Tảo cô đặc Isochrysis galbana ở dạng nhão và lỏng đậm đặc được nghiên cứu làm thức ăn thay thế vi tảo tươi tương ứng cho ấu trùng nghêu Meretrix lyrata giai đoạn trôi nổi. Ấu trùng được ương trong các bể composite hình trụ, dung tích 120 lít. Thức ăn là hỗn hợp hai loài vi tảo Isochrysis galbana và Nannochloropsis oculata theo tỷ lệ bằng nhau.
VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN SỬ DỤNG TẢO Isochrysis galbana CÔ ĐẶC LÀM THỨC ĂN CHO ẤU TRÙNG NGHÊU Meretrix lyrata Đặng Tố Vân Cầm1*, Võ Minh Sơn2 TĨM TẮT Tảo đặc Isochrysis galbana dạng nhão lỏng đậm đặc nghiên cứu làm thức ăn thay vi tảo tươi tương ứng cho ấu trùng nghêu Meretrix lyrata giai đoạn trôi Ấu trùng ương bể composite hình trụ, dung tích 120 lít Thức ăn hỗn hợp hai lồi vi tảo Isochrysis galbana Nannochloropsis oculata theo tỷ lệ Vi tảo I galbana cô đặc dạng nhão lỏng đậm đặc, sản phẩm khoa học đề tài làm thí nghiệm so với dạng tươi dạng nhão, sản phẩm thương mại làm đối chứng Hai thông số kích thước tỷ lệ sống ấu trùng sử dụng để đánh giá ảnh hưởng thức ăn lên phát triển ấu trùng Ấu trùng nghêu 10 ngày tuổi cho ăn tảo I galbana dạng nhão-thí nghiệm có kích thước trung bình (209,7±2,4 µm) cao khác biệt so với tảo tươi (201,7±2,1 µm), cho ăn tảo I galbana dạng lỏng-thí nghiệm (205,3±2,3 µm) dạng nhão-đối chứng (203,3±1,7 µm) có kích thước cao so với tảo tươi, khác biệt không mang ý nghĩa thống kê (p>0,05) Tỷ lệ sống ấu trùng nghêu 10 ngày tuổi cho ăn tảo I galbana dạng nhão-thí nghiệm (22,5±1,4%), dạng lỏng-thí nghiệm (29,2±2,8%), hay dạng nhão-đối chứng (24,5±1,5%) không khác biệt có ý nghĩa so với tảo tươi (23,6±1,7%) Tảo đặc I galbana, sản phẩm nghiên cứu này, làm thức ăn thay vi tảo tươi tương ứng ương ấu trùng nghêu giai đoạn trôi Từ khóa: Isochrysis galbana, Meretrix lyrata, tảo đặc dạng nhão, tảo cô đặc dạng lỏng I MỞ ĐẦU Isochrysis galbana lồi vi tảo biển có hàm lượng chất dinh dưỡng cao, giàu axit béo thiết yếu, tốt để làm thức ăn cho ấu trùng loài nhuyễn thể Tế bào I galbana chứa hàm lượng DHA cao, cao nhiều loài tảo khác, chiếm khoảng 1/4 tổng hàm lượng acid béo lượng nhỏ EPA, cụ thể 5,53 µg DHA/mg trọng lượng ướt 0,24 µg EPA/mg trọng lượng ướt (Volkman ctv., 1989) thức ăn cho ấu trùng nhuyễn thể ấu trùng số lồi tơm cá biển (Wikfors Patterson, 1994) Tuy nhiên, việc sử dụng vi tảo tươi nói chung ni trồng thủy sản gây nhiều hạn chế, công nghệ nuôi chủ yếu theo phương pháp truyền thống nước ta thường không đảm bảo mặt số lượng chất lượng Khả bị tạp nhiễm, biến động nhân nuôi vi tảo dẫn đến rủi ro không đáp ứng đủ kịp thời cho nhu cầu sản xuất Hơn nữa, I galbana loài vi tảo khó ni, giới dù cơng nghệ nuôi tiên tiến theo Takeyama ctv., năm 1996 loài chưa sử dụng phổ biến khó khăn cơng nghệ ni Ở nước ta năm gần đây, nuôi vi tảo tiếp cận công nghệ nuôi đại giới, hệ thống photobioreactor, đặc biệt kết nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu công nghệ nuôi, thu sinh khối vi tảo Nannochlorop- Trung tâm Quốc gia Giống Hải sản Nam - Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản * Email: camdtv.ria2@mard.gov.vn Phòng Sinh học thực nghiệm - Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 29 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN sis oculata & Isochrysis galbana phục vụ sản xuất giống hải sản” đưa công nghệ nuôi vi tảo lên tầm cao Tuy nhiên công nghệ chưa áp dụng rộng đến sở sản xuất giống, sinh khối vi tảo tươi nói chung I galbana nói riêng cịn vấn đề nan giải cho sở sản xuất giống nhuyễn thể Sản phẩm tảo đặc có hàm lượng carbohydrate thấp hơn, hàm lượng protein cao so với tảo tươi tương ứng, sử dụng tảo cô đặc thay cho vi tảo tươi điều Giá trị dinh dưỡng tảo cô đặc lồi tảo khác đánh giá thơng qua ấu trùng hậu ấu trùng hàu nghiên cứu nhiều tác giả (Heasman ctv., 2000; Robert ctv., 2001) với kết đầy hứa hẹn Việc thay tảo tươi sản phẩm đặc tương ứng ương ấu trùng nhuyễn thể có ý nghĩa quan trọng Khi nuôi vỗ tu hài mẹ ương nuôi ấu trùng sử dụng tảo tươi Chlorella, Isochrysis, Chaetoceros, Chroomonas salina Một hạn chế việc dùng tảo tươi khó đảm bảo nguồn cung cấp ổn định ni sinh khối tảo phụ thuộc nhiều vào thời tiết, tượng tảo tàn lụi đồng loạt thường xuyên xảy trại sản xuất giống mà chưa có biện pháp khắc phục hiệu (Trần Thế Mưu, 2010) Sự cố gây thiếu thức ăn nghiêm trọng cho tu hài mẹ ấu trùng trại sản xuất giống (Trần Thế Mưu Vũ Văn Sáng, 2013.) Sản phẩm tảo cô đặc nước chưa sản xuất, sản phẩm thương mại chưa nhập thức, thời hạn sử dụng sản phẩm ngắn, giá thành cao Kết đề tài “Nghiên cứu công nghệ nuôi, thu sinh khối vi tảo Nannochloropsis oculata & Isochrysis galbana phục vụ sản xuất giống hải sản” triển khai 2011-2013, tạo sản phẩm tảo cô đặc hai loài N oculata I galbana dạng nhão lỏng đậm đặc 30 Xuất phát từ nhu cầu vi tảo I galbana sản xuất giống nhuyễn thể, từ việc nghiên cứu ứng dụng sản phẩm tảo cô đặc sản xuất nướcthay vi tảo tươi tương ứng, nghiên cứu thực Mục tiêu nghiên cứu nhằm so sánh việc sử dụng vi tảo tươi đặc lồi I galbana, sản xuất theo quy trình cơng nghệ Đề tài nêu trên, lên phát triển ấu trùng nghêu giai đoạn trôi Kết nghiên cứu nhằm đáp ứng nhu cầu giống ngày cao đối tượng hải sản có giá trị kinh tế cao II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nghêu Meretrix lyrata Nghêu bố mẹ Meretrix lyrata có nguồn gốc từ Bình Đại, Bến Tre; cho đẻ để thu ấu trùng cho bố trí thí nghiệm Phương pháp kích thích sinh sản: Nghêu bố mẹ thành thục vệ sinh nước sau chuyển vào bể cho sinh sản, đực bố trí vào bể Cho sinh sản phương pháp sốc nhiệt Cụ thể sau: nghêu bố mẹ phơi bóng mát Nghêu bố mẹ giữ khô bàn đẻ qua đêm, sau nước cấp vào sáng hơm sau để kích thích sinh sản Trứng thụ tinh vịng 30 phút, sau trứng thụ tinh, chúng thu lại lưới lọc kích thước 30 μm, sau chuyển vào bể ương với mật độ 10 ấu trùng/ml Bằng cách lọc, trứng thụ tinh rửa nhằm loại bỏ tạp chất tinh trùng bám bể mặt trứng Tạp chất tinh trùng dư thừa làm nhiễm mơi trường chúng giàu protein Khoảng 24 sau thụ tinh, ấu trùng chuyển sang giai đoạn đỉnh vỏ thẳng (giai đoạn chữ “D”), chúng lọc qua lưới 50 μm chuyển vào bể ương thí nghiệm TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 2.2 Bố trí thí nghiệm & PTNT, viết tắt “Nhão ĐT” Thí nghiệm bao gồm nghiệm thức khác dạng vi tảo I galbana sử dụng, nghiệm thức lặp lại lần (20 bể ni, Hình 1) • Nghiệm thức 1: dạng tươi • Nghiệm thức 2: dạng nhão, sản phẩm thương mại Reed Mariculture, Campbell, California, viết tắt “Nhão ĐC” • Nghiệm thức 3: dạng nhão, sản phẩm đề tài “Nghiên cứu công nghệ nuôi, thu sinh khối vi tảo N oculata & I galbana phục vụ sản xuất giống hải sản” thuộc chương trình CNSH Nơng nghiệp, Thủy sản Bộ NN • Nghiệm thức 4: dạng lỏng đậm đặc, sản phẩm đề tài, viết tắt “Lỏng ĐT” Sử dụng sản phẩm dạng nhão lỏng đậm đặc lồi I galbana đề tài có thời gian bảo quản sau tuần vào thời điểm bắt đầu thí nghiệm Lồi Nannochloropsis oculata sử dụng dạng tươi cho tất nghiệm thức Bố trí thí nghiệm tiến hành ngẫu nhiên, NT1 bao gồm bể 1, 12, 13, 14, 20; NT2 bao gồm bể 3, 5, 9, 11, 19; NT3 bao gồm bể 4, 6, 8, 10, 16; NT4 bao gồm bể 2, 7, 15, 17, 18 Hình Bể ương ấu trùng 2.3 Phương pháp ương Nước ương Nước sử dụng để ương ấu trùng nước biển pha loãng nước máy để điều chỉnh độ mặn 23‰, xử lý diệt trùng calcium hypochlorite Ca(OCl) nồng độ 30 ppm sục khí hết Ca(OCl) Bể ương Thí nghiệm tiến hành 20 bể composite hình trụ, đáy chóp, màu xám, đặt nhà, dung tích bể 120 l, dung tích ni 100 l Mật độ ấu trùng bố trí 10 con.ml-1 Thức ăn cho ăn Chuẩn bị thức ăn: Tảo tươi I galbana cuối pha tăng trưởng, xác định mật độ trước TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 31 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN sử dụng làm thức ăn cho ấu trùng (sử dụng buồng đếm Neubauer, đếm KHV có độ phóng đại 400 lần) Thể tích tảo sử dụng tính theo cơng thức: V (lít) = [Mật độ tảo trì bể ni x Thể tích nước ni (lít)]/Mật độ tảo sử dụng Tảo đặc dạng nhão, sản phẩm thương mại có mật độ 3,9 tỷ tb.ml-1; tảo cô đặc dạng nhão, sản phẩm đề tài có mật độ tỷ tb.ml-1; tảo cô đặc dạng lỏng, sản phẩm đề tài có mật độ 0,4 tỷ tb.ml-1 Tính tốn lượng tảo cô đặc sử dụng, cho vào nước 23‰ qua xử lý, sục khí mạnh thời gian 5-10 phút, lọc qua vợt có mắc lưới 30 µm, pha thêm với nước 23‰ qua xử lý cho thể tích tảo tươi sử dụng đối chứng trước cho vào bể ương ấu trùng Bảng Thành phần dinh dưỡng (%) sản phẩm tảo cô đặc I galbana sau thời gian bảo quản tuần Dạng nhão Dạng lỏng Tảo tươi Nhão ĐC Lipid 1,49 0,41 0,03 1,72 Protein 2,82 0,60 0,01 3,16 Carbohydrate 1,38 0,20 0,68 1,73 Tro 5,60 3,81 3,41 8,05 Độ ẩm 88,71 94,98 95,87 85,34 Thức ăn cho ấu trùng bơi tự ấu trùng sống đáy sử dụng hỗn hợp loài tảo I galbana, N oculata Tỷ lệ cho ấu trùng ăn trì với mật độ 100 ngàn tb.ml-1 hỗn hợp loài tảo kể với tỉ lệ 1:1 tất nghiệm thức Tần suất cho ăn điều chỉnh giờ.lần1 vào lúc 6, 9, 12, 15, 18 21 ngày Sau đến 10 ngày ấu trùng chuyển sang giai đoạn sống đáy Chăm sóc Bể sục khí liên tục, nước bể ương thay 100%/lần theo định kỳ ngày/ lần Trong trình thay nước, ấu trùng đồng thời lọc rửa việc sử dụng rây lọc chuyển lại bể ương sau rửa Quá trình lọc rửa ấu trùng tiến hành nước, tránh tình trạng ấu trùng bị va đập gây dập vỡ Trong suốt trình ương, yếu tố mơi trường pH, nhiệt độ theo dõi lần ngày-1 theo định kỳ ngày.lần-1; ammonia nitric theo định kỳ ngày.lần-1 32 2.4 Thu thập xử lý số liệu Chất lượng nước bể ương: đo nhiệt độ pH máy đo đa tiêu YSI Model 556MPS Ammonia tổng số (TAN, bao gồm NH3 NH4+) nitric đo test kit Sera (Germany) cách lọc lấy 10-20 ml giấy lọc 0,45 µm Đo kích thước ấu trùng: đo vào buổi sáng theo định kỳ ngày.lần-1 cách lấy ngẫu nhiên 30 ấu trùng nghiệm thức, cố định formol 10%, tiến hành đo kích thước chiều dài ấu trùng (Hình 2) trắc vi thị kính KHV BX51 (Nhật Bản) Chiều dài Hình Đo kích thước chiều dài ấu trùng chữ D TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 6/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 3.2 Ấu trùng Tỷ lệ sống: tính sau 10 ngày tuổi, lúc ấu trùng nghêu đáp đáy Tỷ lệ sống (%) = 100 x (tổng số ấu trùng nghêu đáp đáy/tổng số ấu trùng bố trí) Xử lý số liệu Sử dụng phân tích One-Way ANOVA phép thử Duncan (SPSS version 18.0) để phân tích số liệu tăng trưởng kích thước tỉ lệ sống Số liệu tỷ lệ sống chuyển sang giá trị arsin trước phân tích thống kê III KẾT QUẢ 3.1 Chất lượng nước bể ương Trong suốt trình ương, nhiệt độ trung bình dao động từ 26,8ºC đến 28,2ºC, pH từ 7,58,6, ammonia tổng số trì