(Luận văn thạc sĩ) phân tích di truyền gen sửa chữa bắt cặp sai MSH2 từ bệnh nhân ung thư đại trực tràng

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Mai PHÂN TÍCH DI TRUYỀN GEN SỬA CHỮA BẮT CẶP SAI MSH2 TỪ BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – Năm 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Mai PHÂN TÍCH DI TRUYỀN GEN SỬA CHỮA BẮT CẶP SAI MSH2 TỪ BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60 42 70 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN THỊ HỒNG VÂN Hà Nội – Năm 2012 MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn Mục lục Danh mục bảng Danh mục hình Bảng ký hiệu chữ viết tắt Lời nói đầu Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Những nét khái quát ung thƣ, bệnh ung thƣ gen ung thƣ 1.1.1 Ung thư bệnh ung thư 1.1.2 Gen ung thư (oncogene) 1.2 Những hiểu biết ung thƣ đại trực tràng 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu ung thư đại trực tràng 1.2.2 Sơ lược bệnh ung thư đai trực tràng 1.2.3 Cơ sở phân tử ung thư đại trực tràng di truyền 12 1.3 Hệ thống gen MMR đột biến gen MSH2 với hội chứng ung thƣ đại trực tràng 17 1.3.1 Hệ thống gen MMR 17 1.3.2 Gen MSH2 đột biến gây ung thư đại trực tràng 21 1.4 Một số kỹ thuật di truyền sử dụng nghiên cứu ung thƣ đại trực tràng 24 1.4.1 Kỹ thuật phân tích trình tự lặp lại đơn giản SSR 25 1.4.2 Kỹ thuật đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn RFLP 25 1.4.3 Kỹ thuật phân tích đa hình sợi đơn SSCP 26 1.4.4 Kỹ thuật phân tích sợi đơi dị hợp HET 27 1.4.5 Kỹ thuật điện di gel gradient biến tính DGGE 28 1.4.6 Các phương pháp giải trình tự ADN 28 1.5 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 29 1.5.1 Mục tiêu nghiên cứu 29 1.5.2 Nội dung nghiên cứu 29 Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Vật liệu, địa điểm, hoá chất thiết bị sử dụng nghiên cứu30 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 30 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 30 2.1.3 Hóa chất thiết bị sử dụng nghiên cứu 30 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 31 2.2.1 Thu thập bảo quản mẫu 31 2.2.2 Tách ADN tổng số 31 2.2.3 Xác định độ tinh hàm lượng ADN tổng số 31 2.2.4 Nhân exon nhờ phản ứng PCR 32 2.2.5 Kỹ thuật SSCP phân tích đột biến gây ung thư đại trực tràng 34 2.2.6 Giải trình tự ADN 37 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Kết tách chiết ADN tổng số 39 3.2 Kết nhân 09 exon gen MSH2 40 3.2.1 Kết nhân exon 40 3.2.2 Kết nhân exon 41 3.2.3 Kết nhân exon 42 3.2.4 Kết nhân exon 43 3.2.5 Kết nhân exon 44 3.2.6 Kết nhân exon 12 45 3.2.7 Kết nhân exon 13 46 3.2.8 Kết nhân exon 14 47 3.2.9 Kết nhân exon 15 48 3.3 Kết phân tích đột biến 09 exon gen MSH2 50 3.3.1 Kết phân tích đột biến exon 51 3.3.2 Kết phân tích đột biến exon 53 3.3.3 Kết phân tích đột biến exon 55 3.3.4 Kết phân tích đột biến exon 56 3.3.5 Kết phân tích đột biến exon 57 3.3.6 Kết phân tích đột biến exon 12 59 3.3.7 Kết phân tích đột biến exon 13 60 3.3.8 Kết phân tích đột biến exon 14 61 3.3.9 Kết phân tích đột biến exon 15 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 66 Kết luận 66 Kiến nghị 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 Tài liệu tiếng Việt 68 Tài liệu tiếng Anh 68 Các trang Web 72 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Thống kê bệnh ung thư liên quan đến HNPCC Bảng 2: Tiêu chuẩn Amsterdam I Amsterdam II chẩn đoán lâm sàng HNPCC Bảng 3: Các gen MMR liên quan đến ung thư đại trực tràng Bảng 4: Tỷ lệ đột biến thường gặp hai gen MLH1 MSH2 Bảng 5: Nguy mắc số bệnh ung thư người có đột biến gen liên quan đến HNPCC so với cá thể bình thường Bảng 6: Trình tự cặp mồi dùng để nhân 09 exon quan tâm Bảng 7: Thành phần chu trình nhiệt cho phản ứng PCR Bảng 8: Tỷ lệ thành phần PAGE 12% kỹ thuật SSCP Bảng 9: Quy trình nhuộm bạc thành phần dung dịch nhuộm Bảng 10: Kết tối ưu điều kiện nhiệt độ gắn mồi nhân exon nghiên cứu DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1: Sơ đồ cấu tạo ruột kết hình thành polyp bên Hình 2: Cơ chế MMR E Coli Hình 3: Cơ chế MMR người Hình 4: Sơ đồ cấu tạo NST số vị trí gen MSH2 Hình 5: Vị trí gen MSH2 NST số Hình 6: Sơ đồ gen MSH2 Hình 7: Sơ đồ phần phân tử protein mã hóa gen MSH2 Hình 8: Tỷ lệ dạng đột biến thường gặp gen MSH2 Hình 9: Kỹ thuật SSCP phân tích đột biến gen MSH2 Hình 10: Kết tách chiết ADN tổng số Hình 11: Kết nhân exon Hình 12: Điều kiện thử nghiệm (a) kết nhân (b) exon Hình 13: Kết nhân exon Hình 14: Kết nhân exon Hình 15: Kết nhân exon Hình 16: Điều kiện thử nghiệm (a) kết nhân (b) exon 12 Hình 17: Kết nhân exon 13 Hình 18: Điều kiện thử nghiệm (a) kết nhân (b) exon 14 Hình 19: Điều kiện thử nghiệm (a) kết nhân (b) exon 15 DANH MỤC CÁC HÌNH (tiếp theo) Hình 20: Kết SSCP exon Hình 21: Mơ hình sợi đơn sai khác mẫu 35 so với đối chứng exon Hình 22: Kết giải trình tự mẫu số 35 exon Hình 23: Kết SSCP exon Hình 24: Kết giải trình tự mẫu 14 exon Hình 25: Kết SSCP exon Hình 26: Kết SSCP exon Hình 27: Kết SSCP exon Hình 28: Mơ hình điện di sai khác mẫu 31, 34, 36 exon Hình 29: Kết SSCP exon 12 Hình 30: Kết SSCP exon 13 Hình 31: Kết SSCP exon 14 Hình 32: Kết SSCP exon 15 Hình 33: Mơ hình sợi đơn sai khác mẫu 19 exon 15 Hình 34: Kết giải trình tự mẫu 19 exon 15 gen MSH2 BẢNG KÍ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ADN Deoxiribonucleic Acid Axit deoxiribonucleic APS Amonipersulphate Amonipersulphate ARN Ribonucleic Acid Axit ribonucleic bp Base paire Cặp bazơ CRC Colorectal Cancer Ung thư đại trực tràng DGGE Denaturing Gradient Gel Điện di gel Gradient biến tính Electrophoresis dNTP Deoxyribonucleotide Deoxyribonucleotide triphosphate triphosphate FAP Adenomatous Polyp tuyến theo dòng họ Familial Polyposis HET Heteroduplex Analysis HNPCC Hereditary Phân tích sợi kép dị hợp Non-polyposis Ung thư ruột kết không polyp di Colorectal Cancer truyền HPV Human Papilloma Virus Virut gây ung thư cổ tử cung người IHC Immunohistochemistry Hóa mơ miễn dịch Kb Kilobase 1000 bazơ nitơ LOH Loss of Heterozygosity Mất tính dị hợp tử MMR Mismatch Repair Sửa chữa bắt cặp sai MSI Microsatellite Instability Bất ổn vi vệ tinh MSH2 MutS Homolog Gen MSH2 Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân Tuy nhiên, exon gen MSH2 thuộc người Việt Nam, chúng tơi phát mơ hình điện di sai khác Cụ thể, mẫu đối chứng thể băng vùng sợi đơn, bệnh nhân số 31, 34 36 thể băng (Hình 28) vị trí tương ứng Hai số ba bệnh nhân có mơ hình diện di sợi đơn bất thường chẩn đoán mắc ung thư đại trực tràng từ trẻ (dưới 50 tuổi) mẫu số 31 36 Chúng gửi giải trình tự Tuy nhiên, kết cho thấy khơng có khác biệt trình tự ADN người bình thường người bị bệnh Học viên Khóa 2010 – 2012 58 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân 3.3.6 Kết phân tích đột biến exon 12 Kết điện di exon 12 (Hình 29) cho thấy, khu vực sợi đơn tất mẫu (kể mẫu đối chứng) xuất băng sợi đơn Trong băng phía mờ tách biệt hồn tồn với băng phía đậm Tiến hành đối chiếu so sánh cấu hình di chuyển băng sợi đơn, không phát bất thường Chứng tỏ, khơng có đột biến xảy exon 12 42 mẫu phân tích Học viên Khóa 2010 – 2012 59 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân 3.3.7 Kết phân tích đột biến exon 13 Trong mơ hình điện di exon 13 (Hình 30), thu băng ADN khu vực sợi đơn tất mẫu Trong đó, băng sợi đơn phía tách biệt hồn tồn với băng lại nằm sát Đối chiếu so sánh mơ hình di chuyển băng sợi đơn với mẫu đối chứng, kết luận mẫu phân tích khơng có đột biến phát Học viên Khóa 2010 – 2012 60 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân 3.3.8 Kết phân tích đột biến exon 14 Kết điện di exon 14 (Hình 31) cho thấy, vùng ADN sợi đơn tất mẫu (kể mẫu đối chứng) xuất băng nằm sát Đối chiếu thể mơ hình di chuyển mẫu với mẫu đối chứng, không phát bất thường Chứng tỏ, khơng có đột biến xảy exon 14 Học viên Khóa 2010 – 2012 61 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân 3.3.9 Kết phân tích đột biến exon 15 Nhìn vào kết điện di exon 15 (Hình 32) chúng tơi phát mơ hình sai khác mẫu số so với mẫu đối chứng Bởi vì, mẫu phân tích thể băng khu vực sợi đơn mẫu số xuất băng vị trí tương ứng Chúng tơi nghi ngờ mẫu số xảy đột biến nên có mơ hình sợi đơn thể bất thường Đối chiếu lý lịch mẫu, mơ hình sai khác bệnh nhân nữ, 51 tuổi chẩn đoán mắc ung thư đại tràng Học viên Khóa 2010 – 2012 62 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân Chúng tiến hành điện di lần để có thêm sở khẳng định nhận định đưa Để biết xác mẫu có xảy đột biến hay khơng, vị trí đột biến đâu đột biến thuộc dạng nào, gửi mẫu đọc trình tự trước tinh mẫu làm giàu nồng độ ADN nhờ kỹ thuật PCR Sau phân tích đối chiếu với mẫu đối chứng, chúng tơi chưa phát xác vị trí xảy đột biến dạng đột biến dẫn tới mơ hình điện di sai khác mẫu số exon Học viên Khóa 2010 – 2012 63 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân Tuy nhiên, exon 15 gen MSH2 thuộc người Việt Nam, phát mơ hình sai khác số lượng băng sợi đơn mẫu số 19 (Hình 33) Kết giải trình tự mẫu số 19 phát đột biến dạng thay C>A codon 848 (c.848 C>A) (Hình 34) Đây đột biến đồng nghĩa Bởi vì, việc thay nucleotide C A khơng làm thay đổi axit amin chuỗi polypeptide gen MSH2 tạo mà thay đổi ba mã GCC → GCA tương ứng với ba mã hóa CGG → CGU mARN Hai ba mã hóa axit amin arginin Dựa cấu trúc protein gen MSH2, sản phẩm protein exon 13, 14 15 tạo miền tương tác với dạng tương đồng MutL đóng vai trị quan trọng - sửa chữa lỗi sai hỏng tái ADN [21] Vì đột biến đồng Học viên Khóa 2010 – 2012 64 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân nghĩa nên sản phẩm protein exon 15 tạo không thay đổi Chính chức miền tương tác với dạng tương đồng MutL khơng bị thay đổi Ngồi ra, theo nghiên cứu trước đây, nhiều đột biến exon 15 gen MSH2 phát Cụ thể, năm 2005, Mangold cộng tìm thấy đột biến vô nghĩa c.2536 C>T (p.Gln846X), c.2575 G>T (p.Glu859X), c.2579 C>A (p.Ser860X) [18] Trong năm 2009, Salehi phát hai đột biến vị trí khung đọc 2556 2586 [28] Những đột biến nằm cách xa vị trí đột biến tìm thấy bệnh nhân 62 tuổi Việt Nam tương ứng khoảng 13 đến 43 nucleotide Học viên Khóa 2010 – 2012 65 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu thu được, tới số kết luận sau: Đã nhân thành công 09 tổng số 16 exon gen MSH2 nhờ kỹ thuật PCR, bao gồm: thiết kế cặp mồi đặc hiệu, tối ưu thành phần phản ứng nhiệt độ gắn mồi cho exon 2, 3, 6, 7, 8, 12, 13, 14 15 Sử dụng kỹ thuật PCR-SSCP phân tích đột biến exon lựa chọn, phát mơ hình điện di sai khác bệnh nhân Trong đó, mơ hình thuộc exon 2, mơ hình thuộc exon 3, mơ hình thuộc exon 7, mơ hình thuộc exon mơ hình thuộc exon 15 Giải trình ADN exon gen MSH2 từ mẫu có mơ hình PCR-SSCP sai khác, chúng tơi phát đột biến bao gồm: đột biến nucleotide A vị trí 5193 (vùng intron nằm trước exon gen MSH2); đột biến thay nucleotide vị trí codon 199 nucleotide G bị thay T (c.199 G>T) exon dẫn tới thay đổi axit amin prolin (CCG) thành axit amin glutamin (CAG) chuỗi polypeptide gen MSH2 tạo đột biến thay C>A vị trí 77942 (tương ứng codon 848 exon 15) thuộc gen MSH2 KIẾN NGHỊ Trên sở kết trên, chúng tơi có số kiến nghị sau: Tiếp tục phân tích di truyền exon cịn lại gen MSH2 để có kết luận chung di truyền ung thư đại trực tràng đột biến gen MSH2 gây Học viên Khóa 2010 – 2012 66 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân Mở rộng hướng nghiên cứu với gen cịn lại thuộc hệ thống MMR để có sở liệu chung chẩn đoán sớm ung thư đại trực tràng Áp dụng vài phương pháp khác HET DGGE nhằm làm tăng hiệu phân tích tính di truyền sàng lọc đột biến Học viên Khóa 2010 – 2012 67 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Trịnh Đình Đạt (2009), Cơng nghệ sinh học, Tập 4, NXB Giáo Dục, Hà Nội Võ Thị Thương Lan (2009), Giáo trình sinh học phân tử tế bào ứng dụng, NXB Giáo dục Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng (2009), Cơ sở Di truyền học Phân tử Tế bào, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội Đinh Đoàn Long, Nguyễn Thị Hồng Vân, “Cơ sở Di truyền học Ung thư” (Tài liệu in) Hồng Thị Sèn (2005), Giáo trình giải phẫu người, Đại học Thái Nguyên Lê Duy Thành (2006), Cơ sở di truyền chọn giống thực vật, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Đỗ Lê Thăng, Quyền Đình Thi, Nguyễn Mộng Hùng, Nguyễn Huỳnh Minh Qun, Nguyễn Chí Thành (2009), Cơng nghệ sinh học phân tử - Nguyên lý ứng dụng ADN tái tổ hợp – Bernard R Glick, Jack J Pasternak, NXB Khoa học Kỹ thuật, (tr43) Tài liệu tiếng Anh Aarnio M, Sankila R, Pukkala E, Salovaara R, Aaltonen L, de la Chapelle A, Peltomäki P, Mecklin J-P, Järvinen H (1999), “Cancer risk in mutation carriers of DNA mismatch repair genes”, Int J Cance, 81, pp 214–218 Cecily PV, Elaine L, Wade SS (2008), “Confirmation of single exon deletions in MLH1 ADN MSH2 using quantitative PCR”, ARUP institute for clinical ADN Experimental pathology, Salt Lake City Học viên Khóa 2010 – 2012 68 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Võn 10 Chapman Anthony Hugh & Jean Franỗois Adell (2004) Radiology and imaging of the colon Springer ISBN: 3540435972, 9783540435976 11 De la Chapelle A (2004), “Genetic Predisposition to Colorectal Cancer: Lynch Syndrome (HNPCC)”, Nature Publishing Group , Nat Rev Cancer, 4(10) 12 Hendriks YM, de Jong AE, Morreau H, et al (2006), “Diagnostic approach ADN management of Lynch syndrome (hereditary nonpolyposis colorectal carcinoma): a guide for clinicians”, CA Cancer J Clin,56(4), pp 213-238 13 Huang J, Kuismanen SA, Liu T, et al (2001), “MSH6 and MSH3 are rarely involved in genetic predisposition to nonpolypotic colon cancer”, Cancer Res,61(4), pp 1619-1623 14 Iaccarino I, Marra G, Palombo F, Jiricny J (1998), “hMSH2 and hMSH6 play distinct roles in mismatch binding ADN contribute differently to the ATPase activity of hMutSalpha”, EMBO J, 17(9), pp 2677-2686 15 Jiricny J (2000), “Mediating mismatch repair”, Nat Genet, 24(1), pp 6-8 16 Loukola A, Vilkki S, Singh J, Launonen V, Aaltonen LA (2000), “Germline ADN somatic mutation analysis of MLH3 in MSI-positive colorectal cancer”, Am J Pathol, 157(2), pp 347-352 17 Lynch, H T., Smyrk, T., Watson, P., Lanspa, S J., Boman, B M., Lynch, P M., Lynch, J F., Cavalieri (1991), “Hereditary colorectal cancer” Semin Oncol, 18: 337 – 366 18 Mangold E et al 2005 Spectrum and frequencies of mutations in MSH2 and MLH1 identified in 1,721 German families suspected of hereditary nonpolyposis colorectal cancer Int J Cancer: 116, 692–702 Học viên Khóa 2010 – 2012 69 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân 19 Manuel Perucho, “Genetic and Epigenetic Modification of MLH1” (2000), American Journal of Pathology, 157:1052-1053 20 Minna Nyström-Lahti, Ramon Parsons, Pertti Sistonen, Lea Pylkkänen, Lauri A Aaltonen, Fredrick S Leach, Stanley R Hamilton, Patrice Watson, Earlene Bronson, Ramon Fusaro, Jennifer Cavalieri, Jane Lynch, Stephen Lanspa, Tom Smyrk, Patrick Lynch, Thomas Drouhard, Kenneth W Kinzler, Bert Vogelstein, Henry T Lynch, Albert de la Chapelle, and Päivi Peltomäki (1994), “Mismatch Repair Genes on Chromosomes 2p and 3p Account for a Major Share of Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer Families Evaluable by Linkage”, Am J Hum Genet, 55(4): 659–665 21 Modrich P (2006), “Mechanisms in eukaryotic mismatch repair”, J Biol Chem, 281(41), 30305-30309 22 Myers RM, Maniatis T, Lerman LS Detection and localization of single base changes by denaturing gradient gel electrophoresis Methods Enzymol 155: 501-527, 1987 23 Ohmiya N, Matsumoto S, Yamamoto H, Baranovskaya S, Malkhosyan SR, Perucho M (2001), “Germline ADN somatic mutations in hMSH6 ADN hMSH3 in gastrointestinal cancers of the microsatellite mutator phonotype” Gene, 272(1-2), pp 301-313 24 Orita M, Iwahana H, Kanazawa H, Hayashi K, Sekiya T (1989), “Detection of polymorphism of human DNA by gel electrophoresis as single strand conformation polymorphism”, Proc Natl Acad Sci USA, 86, pp 27662770 25 Papp J, Kovacs ME, Olah E (2007), “Germline MLH1 ADN MSH2 mutational spectrum including frequent large genomic aberrations in Học viên Khóa 2010 – 2012 70 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân Hungarian hereditary non-polyposis colorectal cancer families: implications for genetic testing”, World J Gastroenterol,13(19), pp 2727-2732 26 Peltomäki P (2005), “Lynch syndrome genes”, Fam Cancer, 4(3), pp 227232 27 Peltomäki P, Vasen HF (1997), “Mutations predisposing to hereditary nonpolyposis colorectal cancer: database ADN results of a collaborative study”, The International Collaborative Group on Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer, Gastroenterology, 113(4), pp 1146-1158 28 Salehi M, Amani S, Javan S, Emami M H, Salamat M R, and Noori Daloii M R 2009 Evaluation of MLH1 and MSH2 Gene Mutations in a Subset of Iranian Families with Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer (HNPCC) Journal of Sciences, Islamic Republic of Iran 20(1): 7-12 29 Screening for Lynch Syndrome by Microsatellite Instability Analysis and Immunohistochemistry – Jason D Merker, MD, PhD,CAP Molecular Oncology Committee 30 Stewart B W and Kleihues P (2003), “World Cancer Report”, IARC Press, Lyon 31 Vasen HF, Mecklin JP, Khan PM, Lynch HT (1991), “The International Collaborative Group on Hereditary Non-Polyposis Colorectal Cancer (ICGHNPCC)”, Dis Colon Rectum, 34(5), pp 424-425 32 Vasen HF, Watson P, Mecklin JP, Lynch HT (1999), “New clinical criteria for hereditary nonpolyposis colorectal cancer (HNPCC, Lynch syndrome) proposed by the International Collaborative group on HNPCC”, Gastroenterology, 116(6), pp 1453-1456 33 Viswanadham Duppatla, Nimesh Joseph, Desirazu N Rao (2006), Prokaryotic DNA Mismatch Repair, Elsevier Inc, Indian Học viên Khóa 2010 – 2012 71 Nguyễn Thị Mai Luận văn Cao học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân 34 Warthin, A.S (1925), “The further of study of a cancer family”, J Cancer Res, 279 – 286 35 Watson P , Lynch HT, Shaw TG, et al (1999), “Clinical impact of molecular genetic diagnosis, genetic counseling, and management of hereditary cancer Part I: Studies of cancer in families”, Cancer, 86(11 Suppl), pp 2449-2456 36 Yamashita, K., Dai, T., Dai, Y., Yamamoto, F., Perucho (2003), “Genetics supersedes epigenetics in colon cancer phenotype”, Cancer Cell, 4: 121-131 37 Zhang H, Zhang YZ, Zhang MZ, Sheng JQ, Fu L, Huang JS, Han M, Mu H, Li AQ, Wu ZT, Han Y, Li SR (2008), “Mismatch repair gene mutations in Chinese HNPCC patients”, Cytogenet Genome Res, 122, pp 22-27 Các trang Web 38 http://atlasgeneticsoncology.org 39 http://biosiva.50webs.org 40 http://ghr.nlm.nhi.gov/gene/MSH2 41 http://openi.nlm.nhi.gov 42 http://www.bookrags.com/research/heteroduplex-analysis-wog/ 43 http://www.genetests.org 44 http://www.mayoclinic.com 45 http://www.ncbi.nlm.nih.gov Học viên Khóa 2010 – 2012 72 Nguyễn Thị Mai ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Mai PHÂN TÍCH DI TRUYỀN GEN SỬA CHỮA BẮT CẶP SAI MSH2 TỪ BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG Chuyên ngành: Di truyền. .. trực tràng 1.2.2 Sơ lược bệnh ung thư đai trực tràng 1.2.3 Cơ sở phân tử ung thư đại trực tràng di truyền 12 1.3 Hệ thống gen MMR đột biến gen MSH2 với hội chứng ung thƣ đại trực tràng. .. ĐẠI TRỰC TRÀNG 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu ung thƣ đại trực tràng Ung thư đại trực tràng bệnh lý phổ biến bệnh ung thư có liên quan đến hệ tiêu hóa Trong đó, ung thư đại trực tràng không polyp di