(Luận văn thạc sĩ) nghiêu cứu xác định cloramphenicol trong dược phẩm bằng phương pháp von ampe sử dụng điện cực giọt thủy ngân treo

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Hà Nội - Năm 2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Phƣơng Hà NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CLORAMPHENICOL TRONG DƢỢC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE SỬ DỤNG ĐIỆN CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO Chun ngàng: Hóa Phân tích Mã số: 60 44 29 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS HỒNG THỌ TÍN Hà Nội - Năm 2011 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng 1 TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung 1.1.1 Giới thiệu kháng sinh 1.1.2 Giới thiệu cloramphenicol 1.1.2.1 Giới thiệu chung 1.1.2.2 Tính chất hóa lý 1.1.2.3 Dƣợc lý chế tác dụng 1.1.2.4 Sản xuất 10 1.2 Giới thiệu phƣơng pháp von-ampe 10 1.2.1 Giới thiệu chung 10 1.2.2 Các cực làm việc thƣờng dùng phƣơng pháp von-ampe 11 1.2.3 Các kỹ thuật ghi đƣờng von-ampe 13 1.2.3.1 Kỹ thuật von-ampe xung vi phân 13 1.2.3.2 Kỹ thuật von-ampe sóng vng 15 1.3 Một số phƣơng pháp xác định cloramphenicol 1.3.1 Phƣơng pháp sắc kí 16 16 1.3.1.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng 16 1.3.1.2 Phƣơng pháp sắc kí khí 18 1.3.2 Phƣơng pháp quang 18 1.3.3 Phƣơng pháp điện hóa 19 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 1.3.3.1 Cực phổ xung vi phân 19 1.3.3.2 Cực phổ sóng vng 20 1.3.3.3 Phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng đầu dò vi sợi cacbon 20 1.3.4 Một số phƣơng pháp khác Chƣơng 2: 21 NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Nội dung nghiên cứu 22 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Tiến hành thí nghiệm theo phƣơng pháp von-ampe xung vi phân 23 2.2.2 Ghi đƣờng von-ampe 23 2.2.3 Các yếu tố đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp phân tích 23 2.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 25 2.3.1 Thiết bị dụng cụ 25 2.3.2 Hóa chất 26 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát đáp ứng điện hóa cloramphenicol HMDE 28 28 3.2 Khảo sát tính chất điện hóa cloramphenicol số 30 3.3 Khảo sát ảnh hƣởng pH nồng độ dung dịch đệm 33 3.3.1 Ảnh hƣởng pH 33 3.3.2 Ảnh hƣởng nồng độ dung dịch đệm 34 3.4 Khảo sát ảnh hƣởng tốc độ quét 35 3.5 Khảo sát ảnh hƣởng oxi 38 3.6 Khảo sát ảnh hƣởng chất hữu 40 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 3.6.1 Ảnh hƣởng axit oxalic 40 3.6.2 Ảnh hƣởng axit citric 41 2.6.3 Ảnh hƣởng glucozơ 42 3.7 Ảnh hƣởng ion vô 43 3.7.1 Ảnh hƣởng ion Na+ (K+) 43 3.7.2 Ảnh hƣởng ion Ca2+ 44 3.7.3 Ảnh hƣởng ion Fe3+ 45 3.8 Khảo sát khoảng tuyến tính xây dựng đƣờng chuẩn 45 3.9 Sai số phép đo, độ lặp lại phép đo, độ 48 3.10 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng 50 3.11 Ứng dụng xác định cloramphenicol mẫu thực tế 51 3.11.1 Kỹ thuật xử lý mẫu thực tế 51 3.11.2 Phƣơng pháp xử lý kết 51 3.11.3 Xác định cloramphenicol mẫu thực tế 51 3.11.3.1 Mẫu thuốc nhỏ mắt 51 3.11.3.2 Mẫu thuốc viên 250mg 53 3.11.3.3 Mẫu thuốc tiêm 54 2.12 So sánh kết đối chứng 55 KẾT LUẬN 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 „ Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc hóa học cloramphenicol Hình 1.2: (a) Sự biến thiên thời gian, (b) Dạng đƣờng von-ampe 14 kỹ thuật von-ampe xung vi phân Hình 1.3: (a) Sự biến thiên thời gian, (b) Dạng đƣờng von-ampe 16 kỹ thuật von-ampe sóng vng Hình 2.1: Thiết bị phân tích điện hóa 757VA Metrohm 26 Hình 3.1: Đƣờng qt von-ampe vịng cloramphenicol nồng độ 29 2,5ppm axetat 0,1M pH 5,5 Hình 3.2: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol nồng độ 2,5ppm 31 khác Hình 3.3: Đƣờng quét xung vi phân (a) đồ thị (b) biểu diễn ảnh 34 hƣởng pH đến giá trị chiều cao pic cloramphenicol đệm axetat Hình 3.4: Đƣờng quét von-ampe vòng cloramphenicol nồng độ 37 2,5ppm axetat tốc độ quét khác Hình 3.5: Đồ thị biểu diễn mối quan hệ chiều cao pic 37 cloramphenicol tốc độ quét Hình 3.6: Đƣờng quét xung vi phân (a) cloramphenicol, oxi hỗn 38 hợp chúng (b) ảnh hƣởng thời gian xục khí Hỉnh 3.7: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 40 axit oxalic tỷ lệ nồng độ khác Hình 3.8: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt axit citric tỷ lệ nồng độ khác 40 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Hình 3.9: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 42 glucozơ tỷ lệ nồng độ khác Hình 3.10: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 43 ion Na+ tỷ lệ nồng độ khác Hình 3.11: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 44 ion Ca2+ tỷ lệ nồng độ khác HÌnh 3.12: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol có mặt 45 ion Fe3+ tỷ lệ nồng độ khác Hình 3.13: Đƣờng quét xung vi phân cloramphenicol 11 mức nồng 46 độ khác Hình 3.14: Đồ thị xây dựng đƣờng chuẩn 11 mức nồng độ 47 Hình 3.15: Đƣờng quét xung vi phân đồ đƣờng thêm chuẩn mẫu 52 thuốc nhỏ mắt HÌnh 3.16: Đƣờng quét xung vi phân đồ đƣờng thêm chuẩn mẫu 53 thuốc viên nén Hình 3.17: Đƣờng quét xung vi phân đồ đƣờng thêm chuẩn mẫu thuốc tiêm 55 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Các tính chất vật lý hóa học cloramphenicol Bảng 3.1: Giá trị Ep Ip cloramphenicol 2,5ppm số 31 khác Bảng 3.2: Ảnh hƣởng pH đến chiều cao pic cloramphenicol 33 đệm axetat Bảng 3.3: Giá trị Ip cloramphenicol nồng độ đệm 35 axetat pH 5,5 khác Bảng 3.4: Giá trị Ipa Ipc thay đổi theo tốc độ quét 36 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng thời gian xục khí N2 39 Bảng 3.6: Giá trị Ip cloramphenicol có mặt axit oxalic 40 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.7 Giá trị Ip cloramphenicol có mặt axit citric 41 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.8 Giá trị Ip cloramphenicol có mặt glucozơ 42 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.9: Giá trị Ip cloramphenicol có mặt ion Na+ 43 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.10 Giá trị Ip cloramphenicol có mặt ion Ca2+ 44 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.11: Giá trị Ip cloramphenicol có mặt ion Fe3+ 45 tỷ lệ nồng độ khác Bảng 3.12: Giá trị Ip cloramphenicol 11 mức nồng độ 45 Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Bảng 3.13: Giá trị b‟ kiểm tra hệ số phƣơng trình hồi quy 47 Bảng 3.14: Các giá trị liên quan đến hệ số b‟ 47 Bảng 3.15: Các giá trị dùng để khảo sát độ hệ số a 47 Bảng 3.16: Số liệu đánh giá sai số đƣờng chuẩn 48 Bảng 3.17: Các số liệu thống kê đánh giá độ phƣơng pháp 49 Bảng 3.18: Các giá trị thống kê độ xác phƣơng pháp 50 Bảng 3.19: Giá trị Ip 10 mẫu cloramphenicol 1,5ppm 50 Bảng 3.20: Số liệu thống kê giá trị Ip 10 mẫu cloramphenicol 50 1,5ppm Bảng 3.21: Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc nhỏ mắt 52 giá trị thêm chuẩn Bảng 3.22: Giá trị hàm lƣợng cloramphenicol mẫu thuốc nhỏ mắt 52 Bảng 3.23: Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc viên nén 53 giá trị thêm chuẩn Bảng 3.24: Giá trị hàm lƣợng cloramphenicol mẫu thuốc viên nén 54 Bảng 3.25 Giá trị Ip cloramphenicol mẫu thuốc tiêm 54 giá trị thêm chuẩn Bảng 3.26: Giá trị hàm lƣợng cloramphenicol mẫu thuốc tiêm 55 Bảng 3.27: Tổng hợp so sánh kết phân tích mẫu 56 MỞ ĐẦU Ngày nay, sống đại đòi hỏi ngƣời phải lao động cƣờng độ cao Thêm vào đó, mơi trƣờng sống nhiễm nguyên nhân khiến tỉ lệ mắc bệnh nấm khuẩn ngƣời ngày tăng Việc nghiên cứu thuốc chữa trị loại bệnh đƣợc quan tâm ý Kháng sinh chất có khả ức chế tiêu diệt số loài nấm, vi khuẩn gây bệnh cho ngƣời sinh vật Vì loại thuốc kháng sinh đóng vai trò quan trọng việc bảo vệ nâng cao sức khỏe sinh vật nói chung ngƣời nói riêng Hoạt động kiểm sốt hàm lƣợng thuốc kháng sinh đƣa vào thể cho phù hợp với mức độ nhiễm khuẩn đóng vai trị định pháp đồ điều trị bệnh Do đó, việc xác định đƣợc xác hàm lƣợng thuốc điều cần thiết Hiện nay, có nhiều phƣơng pháp đƣợc dùng để xác định hàm lƣợng kháng sinh Trong số đó, phƣơng pháp cực phổ đƣợc đánh giá phƣơng pháp có nhiều thuận lợi, đặc biệt chất kháng sinh có tính điện hoạt nhƣ cloramphenicol Việc nghiên cứu xác định hàm lƣợng kháng sinh cloramphenicol đƣợc nghiên cứu nhiều giới nhƣ nƣớc Tuy nhiên phƣơng pháp chủ yếu đƣợc nghiên cứu phƣơng pháp sắc ký phƣơng pháp quang Trong luận văn này, tiến hành nghiên cứu sử dụng phƣơng pháp cực phổ với kỹ thuật đo xung vi phân để xác định hàm lƣợng kháng sinh cloramphenicol số loại dƣợc phẩm khác nhau, dạng dung dịch nhƣ dạng bột Sóng cực phổ cloramphenicol sóng cực phố anot, xuất pic nằm xung quanh vị trí 0V, bị ảnh hƣởng hóa chất khác Việc sử dụng phƣơng pháp cực phổ lần khẳng định tính ƣu việt phƣơng pháp phân tích điện hóa, cho phép xác định nhanh hàm lƣợng chất, việc xử lý mẫu trƣớc tiến hành đo đơn giản tránh làm chất q trình phân tích Luận văn Cao học – Nguyễn Phƣơng Hà K20 Fbảng(0,95;10;9) = 3,1373 → Ftính