Nghiên cứu biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp glycoprotein (GP5) của vius gây hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (PRRSV)​

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN VÀ TINH SẠCH PROTEIN TÁI TỔ HỢP GLYCOPROTEIN (GP5) CỦA VIRUS GÂY HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN Ở LỢN (PRRSV) Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái Nguyên, 2015 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu tơi dƣới hƣớng dẫn PGS.TS Lê Văn Sơn số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Hà Đăng Chiến Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Lê Văn Sơn tận tình bảo hƣớng dẫn tơi suốt q trình triển khai, nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Thầy, Cô giáo – Các nhà khoa học trực tiếp giảng dạy truyền đạt kinh nghiệm, kiến thức khoa học quý báu Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy cơ, đồng nghiệp bạn bè tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận văn Tôi trân trọng biết ơn giúp đỡ Tơi xin chân thành cảm ơn cán nghiên cứu thuộc Phòng Công nghệ DNA ứng dụng - Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ trình thực luận văn Tơi xin cám ơn Phịng thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ gen cung cấp kinh phí, thiết bị nhƣ cho phép sử dụng kết nghiên cứu thuộc đề tài NV07-PTNTDD2015 Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô cán sở đào tạo thuộc Trƣờng Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nhƣ trình thực đề tài Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ suốt trình học tập nghiên cứu Tác giả luận văn Hà Đăng Chiến Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu bp Base P CS DNA Deoxyr dNTP Deoxyn E.coli Escher EtBr Ethidiu EDTA Ethylen GP5 Glycop IPTG Isoprop kb Kilobas kDa Kiloda LB Luria B MES 2-(N-m OD Optical PCR Polyme PRRS PRRSV Porcine Respira Porcine Respira RNA Ribonu RNase Ribonu SDS Sodium TAE Tris-Ac TBS Tris-Bu TTBS Tween v/p X-gal Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN 5-Brom D-Gala iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iii MỤC LỤC iv DANH MỤC HÌNH .vi MỞ ĐẦU .1 Lý chọn đề tài .1 Mục tiêu nghiên cứu: Nội dung nghiên cứu: Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan PRRS .3 1.1.1 Khái niệm PRRS 1.1.2 Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn 1.1.3 Virus gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRSV) 1.2 Protein tái tổ hợp 11 1.2.1 Giới thiệu 11 1.2.2 Glycoprotein (GP5) .12 1.2.3 Sản xuất protein tái tổ hợp dựa ORF5 13 1.2.4 Vector biểu pET 32a(+) chủng biểu BL21 14 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn v 2.1 Vật liệu 16 2.1.1 Nguyên liệu 16 2.1.2 Hóa chất môi trƣờng 18 2.1.3 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 19 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu .19 2.2.1 Tạo dòng gen gp5 19 2.2.2 Tạo vector tái tổ hợp mang gen gp5 21 2.2.3 Phƣơng pháp biểu tinh protein GP5 25 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Tạo dịng vector mang gen mã hóa protein GP5 29 3.2 Thiết kế vector tái tổ hợp mang gen mã hóa protein GP5 32 3.3 Biểu tinh protein GP5 E.coli 34 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41 Kết luận 41 Đề nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc hệ gen virus PRRS 10 Hình 2.1 Sơ đồ vector tách dòng pBT 16 Hình 2.2 Cấu trúc vector biểu pET 32a(+) 17 Hình 3.1 Kết qủa điện di sản phẩm colony - PCR khuẩn lạc mang gen GP5 .30 Hình 3.2 Kết cắt kiểm tra tinh pBT-GP5 31 Hình 3.3 Kết cắt kiểm tra plasmid pET 32a(+) enzyme cắt giới hạn SacI HindIII 32 Hình 3.4 Kết cắt kiểm tra plasmid tái tổ hợp enzyme cắt giới hạn SacI HindIII 34 Hình 3.5 Kết điện di SDS-PAGE dịch nuôi vi khuẩn mang vector tái tổ hợp ……… 35 Hình 3.6 Kết phân tích Western blot với kháng thể anti-His-tag (pha lỗng 1:1000 lần) 36 Hình 3.7 Khảo sát nồng độ Imidazol để tinh sản phẩm .38 Hình 3.8 Kết điện di kiểm tra GP5 tinh sắc ký lực Ni-NTA .39 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Tên thiết bị thí nghiệm 19 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 20 Bảng 2.3 Chu trình nhiệt phản ứng PCR .20 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng cắt pBT mang gen GP5 22 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng cắt pET 32a(+) 22 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng ghép nối gen 24 Bảng 2.7 Thành phần gel điện di protein (SDS-PAGE) .26 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 36 mang plasmid tái tổ hợp pET 32a(+) không mang gen GP5 nên khơng thấy xuất vạch vị trí có kích thƣớc 43 kDa Do đó, khẳng định protein tái tổ hợp TrxGP5 đƣợc tổng hợp tế bào E coli có kích thƣớc với kích thƣớc lý thuyết có hàm lƣợng lớn Để tiến hành tinh chế protein cần phải phá vỡ lƣợng lớn tế bào nhằm thu protein tổng số loại bỏ thành phần không cần thiết  Kiểm tra biểu protein tái tổ hợp Western blot Để xác định protein, biểu tinh đƣợc GP5/His-tag, tiến hành kỹ thuật lai Western blot sử dụng kháng thể kháng trình tự His-tag với nồng độ pha loãng 1:1000 lần Kết cho thấy dịch chiết tế bào thu đƣợc băng protein có kích thƣớc 43kDa (Hình 3.6) Chứng tỏ GP5 đƣợc biểu thành công tế bào E.coli BL21 Kết việc sử dụng cột sắc ký lực Ni-NTA cho phép tinh đƣợc protein tái tổ hợp GP5 Hình 3.6 Kết phân tích Western blot với kháng thể anti-His-tag (pha lỗng 1:1000 lần) M: thang chuẩn hãng Thermo 1: phân đoạn thu mẫu Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 37 (-) đối chứng âm  Khảo sát nồng độ Imidazol để tinh chế protein tái tổ hợp Cột tinh chế protein đƣợc thiết kế có giá thể gắn với ion kim loại Ni 2+ nhờ phức hợp cua, ion có lực lớn với vòng Imidazol histidine Khi cho protein tổng số qua cột, protein có chứa amino acid histidine đƣợc giữ lại cột tƣơng tác Imidazol - Ni 2+, cịn protein khơng chứa vịng Imidazol histidine khỏi cột Ái lực ion kim loại protein mạnh hay yếu phụ thuộc vào protein có nhiều Histidine khơng Histidine có nằm sát hay khơng Nếu protein có nhiều Histidine Histidine nằm gần liên kết chúng với ion kim loại mạnh Vector biểu pET 32a(+) đƣợc thiết kế cho sau dịch mã protein tái tổ hợp có mang Histidine (Hexa histidine) nên chúng có lực cao với ion Ni2+ Khi cho mẫu chứa protein tổng số qua cột protein khơng có chứa Histidine khỏi cột, lúc cột protein có histidine liên kết với ion Ni 2+ Nhƣng mức độ liên kết lại khác protein chứa nhiều amino acid Histidine liên kết với ion kim loại mạnh ngƣợc lại Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 38 Hình 3.7 Khảo sát nồng độ Imidazol để tinh sản phẩm (+): đối chứng dƣơng M: thang chuẩn hãng Thermo Giếng 1: 20 mM Imidazol; giếng 2: 40 mM Imidazol; giếng 3: 60 mM Imidazol; giếng 4: 80 mM Imidazol; giếng 5: 100 mM Imidazol Từ số nghiên cứu thực nghiệm giới tiến hành khảo sát nồng độ Imidazol mức 20 nM đến 100 mM để đạt hiệu cao chi phí thấp Khảo sát nồng độ Imidazol mức 20 mM đến 100 mM Có thể thấy, nồng độ 100 mM Imidazol thu đƣợc băng sang đậm Chúng lựa chọn nồng độ 100 mM Imidazol thu đƣợc lƣợng protein tái tổ hợp lớn, tốn hóa chất dễ dàng để loại muối thẩm tách  Tinh protein tái tổ hợp GP5 Do protein nằm pha dịch tế bào nên sau siêu âm phá tế bào tiến hành ly tâm loại bỏ phần xác tế bào lắng xuống, thu lấy phần dịch cho trực tiếp qua cột sắc ký lực Ni-NTA Do GP5 đƣợc biểu hệ thống vector hiểu pET 32a(+) nên protein đƣợc tạo đƣợc dung hợp với trình tự gồm amino acid histidine Trình tự His-tag giúp protein tái tổ hợp kết bám vào cột sắc ký, protein khác bị loại bỏ băng dung dịch rửa chứa Imidazol 100 mM Kết thu đƣợc điện di SDS-PAGE cho thấy protein GP5 tái tổ hợp đƣợc thu lại dạng tinh sạch, có kích thƣớc 43 kDa tƣơng ứng với kích thƣớc tính tốn lý thuyết (Hình 3.8) Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 39 Hình 3.8 Kết điện di kiểm tra GP5 tinh sắc ký lực Ni-NTA M: Thang chuẩn hãng Thermo Giếng 1: GP5 tinh Imidazol 100 mM Giếng 2: đối chứng (+) Giếng 3: đối chứng (-) Trên hình 3.8 cho thấy với nồng độ 100 mM Imidazol protein tái tổ hợp thu đƣợc với lƣợng lớn tinh Nhƣ thấy, để tinh chế protein TrXGP5 dùng Imidazol với nồng độ 100 mM Nhƣ việc Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 40 tinh chế protein tái tổ hợp thành công đạt hiệu xuất cao, tinh đảm bảo cho ứng dụng sau protein tái tổ hợp GP5 nhƣ việc tạo kit chuẩn đoán nhanh dịch bệnh hay tạo sản phẩm có chất vaccine với chất lƣợng tƣơng đƣơng chất lƣợng quốc tế… Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 41 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1) 2) Đã đƣợc tách dịng thành cơng gen gp5vào vector pBT Gen mã hóa cho protein GP5 đƣợc thiết kế thành công vào vector biểu pET 32a(+) 3) Protein tái tổ hợp GP5 đƣợc biểu tinh cột sắc ký lực Ni-NTA với kích thƣớc 43 kDa Đề nghị Với kết thu đƣợc nhƣ trên, đƣa số định hƣớng nghiên cứu nhƣ sau: 1) Tiếp tục thử nghiệm protein tái tổ hợp làm làm nguyên liệu để sản xuất hợp chất nhƣ vaccine hệ 2) Nghiên cứu sử dụng kháng nguyên GP5 để tạo kháng thể đặc hiệu nhằm chuẩn đoán nhanh bệnh dịch PRRSV Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Tiêu Quang An, Nguyễn Hữu Nam (2011), “ Xác định số vi khuẩn kế phát gây chết lợn vùng dịch lợn Tai xanh huyện Văn Lâm tỉnh Hƣng Yên năm 2010”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 18(3), tr 56 - 64 [2] Bùi Quang Anh, Hoàng Văn Năm, Văn Đăng Kỳ, Nguyễn Văn Long, Nguyễn Ngọc Tiến (2008), Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (Bệnh Tai xanh), Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr - 21 [3] Nguyễn Văn Cảm, Nguyễn Tùng, Nguyễn Đăng Thọ, Tống Hữu Hiến (2011), “Điều tra lƣu hành Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRS) đàn lợn số tỉnh Việt Nam”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 18(1), tr 21 - 30 [4] Cục Thú y (2008), Báo cáo chẩn đoán nghiên cứu virus gây Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn Việt Nam từ tháng 3/2007 đến 5/2008, Hội thảo khoa học phòng chống Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn, ngày 21 tháng năm 2008, Hà Nội [5] Nguyễn Tiến Dũng (2011), “Những vấn đề thời Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 18(1), tr - 11 [6] Đậu Ngọc Hào, Văng Đăng Kỳ, Nguyễn Văn Long, Tiêu Quang Ân (2008), “Một số đặc điểm dịch tễ hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn từ cuối tháng đến đầu tháng 7/2008 mơt số tỉnh nƣớc”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 15(5), tr 14-20 [7] Nguyễn Bá Hiên, Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Hữu Nam (2013), “Ngiên cứu chọn chủng virus gây Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRS) để sản xuất vaccine phịng bệnh Việt Nam”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 20(1), tr -15 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 43 [8] Lê Thanh Hịa, Lê Thị Kim Xuyến, Đồn Thị Thanh Hƣơng, Trần Quang Vui, Phạm Công Hoạt, Nguyễn Bá Hiên (2009), “ Phân tích gen M mã hóa protein màng vỉus gây PRRS Việt Nam so sánh với chủng Trung Quốc, giới”, Tạp chí Khoa học phát triển, 7(3), tr 282 - 290 [9] Lê Văn Năm (2007), Kết khảo sát bước biểu lâm sàng bệnh tích đại thể bệnh PRRS số địa phương thuộc Đồng Bắc Việt Nam, Hội thảo Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản bệnh liên cầu gây lợn 10/2007, Trƣờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội, tr 64 - 77 [10] Phạm Ngọc Thạch (2007), Một số tiêu lâm sàng, tiêu máu lợn mắc Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (bệnh Tai xanh) số đàn lợn tỉnh Hải Dương Hưng Yên, Hội thảo khoa học Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản bệnh liên cầu gây lợn 10/2007, Trƣờng Đại học Nông nghiệp, Hà Nội, tr 25 - 34 [11] Khuất Hữu Thanh (2006), Kĩ thuật gen - nguyên lý ứng dụng, NXB KHKT, Hà Nội [12] Tô Long Thành (2007), “Hội chứng rối loạn sinh sản hơ hấp lợn”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 14 (3), tr 81 - 88 [13] Nguyễn Nhƣ Thanh (2007), Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản, Hội thảo PRRS bệnh liên cầu khuẩn gây lợn tháng 10/2007, Trƣờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội [14] Cao Văn Thật, Trần Thị Dân, Trần Thị Bích Liên, Thái Quốc Hiếu, Nguyễn Văn Hân, Hồ Huỳnh Mai, Nguyễn Thị Mến (2012), “Mức độ nhiễm virus PRRS ảnh hƣởng nhiễm ghép PRRSV-Leptospira lên suất sinh sản heo nái tỉnh Tiền Giang”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 19(6), tr 17 - 23 [15] Nguyễn Ngọc Tiến (2011), “Tình hình dịch lợn Tai xanh (PRRS) Việt Nam cơng tác phịng chống dịch”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 18(1), tr 12 - 20 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 44 [16] Cục Thú y (2008), Báo cáo chẩn đoán nghiên cứu virus gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn Việt Nam từ tháng 3/2007 đến 5/2008, Hội thảo khoa học phịng chống hội chứng rối loạn hơ hấp sinh sản lợn, ngày 21 tháng năm 2008, Hà Nội [17] William T.Christianson, Han Soo Joo (2001), “Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, (2), tr 74 - 87 Tài liệu tiếng Anh [18] Albina E., Madec F., Cariolet R., Torrison J (1994), “Immune response and persistence of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus in infected pigs and farm units”, Vet Rec 134, pp 567 573 [19] Alasdair D I., Bruun R T (2000), Promoter, patent WO 0078975 [20] Anonymous (1992), “Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS or blue-eares pig disease)”, Vet Rec 130, pp 87 - 89 [21] Ansari I H., Kwon B., Osorio F.A., Pattnaik A K (2006), “Influence of N-linked glycosylation of porcine reproductive and respirattory syndrome virus GP5 on virus infectivity, antigenicity, and ability to induce neutralizing antibodies”, J Virol 80, pp 3994 - 4004 [22] Cancel-Tirado S.M., Evans R.B and Toom K.J (2004), “Monoclonal antibody analysis of porcine reproductive and respiratory sydrome virus epitopes associated with antibody-dependent enhancement and neutralization of virus infection” Vet Immunol Immunopathol 102, pp 249 – 262 [23] Carson S.D, Konigsberg W.H (1981), Phenyl-Sepharose chromatography of membrane proteins solubilized in Triton X-100 Anal Biochem 116, pp 398-401 [24] Collins J E., Benfield D A., Christianson W T., Harris L., Hennings J C., Shaw D P., Goyal S M., McCullough S., Morrison R B., Joo S H., Gorcyca D., Chladek D (1992), “Isolation of swine infertility and Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 45 respiratory syndrome virus (isolate ATCC VR- 2332) in North America and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic pigs”, J Vet Diagn Invest 4, pp 117 - 126 [25] Zhang H., Yan Q., Song R., Feng T., Liu L., Zhou L., Lin T (2013), Construction and prokaryotic expression of the fusion gene PRRSV GP5 and Mycobacterium bovis Hsp70 Afri.J Biotech 12(30), pp: 475 – 4760 [26] Jiang W., Jiang P., Wang X., Li Y., Tang J., Wang X., Ma S (2006), “Recombinant adenovirus expressing GP5 and M fusion proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome virus induce both humoral and cell-mediated immune responses in mice” Vet Immunol Immunopathol 113, pp 169 - 180 [27] Jiang W., Jiang P., Wang X., Li Y., Wang X., Du Y (2007), “Influence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus GP5 glycoprotein N-linked glycans on immune responses in mice” Virus Genes 35, pp 663 - 671 [28] Kegong Tian, Yu X (2007), Emergence of Fatal PRRSV Varants: Unparalleled Outbreaks of Atypical PRRS in China and Molecular Dissection of the Unique Hallmark, PloS ONE 2(6): e526 doi:10 1371/journal pone 0000526 [29] Leman A D (1992), The decision to repopulate In Proceedings Am Assoc Swine Pract pp - 12 [30] Lin P K T., Brown D.M (1992), “Synthesis of oligodeoxyribonucleotides containing degenrate bases and their use as primers in the Polymerase chain reaction”, Nucleic Acids Res 19, pp 5149 - 5152 [31] Lim A., Dimalanta E.T., Potamousis K.D., Apodaca J., Anantharaman T.S., and Witkin E.M, “Differences in sensitivity to radiation in Escherichia coli” Proc Natl Acad Sci USA 32, pp 59 – 68 [32] Liu C., Liu C.J., Yuan X.G., Zhang C (2013), Purification and characterization of recombinant envelope protein GP5 of porcine Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 46 reproductive and respiratorry syndrome virus from E.coili J Chromatogr A 23, pp 1304: 133-7 [33] Meulenberg J.J., Petersen den Besten A., de Kluyver E., van Nieuwstandt A., Wensvoort G and Moormann RJ (2004), Molecular characterization of Lelystand virus Vet Microbiol 55, pp 197 – 202 [34] Montpetit M L., Cassol S., Salas T., and O'Shaughnessy M V (1992), “OLIGOSCAN: A computer program to assist in the design of PCR primers homologous to multiple DNA sequences”, J Virol Methods 36, pp 119 - 128 [35] Sambrook J., Russell D W (2001), Molecular cloning a Laboratory Manual, 3rd, ed Cold spring harbor laboratory press, cold springhabor NY [36] Wensvoort G., Terpstra C., Pol J M A (1991), “Mystery swine disease in the Netherlands: the isolation of Lelystad virus”, The Veterinary Quarterly 13, pp 121 - 130 Internet [37] Nguyen Van D., Ken I., Phan Xuan T (2010), Nucleotide Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, GeneBank databases Acc No HQ540655, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/311909479, ngày 17/10/2010 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ... tái tổ hợp glycoprotein (GP5) vius gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (PRRSV)” Mục tiêu nghiên cứu Thiết kế đƣợc vector biểu protein tái tổ hợp GP5 Biểu tinh đƣợc protein tái tổ hợp GP5... 1.1.2 Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn 1.1.3 Virus gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRSV) 1.2 Protein tái tổ hợp 11 1.2.1 Giới thiệu 11 1.2.2 Glycoprotein (GP5). .. tên hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn (PRRS) đƣợc tổ chức Thú Y giới công nhận Bệnh đƣợc gây virus PRRS, tồn dƣới dạng hạt virion gây nhiễm 1.1.2 Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn *