Khả năng ức chế tăng trưởng của Vibrio spp. bởi một số dịch chiết có nguồn gốc thảo dược

Hiện nay, nhóm vi khuẩn Vibrio spp. là tác nhân chính gây ra những bệnh nguy hiểm trên tôm nuôi. Nghiên cứu này được thực hiện nhằm đánh giá khả năng ức chế tăng trưởng của Vibrio spp. bởi một số dịch chiết có nguồn gốc thảo dược.

VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TĂNG TRƯỞNG CỦA Vibrio spp BỞI MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CÓ NGUỒN GỐC THẢO DƯỢC Nguyễn Thị Thu Thủy1*, Trần Hồng Bích Ngọc1, Nguyễn Lê Hồi Nhân1, Nguyễn Thị Ngọc Tĩnh1 TĨM TẮT Hiện nay, nhóm vi khuẩn Vibrio spp tác nhân gây bệnh nguy hiểm tôm nuôi Nghiên cứu thực nhằm đánh giá khả ức chế tăng trưởng Vibrio spp số dịch chiết có nguồn gốc thảo dược Kết thí nghiệm cho thấy loại dịch chiết thảo dược (gừng, tỏi, hành tây, hẹ, diếp cá) dung môi ethanol cho kết đối kháng với chủng Vibrio gây bệnh Nồng độ thảo dược có tác dụng kháng khuẩn cao 90% Đối với V parahaemolyticus, dịch chiết hẹ dịch chiết tỏi cho đường kính vịng kháng khuẩn cao (tương ứng 4,33 mm 4,0 mm), V alginolyticus, đường kính vịng kháng khuẩn dịch chiết diếp cá dịch chiết gừng cao (tương ứng 3,17 mm 2,75 mm) Kết khảo sát khả ức chế tăng trưởng ba chủng Vibrio gây bệnh loại kháng sinh, cho thấy chủng V parahaemolyticus kháng hoàn toàn với Ciprofloxacin Norfloxacin, kháng yếu với Kanamycin, Tetracylin Doxycycline Kết thí nghiệm cho thấy dịch chiết thảo dược (tỏi, hành tây, gừng hẹ) có khả ức chế tăng trưởng V parahaemolyticus tốt so với đĩa giấy tẩm kháng sinh Kết thử nghiệm tôm thẻ chân trắng (khối lượng trung bình 6,5 g/con) cho thấy dịch chiết hẹ (nồng độ 90% ethanol) trộn vào thức ăn không ảnh hưởng đến tăng trưởng tỷ lệ sống tơm ni Từ khóa: dịch chiết thảo dược, kháng sinh, Vibrio spp., tôm thẻ chân trắng I ĐẶT VẤN ĐỀ Nghề ni tơm phải đương đầu với tình trạng dịch bệnh bùng nổ ngày thường xuyên nghiêm trọng suy thối mơi trường lây lan mầm bệnh, nhóm vi khuẩn Vibrio spp tác nhân gây bệnh nguy hiểm tôm nuôi Đặc biệt năm gần bệnh hoại tử gan tụy cấp tính (EMS/AHPNS) chủng vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus gây thiệt hại lớn cho người nuôi tôm Để hạn chế dịch bệnh, người nuôi tôm thường dùng chất diệt khuẩn, chủ yếu chất chlorine, iodine chất kháng sinh Việc lạm dụng chất kháng sinh dẫn đến việc kháng thuốc vi sinh vật gây bệnh từ khó kiểm soát bệnh dịch Mặt khác, việc tồn dư chất kháng sinh tơm ni gây khó khăn cho xuất Do đó, việc tìm giải pháp thay nhu cầu tất yếu Các chất có nguồn gốc tự nhiên nguồn lợi đáng kể để nghiên cứu sản xuất thuốc thảo dược thay chất hóa học tổng hợp (Cos ctv., 2006; Solanki, 2010) Thảo dược ngày chứng minh vai trị quan trọng cơng nghiệp dược phẩm giải pháp an toàn sinh học thay cho thuốc kháng sinh (Mahesh Satish, 2008) Thảo dược ưa chuộng tính an tồn sinh học, khơng có hay có tác dụng phụ, chí chưa tìm thấy vi Phịng Sinh học Thực nghiệm, Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II Trường Đại học Cơng nghiệp Thực phẩm Tp.HCM *Email:thuthuyria2@yahoo.com 82 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II khuẩn kháng thuốc (Seyyednejad Motamedi, 2010) Trong nuôi trồng thủy sản, việc tìm kiếm hoạt chất tự nhiên từ loại thảo dược có tính kháng khuẩn cao để làm thuốc tạo điều kiện ứng dụng sản xuất chế phẩm dược liệu để phòng trị bệnh cho đối tượng nuôi xu đáng quan tâm Trong nghiên cứu này, tiến hành đánh giá khả ức chế phát triển chủng vi khuẩn Vibrio spp gây bệnh nuôi trồng thủy sản loại dịch chiết từ thảo dược (tỏi, hành tây, gừng, diếp cá, hẹ), nhằm chọn loại thảo dược có hiệu cao để làm tiền đề cho việc tạo chế phẩm thảo dược phòng trị bệnh tơm có chứa 200 ml dung mơi ethanol 90%, lắc cho bột thảo dược phân bố dung mơi Q trình chiết xuất xảy bể điều nhiệt với nhiệt độ chiết xuất 500C, thời gian chiết xuất Các dịch chiết lọc chứa chai thủy tinh chịu nhiệt, trữ lạnh -200C 2.2.2 Khảo sát tính đối kháng dịch chiết thảo dược với chủng Vibrio Dịch chiết thảo dược pha nồng độ khác theo Bảng Bảng 1: Cách pha nồng độ dịch chiết thảo dược Nồng độ dịch Thể tích Thể tích Thể tích chiết thảo dược dịch chiết nước cất tổng (ml) (ml) (% ethanol) (ml) II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 50 5,5 4,5 10 2.1 Vật liệu 70 7,7 2,3 10 90 10 10 Các loại thảo dược: tỏi (Allium sativum), hành tây (Allium cepa), gừng (Zingiber offcinale), diếp cá (Houttuynia cordata), hẹ (Allibum ramosum); Các chủng vi khuẩn gây bệnh: V harveyi phân lập từ tôm sú bệnh phát sáng; V parahaemolyticus phân lập từ tôm thẻ bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND); V alginolyticus phân lập từ cá Mú bệnh Đĩa giấy tẩm kháng sinh Kanamycin (30 µg), Tetracyclin (30 µg), Doxycycline (30 µg), Ciprofloxacin (5 µg), Norfloxacin (10 µg) Nhà sản xuất: cơng ty TNHH Nam Khoa Tơm thẻ chân trắng có trọng lượng trung bình 6,5 g/con 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp thu dịch chiết thảo dược thô Các loại thảo dược sơ chế, sau sấy 400C (chế độ sấy lạnh) khô (độ ẩm < 10%) nghiền máy xay thành dạng bột Cân 10g bột khô loại thảo dược cho vào erlen tương ứng Tiến hành thí nghiệm theo phương pháp thạch khuếch tán (agar diffusion) (Kirby-Bauer, 1996) Các chủng Vibrio khảo sát ni cấy mơi trường Nutrient Broth (NB) có bổ sung 1,5% NaCl Mật độ Vibrio nuôi cấy sau 24 đạt 109 cfu/ml 50 dịch Vibrio tráng đĩa Nutrient Agar (NA) có bổ sung 1,5% NaCl, đĩa/chủng, nồng độ dịch chiết thảo dược tương ứng với đĩa (2 lần lặp lại) đĩa đối chứng Dùng ống kim loại hình trụ tiệt trùng đường kính mm, khoan ba giếng đĩa Sau hút 80 nồng độ dịch chiết nhỏ vào giếng tương ứng (đối với nhóm Vibrio, nồng độ tương ứng với giếng, ứng với lần lặp lại) Riêng nghiệm thức đối chứng thực đĩa (3 lần lặp lại) Mỗi giếng đĩa đối chứng chứa 80 ethanol Cất đĩa vào tủ lạnh thời gian 30 phút để dịch chiết có thời gian khuếch tán vào thạch Sau ủ đĩa tủ ấm nhiệt độ 300C Sau ủ 24 giờ, đo đường kính vịng kháng khuẩn (nếu có) tạo xung quanh giếng TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 83 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Đánh giá mức độ đối kháng theo mức (theo Gulahmadov ctv., 2009): D > mm: đối kháng mạnh mm ≥ D ≥ mm: đối kháng trung bình D < mm: đối kháng yếu D = mm: không đối kháng Trong D: đường kính vịng kháng khuẩn (khơng bao gồm đường kính giếng) 2.2.3 Khảo sát khả ức chế tăng trưởng chủng Vibrio số loại kháng sinh thông dụng nuôi trồng thủy sản Dựa nguyên tắc đặt đĩa giấy tẩm kháng sinh với hàm lượng theo quy định lên môi trường thạch dinh dưỡng trải vi khuẩn Trong trình ủ, kháng sinh khuếch tán mơi trường ức chế vi khuẩn dẫn đến tạo thành vịng vơ khuẩn xung quanh đĩa kháng sinh (Kirby-Bauer, 1996) Các chủng Vibrio khảo sát nuôi cấy môi trường NB có bổ sung 1,5% NaCl Mật độ Vibrio ni cấy sau 24 đạt 109 cfu/ml 50 dịch Vibrio tráng đĩa NA có bổ sung 1,5% NaCl, 10 đĩa/chủng, loại kháng sinh thử nghiệm đĩa (6 lần lặp lại) Dùng nhíp tiệt trùng gắp đĩa giấy kháng sinh đặt lên đĩa thạch Các đĩa thạch để tủ lạnh 30 phút cho kháng sinh từ đĩa giấy khuếch tán mặt thạch sau ủ tủ ấm 300C 24 Đo đường kính vịng kháng khuẩn (nếu có) tạo xung quanh đĩa giấy kháng sinh sau thời gian ủ Thí nghiệm bao gồm nghiệm thức khác việc có bổ sung hay khơng bổ sung dịch chiết thảo dược vào thức ăn cho tôm, nghiệm thức lặp lại lần Điều kiện thí nghiệm: bể ni tơm tích 80 L chứa nước qua xử lý, bố trí 15 tơm/bể Tơm cho ăn lần/ngày Khối lượng thức ăn cho tôm ăn ngày chiếm 3% trọng lượng thân Theo dõi trình ni tơm vịng 20 ngày Theo dõi tăng trọng tỷ lệ sống tơm tính tốn theo công thức:  Tăng trọng (WG): WG (g) = Mf (g) - Mi (g) Mi Mf: trọng lượng trung bình tơm đầu cuối thí nghiệm  Tỷ lệ sống (SR): SR (%) = Nt * 100/N0 N0 Nt: số tơm đầu cuối thí nghiệm  SGR: tốc độ tăng trưởng đặc hiệu SGR (%/ngày) = [(Ln(Mf) - Ln(Mi))/ thời gian nuôi] *100 2.2.5 Phương pháp xử lý số liệu Số liệu thu thập tính toán Excel 2010 xử lý thống kê sinh học phần mềm Statgraphics, Origin 85, trắc nghiệm one-way ANOVA III KẾT QUẢ 3.1 Kết khảo sát tính đối kháng dịch chiết thảo dược với chủng Vibrio Kết thu dịch chiết thảo dược thô từ dung mơi ethanol-nước (Hình 1) 2.2.4 Khảo sát tính an toàn thức ăn trộn dịch chiết thảo dược lên tăng trưởng tỷ lệ sống tôm Chọn dịch chiết thảo dược có tính kháng Vibrio cao loại thảo dược (dịch chiết hẹ 90%) để trộn với thức ăn tơm khảo sát tính an tồn thức ăn cho tơm ăn Lấy 50 ml dịch chiết hẹ 90% trộn vào kg thức ăn tơm, lắc 15 phút, sau sấy 400C 84 Hình Dịch chiết thảo dược thơ TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Mẫu dịch chiết thảo dược thô sử dụng để đánh giá khả ức chế chủng vi khuẩn V harveyi, V alginolyticus, V parahaemolyticus tác nhân gây bệnh phổ biến thủy sản, phương pháp khuếch tán a) đĩa thạch (Kirby-Bauer, 1996) Kết khả kháng khuẩn loại dịch chiết thảo dược chủng vi khuẩn thể Hình Bảng b) c) Hình Khả ức chế phát triển vi khuẩn Vibrio dịch chiết thảo dược dung môi ethanol 90% a) Dịch chiết diếp cá, b) Dịch chiết tỏi, c) Dịch chiết hẹ Bảng Kết khảo sát khả đối kháng dịch chiết thảo dược chủng vi khuẩn Vibrio (n=6) Chủng vi khuẩn Vibrio harveyi Vibrio alginolyticus Vibrio parahaemolyticus Loại Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) dịch chiết 50% 70% 90% Tỏi 0,0 ± 0,0a 2,00 ± 0,0a 3,00 ± 0,0a Hành tây 0,0 ± 0,0a 2,00 ± 2,19a 3,75 ± 1,94a Gừng 0,0 ± 0,0a 2,42 ± 0,49a 2,83 ± 0,61a Diếp cá 0,0a ± 0,0a 1,42 ± 1,56a 3,33 ± 0,52a Hẹ 1,00 ± 1,55b 2,33 ± 0,52a 3,00 ± 0,63a Tỏi 0,0 ± 0,0a 1,17 ± 0,41a 1,33 ± 0,82ab Hành tây 0,0 ± 0,0a 0,50 ± 0,55a 0,50 ± 1,22a Gừng 0,0 ± 0,0a 1,58 ± 1,74ab 2,75 ± 1,25cd Diếp cá 0,0 ± 0,0a 1,50 ± 0,84ab 3,17 ± 0,41d Hẹ 0,0 ± 0,0a 2,33 ± 0,52b 1,83 ± 1,17bc Tỏi 1,33 ± 0,52b 2,50 ± 0,84c 4,00 ± 0,63c Hành tây 0,0 ± 0,0a 1,08 ± 1,02ab 3,00 ± 0,84b Gừng 0,0 ± 0,0a 1,83 ± 0,98bc 3,17 ± 0,41b Diếp cá 0,0 ± 0,0a 0,33 ± 0,52a 1,00 ± 0,63a Hẹ 1,00 ± 1,10b 2,58 ± 1,02c 4,33 ± 0,75c Ghi chú: Số liệu thể giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn; cột, chữ khác biểu thị khác biệt có ý nghĩa thống kê (P 0,05) V alginolyticus nhạy cảm với dịch chiết diếp cá 90% với mức đối kháng trung bình (vịng kháng khuẩn 3,17 mm), có khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) so với dịch chiết tỏi, hành tây hẹ Dịch chiết hẹ 90% dịch chiết tỏi 90% đối kháng mạnh với V parahaemolyticus, vòng kháng khuẩn 4,33 mm 4,0 mm, khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,01) so với loại dịch chiết hành tây, gừng, diếp cá Đồng thời, dịch chiết hẹ 70% 90% cho kết kháng lại chủng V harveyi có đối kháng trung bình (vịng vơ khuẩn 2,33 mm 3,0 mm); chủng V alginolyticus (vòng vô khuẩn 2,33 mm 1,83 mm) Riêng dịch chiết hẹ nồng độ 50% có khả ức chế chủng V harveyi V parahaemolyticus (vi khuẩn gây nguy hiểm nuôi trồng thủy sản, gây bệnh chết sớm tôm) dịch chiết tỏi 50% có khả đối kháng V parahaemolyticus Như vậy, dịch chiết hẹ tạo vịng vơ khuẩn có đường kính dao động từ mm đến 4,33 mm chọn để tiến hành cho thí nghiệm đánh giá tính an tồn dịch chiết thảo dược tôm 3.2 Kết khảo sát khả ức chế tăng trưởng chủng Vibrio số loại kháng sinh Bảng Kết đối kháng đĩa giấy tẩm kháng sinh với chủng Vibrio Chủng vi khuẩn Vibrio harveyi Vibrio alginolyticus Vibrio parahaemolyticus Loại kháng sinh Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Kanamycin Tetracylin Doxycycline Ciprofloxacin Norfloxacin Kanamycin Tetracylin Doxycycline Ciprofloxacin Norfloxacin Kanamycin Tetracylin Doxycycline Ciprofloxacin Norfloxacin 6,5 ± 6,09ab 4,5 ± 1,87a 11,08 ± 1,91b 3,83 ± 5,95a 7,33 ± 3,67ab 3,33 ± 1,97a 1,33 ± 1,51a 4,83 ± 0,75ab 8,67 ± 4,50b 8,33 ± 7,28b 1,67 ± 2,66ab 1,17 ± 1,17ab 2,17 ± 2,48b 0,0 ± 0,0a 0,0 ± 0,0a Ghi chú: Số liệu thể giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn; cột, chữ khác biểu thị khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) 86 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Hình Khả ức chế phát triển vi khuẩn Vibrio số loại kháng sinh a) Đĩa giấy tẩm kháng sinh Tetracyclin; b) Đĩa giấy tẩm kháng sinh Doxycyline Kết bảng cho thấy số loại kháng sinh khảo sát, có Doxycyline nhạy V harveyi, với đường kính vịng kháng khuẩn 11,08 mm (theo tiêu chuẩn CLSI, 2014) Điều đáng lưu ý chủng vi khuẩn V parahaemolyticus có tượng kháng với hai loại kháng sinh Ciprofloxacin Norfloxacin (đường kính vịng kháng khuẩn mm), kháng yếu với Kanamycin, Tetracylin, Doxycycline (đường kính vịng kháng khuẩn tương ứng 1,67 mm; 1,17 mm; 2,12 mm) Khi so sánh kết bảng bảng 3, cho thấy V harveyi V alginolyticus, đường kính vịng vơ khuẩn dịch chiết thảo dược thấp so với đường kính vịng vơ khuẩn đĩa giấy tẩm kháng sinh, ngoại trừ trường hợp đường kính vịng vơ khuẩn V alginolyticus Tetracyclin (1,33 ± 1,51 mm), thấp so với đường kính vịng vơ khuẩn chủng vi khuẩn với dịch chiết gừng, diếp cá hẹ Đặc biệt trường hợp V parahaemolyticus (chủng vi khuẩn phân lập nhóm nghiên cứu từ tơm có biểu bệnh AHPND Cà Mau năm 2015), có tượng kháng hồn tồn kháng yếu loại kháng sinh, chủng vi khuẩn lại nhạy với loại dịch chiết tỏi, hành tây, gừng hẹ (đường kính vịng kháng khuẩn từ 3,0 – 4,33 mm) 3.3 Khảo sát tính an tồn thức ăn trộn dịch chiết thảo dược lên khả tăng trưởng tôm Kết tăng trưởng tơm ni thí nghiệm thể bảng Tăng trọng tôm nuôi bể thử nghiệm thức ăn có trộn dịch chiết thảo dược (0,82 g/cá thể) tôm nuôi bể đối chứng (0,27 g/cá thể) có khác biệt, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) Tốc độ tăng trưởng đặc hiệu tôm nuôi bể thử nghiệm (0,62 %/ ngày) cao so với tôm nuôi đối chứng (0,19 %/ngày), khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) Tương tự, tỷ lệ sống tôm nuôi hai nghiệm thức cao, đạt 82,2% bể thử nghiệm, 77,8% bể đối chứng, nhiên khơng có khác biệt mặt thống kê hai nghiệm thức (P > 0,05) Điều chứng tỏ việc bổ sung dịch chiết hẹ thức ăn cho tôm thẻ chân trắng không ảnh hưởng đến tăng trưởng tỉ lệ sống tôm TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 87 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Bảng Kết tăng trưởng tôm nghiệm thức (n=3) Nghiệm thức Khối lượng tôm Khối lượng ban đầu (g/cá tôm sau thu thể) hoạch (g/cá thể) Tăng trọng (g/cá thể) Tốc độ tăng trưởng đặc hiệu (%/ngày) Tỷ lệ sống (%) Đối chứng 6,87 ± 0,04a 7,12 ± 0,22a 0,27 ± 0,25a 0,19 ± 0,17a 77,78 ± 20,38a Thử nghiệm 6,36 ± 0,53a 7,18 ± 0,31a 0,82 ± 0,79a 0,62 ± 0,60a 82,22 ± 16,77a Ghi chú: Số liệu thể giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn; cột, chữ giống biểu thị khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05) IV THẢO LUẬN Với đặc điểm ưu việt thảo dược an tồn sinh học, có tính kháng khuẩn cao, khơng có có tác dụng phụ (Seyyednejad Motamedi, 2010), chất chiết xuất từ thảo dược số nhóm tác giả nghiên cứu Theo Gull ctv., (2012), dịch chiết tỏi chiết xuất từ ethanol có vịng vô khuẩn dao động từ 11 mm đến 14 mm dịch chiết gừng có vịng kháng khuẩn dao động từ 11 mm đến 15 mm đối tượng nghiên cứu Escherichia coli, Pseudomonas aeruginos, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumonia, Staphylococcus epidermidis, Salmonella typhi Mặc dù kết nghiên cứu nhóm tác giả cao so với kết nghiên cứu khác đối tượng Thêm vào đó, mật độ vi khuẩn mà nhóm tác giả sử dụng cho nghiên cứu có 107 cfu/ml thấp so với nghiên cứu (mật độ Vibrio 109 cfu/ml) Theo Đỗ Tất Lợi (2003), hẹ có chứa hoạt chất odonin có tác dụng kháng khuẩn ức chế mạnh vi khuẩn S aureus B coli, nước ép hẹ có tính kháng khuẩn cao nhiều chủng vi khuẩn: S typhi (đường kính vịng vơ khuẩn cm), Staphylococcus (đường kính vịng vơ khuẩn cm), Shigella flexneri B subtilis (đường kính vịng vơ khuẩn 0,8 cm), Coli bethesda Coli pathogéne (đường kính vịng vơ khuẩn 0,6 cm) Các nhóm nghiên cứu khác khảo sát ảnh hưởng dịch chiết tỏi cho thấy dịch 88 chiết có khả ức chế tăng trưởng Vibrio spp mật độ vi khuẩn khác Trong nghiên cứu tác giả Vaseeharan ctv., (2011), tỏi tươi chiết xuất dung dịch methanol cho đường kính vịng kháng khuẩn với V harveyi (mật độ 104 cfu/ml) 14 mm Một nghiên cứu tương tự tác giả Vuddhakul ctv., (2007) sử dụng chiết xuất từ tỏi tươi V parahaemolyticus (mật độ 1,5 x 108 cfu/ml) tạo đường kính vịng vơ khuẩn 5,6 mm (khơng bao gồm đường kính giếng) Yano ctv., (2006) báo cáo hoạt động ức chế tỏi V parahaemolyticus mật độ x 104 cfu/ml 105 cfu/ml Trong nghiên cứu chúng tôi, dịch chiết tỏi 90% chiết xuất dung môi ethanol tạo đường kính vịng kháng khuẩn với V harveyi (mật độ 109 cfu/ml) mm, đường kính vịng kháng khuẩn với V parahaemolyticus (mật độ 109 cfu/ ml) mm Có thể nói kết nghiên cứu tương đương với kết nghiên cứu nhóm tác giả khác Kết thử nghiệm khả ức chế tăng trưởng chủng Vibrio loại kháng sinh thông dụng nuôi trồng thủy sản, cho thấy chủng vi khuẩn V parahaemolyticus phân lập từ tơm có dấu hiệu bệnh AHPND có tượng kháng thuốc loại kháng sinh Ciprofloxacin Norfloxacin, kháng yếu Kanamycin, Tetracylin Doxycycline Các nghiên cứu trước chứng minh sử dụng kháng sinh nuôi trồng thủy TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II sản, vi khuẩn có khuynh hướng đề kháng với kháng sinh (Đặng Thị Hoàng Oanh ctv., 2006; Chikwendu ctv., 2014) Nghiên cứu nhóm tác giả Melo ctv., (2011) cho thấy Vibrio spp phân lập từ đối tượng thủy sản ni có tượng kháng với Ciprofloxacin Điều cho thấy việc sử dụng kháng sinh để phịng trị bệnh ni thủy sản cần kiểm soát cách chặt chẽ, đồng thời cần tìm giải pháp thay thế, điển hình hợp chất chiết xuất từ thảo dược Kết nghiên cứu cho thấy dịch chiết thảo dược có khả thay kháng sinh việc phịng bệnh cho tơm Đặc biệt chủng V parahaemolyticus gây bệnh AHPND, đường kính vịng kháng khuẩn tạo dịch chiết thảo dược lớn so với đường kính vịng kháng khuẩn tạo đĩa giấy tẩm kháng sinh Bên cạnh đó, việc sử dụng hợp chất chiết xuất từ thảo dược có nhiều ưu điểm thân thiện với mơi trường, an tồn cho đối tượng ni có tính bền vững cao Một số nghiên cứu trước (Yu ctv., 2009; Chang ctv., 2012) nghiên cứu chứng tỏ dịch chiết thảo dược an tồn cho tơm nuôi, không ảnh hưởng đến tăng trưởng tỷ lệ sống tơm Thêm vào đó, dịch chiết thảo dược trộn vào thức ăn cho tơm khả với vi khuẩn probiotic tạo chế phẩm có tính an tồn sinh học, bền vững cho hiệu phòng trị bệnh cao V KẾT LUẬN Kết thí nghiệm khảo sát tính đối kháng dịch chiết thảo dược với chủng Vibrio cho thấy loại dịch chiết thảo dược dung môi ethanol cho kết đối kháng với chủng Vibrio gây bệnh, với mức độ khác Nồng độ thảo dược có tác dụng kháng khuẩn cao 90% Dịch chiết diếp cá 90% dịch chiết gừng 90% cho kết kháng V alginolyticus tốt (đường kính vịng kháng khuẩn tương ứng 3,17 mm 2,75 mm) Đối với V parahaemolyticus, dịch chiết hẹ 90% dịch chiết tỏi 90% cho kết kháng tốt (đường kính vịng kháng khuẩn tương ứng 4,33 mm 4,0 mm) Khi so sánh với kết đối kháng với chủng Vibrio gây bệnh loại kháng sinh sử dụng phổ biến nuôi tôm, nhận thấy loại dịch chiết thảo dược (tỏi, hành tây, gừng hẹ) có khả kháng V parahaemolyticus tốt so với loại kháng sinh khảo sát Khi cho tôm ăn thức ăn có trộn dịch chiết hẹ 90%, tốc độ tăng trưởng đặc hiệu, tăng trọng tỷ lệ sống tơm ni khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) nghiệm thức cho ăn thức ăn trộn dịch chiết hẹ so với nghiệm thức đối chứng TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 89 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đỗ Tất Lợi, 2003 Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học Đặng Thị Hoàng Oanh, Đoàn Nhật Phương, Nguyễn Thị Thu Hằng Nguyễn Thanh Phương, 2006 Xác định vị trí phân loại khả kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn Vibrio phát sáng phân lập từ hậu ấu trùng tơm sú (Penaeus monodon), Tạp chí Nghiên cứu Khoa học 2006: 42-52 Tài liệu tiếng Anh Chang, Y P., Liu, C H., Wu, C C., Chiang, C M., Lian, J L., & Hsieh, S L., 2012 Dietary administration of zingerone to enhance growth, non-specific immune response, and resistance to Vibrio alginolyticus in Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) juveniles Fish & shellfish immunology, 32(2), 284-290 Clinical and Laboratory Standards Institute (2014) Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, 24th informational supplement Approved standard M100-S24 Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, PA, 226 pp Chikwendu, C I., Ibe, S N., & Okpokwasili, G C., 2014 Multiple antimicrobial resistance in Vibrio spp isolated from river and aquaculture water sources in Imo State, Nigeria British Microbiology Research Journal, 4(5), 560 Cos, P., Vlietinck, A.J., Berghe, D.V., & Maes, L., 2006 Anti-infective potential of natural products: how to develop a stronger in vitro ‘proof-of-concept’ Journal of Ethnopharmacology 106.3, 290-302 Gulahmadov, S.G., Abdullaeva, N.F., Guseinova, N.F., Kuliev, A.A., Ivanova, I.V., Dalgalarondo, M., Chobert, J.-M., Haertlee, T (2009) Isolation and Characterization of BacteriocinLike Inhibitory Substances from Lactic Acid Bacteria isolated from Azerbaijan cheeses Applied Biochemistry and Microbiology 45(3): 266-271 Gull, I., Saeed, M., Shaukat, H., Aslam, S M., Samra, Z Q., & Athar, A M., 2012 Inhibitory effect of Allium sativum and Zingiber officinale 90 extracts on clinically important drug resistant pathogenic bacteria Annals of clinical microbiology and antimicrobials, 11(1), Kirby-Bauer, A., 1996 Antimicrobial sensitivity testing by agar diffusion method J Clin Pathol, 44, 493 Mahesh, B., & Satish, S., 2008 Antimicrobial activity of some important medicinal plant against plant and human pathogens World journal of agricultural sciences, 4(5), 839-843 Melo, L M R D., Almeida, D., Hofer, E., Reis, C M F D., Theophilo, G N D., Santos, A F D M., & Vieira, R H S D F., 2011 Antibiotic resistance of Vibrio parahaemolyticus isolated from pond-reared Litopenaeus vannamei marketed in Natal, Brazil Brazilian Journal of Microbiology, 42(4), 1463-1469 Seyyednejad, S M., & Motamedi, H., 2010 A review on native medicinal plants in Khuzestan, Iran with antibacterial properties International Journal of Pharmacology, 6(5), 551-560 Solanki, R., 2010 Some medicinal plants with antibacterial activity International Journal of Comprehensive pharmacy, 4, 10 Vaseeharan, B., Prasad, G S., Ramasamy, P., & Brennan, G., 2011 Antibacterial activity of Allium sativum against multidrug-resistant Vibrio harveyi isolated from black gill– diseased Fenneropenaeus indicus Aquaculture International, 19(3), 531-539 Vuddhakul, V., Bhoopong, P., Hayeebilan, F., & Subhadhirasakul, S., 2007 Inhibitory activity of Thai condiments on pandemic strain of Vibrio parahaemolyticus Food Microbiology, 24(4), 413-418 Yano, Y., Satomi, M., & Oikawa, H., 2006 Antimicrobial effect of spices and herbs on Vibrio parahaemolyticus International Journal of Food Microbiology, 111(1), 6-11 Yu, M C., Li, Z J., Lin, H Z., Wen, G L., & Ma, S., 2009 Effects of dietary medicinal herbs and Bacillus on survival, growth, body composition, and digestive enzyme activity of the white shrimp Litopenaeus vannamei Aquaculture International, 17(4), 377-384 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II INHIBITORY ACTIVITY OF SOME HERBAL EXTRACTS AGAINST Vibrio spp Nguyen Thi Thu Thuy1*, Tran Hoang Bich Ngoc1, Nguyen Le Hoai Nhan2, Nguyen Thi Ngoc Tinh1 ABSTRACT Nowadays, Vibrio spp have been one of the main pathogens causing important diseases in cultured shrimps This study was conducted to assess the ability to inhibit growth of Vibrio spp by several herbal extracts The results showed that all five types of herbal extracts (ginger, garlic, onion, shallot, and heartleaf) had antibacterial effects against all three strains of Vibrio pathogens The herb concentration of 90% demonstrated highest antibacterial activity In particular, the largest antibacterial halo’s diameter caused by shallot, onion and heartleaf extracts against V parahaemolyticus, V harveyi, and V alginolyticus were 4.33 mm, 3.75 mm, and 3.17 mm, respectively The results of antibiotic susceptibility test in the three Vibrio strains indicated that, V parahaemolyticus was fully resistant to Ciprofloxacin and Norfloxacin and partly resistant to Kanamycin, Tetracycline, and Doxycycline In addition, the results of the two experiments showed that V parahaemolyticus was more susceptible to the four types of herbal extracts (ginger, garlic, onion, shallot) compared to antibiotics Shallot extract at the concentration of 90% was used to evaluate the effect of herbs on growth and survival rate of shrimp The result showed that growth and survival rate of white-leg shrimp (average body weight of 6.5 g) was not affected by the addition of herbal extract to the feed Keywords: herbal extracts, Vibrio spp., antibiotics, white-leg shrimp Người phản biện: TS Nguyễn Diễm Thư Ngày nhận bài: 26/7/2016 Ngày thông qua phản biện: 10/8/2016 Ngày duyệt đăng: 05/9/2016 Department of Experimental Biology, Research Institute for Aquaculture No.2 HCMC University of Food Industry *Email:thuthuyria2@yahoo.com TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 9/2016 91 ... lên tăng trưởng tỷ lệ sống tôm Chọn dịch chiết thảo dược có tính kháng Vibrio cao loại thảo dược (dịch chiết hẹ 90%) để trộn với thức ăn tơm khảo sát tính an tồn thức ăn cho tơm ăn Lấy 50 ml dịch. .. Kết khảo sát tính đối kháng dịch chiết thảo dược với chủng Vibrio Kết thu dịch chiết thảo dược thô từ dung mơi ethanol-nước (Hình 1) 2.2.4 Khảo sát tính an toàn thức ăn trộn dịch chiết thảo dược. .. Kết khả kháng khuẩn loại dịch chiết thảo dược chủng vi khuẩn thể Hình Bảng b) c) Hình Khả ức chế phát triển vi khuẩn Vibrio dịch chiết thảo dược dung môi ethanol 90% a) Dịch chiết diếp cá, b) Dịch