gan mực 6,67 ± 0,01 45,16 ± 0,27 16,47 ± 0,47 7,75 ± 0,06 6,45 ± 0,55 BDĐN 45% 10,08 ± 0,14 48,80 ± 0,17 2,70 ± 0,54 6,18 ± 0,08 7,89 ± 0,07 Wheat gluten 7,84 ± 0,07 77,54 ± 0,36 0,78 ± 0,13 0,74 ± 0,25 0,38 ± 0,16 Bột mì 12,06 ± 0,06 11,23 ± 0,22 1,47 ± 0,32 0,58 ± 0,05 0,51 ± 0,11 2.2.2 Phương pháp pH drop enzyme từ Streptomyces griseus), lắc chuyển vào Theo Hsu et al., (1977) Lazo et al., bể ủ nhiệt, ủ 55oC phút Lấy cốc để (1998), phương pháp pH drop enzyme nhiệt độ phòng ghi nhận giá trị pH sau thực sau: cân mẫu thức ăn casein phút Độ tiêu hóa tương đối tính tương tự cho mẫu chứa 6,25 mg protein Thêm 10ml pH drop enzyme nước cất vào cốc, lắc giờ, nhiệt độ phòng Điều chỉnh pH dung dịch pH 8,0 2.2.4 Phương pháp pH stat enzyme: (Pedersen & Eggum, 1983) NaOH 0,1N Thêm 1,0ml hỗn hợp enzyme Cân mẫu thức ăn cho mẫu chứa 18,75 (1,6 mg/ml trypsin + 3,1 mg/ml chymotrypsin + mg protein Thêm 30 ml nước cất vào cốc, 1,6 mg/ml Flavourzyme® 500MG), lắc đều, đo lắc giờ, nhiệt độ phòng Điều lại pH sau 10 phút Kết xác định độ tiêu hóa chỉnh pH dung dịch pH 8,0 NaOH tương đối sau: 0,1N Thêm 3,0 ml hỗn hợp enzyme (1,6 Độ tiêu hóa protein (-∆pH mẫu) = x 100 (-∆pH casein) tương đối (RPD, %) mg/ml trypsin + 3,1 mg/ml chymotrypsin + 2.2.3 Phương pháp pH drop enzyme: trì pH dung dịch pH 8,0 cách (Satterlee et al., 1979; Lazo et al., 1998) 1,6 mg/ml Flavourzyme® 500MG), lắc thêm NaOH 0,1N từ máy chuẩn độ điện tự Chuẩn bị mẫu tương tự pH drop enzyme động Radiometer TritraLab 865, Sau đó, thêm 1,0 ml dung dịch A (1,6 mg/ml Sau đó, ghi nhận lại thể tích NaOH 0,1N trypsin + 3,1 mg/ml chymotrypsin + 1,6 mg/ml sử dụng Flavourzyme® 500MG), lắc 10 phút Thêm 1,0 ml dung dịch B (7,95 mg/ml protease Độ thủy phân (DH, %) = BxNBx1/αx1/ MPx1/htotx100 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 119 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Trong đó: B: thể tích NaOH 0,1N sử dụng (ml); NB: Nồng độ đương lượng NaOH (N); 1/α: Hệ số thuỷ phân nhóm α -amin phụ thuộc pK amin điều kiện nhiệt độ pH thực nghiệm; MP: lượng protein phản ứng (%); 1/htot: tổng số liên kết peptide mẫu protein khác (meq/g) Thực tương tự phương pháp pH stat enzyme, nhiên enzyme sử dụng hỗn hợp enzyme (1,6 mg/ml trypsin + 3,1 mg/ml chymotrypsin + 1,6 mg/ml Flavourzyme® 500MG + 7,95 mg/ml protease từ Streptomyces griseus), thời gian phản ứng Kết xác định độ thủy phân (DH) tính theo cơng thức phương pháp pH stat enzyme 2.2.6 Phương pháp pepsin tiêu hóa: (Siccardi III, 2006; AOAC, 971.09) Ban đầu mẫu khử béo cách chiết mẫu với ether dầu Soxhlet Cân 0,5 g mẫu khử béo, cho vào ống máy xoay với 150 ml dung dịch pepsin 0,0002% (trong HCl 0,075N) Ủ 45oC, tốc độ xoay: 15 vịng/phút, 16 Hình Máy chuẩn độ điện tự động Sau ủ, để lắng, lọc giấy lọc cân trọng lượng qua phễu buchner Rửa lại lần với acetone, lần 15 ml acetone 2.2.5 Phương pháp pH stat enzyme: (Ezquerra et al., 1997) Xác định protein thô cặn thu (Protein thơ cặn khơng tiêu hóa) Protein thơ cặn thu x 100 Protein tiêu hóa (%) = 100 - Protein thô mẫu Nếu xem xét hàm lượng Nitơ phi protein: Protein tiêu hóa (%) = 100 - Protein thô cặn thu x 100 Protein thô mẫu – (Nitơ phi protein x 6,25) 2.2.7 Quy trình ni thử nghiệm in vivo Chọn tơm thí nghiệm có kích cỡ đồng (8 – 10g), khỏe mạnh Tơm bố trí vào 18 bể kính có đánh số, mật độ 10 con/ bể, thể tích chứa nước 70 lít, nước ni tơm có độ mặn 18‰ Hệ thống lọc nước sử dụng vào ban đêm Định kỳ tuần thay nước lần, thay khoảng 50% thể tích nước bể Thử nghiệm bao gồm nghiệm thức, nghiệm thức lặp lại lần Trước thí nghiệm tơm ni dưỡng 120 vịng tháng để thích nghi với môi trường, cho ăn loại thức ăn thương mại Sau tập cho tơm ăn thức ăn thí nghiệm vòng ngày tiến hành thu phân Khi tiến hành thử nghiệm cho tôm ăn 03 lần/ngày, cho ăn - 6% trọng lượng thân, lượng thức ăn điều chỉnh cho tôm ăn hết tránh để thức ăn dư bể Sau 30 phút cho ăn kiểm tra lại lượng thức ăn cho ăn Tiến hành siphong thu phân, ngày thu phân lần Tơm ni khoảng tháng TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Trong thời gian thí nghiệm tiêu mơi trường như: pH, to, DO, N-NH3, N-NO2- theo dõi thường xuyên: pH, nhiệt độ đo ngày lần; DO, N-NH3, N-NO2- đo tuần lần Độ tiêu hóa protein khả kiến APD (%) = 100 - Phân thu được bảo quản -20oC tiến hành sấy đông khô Sau sấy đông khô, phân đem xác định độ ẩm, protein thô hàm lượng Cr2O3 % Cr2O3thức ăn % Cr2O3phân 2.2.8 Phương pháp phân tích Hàm lượng protein thơ xác định theo TCVN 4328-1:2007 Hàm lượng lipid thô xác định theo TCVN 4331:2001 Hàm lượng tro xác định theo TCVN 4327:2007 Độ ẩm xác định theo TCVN 4326:2001 Hàm lượng Nitơ phi protein xác định theo TCVN 8801:2011 Hàm lượng Cr2O3 xác định theo phương pháp Furukawa & Tsukahara, 1966 Hàm lượng N-NO2- xác định theo phương pháp APHA 2005.4500.NO2B x % Protein phân % Protein thức ăn x 100 Hàm lượng N-NH3 xác định theo phương pháp APHA 2005.4500.NH3 F 2.2.9 Phương pháp xử lý số liệu Sử dụng phần mềm SPSS 16.0 để phân tích thống kê Khác biệt có ý nghĩa mức 5% (P < 0,05) Để kiểm chứng mơ hình tương quan, sử dụng mẫu thức ăn chế biến phịng thí nghiệm Kết kiểm tra đánh giá dựa số dư dự đoán, độ chệch giá trị in vitro vào mô hình so sánh với giá trị in vivo thu nhận Theo Lemos et al., (2009), số dư dự đốn tính sau: Số dư dự đốn = APD dự đoán từ in vitro - APD xác định từ in vivo Độ chệch (%) = APD dự đoán từ in vitro – APD xác định từ in vivo APD xác định từ in vivo III KẾT QUẢ 3.1 Kết phân tích thành phần dinh dưỡng mẫu thức ăn chế biến PTN Kết phân tích thành phần dinh dưỡng mẫu thức ăn chế biến từ bảng cho thấy hàm lượng protein khơng khác có ý nghĩa x 100 thống kê tất phần Trong đó, hàm lượng lipid có dao động có khuynh hướng giảm nhẹ tăng phần trăm thay bột cá bánh dầu đậu nành Do bánh dầu đậu nành (lipid 2,70%) có hàm lượng lipid thấp so với bột cá (7,17%) nên tăng phần trăm bánh dầu đậu nành hàm lượng lipid giảm TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 121 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Bảng Thành phần dinh dưỡng thức ăn chế biến PTN (n = 3) Protein Lipid Tro Xơ (%, VCK) (%, VCK) (%, VCK) (%, VCK) Tỷ lệ Ca/P TĐC 44,36a ± 0,35 5,87c ± 0,13 11,38e ± 0,02 2,46a ± 0,12 1,48 T20 44,00a ± 0,52 5,57bc ± 0,24 10,89d ± 0,05 3,27b ± 0,20 1,48 T40 44,73a ± 0,35 5,45abc ± 0,11 10,60c ± 0,02 3,98bc ± 0,34 1,52 T60 44,49a ± 0,73 5,52abc ± 0,29 10,61c ± 0,01 4,70cd ± 0,18 1,45 T80 44,54a ± 0,37 5,00ab ± 0,27 10,03b ± 0,03 5,14de ± 0,26 1,29 T100 44,64a ± 0,25 4,95a ± 0,09 9,39a ± 0,01 5,79e ± 0,32 1,52 TT Mẫu * Các giá trị cột có ký hiệu mũ khác khác có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Khi xét thành phần khác thành So sánh với quy định tạm thời thức ăn tôm phần tro xơ thay đổi đáng kể Khi tăng thẻ chân trắng (thông tư 73/2009/BNNPTNT, phần trăm thay bột cá bánh dầu đậu ngày 20/11/2009), thành phần dinh dưỡng nành hàm lượng xơ tăng hàm lượng mẫu thức ăn thí nghiệm thỏa mãn tro giảm Điều giải thích bánh tiêu chuẩn dành cho tôm giai đoạn từ – 12,g dầu đậu nành có hàm lượng xơ (7,89%) cao (đây giai đoạn tơm ni thí nghiệm), tro (6,18%) thấp so với bột cá (xơ có hàm lượng xơ thức ăn T60, T80 T100 0,98% tro 16,09%) Xét tỷ lệ Ca/P cho cao ngưỡng cho phép (> 4%) thấy, tất phần có tỷ lệ Ca/P ≥ Theo Davis et al., (1993), Ca diện 1% hàm lượng phosphor từ 0,5 – 1%, 2% hàm lượng phosphor – 2% Như vậy, tỷ lệ Ca/P mẫu thức ăn thí nghiệm thỏa điều kiện tăng trưởng tơm thẻ 3.2 Độ tiêu hóa protein in vivo thức ăn chế biến PTN Trong thời gian nuôi thử nghiệm, yếu tố môi trường nằm khoảng thuận lợi cho sinh trưởng tơm, nhiệt độ từ 28,0 – 30,7oC; pH: 7,1 – 8,3; DO: 6,5 – 7,4 mg/l; N-NH3: 0,001 – 0,013 mg/l; N-NO2-: 0,002 – 0,015 mg/l 122 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Bảng Độ tiêu hóa protein in vivo thức ăn chế biến PTN Thức ăn Mẫu Phân CV (%) (%, VCK) Protein thô (%, VCK) APD* (%) (%, VCK) Cr2O3 1,00 ± 0,02 44,36 ± 0,19 2,67 ± 0,06 45,05 ± 1,84 62,09a ± 2,03 3,28 T20 1,00 ± 0,04 44,00 ± 0,26 2,37 ± 0,19 39,84 ± 3,33 61,79a ± 1,29 2,09 T40 0,94 ± 0,15 44,73 ± 0,05 2,36 ± 0,09 43,84 ± 1,52 60,78a ± 1,58 2,59 T60 0,98 ± 0,01 44,49 ± 0,21 2,41 ± 0,15 43,64 ± 0,06 59,76ab ± 2,70 4,52 T80 1,02 ± 0,01 44,54 ± 0,25 2,32 ± 0,05 45,23 ± 0,85 55,41bc ± 0,21 0,38 T100 0,95 ± 0,01 44,64 ± 0,54 1,87 ± 0,05 40,42 ± 1,02 53,93c ± 2,19 4,06 Cr2O3 Protein thô (%, VCK) TĐC * Các giá trị cột có ký hiệu mũ khác khác có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Kết cho thấy hệ số biến động (CV) thực nuôi thử nghiệm in vivo nằm giới hạn cho phép (< 5%), độ biến động khơng cao, kết tin cậy Khi xét kết độ tiêu hóa protein in vivo, nhận thấy độ tiêu hóa protein in vivo mẫu thức ăn đối chứng tương đối thấp (62,09 ± 2,03%) Do mẫu thức ăn chế biến điều kiện PTN, trộn tay ép máy xay thịt nên có độ tiêu hóa so với mẫu thức ăn thương mại có hàm lượng protein Các mẫu thức ăn thương mại sản xuất nhà máy với thiết bị máy móc đại, nguyên liệu xay mịn hơn, trộn Ngoài ra, mẫu thức ăn thương mại trải qua giai đoạn chịu nhiệt, làm chín nén ép, khác biệt so với thức ăn chế biến phịng thí nghiệm, mẫu thức ăn có độ bền cao độ tiêu hóa protein cao hẳn Khi tăng phần trăm thay bột cá bánh dầu đậu nành độ tiêu hóa protein in vivo giảm Đặc biệt tỷ lệ 80 100% độ tiêu hóa in vivo giảm đáng kể khác biệt có ý nghĩa so với tỷ lệ cịn lại Năm 1990, Lim & Dominy nghiên cứu đánh giá tỷ lệ thay bột cá bánh dầu đậu nành Kết cho thấy thay bột cá đến 40% trọng lượng tơm khơng khác có ý nghĩa thống kê, nhiên tăng phần trăm thay trọng lượng tơm giảm đáng kể Trong nghiên cứu này, tác giả không đánh giá thay đổi độ tiêu hóa protein in vivo, nhiên, tác giả có khảo sát hệ số sử dụng protein (apparent net protein utilization) Kết cho thấy phần thay đến 80% thay đổi khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê, có phần thay 100% giảm đáng kể Kết tương đồng với kết nghiên cứu đề tài phần T100 có giá trị APD thấp đáng kể so với phần cịn lại 3.3 Kiểm chứng mơ hình tương quan Kết nghiên cứu từ đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đạm tiêu hóa thức ăn thủy sản” cho thấy có phương trình hồi quy phi tuyến có hệ số tương quan cao (Bảng 5) thực xử lý số liệu hồi quy phi tuyến có bổ sung điểm 0, nhằm đánh giá mối tương quan phương pháp in vitro phương pháp in vivo với số liệu 40 mẫu thức ăn thương mại (Trần Thị Lệ Trinh & Nguyễn Thị Lan Chi, 2013) TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 123 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN Bảng Các phương trình tương quan phương pháp in vitro in vivo với giả thiết qua điểm Phương pháp in vitro Phương trình hồi quy Pepsin y = a + bx + cx Hằng số Hệ số tương quan, R2 a = -0,20244 b = 1,87624 0,963 c = -0,01118 a = 0,05873 Pepsin - NPP y = a + bx + cx2 b = 2,01401 0,963 c = -0,01287 a = 0,00394 b = 3,07784 pH drop enzyme 0,963 c = -0,00170 d = 0,00042 a = -0,00196 pH drop enzyme y = a + bx + cx2 + dx3 b = 4,03978 0,954 c = -0,06426 d = 0,00032 pH stat enzyme y = a (1 – e-bx) pH stat enzyme y = a (1 – e-bx) Để kiểm chứng mơ hình trên, đề tài sử dụng mẫu thức ăn chế biến phịng thí nghiệm Kết đánh giá số dư dự đoán, độ a= 77,85977 0,953 b = 0,30111 a = 79,74929 0,956 b = 0,16573 chệch độ giá trị in vitro vào mơ hình so sánh với giá trị in vivo, thể bảng sau: Bảng Kết số dư dự đoán, độ chệch độ kiểm chứng mơ hình tương quan phương pháp pepsin tiêu hóa in vivo Mẫu Độ tiêu hóa pepsin (%) APD dự đoán (%) APD xác định (%) Số dư dự đoán Độ chệch (%) Độ (%) TĐC 59,11 ± 0,31 71,63 62,09 ± 2,03 9,54 15,36 115,36 T20 54,61 ± 1,73 68,91 61,79 ± 1,29 7,12 11,53 111,53 T40 59,87 ± 0,03 72,05 60,78 ± 1,58 11,27 18,54 118,54 T60 61,23 ± 2,89 72,76 59,76 ± 2,70 13,00 21,75 121,75 T80 59,21 ± 0,03 71,69 55,41 ± 0,21 16,28 29,37 129,37 T100 30,65 ± 5,00 46,80 53,93 ± 2,19 -7,13 -13,22 86,78 124 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Bảng Kết số dư dự đoán, độ chệch độ kiểm chứng mơ hình tương quan phương pháp pepsin tiêu hóa – NPP in vivo Mẫu Độ tiêu hóa pepsin (%) APD dự đốn (%) APD xác định (%) Số dư dự đoán Độ chệch (%) Độ (%) TĐC 51,59 ± 0,37 69,71 62,09 ± 2,03 7,61 12,26 112,26 T20 47,00 ± 2,02 66,28 61,79 ± 1,29 4,49 7,27 107,27 T40 53,30 ± 0,30 70,84 60,78 ± 1,58 10,06 16,55 116,55 T60 54,99 ± 3,12 71,89 59,76 ± 2,70 12,13 20,29 120,29 T80 53,43 ± 0,30 70,93 55,41 ± 0,21 15,51 28,00 128,00 T100 19,15 ± 6,05 33,91 53,93 ± 2,19 -20,02 -37,12 62,88 Từ bảng nhận thấy với phần có chứa bột cá (TĐC, T20 – T80) phương pháp pepsin (khơng tính có tính hàm lượng NPP) cho kết độ tiêu hóa pepsin tương tự nhau, có phần thay bột cá hồn tồn (T100) có độ tiêu hóa pepsin thấp Điều cho thấy phương pháp pepsin (khơng tính có tính hàm lượng NPP) phân biệt thức ăn không chứa bột cá thức ăn có chứa bột cá, khơng thể đánh giá chất lượng phần có độ tiêu hóa khác phần có chứa bột cá Khi giá trị độ tiêu hóa pepsin vào mơ hình tương quan kết cho thấy số dư dự đoán tăng dần tăng phần trăm thay bột cá bánh dầu đậu nành Tuy nhiên, thay hoàn toàn bột cá bánh dầu đậu nành (T100) cho số dư dự đốn âm Điều chứng tỏ mơ hình tương quan xây dựng phương pháp pepsin tiêu hóa phương pháp in vivo phù hợp để dự đoán thức ăn có thành phần protein có nguồn gốc động vật, mẫu thức ăn có thành phần protein có nguồn gốc thực vật cao khả dự đốn khơng cịn xác Bảng Kết số dư dự đốn, độ chệch độ kiểm chứng mơ hình tương quan phương pháp pH drop enzyme in vivo Mẫu RPD (%) APD dự đoán (%) APD xác định (%) Số dư dự đoán Độ chệch (%) Độ (%) TĐC 68,02 ± 2,69 74,56 62,09 ± 2,03 12,46 20,07 120,07 T20 68,44 ± 2,50 74,40 61,79 ± 1,29 12,61 20,41 120,41 T40 73,89 ± 3,76 72,33 60,78 ± 1,58 11,55 18,99 118,99 T60 67,44 ± 1,88 74,76 59,76 ± 2,70 15,00 25,10 125,10 T80 55,03 ± 6,28 78,21 55,41 ± 0,21 22,80 41,15 141,15 T100 67,40 ± 1,65 74,78 53,93 ± 2,19 20,85 38,65 138,65 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 125 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Kết từ bảng cho thấy phương pháp pH drop enzyme cho độ tiêu hóa protein tương đối thay đổi không theo khuynh hướng tăng phần trăm thay bột cá bánh dầu đậu nành Khi xét số dư dự đoán cho thấy tăng phần trăm thay bánh dầu đậu nành lên đến 60% (T60) số dư dự đốn bắt đầu tăng Điều chứng tỏ khả dự đốn APD phương pháp pH drop enzyme khơng cao, đặc biệt tăng phần trăm thành phần protein có nguồn gốc thực vật (thay từ 60% trở lên) Bảng Kết số dư dự đoán, độ chệch độ kiểm chứng mơ hình tương quan phương pháp pH drop enzyme in vivo Mẫu RPD (%) APD dự đoán (%) APD xác định (%) Số dư dự đoán Độ chệch (%) Độ (%) TĐC 64,55 ± 1,78 79,54 62,09 ± 2,03 17,45 28,10 128,10 T20 66,89 ± 0,69 78,98 61,79 ± 1,29 17,19 27,82 127,82 T40 64,05 ± 0,92 79,66 60,78 ± 1,58 18,88 31,05 131,05 T60 67,53 ± 2,17 78,83 59,76 ± 2,70 19,07 31,91 131,91 T80 68,53 ± 1,50 78,59 55,41 ± 0,21 23,18 41,84 141,84 T100 68,72 ± 1,51 78,55 53,93 ± 2,19 24,62 45,64 145,64 Tương tự phương pháp pH drop enzyme, phương pháp pH drop enzyme cho số dư dự đoán cao đặc biệt tăng thức ăn thay từ 80% bánh dầu đậu nành (Bảng 9) Như vậy, phương pháp pH drop enzyme giống phương pháp pH drop enzyme có khả dự đốn APD khơng cao, phần trăm protein thực vật cao (thay từ 80% trở lên) Bảng 10 Kết số dư dự đoán, độ chệch độ kiểm chứng mơ hình tương quan phương pháp pH stat enzyme in vivo Mẫu DH (%) APD dự đoán (%) APD xác định (%) Số dư dự đoán Độ chệch (%) Độ (%) TĐC 7,99 ± 0,16 71,43 62,09 ± 2,03 9,33 15,03 115,03 T20 7,90 ± 0,16 71,43 61,79 ± 1,29 9,63 15,59 115,59 T40 6,00 ± 0,38 66,25 60,78 ± 1,58 5,47 9,00 109,00 T60 6,36 ± 0,00 67,54 59,76 ± 2,70 7,77 13,01 113,01 T80 6,60 ± 0,22 67,99 55,41 ± 0,21 12,58 22,70 122,70 T100 5,99 ± 0,38 66,14 53,93 ± 2,19 12,21 22,64 122,64 Bảng 10 cho thấy phương pháp pH stat enzyme có khuynh hướng cho kết DH cao phần có phần trăm bột cá cao, ngược lại cho kết DH thấp phần có phần trăm bột cá thấp Số dư dự đoán từ phương pháp pH stat enzyme thấp so với 126 phương pháp khác Ở phần T80 T100 số dư dự đoán cao so với phần lại, chênh lệch không nhiều Điều cho thấy phương pháp pH stat enzyme có khả dự đốn APD ổn định so với phương pháp khác TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Bảng 11 Kết số dư dự đoán, độ chệch độ kiểm chứng mơ hình tương quan phương pháp pH stat enzyme in vivo Mẫu DH (%) APD dự đoán (%) APD xác định (%) Số dư dự đoán Độ chệch (%) Độ (%) TĐC 14,77 ± 0,00 73,44 62,09 ± 2,03 11,35 18,28 118,28 T20 15,69 ± 0,25 74,53 61,79 ± 1,29 12,74 20,61 120,61 T40 16,29 ± 0,24 75,12 60,78 ± 1,58 14,33 23,58 123,58 T60 15,49 ± 0,25 74,43 59,76 ± 2,70 14,67 24,55 124,55 T80 13,78 ± 0,40 72,33 55,41 ± 0,21 16,92 30,53 130,53 T100 14,22 ± 0,24 73,01 53,93 ± 2,19 19,08 35,37 135,37 Giá trị DH thu nhận từ phương pháp pH stat enzyme không cho thấy khuynh hướng rõ rệt tăng phần trăm thay bột cá bánh dầu đậu nành (Bảng 11) Khi xét số dư dự đoán, kết cho thấy tăng phần trăm thay bột cá bánh dầu đậu nành số dư dự đốn tăng Sở dĩ giá trị APD giảm, giá trị APD dự đốn thay đổi khơng đáng kể Bảng 12 Điểm trung bình số dư dự đốn độ chệch kiểm chứng mơ hình TT Phương pháp Điểm TB số dư dự đoán Điểm TB độ chệch Pepsin 10,72 18,30 Pepsin-NPP 11,28 19,60 pH drop enzyme 18,55 27,40 pH drop enzyme 20,06 34,39 pH stat enzyme 9,50 16,33 pH stat enzyme 14,85 25,49 Khi thực kiểm chứng, giá trị APD dự đốn dựa phương trình hồi quy phi tuyến có bổ sung điểm cho số dư dự đoán (từ 9,50 – 20,06 điểm) độ chệch (từ 16,33 – 34,39 điểm) cao Trong đó, phương pháp pH stat enzyme cho điểm trung bình số dư dự đoán độ chệch thấp (9,50 16,33 điểm, tương ứng) Chứng tỏ phương pháp pH stat enzyme có khả dự đốn APD ổn định so với phương pháp khác, nhiên số dư dự đốn cịn cao chứng tỏ mơ hình hồi quy phi tuyến có bổ sung điểm chưa phải mơ hình dự đốn tốt TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 127 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Bảng 13 So sánh trung bình phương pháp in vitro in vivo Phương pháp P (Levene test) P (Kruskal-Wallis test) Pepsin 0,029 0,001 Pepsin-NPP 0,006 0,001 pH drop enzyme 0,001 0,000 pH drop enzyme 0,000 0,000 pH stat enzyme 0,026 0,000 pH stat enzyme 0,000 0,000 Khi thực xử lý thống kê so sánh giá trị trung bình phương pháp in vivo in vitro, kết cho thấy tất phương pháp cho kết APD dự đốn khác biệt có ý nghĩa thống kê so với giá trị APD in vivo (P < 0,05) (Bảng 13) IV THẢO LUẬN Một thách thức nhà quản lý tìm cơng cụ nhanh chóng đáng tin cậy dùng để dự đốn tương đối xác độ tiêu hóa protein thức ăn thủy sản bày bán thị trường, nhằm quản lý chặt chẽ tình hình chất lượng thức ăn Đây nhu cầu quan trọng ngành công nghiệp sản xuất thức ăn thủy sản phương pháp in vitro giảm đáng kể chi phí nhân cơng q trình đánh giá ngun liệu thiết lập cơng thức thức ăn Phương pháp in vitro mô tiêu hóa in vivo nguyên liệu nhiều nhà nghiên cứu khoa học giới quan tâm cho kết khả quan, hệ số tương quan tương đối cao Tuy nhiên, việc ứng dụng phương pháp vào đánh độ tiêu hóa protein thức ăn thủy sản lại nhận quan tâm tính chất phức tạp thức ăn thức ăn hỗn hợp bao gồm protein thực vật lẫn protein động vật, đó, phương pháp in vitro cho tương quan cao xét đến nguồn gốc protein riêng biệt (Pedersen & Eggum, 1983) Chính vậy, thực đánh 128 giá tương quan độ tiêu hóa protein in vitro in vivo 40 mẫu thức ăn tôm thẻ chân trắng thương mại, độ tương quan thấp (R2 < 0,3) cho tất phương pháp khảo sát (pH drop, pH stat pepsin tiêu hóa) Ngồi hạn chế trên, 40 mẫu thức ăn thương mại khảo sát có tính chất khơng q khác biệt nên điểm đồ thị tương quan tập trung lại nhóm giá trị làm cho hệ số tương quan phương trình tương quan thấp Khi sử dụng mẫu thức ăn chế biến PTN để kiểm chứng mơ hình tương quan giá trị APD mẫu thức ăn thấp (từ 53,93 – 62,09%), nằm ngồi khoảng liệu phương trình hồi quy phi tuyến xây dựng 40 mẫu thức ăn thương mại (từ 67,95 – 84,75%) Bên cạnh đó, số dư dự đốn tất phương pháp cao (điểm trung bình ≥ 9,5) Như vậy, nhận thấy phương trình hồi quy phi tuyến không phù hợp để xác định giá trị APD dự đốn mẫu có độ tiêu hóa biểu kiến thấp khoảng liệu (APD < 67,95%) Ngoài ra, bổ sung thêm điểm 0, tức chấp nhận giả thiết x = y = Trong đó, giả thiết khó xảy thực tế, việc xây dựng phương trình hồi quy phi tuyến qua điểm gây sai số đáng kể dự đoán giá trị APD Chính vậy, cần xây dựng lại phương trình hồi quy mà khơng sử dụng điểm TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN V KẾT LUẬN - Phương pháp pepsin tiêu hóa phù hợp để dự đốn độ tiêu hóa in vivo thức ăn có thành phần protein có nguồn gốc động vật cao, mẫu thức ăn có thành phần protein có nguồn gốc thực vật cao khả dự đốn khơng cịn xác - Phương pháp pH stat enzyme có khả dự đốn độ tiêu hóa in vivo ổn định so với phương pháp in vitro khác, nhiên số dư dự đoán cịn cao chứng tỏ mơ hình hồi quy phi tuyến có bổ sung điểm chưa phải mơ hình dự đốn tốt nhất, cần xây dựng lại phương trình hồi quy mà khơng sử dụng điểm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Trần Thị Lệ Trinh Nguyễn Thị Lan Chi, 2013 Báo cáo chuyên đề “Đánh giá độ xác quy trình phân tích đạm tiêu hóa thơng qua so sánh với kết nuôi thử nghiệm in vivo” Đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đạm tiêu hóa thức ăn thủy sản” Đề tài cấp Bộ, chương trình giai đoạn 2011 – 2015 Nguyễn Văn Nguyện, 2012 Báo cáo tổng hợp kết khoa học công nghệ dự án sản xuất thực nghiệm “Hồn thiện cơng nghệ sản xuất thức ăn công nghiệp cho cá tra, tôm sú tôm xanh” Dự án độc lập cấp Nhà nước, MS: DA – ĐL 2009/04 TCVN 9129, 2011 Thức ăn chăn ni – Xác định hàm lượng nitơ hịa tan sau xử lý pepsin axit clohydric loãng Tiêu chuẩn quốc gia Hà Nội Tài liệu tiếng Anh 72/199/EEC Third Commission Directive of 27 April 1972 establishing Community methods of analysis for the official control of feedingstuffs Consolidated Text produced by the CONSLEG system of the Office for Official Publications of the European Communities AOAC 971.09 Pepsin Digestibility of Animal Protein Feeds Ezquerra, J.M., Garcia-Carreno, F.L., Civera, R., Haard, N.F., 1997 pH-stat method to predict protein digestibility in white shrimp (Penaeus vannamei) Aquaculture 157, 251 – 262 Hsu, H.W., Vavak, D.L., Satterlee, L.D., Miller, G.A., 1977 A multienzyme technique for estimating protein digestibility Journal of Food Science 42(5), 1269 – 1271 ISO 6655:1997 Animal feeding stuffs - Determination of soluble nitrogen content after treatment with pepsin in dilute hydrochloric acid International Organization for Standardization Geneva Switzerland Lazo, J P., Romaire, R.P., Reigh, R.C., 1998 Evaluation of three in vitro enzyme assays for estimating protein digestibility in the Pacific white shrimp Penaeus vannamei Journal of the World Aquaculture Society 29 (4), 441 – 450 Miller, E.L., Bimbo, A.P., Walters, D.E., Barlow, S.M., Sheridan, B., 2002 Determination of nitrogen solubility in dilute pepsin hydrochloric acid solution of fishmeal: interlaboratory study J AOAC Int 85(6) 1374 – 1381 Pedersen, B., and Eggum, B.O., 1983 Prediction of protein digestibility by an in vitro enzymatic pHstat procedure Zeitschrift für Tierphysiologie Tierernährung und Futtermittelkunde 49 (1-5), 265 – 277 Satterlee, L.D., Marshall, H.F., Tennyson, J.M., 1979 Measuring protein quality Journal of the American Oil Chemists’ Society 56 (3), 103-109 Siccardi, III., A.J., 2006 Daily digestible protein and energy requirements for growth and maintenance of sub-adult Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) A Dissertation for Doctor of Philosophy (Major subject: Nutrition) Texas A & M University TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 129 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN VALIDATION OF REGRESSION MODELS BETWEEN IN VITRO AND IN VIVO PROTEIN DIGESTIBILITY OF FEEDS FOR WHITE LEG SHRIMP (Litopenaeus vannamei) Nguyen Thi Lan Chi1*, Le Thi Lam1 ABSTRACT In Vietnam, aquafeed official controllers are currently seeking a tool to determine protein digestibility of feed The initial results of the project “Study on methods evaluating protein digestibility of aquafeeds” which was conducted in Research Institute for Aquaculture No were six regression models describing the relationship between in vitro and in vivo protein digestibility These predictive models displayed high determination coefficients (R2 > 0,9) as they were nonlinear regression and passed through zero point However, it is impossible to obtain a sample with no protein digestibility in terms of both in vitro and in vivo Therefore, we need to validate these models by six formulated feeds processed in laboratory The results of study indicated that the predictive capacity of all models was low since they produced high residuals and high bias This means we need to find other regression models without zero point Keywords: protein digestibility, in vitro, in vivo, white leg shrimp feeds Người phản biện: TS Vũ Anh Tuấn Ngày nhận bài: 29/5/2015 Ngày thông qua phản biện: 10/6/2015 Ngày duyệt đăng: 15/6/2015 Centre for Fishery Post-harvest Technology Research Institute for Aquaculture No * Email: lanchiria2@yahoo.com.vn 130 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 ... 5%), độ biến động không cao, kết tin cậy Khi xét kết độ tiêu hóa protein in vivo, nhận thấy độ tiêu hóa protein in vivo mẫu thức ăn đối chứng tương đối thấp (62,09 ± 2,03%) Do mẫu thức ăn chế... giá tương quan độ tiêu hóa protein in vitro in vivo 40 mẫu thức ăn tôm thẻ chân trắng thương mại, độ tương quan thấp (R2 < 0,3) cho tất phương pháp khảo sát (pH drop, pH stat pepsin tiêu hóa) ... in vitro vào mơ hình so sánh với giá trị in vivo, thể bảng sau: Bảng Kết số dư dự đoán, độ chệch độ kiểm chứng mơ hình tương quan phương pháp pepsin tiêu hóa in vivo Mẫu Độ tiêu hóa pepsin (%)