(Luận án tiến sĩ) nghiên cứu biến đổi của một số gen ty thể ở bệnh ung thư đại trực tràng

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN T ị NG N Ứ Ở N NĐ Ủ T G NT T NG T Ư ĐẠ TRỰ TR NG LUẬN ÁN TI N Ĩ SINH HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN T ị NG N Ứ Ở N NĐ Ủ T G NT T NG T Ư ĐẠ TRỰ TR NG Chuyên ngành: Sinh Mã số: 62420104 ọ ộ ậ LUẬN ÁN TI N Ĩ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Trịnh Hồng Thái TS Tô Thanh Thúy Hà Nội - 2018 Ờ T i xin m o n yl Đ N ng tr nh nghi n ứu t i thực hướng dẫn PGS.TS.Trịnh Hồng Thái v TS.T Th nh Thúy ũng hỗ trợ, giúp ỡ củ phần k t ồng nghiệp số liệu k t ủ lu n án l trung thự ược công bố tạp chí khoa học Việc sử dụng liệu lu n án củ t i ược chấp thu n văn củ ồng tác giả Lu n án hư ược tác giả khác công bố Nghiên cứu sinh Ph m Thị Bích N LỜ Lời ầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng bi t ơn s u sắ Hồng Thái TS.Tô Thanh Thúy người thầy/ hướng dẫn ộng viên khích lệ n PGS.TS.Trịnh lu n t n tình dìu dắt, ịnh hướng bảo cho kinh nghiệm quý báu trình thực lu n án T i xin h n th nh ám ơn bá sĩ y tá Kho Giải phẫu bệnh – T bào, Bệnh viện K Hà Nội, Bệnh viện Quân Y 103, bá sĩ y tá Kho S ng lọ máu Viện Huy t họ v Truy n máu Trung ương ứu ũng thông tin v nhiệt t nh giúp ỡ, cung cấp mẫu nghi n i m bệnh họ ủ bệnh nhân UTĐTT húng t i thự nghi n ứu n y Tôi xin chân thành cảm ơn to n th Quý Thầy, Cô Bộ môn Sinh lý học Sinh họ người, Khoa Sinh họ Trường Đại học Khoa học Tự nhi n truy n ạt cho ki n thức quý báu suốt thời gian học t p nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn n Ban giám hiệu Phòng S u ại họ Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên - Đại học Quốc Gia Hà Nội Kho Sinh họ tạo i u kiện cho tơi hồn thành thủ tục bảo vệ T i ũng xin h n th nh ảm ơn ồng nghiệp bạn sinh viên Phòng Proteomics Sinh học cấu trúc thuộc Phịng thí nghiệm Trọng i m Cơng nghệ Enzyme v Protein Trường Đại học Khoa học Tự Nhi n lu n hỗ trợ giúp ỡ q trình tơi làm thực nghiệm sử lý số liệu k t Lu n án ược thực với hỗ trợ kinh phí củ QGTĐ.13.06 QG.15.05 v tr ng th t bị tài KC.04.10/11-15, sở v t chất phòng Proteomics Sinh học cấu trúc thuộc Phòng thí nghiệm Trọng i m Cơng nghệ Enzyme Protein, Phịng thí nghiệm Sinh họ người thuộc Bộ mơn Sinh lý học Sinh họ người, Khoa Sinh họ Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Cuối cùng, xin bày tỏ lòng bi t ơn tới gi kiện tốt nh v người th n lu n tạo i u tơi hồn thành lu n án NCS Phạm Thị Bích MỤC LỤC Ờ Đ N i N ii LỜ MỤC LỤC N Ụ Ữ VI T TẮT N Ụ NG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU Ư NG T NG QUAN TÀI LI U 10 1.1 NG T Ư ĐẠI TRỰC TRÀNG 10 1.1.1 Thực trạng mắ ung thư ại trực tràng 10 1.1.2 Các y u tố nguy g y ung thư ại trự tr ng 11 1.1.3 Một số i m bệnh học phản ánh ti n tri n củ ung thư ại trực tràng 11 1.1.4 Các thị sinh học củ ung thư ại trực tràng 15 1.2 H GEN TY TH VÀ HI N TƯỢNG DỊ T BÀO CHẤT 16 1.2.1 Hệ gen ty th 16 1.2.2 Hiện tượng dị t bào chất v ngưỡng bi u củ ột bi n ADN ty th 17 1.3 Đ T BI N ADN TY TH VÀ B N NG T Ư 18 1.3.1 Bi n ổi số gen ty th mã hóa cho protein 19 1.3.1.1 Biến đổi gen ND1 19 1.3.1.2 Biến đổi gen ND3 20 1.3.1.3 Một số biến đổi gen COX-1 COX-2 21 1.3.2.Mất oạn lớn ADN ty th 23 1.3.3 Sự th y ổi số ADN ty th bệnh ung thư 25 1.4 NG N Ứ NĐ Ủ ADN T T Ở TN 26 1.5 Ư NG T N BI N Đ I GEN TY TH 27 1.5.1 Kỹ thu t PCR k t hợp với RFLP 27 1.5.2 Xá ịnh trình tự gen 28 1.5.3 phương pháp ịnh lượng mứ ộ bi n ổi ADN ty th 29 Ư NG NG N Ư NG NG IÊN CỨU 30 2.1 NGUYÊN LI U 30 2.1.1 Mẫu nghiên cứu 30 2.1.2 Các hóa chất 33 2.2 MÁY VÀ TRANG THI T BỊ 33 2.3 Ư NG NG N ỨU 34 2.3.1 Tá h hi t ADN tổng số từ mẫu m ung thư ại trực tràng 34 2.3.2 Tách chi t ADN tổng số từ mẫu máu 35 2.3.3 Điện di gel agarose gel polyacrylamide 35 2.3.4 Nhân oạn gen ty th 2.3.5 Kỹ thu t P R v ột bi n quan tâm kỹ thu t PCR 35 h nh hi u d i 2.3.6 Nhân dòng trực ti p oạn gen 2.3.7 Giải tr nh tự oạn gen oạn cắt giới hạn (PCR-RFLP) 39 ột bi n vào vector pJET1.2 40 ột bi n 42 2.3.8 Tinh sản phẩm PCR 42 2.3.9 Định lượng mứ ộ oạn số s o ADN ty th 42 2.4 ẦN TN N Ọ Ư NG T NG ĐƯỢ Ử DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU 46 Ư NG T QU VÀ TH O LUẬN 48 3.1 BI N Đ I CỦA CÁC GEN ND1, ND3, COX-1 VÀ COX-2 TY TH 48 3.1.1 Bi n ổi T4216 v 4164G ủ gen ND1 ty thể 48 3.1.1.1 Biến đổi A4164G số biến đổi khác 48 3.1.1.2 Tần suất biến đổ 64 v ố n qu n v đặ đ ể n 51 3.1.2 Bi n ổi A10398G thuộc gen ND3 ty thể 53 3.1.3 Một số vị tr bi n ổi ủ gen COX-1 COX-2 ty th 57 3.2 MẤT Đ ẠN LỚN CỦA ADN TY TH Ở B N N ÂN NG T Ư ĐẠI TRỰC TRÀNG 65 3.2.1 Xá ịnh oạn 4977 bp số oạn lớn khác 65 3.2 X 3.2 .2 X định đoạn 4977 bp 65 định đoạn l n khác 4977 bp 68 3.2.2 Mối liên quan giữ t lệ oạn 4977 bp với 3.2.3 Xá ịnh mứ i m bệnh học 69 ộ oạn lớn ADN ty th bệnh nh n ung thư ại trực tràng phương pháp re l-time PCR 71 3.2.3 X n đ n u n o kỹ thuật r -t P R địn độ ất đoạn n ADN ty thể 72 3.2.3.2 X định m độ đoạn mẫu nghiên c u 73 3.2.4 Mối liên quan mứ ộ oạn lớn với i m bệnh học 74 3.3 SỰ T Đ I S B N SAO ADN TY TH Ở CÁC B NH NHÂN NG T Ư ĐẠI TRỰC TRÀNG 76 3.3.1 Số ADN ty th mẫu nghiên cứu 76 3.3.2 Mối liên quan số ADN ty th với i m bệnh họ 77 3.4 T Đ NG T NG HỢP CỦA M T S BI N Đ I, MỨ Đ MẤT Đ ẠN, S B N SAO CỦA ADN TY TH VỚI TI N TRI N TĐTT 80 3.4.1 Đối với di ăn hạch 80 3.4.2 Đối với ti n tri n gi i oạn ung thư 81 3.5 VAI TRÒ CỦA MẤT Đ ẠN, S B N SAO VỚ NG MẮ NG T Ư ĐẠI TRỰC TRÀNG 83 3.5.1 Mối tương qu n v mứ ộ oạn, số ADN ty th mẫu mô mẫu máu, mứ 3.5.2 Mứ ộ oạn số ADN ty th 84 ộ oạn tăng l m tăng nguy mắ ung thư ại trực tràng 88 BÀN LUẬN CHUNG 92 T ẬN 99 N NG Ị 100 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GI LIÊN QUAN Đ N LUẬN ÁN 101 T T O 102 PHỤ LỤC Hệ thống ph n loại TNM ối với ung thư ại trự tr ng - PHỤ LỤC Vị trí gen ty th - PHỤ LỤC nh sá h i m bệnh họ v nồng ộ ADN tổng số từ mẫu bệnh nh n ung thư ại trự tr ng - PHỤ LỤC Ảnh iện di ADN tổng số từ số mẫu nghiên cứu - PHỤ LỤC Bản cam k t cho mẫu bệnh nhân - 10 PHỤ LỤC Phi u lấy mẫu ung thư - 11 PHỤ LỤC So sánh trình tự oạn ADN gen ND1, ND4, HBB với trình tự ADN ty th chuẩn, gen HBB hương tr nh BL ST - 12 PHỤ LỤC Một số bi n ổi, oạn 4977 bp, mứ ộ oạn, số ADN ty th củ m ung thư ại trự tr ng - 13 PHỤ LỤC K t real-time P R thị củ h i ường chuẩn ND1 ND4 - 18 PHỤ LỤC 10 Mứ ộ oạn số s o ADN ty th củ 40 bệnh nh n UTĐTT từ Bệnh viện Qu n Y 103 - 20 PHỤ LỤC 11 Dự oán khả mắ UTĐTT dựa vào mứ ộ oạn từ phân tích hồi quy ơn bi n - 24 PHỤ LỤC 12 Dự oán khả mắ UTĐTT dựa vào số ADN ty th oạn từ phân tích hồi quy ơn bi n - 26 PHỤ LỤC 13 Mối liên quan mứ ộ oạn, số ADN ty th với i m bệnh họ ủ bệnh UTĐTT - 30 N Ụ Ữ VI T TẮT AJCC American Joint Committee on Cancer (hiệp hội ung thư Ho Kỳ) ATP Adenosine triphosphate bp Base pair (c p b zơ) COX-1 Cytochrome c oxidase I COX-2 Cytochrome c oxidase II Cyt c Cytochrome c D-loop Displacement loop EtBr Ethidium bromide GĐ Gi i oạn HPLC High-performance liquid chromatography (sắc ký lỏng hiệu o) KSS Kearns-Sayre syndrome (hội chứng KSS) LHON Leber’s heredit ry opti neurop thy (hội chứng liệt thần kinh thị giác di truy n theo Leber) LCU MELAS Lân c n u Mitochondrial encephalopathy, lactic acidosis, stroke-like episodes (hội chứng não gi t tăng id l ti máu v giả tai bi n mạch) mtADN Mitochondrial ADN (ADN ty th ) NADH Nicotinamide adenine dinucleotide (dạng khử) ND1 NADH dehydrogenase ND3 OXPHOS NADH dehydrogenase Oxidative phosphorylation (phosphoryl hóa oxy hóa) PCR Polymerase chain reaction (phản ứng chuỗi polymerase) RFLP Restri tion fr gment length polymorphism ( oạn cắt giới hạn) ROS Reactive oxygen species (dạng oxy hoạt ộng) TNM Tumor- lymph Node- Metastases UTĐTT Ung thư ại trự tr ng Tm Melting temperature (nhiệt ộ nóng chảy) h nh hi u dài N Ụ NG Bảng 1.1 Ph n hi gi i oạn UTĐTT AJCC -2002 14 Bảng 2.1 Số lượng bệnh nh n UTĐTT theo i m bệnh học 31 Bảng 2.2 h hất h nh ượ sử dụng nghi n ứu 33 Bảng 2.3 Tr nh tự p mồi d ng nghi n ứu 36 Bảng 2.4 Đi u kiện phản ứng P R ối với p mồi 38 Bảng 2.5 enzyme giới hạn d ng nghi n ứu 39 Bảng 2.6 ve tor m ng oạn h n 40 Bảng 2.7 Tr nh tự p mồi sử dụng phản ứng P R nh n oạn ADN nh n dòng ho dựng ường huẩn v Re l-time PCR 43 Bảng 3.1 Tần suất bi n ổi 4164G v mối li n qu n với i m bệnh họ ủ bệnh UTĐTT 52 Bảng 3.2 Tần suất bi n ổi 10398G v mối li n qu n với i m bệnh họ ủ bệnh UTĐTT 55 Bảng 3.3 vị tr bi n ổi tr n gen COX-2 ty th 31 mẫu m UTĐTT 58 Bảng 3.4 Tần suất bi n ổi G7853 v mối li n qu n với i m bệnh họ ủ bệnh UTĐTT 60 Bảng 3.5 vị tr bi n ổi tr n gen COX-1 ty th 25 mẫu UTĐTT 62 Bảng 3.6 Mất oạn 4977 bp v số oạn lớn 68 Bảng 3.7 T lệ oạn 4977 bp v mối liên quan với số i m bệnh họ ủ bệnh UTĐTT 70 Bảng 3.8 Phương tr nh v th ng số củ h i ường chuẩn d ng ho ịnh lượng mứ ộ oạn lớn ADN ty th 73 Bảng 3.9 Mứ ộ oạn theo i m bệnh họ ủ bệnh nh n UTĐTT 75 Bảng 3.10 Số s o ADN ty th tương ối theo i m bệnh họ bệnh nh n UTĐTT 78 Bảng 3.11 Tá ộng tổng hợp bi n ổi n di ăn hạch củ UTĐTT 81 Bảng 3.12 Tác ộng tổng hợp y u tố n gi i oạn củ UTĐTT 82 Bảng 3.13 Mứ ộ oạn, số ADN ty th vị trí mẫu khác 40 bệnh nh n UTĐTT v máu ối chứng 84 Bảng 3.14 K t phân tích mối tương qu n 85 ộ oạn, số ADN ty th v nguy mắ UTĐTT phân tích hồi quy ơn bi n v bi n 90 Bảng 3.15 Mứ DANH MỤC HÌNH H nh 1.1 gi i oạn phát tri n ủ UTĐTT 14 Hình 1.2 Bản hệ gen ty th người 16 H nh 1.3 Hiện tượng dị t b o hất ủ ADN ty th v ngưỡng ảnh hưởng n chức huỗi hô hấp 17 Hình 1.4 Hệ gen ty th oạn 4977 bp 23 H nh 2.1 Sơ bước nghiên cứu 34 Hình 3.1 Ảnh iện di sản phẩm PCR sản phẩm cắt enzyme NlaIII 49 Hình 3.2 Trình tự oạn ADN thuộ gen ND1 vị tr 4216 v 4164 50 Hình 3.3 Trình tự oạn gen ND1 có chứa bi n ổi 51 Hình 3.4 Ảnh iện di sản phẩm PCR-RFLP trình tự oạn gen ND3 54 H nh 3.5 Một số vị tr bi n ổi gen COX-2 ty th 58 H nh 3.6 Ảnh iện di sản phẩm P R-RFLP oạn ADN ủ gen COX-2 59 Hình 3.7 Một số vị trí bi n ổi gen COX-1 ty th 62 H nh 3.8 Ảnh iện di sản phẩm P R-R LP oạn ADN ủ gen COX-1 63 H nh 3.9 Minh họ vị tr bắt p ủ p mồi Hình 3.10 Ảnh iện di sản phẩm P R từ phát oạn 4977 bp 66 p mồi Mt, 4977-2, 10398 67 Hình 3.11 Trình tự ADN ty th ượ nối lại sau xuất oạn lớn 69 Hình 3.12 Bi u so sánh mứ ộ oạn ADN ty th giữ m u v m l n Hình 3.13 Bi u so sánh số ADN ty th giữ m u v l n Hình 3.14 Mối tương qu n giữ mứ n u 74 n u 77 ộ oạn v số s o ADN ty th 87 Hình 3.15 Ðồ thị th mối tương qu n giữ mứ ộ oạn số s o ADN ty th với nguy mắ UTÐTT 89 H nh 3.16 M h nh giải th h mở rộng ủ trạng thái ồng t b o hất ủ ột bi n ADN ty th khối u 93 Hình 3.17 Quá trình hình thành oạn ADN ty th ứt gãy sợi i 95 PHỤ LỤC Kết real- R thị ờng chuẩn ND1, ND4 HBB A,B: gen ND1, C, D: gen ND4 - 18 - ờng chuẩ N N - 19 - ứng PHỤ LỤC 10 Danh sách bệnh nhân kết ị 40 ệ STT ố â ệ Tuổ â Gớ ợng mứ TĐTT ị u ộ mấ n số ADN ty thể mô máu ợc cung cấp từ Bệnh viện Quân Y 103 Kích ớc u (cm) TNM 27 64 Nam ại tràng T4N2M0 28 51 Nam ại tràng 29 63 Nữ ại tràng 30 43 Nam 31 61 35 Độ biệt hóa Mứ ộ n máu (%) ố ả a ADN y ể máu 54,91 566,96 T4N0M0 Rõ Rõ 58,89 698,76 T4N0M0 Rõ 61,29 878,05 ại tràng T4N0M0 Vừ 66,13 816,63 Nam ại tràng 6,5 T4N0M0 Rõ 59,62 588,36 54 Nữ ại tràng T3N1M0 58,41 859,75 37 54 Nữ ại tràng T4N0M0 Rõ 59,82 468,95 38 79 Nam ại tràng T4N0M0 Rõ 55,77 496,03 40 37 Nam ại tràng T4N0M0 53,43 862,78 10 42 67 Nữ ại tràng 3,5 T3N0M0 Rõ 57,28 559,44 11 43 58 Nữ ại tràng T2N2M1 65,31 110,6 12 44 57 Nữ ại tràng T2N2M0 Vừ Rõ 62,05 335,74 61,51 404,74 13 46 67 Nam ại tràng 5,5 T3N0M0 Rõ 14 47 66 Nữ ại tràng T4N1M0 Rõ 54,95 589,64 15 48 70 Nam ại tràng 3,5 T3N1M0 Rõ 61,98 1372,19 16 49 54 Nam ại tràng 6,5 T3N0M0 36,35 738,27 17 50 64 Nam ại tràng 6,5 T3N2M0 Vừ Rõ 63,52 2948,78 - 20 - 18 51 59 Nam ại tràng T4N1M0 Rõ 58,29 1241,85 19 52 54 Nam ại tràng T3N1M0 Rõ 64,16 163,65 20 54 73 Nam ại tràng T3N0M0 Rõ 56,13 1226,04 21 55 50 Nam ại tràng T2N0M0 Rõ 57,76 592,49 22 56 60 Nam ại tràng T4N1M0 Rõ 64,67 845,82 23 57 83 Nữ ại tràng 2,5 T4N0M0 Rõ 62,51 927,25 24 58 63 Nam ại tràng T2N0M0 Rõ 68,29 155,94 25 60 54 Nam ại tràng 4,5 T3N0M0 Rõ 60,37 318,44 26 61 69 Nam ại tràng T4N2M0 Rõ 61,44 423,79 27 62 52 Nam ại tràng 4,5 T4N2M0 62,41 277,83 28 63 54 Nam ại tràng T4N0M0 Rõ 63,88 213,36 29 65 71 Nữ ại tràng T4N0M0 Rõ 58,9 527,39 30 66 65 Nam ại tràng 2,5 T4N0M1 Vừ 65,04 334,4 31 68 52 Nữ ại tràng 3,5 T4N1M0 Kém 64,46 457,72 32 69 72 Nữ ại tràng T2N0M0 Vừ 64,62 921,88 33 71 59 Nam ại tràng T4N0M0 Vừ 58,6 289,87 34 72 56 Nữ ại tràng T4N2M0 55,34 427,51 35 7Z 48 Nữ ại tràng T3N0M0 Vừ Rõ 55,67 506,73 36 80 63 Nam ại tràng T3N1M0 Rõ 58,79 221,42 37 81 44 Nữ ại tràng T2N0M0 Rõ 57,95 278,76 38 83 52 Nữ ại tràng T2N0M0 56,92 355,15 39 84 49 Nữ ại tràng 3,5 T4N1M0 Vừ Rõ 59,12 510,69 40 85 76 Nữ ại tràng T4N0M0 Rõ 52,55 974,23 - 21 - ố STT ệ nhân Tuổ Gớ tính 27 64 Nam ại tràng 28 51 Nam 29 63 30 Kích ớc u (cm) TNM Độ biệt hóa T4N2M0 ại tràng Nữ ại tràng 43 Nam 31 61 35 ị u Mứ ộ mấ n (%) ố ả a ADN y Mô LCU Mô u Mô LCU Mô u Rõ 65,22 58,25 1010,77 2976,58 T4N0M0 Rõ 66,97 65,15 1256,61 962,11 T4N0M0 Rõ 62,09 62,95 2064,38 1334,07 ại tràng T4N0M0 Vừa 62,95 61,12 1856,51 1736,27 Nam ại tràng 6,5 T4N0M0 Rõ 61,02 56,69 1244,42 1979,46 54 Nữ ại tràng T3N1M0 59,58 62,73 1276,92 1427,25 37 54 Nữ ại tràng T4N0M0 Rõ 65,15 63,77 2108,98 5053,56 38 79 Nam ại tràng T4N0M0 Rõ 64,66 66,36 1165,96 1735,23 40 37 Nam ại tràng T4N0M0 62,13 56,77 1615,96 2100,04 10 42 67 Nữ ại tràng 3,5 T3N0M0 Rõ 60,72 60,81 1597,38 1348,36 11 43 58 Nữ ại tràng T2N2M1 Vừa 59,66 62,83 1670,25 1848,53 12 44 57 Nữ ại tràng T2N2M0 Rõ 61,85 58,38 1046,33 7770,11 13 46 67 Nam ại tràng 5,5 T3N0M0 Rõ 61,01 62,17 2003,77 832,95 14 47 66 Nữ ại tràng T4N1M0 Rõ 60,13 65,83 1866,52 2495,15 15 48 70 Nam ại tràng 3,5 T3N1M0 Rõ 64,50 64,24 1558,88 1433,53 16 49 54 Nam ại tràng 6,5 T3N0M0 Vừa 33,66 33,19 2159,75 2128,73 17 50 64 Nam ại tràng 6,5 T3N2M0 Rõ 59,35 64,03 3683,06 2868,72 18 51 59 Nam ại tràng T4N1M0 Rõ 61,80 62,73 4576,67 2284,29 19 52 54 Nam ại tràng T3N1M0 Rõ 61,95 62,79 2470,08 2535,51 20 54 73 Nam ại tràng T3N0M0 Rõ 62,39 61,24 2517,98 3277,53 - 22 - ể 21 55 50 Nam ại tràng T2N0M0 Rõ 60,19 57,93 3718,62 14134,62 22 56 60 Nam ại tràng T4N1M0 Rõ 56,23 58,96 2379,86 1487,90 23 57 83 Nữ ại tràng 2,5 T4N0M0 Rõ 57,30 58,96 2379,86 1487,90 24 58 63 Nam ại tràng T2N0M0 Rõ 61,84 61,09 1258,46 1601,69 25 60 54 Nam ại tràng 4,5 T3N0M0 Rõ 59,97 60,20 1519,62 3128,89 26 61 69 Nam ại tràng T4N2M0 Rõ 58,70 57,95 1606,17 3438,48 27 62 52 Nam ại tràng 4,5 T4N2M0 61,20 63,36 1256,20 666,66 28 63 54 Nam ại tràng T4N0M0 Rõ 62,38 51,61 1742,18 759,04 29 65 71 Nữ ại tràng T4N0M0 Rõ 55,99 64,29 5175,67 1046,78 30 66 65 Nam ại tràng 2,5 T4N0M1 Vừa 61,83 58,17 1527,76 1102,45 31 68 52 Nữ ại tràng 3,5 T4N1M0 Kém 62,54 60,05 1563,75 4520,60 32 69 72 Nữ ại tràng T2N0M0 Vừa 57,63 54,83 3026,49 1527,14 33 71 59 Nam ại tràng T4N0M0 Vừa 58,36 54,89 2214,04 3299,32 34 72 56 Nữ ại tràng T4N2M0 Vừa 59,56 63,57 1334,89 4537,10 35 7Z 48 Nữ ại tràng T3N0M0 Rõ 59,14 57,13 3080,48 2842,63 36 80 63 Nam T3N1M0 Rõ 61,31 55,54 2430,70 4211,83 37 81 44 Nữ ại tràng ại tràng T2N0M0 Rõ 58,85 56,36 2014,37 2080,91 38 83 52 Nữ ại tràng T2N0M0 Vừa 57,18 57,00 3664,29 5157,43 39 84 49 Nữ ại tràng 3,5 T4N1M0 Rõ 55,86 45,62 3897,70 6679,38 40 85 76 Nữ ại tràng T4N0M0 Rõ 51,14 54,07 7063,10 3811,97 - 23 - PHỤ LỤC 11 ả ă Kết dự ắ TĐTT ựa vào mứ uy ADN ty thể phân tích hồ STT Mã số bệnh nhân ối chứng Mã hóa liệu ộ Mứ mấ n (%) ộ mấ n lớn ến Khả ă ắc bệnh (%) 29111 39,29 13,10 28992 45,71 28,95 28968 46,13 30,30 28971 47,09 33,53 28948 50,64 46,64 29203 50,69 46,83 29106 51,03 48,15 28949 51,98 51,82 28976 53,61 58,06 10 28999 54,15 60,08 11 29250 55,25 64,09 12 29245 57,52 71,72 13 29026 58,90 75,85 14 29246 61,04 81,39 15 29117 61,84 83,20 16 29055 63,94 87,27 17 29215 65,13 89,18 18 49 36,35 8,73 19 85 52,55 54,02 20 40 53,43 57,38 21 27 54,91 62,87 22 47 54,95 63,01 23 72 55,34 64,41 24 73 55,67 65,57 25 38 55,77 65,92 26 54 56,13 67,16 27 83 56,92 69,80 - 24 - 28 42 57,28 70,96 29 55 57,76 72,47 30 81 57,95 73,05 31 51 58,29 74,08 32 35 58,41 74,43 33 71 58,6 74,99 34 80 58,79 75,54 35 28 58,89 75,82 36 65 58,90 75,85 37 84 59,12 76,47 38 31 59,62 77,83 39 37 59,82 78,36 40 60 60,37 79,77 41 29 61,29 81,97 42 61 61,44 82,31 43 46 61,51 82,47 44 48 61,98 83,50 45 44 62,05 83,65 46 62 62,41 84,39 47 57 62,51 84,60 48 50 63,52 86,53 49 63 63,88 87,16 50 52 64,16 87,64 51 68 64,46 88,14 52 69 64,62 88,39 53 56 64,67 88,47 54 66 65,04 89,04 55 43 65,31 89,44 56 30 66,13 90,58 57 58 68,29 93,08 - 25 - PHỤ LỤC 12 ả ă Kết dự ắ TĐTT ựa vào số ADN ty thể phân tích hồ STT Mã số bệnh nhân ối chứng Mã hóa liệu uy ến Số Khả ă ắc bệnh ADN ty thể (%) 28989 50,74 3,41 29250 53,45 3,51 29245 58,49 3,69 28979 71,98 4,23 28984 72,24 4,24 28960 73,44 4,29 28971 80,94 4,63 28974 85,84 4,86 28968 92,67 5,21 10 28970 93,26 5,24 11 28973 95,9 5,38 12 28988 99,35 5,57 13 28977 102,4 5,74 14 29246 102,89 5,77 15 28959 104,4 5,86 16 28986 107,53 6,04 17 29111 112,6 6,35 18 28975 118,37 6,73 19 29207 119,43 6,79 20 29215 120,26 6,85 21 29242 120,26 6,85 22 28943 124,44 7,14 23 28978 124,5 7,14 - 26 - 24 28950 125,06 7,18 25 28963 127,94 7,39 26 28964 128,15 7,40 27 28985 129,93 7,53 28 29106 131,14 7,62 29 28990 133,18 7,77 30 89267 148,04 8,98 31 28999 148,06 8,98 32 29117 148,57 9,02 33 28962 148,64 9,03 34 29212 152,22 9,34 35 28952 152,95 9,41 36 28972 159,24 9,9 37 28976 159,95 10,06 38 28944 164,14 10,47 39 28949 169,39 10,99 40 28948 176,25 11,72 41 28992 176,97 11,80 42 28981 184,18 12,62 43 29203 190,68 13,39 44 28954 202,73 14,94 45 28995 205,05 15,25 46 28942 217,86 17,08 47 28956 221,26 17,59 48 29055 223,77 17,98 49 29085 233,11 19,48 50 28941 240,65 20,76 51 28939 246,42 21,78 52 29041 254,9 23,35 - 27 - 53 29013 268,66 26,04 54 29026 272,95 26,92 55 28951 282,46 28,94 56 29000 291,2 30,88 57 28991 299,91 32,87 58 29058 311,71 35,68 59 28982 326,15 39,24 60 29093 341,77 43,23 61 28993 343,74 43,74 62 29049 373,87 51,66 63 29079 377,83 52,70 64 29105 392,31 56,49 65 29107 419,7 63,41 66 29102 442,24 68,74 67 28996 650,88 95,21 68 43 110,60 6,23 69 58 155,94 9,68 70 52 163,65 10,42 71 63 213,36 16,42 72 80 221,42 17,62 73 62 277,83 27,95 74 81 278,76 28,15 75 71 289,87 30,58 76 60 318,44 37,32 77 66 334,40 41,34 78 44 335,74 41,68 79 83 355,15 46,73 80 46 404,74 59,68 81 61 423,79 64,41 - 28 - 82 72 427,51 65,30 83 68 457,72 72,13 84 37 468,95 74,45 85 38 496,03 79,50 86 73 506,73 81,28 87 84 510,69 81,91 88 65 527,39 84,37 89 42 559,44 88,33 90 27 566,96 89,13 91 31 588,36 91,13 92 47 589,64 91,24 93 55 592,49 91,48 94 28 698,76 97,05 95 49 738,27 98,04 96 30 816,63 99,13 97 56 845,82 99,36 98 35 859,75 99,45 99 40 862,78 99,47 100 29 878,05 99,54 101 69 921,88 99,71 102 57 927,25 99,73 103 85 974,23 99,83 104 54 1226,04 99,99 105 51 1241,85 99,99 106 48 1372,19 99,99 107 50 2948,78 100,00 Ghi chú: 0: Mã o u đối ch ng, 1: mã hóa cho máu b n n - 29 - n UTĐTT PHỤ LỤC 13 ứ ộ ấ ôu ặ ể ệ ọ ệ TĐTT ợc lấy t i Bệnh viện K 103 Đặ Tuổi Giới tính ớc u (cm) Vị trí khối u Mứ ộ biệt hóa Mứ ộ xâm lấn khối u (T) ă H (N) Ga n bệnh P Số bệnh nhân Trung vị (25th-75th) < 50 >= 50 20 79 55,26 (52,93-57,2) 57,04 (54,39-61,18) 0,58* Nam Nữ 52 48 57,94 (54,61-61,15) 56,17 (53,02-60,12) 0,39* =3, 3,5 53 56,95 (54,09-61,24) Đại tràng 72 58,06 (54,82-62,44) Trực tràng 28 55,26 (51,59-57,07) Rõ 36 58,96 (56,30-62,74) Vừa 33 56,14 (53,06-59,42) Kém 54,34 (49,58-58,96) T1 57,87 (54 -60,36) T2 30 56,08 (54,15 -57,8) T3 62 58,06 (54,14 -61,94) N0 61 56,20 (53,54 – 60,20) N1 37 58,25 (55,54-62,73) I 25 55,62 (53,54 -57,93) II 35 56,77 (55,50 -60,97) ểm 0,18* 0,05* 0,026*** 0,26*** 0,12* 0,17*** III+IV 38 58,21 (55,69-62,73) Ghi chú*: Giá trị p nhận đ ợc từ kiể định Man-Whitney U test, ***: Kruskal-Wallis - 30 - ố ả Đặ a ADN y ểm Số Tuổi ểở ợng ôu T u ặ ị (25th-75th) < 50 23 836,95 (621,34-1570,29) >= 50 101 1276,52 (685,02-1979,46) Nam 64 1106,09 (632,77-1992,72) Nữ 62 1102,43 (692,07-1824,76) =3, 3,5 68 1311,97 (632,77-2085,69) Đ i tràng 85 1427,25 (898,27-2132,01) Trực tràng 41 689,31 (504,25-1113,59) Rõ 38 1668,46 (977,05-2949,62) Vừa 47 789,06 (486,69-1247,98) Kém 732,66 (503,33-1122,85) T1 1270,34 (719,57-1806,52) T2 41 972,80 (622,96-1600,16) T3 46 962,82 (559,11-1836,95) T4 27 1735,23 (1088,31-3137,95) N0 75 1113,59 (709,98-1951,74) N1 37 950,14 (626,89 -1753,4) N2 11 1848,53 (971,59 -3207,53) I 35 1219,44 (661,67-1728,21) II 39 1092,94 (734,95-2039,75) III+IV 49 1045,52 (637,38-2011,42) Giới tính ớc u (cm) Vị trí khối u Mứ ộ biệt hóa Mứ ộ xâm lấn khối u (T) ă H (N) Ga n bệnh ể ệ ọ P 0,16* 0,94* 0,47***