Kết quả phân lập và xác định tính kháng nguyên, độc lực của các chủng vi khuẩn Streptococcus spp. gây bệnh ở cá rô phi tại 7 tỉnh/thành: Hà Nội, Hải Dương, Quảng Ninh, Đồng Tháp, Tiền Giang,Vĩnh Long, An Giang cho thấy tỷ lệ mẫu bệnh phân lập được vi khuẩn Streptococcus spp. là 96%. Trong số 296 chủng vi khuẩn S. agalactiae phân lập được, các chủng: NS5; NS13; LX7; LX8; LX9; LX10; ĐN8; ĐN9; ĐN10; ĐN12; ĐN17; O2; TP3; TP4 có tính kháng nguyên.
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH TÍNH KHÁNG NGUYÊN VÀ ĐỘC LỰC CỦA CÁC CHỦNG STREPTOCOCCUS AGALACTIAE GÂY BỆNH Ở CÁ RÔ PHI TẠI TỈNH, THÀNH TRONG CẢ NƯỚC Hồ Thu Thủy1, Vũ Đức Hạnh3, Nguyễn Bá Tiếp , Nguyễn Viết Khơng2, Lại Thị Lan Hương3 TĨM TẮT Kết phân lập xác định tính kháng nguyên, độc lực chủng vi khuẩn Streptococcus spp gây bệnh cá rô phi tỉnh/thành: Hà Nội, Hải Dương, Quảng Ninh, Đồng Tháp, Tiền Giang,Vĩnh Long, An Giang cho thấy tỷ lệ mẫu bệnh phân lập vi khuẩn Streptococcus spp 96% Trong số 296 chủng vi khuẩn S agalactiae phân lập được, chủng: NS5; NS13; LX7; LX8; LX9; LX10; ĐN8; ĐN9; ĐN10; ĐN12; ĐN17; O2; TP3; TP4 có tính kháng ngun Độc lực chủng vi khuẩn S.agalactiae (TP4; O2; ĐN12; LX8 NS5) mạnh Từ khóa: Cá rơ phi, vi khuẩn Streptococcus agalactiae, kháng nguyên, độc lực Isolation, virulence and antigen determination of Streptococcus agalactiae strains caused disease in Tilapia at provinces of Viet Nam Ho Thu Thuy, Vu Duc Hanh, Nguyen Ba Tiep, Nguyen Viet Khong, Lai Thi Lan Huong SUMMARY The result of isolation, virulence and antigen determination of Streptococcus agalactiae strains caused the disease in Tilapia at Ha Noi, Hai Duong, Quang Ninh, Dong Thap, Tien Giang, Vinh Long, An Giang showed that there were 96% of samples infected with Streptococcus agalactiae The isolated Streptococcus strains presenting antigen, belonged to NS5, NS13, LX7, LX8, LX9, LX10, DN8, DN9, DN10, DN12, DN17, O2, TP3, TP4 The virulence of Streptococcus agalactiae strains belonging to serotype (TP4, O2, DN12, LX8 and NS5) was very strong Keywords: Tilapia, S agalactiae, antigen, virulence I ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm vừa qua, ngành thủy sản có tốc độ phát triển nhanh lĩnh vực sản xuất thực phẩm cho người (Khan et al., 2011) Tại Việt Nam, nuôi trồng thủy sản đóng vai trị quan trọng kinh tế quốc gia với tổng sản lượng thủy sản đạt 7,28 triệu năm 2017, khoảng 3,9 triệu đóng góp từ hoạt động nuôi trồng Công ty cổ phần dược vật tư thú y (Hanvet) Viện Thú y Khoa Thú y, Học Viện Nông nghiệp Việt Nam 56 thủy sản thủy sản xuất khẩu, mang lại kim ngạch xuất đạt 8,3 tỷ USD (VASEP, 2018) Tuy nhiên, việc chuyển đổi cấu nuôi trồng sang nuôi thâm canh tạo nhiều hệ lụy đến môi trường đặc biệt gây nhiều loại dịch bệnh nguy hiểm, gây tổn thất kinh tế cho ngành ni trồng thủy sản tồn giới Hiện khu ni thủy hải sản nói chung, vùng ni cá rơ phi nói riêng, việc sử dụng kháng sinh phịng trị bệnh tràn lan, khơng cách gây tượng kháng kháng sinh vi khuẩn gây bệnh động vật thủy sản, dẫn đến hiệu điều trị bệnh khơng có thấp (Sarter et al., 2007) Trong số vi khuẩn gây KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 bệnh nuôi trồng thủy sản, Streptococcus spp tác nhân gây bệnh nguy hiểm chúng có phổ ký chủ rộng từ cá tầm, cá hồi đến nhóm cá biển đặc biệt lồi cá thuộc họ cá rơ cá rơ phi (Toranzo cs, 2005) Vi khuẩn S agalactiae gây bệnh cá rơ phi có tần suất xuất từ 95-100% tháng có nhiệt độ cao với tỷ lệ gây chết cộng dồn lên đến 42-100% đàn cá nuôi, làm thiệt hại nghiêm trọng cho nghề nuôi cá rô phi thương phẩm Việt Nam, việc dùng kháng sinh không cách, vi khuẩn bị kháng kháng sinh nên điều trị bệnh kháng sinh không hiệu (Phạm Hờng Qn et al., 2013) Để có sở cho việc nghiên cứu chế tạo vacxin phòng Streptococcosis cá rô phi, tiến hành phân lập xác định kiểm tra độc lực chủng vi khuẩn gây bệnh cá rô phi II NGUYÊN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu - Mẫu bệnh phẩm gan, thận, lách từ mẫu cá rô phi bị bệnh với dấu hiệu bệnh lý bơi lờ đờ định hướng, chướng bụng, xuất huyết, lồi mắt, sưng ruột; quan nội tạng gan, thận, lách sưng to, xuất huyết, bạc màu - Cá rô phi dùng thí nghiệm: Cá rơ phi (vằn) giống khỏe mạnh, sạch bệnh, có trọng lượng trung bình 10g/con, cá rơ phi (diêu hồng) giống khỏe mạnh, sạch bệnh, có trọng lượng trung bình 2,5g/con Trước làm thí nghiệm, cá được nuôi và cho thích nghi với môi trường ngày - Các loại môi trường nuôi cấy: BHI broth (Brain heart infusion broth - Merck), BHI agar (Brain heart infusion agar - Merck), BHI có bổ sung 5% máu cừu, nước muối sinh lý 0,85%, kit API20 Strep (BioMerieux, Pháp) - Thuốc gây mê, bơm tiêm, đĩa lồng nuôi cấy trang thiết bị phịng thí nghiệm khác 2.2 Địa điểm nghiên cứu - PhòngThủy sản - Trung tâm Nghiên cứu Sản xuất sinh phẩm - Công ty cổ phần Dược Vật tư thú y (Hanvet) - Trung tâm Thú y vùng 6, số phòng thí nghiệm khác - Trung tâm giống nơng nghiệp Hậu Giang - Các vùng nuôi cá rô phi tỉnh/thành: Hà Nội, Hải Dương, Quảng Ninh, Đồng Tháp, Tiền Giang, Vĩnh Long, An Giang 2.3 Nội dung nghiên cứu - Thu mẫu cá bệnh từ địa phương phân lập, định danh vi khuẩn Streptococcus spp - Lựa chọn chủng vi khuẩn Streptococcus spp có tính kháng ngun - Lựa chọn chủng vi khuẩn Streptococcus spp có độc lực cao 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Thu mẫu, phân lập định danh vi khuẩn Thu mẫu cá bệnh Thu mẫu cá rô phi vằn rô phi đỏ bị bệnh tỉnh/thành: Hà Nội, Hải Dương, Hải Phòng, Quảng Ninh, Đồng Nai, Tiền Giang, Vĩnh Long, An Giang, Đồng Tháp Mẫu cá bệnh sống chết Cơ quan sử dụng để nuôi cấy phân lập vi khuẩn gồm: Gan, thận, lách, não mắt quan đích vi khuẩn Streptococcus spp Phân lập định danh vi khuẩn Streptococcus spp Nuôi cấy phân lập vi khuẩn Streptococcus spp cá rô phi phương pháp nghiên cứu vi khuẩn Frerich G.N (1984, 1993) Vi khuẩn phân lập từ quan đích mơi trường BHIA, chuyển phịng thí nghiệm để phân lập sàng lọc khuẩn tạp, từ chọn chủng vi khuẩn mang đặc điểm đặc trưng vi khuẩn Streptococcus spp 57 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Dựa vào hình thái khuẩn lạc có đặc điểm trịn, đường kính nhỏ 1-2mm, lồi có màu trắng đục Khuẩn lạc chọn, tiến hành soi tươi, nhuộm Gram quan sát kính hiển vi vật kính 100X, kiểm tra đặc điểm dung huyết mơi trường thạch máu cừu 5% Thử đặc tính sinh hóa kít API20 Strep (BioMerieux, Pháp) 2.4.2 Lựa chọn chủng vi khuẩn Streptococcus spp có tính kháng ngun Chế tạo kháng nguyên cho chủng vi khuẩn: Sau 24 vi khuẩn tăng sinh mạnh, sau bất hoạt vi khuẩn formalin 38%, sử dụng với tỷ lệ 0,5% Bảo quản điều kiện 0C khoảng 24 - 48 Sau bất hoạt formalin, vi khuẩn thu nhận cách ly tâm môi trường ni tăng sinh vi khuẩn Sau phần đặc nằm đáy ống ly tâm, có màu trắng thu lại Thực ly tâm 5000 vòng/phút vịng 15 phút Phần đặc rửa nước muối sinh lý lần Sau lần rửa, ly tâm lại để rửa hết formalin Phần cô đặc nằm ống ly tâm pha với nước muối sinh lý Bảo quản nhiệt độ -100C Kháng nguyên chủng vi khuẩn sau chế tạo, tiêm miễn dịch cho cá rô phi với 10 - 109 CFU/ml /con cá vào xoang bụng, chủng tiêm cho 10 cá (lặp lại lần) Sau 21 ngày tiến hành lấy máu xác định hiệu giá kháng thể huyết Mẫu máu sau lấy để nhiệt độ phòng ly tâm 2500 vòng/5 phút để thu huyết Tiến hành phản ứng ngưng kết phiến kính Nếu phản ứng có nhiều ngưng kết màu trắng đục, nhỏ li ti chứng tỏ có kháng thể kháng vi khuẩn Streptococcus spp 2.4.3 Lựa chọn chủng độc lực Dùng chủng có kháng nguyên lựa 58 chọn để gây nhiễm cho cá với LC70 (Lethal Concentration 70) Dựa vào LC70 gây chết cá để đánh giá độc lực chủng vi khuẩn - Nuôi cấy tăng sinh dịng vi khuẩn lựa chọn mơi trường BHI 30 oC vòng 18 (Hernandez cs., 2009) - Định lượng vi khuẩn phương pháp đếm khuẩn lạc Gây nhiễm nồng độ vi khuẩn khác nhau, đối chứng nước muối sinh lý Mỗi nồng độ vi khuẩn tiêm cho 30 cá có trọng lượng 20g ± với liều 0,2 ml/con cá (thí nghiệm lặp lại lần) - Cảm nhiễm bệnh nhân tạo phương pháp tiêm xoang bụng sau cá gây mê - Theo dõi thí nghiệm, ghi chép số lượng cá chết kết thúc thí nghiệm sau cá ngừng chết ngày liên tục - Phân lập vi khuẩn từ mẫu cá bệnh sau cảm nhiễm bệnh môi trường BHIA, kiểm tra hình thái vi khuẩn, thử phản ứng sinh hóa kit API20 Strep để khẳng định cá bị bệnh vi khuẩn cảm nhiễm gây III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết thu mẫu, phân lập định danh vi khuẩn 3.1.1 Kết thu mẫu cá bệnh Chúng tiến hành phân lập vi khuẩn Streptococcus agalactiae từ 256 mẫu cá bệnh có trọng lượng từ 2g đến 450g tỉnh/thành Hà Nội, Hải Dương, Quảng Ninh, Đồng Tháp, Tiền Giang, Vĩnh Long, An Giang Hầu hết mẫu cá bệnh thu có triệu chứng bệnh tích điển hình: bơi lờ đờ, phương hướng; mắt lồi đục; xuất huyết nắp mang, thân, gốc vây ngực vây bụng; mang tái nhạt, bụng trướng to, xoang bụng có chứa dịch màu vàng, nội tạng bị xuất huyết, mềm nhũn Kết trình bày bảng KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Bảng Số mẫu cá bệnh thu địa phương STT Số hộ thu mẫu Số lượng cá (con) Trọng lượng (g) Hà Nội Địa điểm 23 15 - 280 Hải Dương 30 10 - 250 Quảng Ninh 24 12 - 320 Đồng Tháp 16 56 - 300 Tiền Giang 11 36 - 450 Vĩnh Long 35 - 250 An Giang 15 52 - 430 70 256 Tổng cộng 3.1.2 Phân lập định danh vi khuẩn khuẩn gây bệnh, mẫu cá bị bệnh da Trước tiến hành phân lập, giám định vi Hình 1a Hình thái khuẩn lạc Streptococcus spp môi trường BHIA ký sinh trùng nấm kiểm tra để loại bỏ Hình 1b Hình thái khuẩn lạc Streptococcus spp mơi trường thạch máu Hình 1c Hình dạng nhuộm Gram vi khuẩn Streptococcus spp Bảng Kết phân lập vi khuẩn từ mẫu cá bệnh Tỉnh Số mẫu Aeromonas sp Flavobacterium sp Streptococcus spp Mẫu (+) Tỷ lệ (%) Mẫu (+) Tỷ lệ (%) Mẫu (+) Tỷ lệ (%) Hà Nội 23 34,78 4,34 22 95,65 Hải Dương 30 13 43,33 6,67 29 96,70 Quảng Ninh 24 20,83 4,17 23 95,83 Đồng Tháp 56 24 42,85 14,28 55 98,21 Tiền Giang 36 14 38,88 11,11 35 97,20 Vĩnh Long 35 22,85 8,57 34 97,14 52 14 26,92 11,53 51 98,07 256 86 33,59 25 9,76 249 97,26 An Giang Tổng Ghi chú:(+): số mẫu nhiễm 59 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Bảng cho thấy, tổng số 256 mẫu cá rô phi bị bệnh, xuất loại vi khuẩn là: Aeromonas sp., Flavobacterium sp Streptococcus spp Trong đó, số mẫu có vi khuẩn Streptococcus spp cao 249/256 mẫu, chiếm tỷ lệ 97,26%; số mẫu có vi khuẩn Aeromonas sp 86/256, chiếm tỷ lệ 33,59%; số mẫu xuất Flavobacterium sp 9,76% Kết nghiên cứu tương đồng với công bố trước Phạm Hồng Quân cs, (2013), có 74/86 mẫu dương tính với vi khuẩn Streptococcus spp chiếm tỷ lệ 86,05% (Nguyễn Viết Khuê cs, 2009); tỷ lệ dương tính với vi khuẩn 90% (Liu cs, 2012) Sau định danh kit API20 Strep, xác định 249 mẫu vi khuẩn Streptococcus spp phân lập S agalactiae Các mẫu vi khuẩn giữ tủ nhiệt độ -800C để đặc tính vi A khuẩn bị biến đổi 3.2 Kết lựa chọn chủng kháng nguyên Với mục đích lựa chọn chủng vi khuẩn đưa vào nghiên cứu sản xuất vacxin quy mô công nghiệp, ứng dụng thực tiễn nên cần thiết phải lựa chọn chủng vi khuẩn có tính kháng ngun ổn định, có khả kích thích thể cá sinh đáp ứng miễn dịch cao, có khả bảo hộ rộng Đánh giá tính kháng nguyên chủng vi khuẩn dựa phản ứng ngưng kết với nguyên tắc liên kết kháng nguyên kháng thể nhìn thấy dạng kết khối Kết thể bảng + Các chủng vi khuẩn có phản ứng dương tính: kháng ngun bị ngưng kết thành đám lấm phiến kính B Hình Kết phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính A: Âm tính; B: Dương tính với vi khuẩn sống; C: Dương tính với vi khuẩn bất hoạt Hình Cụm ngưng kết quan sát kính hiển vi 60 C KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 + Các chủng vi khuẩn có phản ứng âm tính: khơng có tượng ngưng kết loại bỏ Kết kiểm tra phản ứng ngưng kết, thu 14/246 mẫu vi khuẩn có tính kháng ngun chủng S agalactiae có ký hiệu NS5, NS13, LX7, LX8, LX9, LX10, ĐN8, ĐN9, ĐN10, ĐN12, ĐN17, O2, TP3, TP4 3.3 Kết lựa chọn chủng độc lực Từ 14 chủng vi khuẩn có tính kháng ngun, chúng tơi tiến hành kiểm tra độc lực cá rơ phi có trọng lượng 20g ± nồng độ từ 106 đến 1010 CFU/ml Mỗi nồng độ tiêm cho 30 cá với liều 0,2 ml/con (thí nghiệm lặp lại lần) Sau 24 gây nhiễm, hầu hết lô cá thử độc lực với liều 0,2 x 108 - 1010 cfu/ml/con có biểu bệnh với dấu hiệu bệnh lý điển hình xuất huyết, lồi mắt, cá chết sau 36 gây nhiễm; riêng chủng O2, cá thử độc lực liều 106 có biểu chết sau 36 gây nhiễm Hình Dấu hiệu bệnh lý cá sau công vi khuẩn S agalactiae độc lực Kết bảng cho thấy, ngồi chủng O2 có cá chết 30% nồng độ vi khuẩn 106CFU/ ml, chủng khác khơng có biểu bệnh chết cơng cường độc nồng độ vi khuẩn 106 - 10 CFU/ml Ở nồng độ vi khuẩn 108 CFU/ml, có số vi khuẩn gây chết cá tỷ lệ không cao Ở nồng độ vi khuẩn 10 CFU/ml, có chủng gây chết với tỷ lệ >70% cá thí nghiệm chủng TP4, O2, ĐN12, LX8 NS5, lơ đối chứng khơng có cá chết So sánh với báo cáo Bromage (1999) độc lực chủng thí nghiệm thấp độc lực chủng vi khuẩn S iniae phân lập từ cá chẽm cá rô phi đỏ nuôi Úc (LC50 = 3,2 x 10 4CFU) (vaccine Adjuvants , 2010) Thái Lan (LC50 = 1,08 x 10 4CFU) (Suanyuk, 2010) Những cá có dấu hiệu bệnh chết sau cảm nhiễm lơ thí nghiệm giải phẫu để kiểm tra, quan sát biến đổi bệnh lý quan nội tạng Sau tiến hành tái phân lập vi khuẩn từ gan, thận, mắt não cá môi trường BHIA nhiệt độ 30 oC, 24 giờ, thấy khuẩn lạc đĩa mơi trường BHIA có màu sắc hình thái giống với khuẩn lạc vi khuẩn Streptococcus spp phân lập từ mẫu cá rô phi lúc thu mẫu 61 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 Bảng Kết thử độc lực chủng vi khuẩn S.agalactiae Số TT Mã VK NS5 NS13 LX7 LX8 LX9 LX10 ĐN8 Mật độ VK tiêm (cfu/ml) Số cá sống/cá tiêm (con) Tỷ lệ chết (%) 1010 0/30 100,00 10 2/30 93,33 108 28/30 6,67 10 10 6/30 80,00 109 9/30 70,00 10 30/30 0,00 1010 9/30 70,00 109 15/30 50,00 108 30/30 0,00 1010 0/30 100,00 109 0/30 100,00 108 21/30 30,00 10 10 11 12 ĐN9 ĐN10 ĐN12 ĐN17 O2 13/30 56,66 9/30 30,00 10 30/30 0,00 1010 15/30 50,00 109 10/30 66,67 108 30/30 0,00 10 10 0/30 100,00 109 7/30 76,66 108 30/30 0,00 10 6/30 80,00 109 12/30 60,00 10 10 30/30 0,00 1010 9/30 70,00 109 18/30 40,00 108 30/30 0,00 10 10 0/30 100,00 109 1/30 96,67 10 6/30 80,00 1010 6/30 80,00 109 18/30 40,00 10 14 62 TP3 TP4 30/30 0,00 1010 0/30 100,00 109 0/30 100,00 108 3/30 90,00 10 13 109 10 7/30 76,67 106 21/30 30,00 10 10 21/30 30,00 109 15/30 50,00 10 30/30 0,00 1010 0/30 100,00 109 7/30 76,66 10 30/30 0,00 8 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXVI SỐ - 2019 IV KẾT LUẬN Nguyện, Nguyễn Hải Xuân, Phạm Thái - Từ 256 mẫu cá bệnh tỉnh/thành Hà Nội, Hải Dương, Quảng Ninh, Đồng Tháp, Tiền Giang, Vĩnh Long, An Giang, phân lập 249 chủng vi khuẩn S agalactiae (chiếm 96 %) Giang Nguyễn Thị Thu Hà (2009) “Xác - 14 chủng S agalactiae có tính kháng nguyên NS5, NS13, LX7, LX8, LX9, LX10, ĐN8, ĐN9, ĐN10, ĐN12, ĐN17, O2, TP3, TP4 Nuôi trồng Thủy sản định nguyên nhân gây chết hàng loạt cá rô phi nuôi thương phẩm số tỉnh miền Bắc”, Báo cáo khoa học Viện Nghiên cứu Phạm Hồng Quân, Hồ Thu Thủy, Nguyễn Hữu Vũ, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Lê Văn Khoa, - Từ 14 chủng có tính kháng ngun, chọn chủng có độc lực mạnh TP4, O2, ĐN12, LX8 NS5 2013 Một số đặc tính sinh học vi khuẩn TÀI LIỆU THAM KHẢO khoa học phát triển tập 11số 4-2013, trang Bromage E S., Thomas A and Owens L (1999) Streptococcus iniae, a bacterial infection in barramundi Lates calcarifer Diseases of Aquatic Organisms, 36: 177-181 Frerichs, G.N & Millar (1993) Manual for the isolation and identification of fish bacterial pathogens Pisces Press Stirling, pp 58 Streptococcus spp gây bệnh xuất huyết cá rô phi nuôi số tỉnh miền Bắc Tạp chí 506-513 Sarter, S., Kha, N H N., Hung, L.T., Jérôme Lazard, J & Montet, D 2007 Antibiotic resistance in Gram-negative bacteria isolated from farmed catfish Food Control 18: 13911396 Toranzo, A.E., Magarin B., Romalde J.L Hernandez, E., J Figueroa and C Iregui, (2009) Streptococcosis on a red tilapia, Oreochromis sp., farm: A case study J Fish Dis., 32: 247-252 (2005) A review of the main bacterial fish Khan, M., Khan, S., Miyan, K (2011) Aquaculture as a food production system: A review Biol Med 3, 291-302 10 Vacxin Adjuvants: Methods and Protocols Liu Liping, Zhang Zongfeng, Zhang Wembo, Francis Murray, David Little, 2012 Tilapia aquaculture in China: Low market prices, other issues challenge as sector seeks sustainability Global Aquaculture Advocate, Vo 15 Issue 2, March/ April 2012, pp.20-21 Nguyễn Viết Khuê, Trương Thị Mỹ Hạnh, Đồng Thanh Hà, Nguyễn Thị Hà, Phạm Thành Đô, Bùi Ngọc Thanh, Nguyễn Thị diseases mariculture systems Aquaculture 246: 37-61 Edited by Gwyn Davies., 2010 Humana Press © Springer Science Business Media, LLC 2010 ISSN 1064-3745 pp 314 11 VASEP (2018) Tổng quan ngành thủy sản Việt Nam http://vasep.com.vn/1192/ Onecontent/tong-quan-nganh.htm Ngày nhận 13-5-2019 Ngày phản biện 17-7-2019 Ngày đăng 1-9-2019 63 ... có kháng thể kháng vi khuẩn Streptococcus spp 2.4.3 Lựa chọn chủng độc lực Dùng chủng có kháng nguyên lựa 58 chọn để gây nhiễm cho cá với LC70 (Lethal Concentration 70 ) Dựa vào LC70 gây chết cá. .. Streptococcosis cá rô phi, tiến hành phân lập xác định kiểm tra độc lực chủng vi khuẩn gây bệnh cá rô phi II NGUYÊN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu - Mẫu bệnh phẩm... XXVI SỐ - 2019 bệnh nuôi trồng thủy sản, Streptococcus spp tác nhân gây bệnh nguy hiểm chúng có phổ ký chủ rộng từ cá tầm, cá hồi đến nhóm cá biển đặc biệt lồi cá thuộc họ cá rô cá rô phi (Toranzo