Nghiên cứu tạo cây ngô chuyển gen dreb2 7 liên quan đến tính chịu hạn​

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  Nguyễn Thùy Linh NGHIÊN CỨU TẠO CÂY NGƠ CHUYỂN GEN DREB2.7 LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN -  - Nguyễn Thùy Linh NGHIÊN CỨU TẠO CÂY NGÔ CHUYỂN GEN DREB2.7 LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS Huỳnh Thị Thu Huệ TS Lê Hồng Điệp Hà Nội, 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tôi, hướng dẫn khoa học TS Huỳnh Thị Thu Huệ TS Lê Hồng Điệp Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa cơng bố hình thức Luận văn sử dụng thông tin, số liệu từ báo nguồn tài liệu tác giả khác có trích dẫn thích nguồn gốc đầy đủ Nếu có gian lận tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Học viên Nguyễn Thùy Linh LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô giáo khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội trang bị kiến thức cho tơi suốt q trình học tập Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Huỳnh Thị Thu Huệ – Viện Nghiên cứu hệ gen TS Lê Hồng Điệp –Đại học Khoa học Tự nhiên tận tình bảo giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu đề tài hoàn chỉnh Luận văn Thạc sĩ Xin cảm ơn đề tài cấp nhà nước: ―Phân lập thiết kế gen chịu hạn phục vụ công tác tạo giống ngô biến đổi gen‖ Viện Nghiên cứu hệ gen chủ trì, Bộ Nơng nghiệp Phát triển nông thôn chủ quản hỗ trợ phương diện để thực nghiên cứu Tơi xin cảm ơn cán Phịng Đa dạng sinh học hệ gen - Viện Nghiên cứu hệ gen tạo điều kiện, giúp đỡ cho tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp sát cánh hỗ trợ động viên vật chất tinh thần suốt trình học tập nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng Học viên Nguyễn Thùy Linh i năm MỤC LỤC MỤC LỤC ii DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC BẢNG vi BẢNG KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU Chƣơng - TỔNG QUAN 1.1 Cây ngô hạn hán 1.1.1 Tình hình ngô nước ta 1.1.2 Hạn hán ảnh hưởng đến suất ngô 1.1.3 Nâng cao suất ngô điều kiện hạn hán 1.2 Nghiên cứu tạo ngô biến đổi gen chịu hạn 1.2.1 Tình hình nghiên cứu tạo giống ngô biến đổi gen giới 1.2.2 Tình hình nghiên cứu tạo giơng ngơ biến đổi gen chịu hạn giới 1.2.3 Tình hình nghiên cứu ngô biến đổi gen Việt Nam .9 1.3 Tính trạng chịu hạn thực vật nhân tố phiên mã DREB .10 1.3.1 Cơ sở phân tử tính chống chịu hạn thực vật 10 1.3.2 Họ nhân tố phiên mã DREB 12 1.3.3 Nhân tố phiên mã ZmDREB2.7 13 Chƣơng - VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 15 2.1 Vật liệu 15 2.1.1 Mẫu thực vật 15 2.1.2 Chủng vi khuẩn, vector mồi 15 2.1.3 Hóa chất mơi trường 17 2.1.4 Thiết bị nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Tách chiết DNA 19 2.2.2 Tách chiết RNA tổng hợp cDNA 20 2.2.3 Phương pháp PCR 21 2.2.4 Tinh DNA 21 ii 2.2.5 Tạo tế bào khả biến E coli biến nạp sốc nhiệt .21 2.2.6 Tạo tế bào khả biến A tumefaciens biến nạp xung điện .22 2.2.7 Nhân dòng gen ZmDREB2.7tv 22 2.2.8 Tạo vector biểu thực vật pCAMBIA1300/rd29A::ZmDREB2.7tv: :polyA 23 2.2.9 Chuyển gen vào ngô thông qua vi khuẩn A tumefaciens 24 2.2.10 Real-time PCR định lượng để ước lượng số gen chuyển gen 26 2.2.11 Real-time PCR định lượng để đánh giá biểu gen chuyển gen 27 2.2.12 Phân tích chuyển gen 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Kết phân lập gen ZmDREB2.7tv từ ngô Tẻ vàng .29 3.1.1 Tách chiết DNA tổng số từ ngô Tẻ vàng 29 3.1.2 Phân lập tạo dòng gen ZmDREB2.7tv 30 3.1.3 Phân tích trình tự gen ZmDREB2.7tv 32 3.2 Kết thiết kế vector biểu thực vật mang gen ZmDREB2.7tv 35 3.2.1 Thiết kế vector trung gian pRTL2/rd29A::ZmDREB2.7tv 35 3.2.2 Thiết kế vector biểu pCAMBIA1300/rd29A::ZmDREB2.7tv 39 3.2.3 Tạo chủng A tumefaciens EHA105 mang vector biểu 42 3.3 Kết tạo ngô biến đổi gen mang gen ZmDREB2.7tv .42 3.3.1 Chuyển gen ZmDREB2.7tv vào ngô hệ T0 42 3.3.2 Đánh giá chuyển gen hệ T0 47 3.3.3 Tạo đánh giá chuyển gen hệ T1 50 3.3.4 Ước lượng số gen ZmDREB2.7tv chuyển gen hệ T1 51 3.3.5 Đánh giá biểu tương đối gen ZmDREB2.7tv chuyển gen hệ T2 53 KẾT LUẬN 56 KIẾN NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 iii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Tổng sản lượng ngơ tiêu thụ theo năm tài giai đoạn 2015-2018 nước ta Hình 1.2 Số lượng thử nghiệm biến đổi gen đồng ruộng qua năm [32] Hình 1.3 Số lượng thử nghiệm đồng ruộng biến đổi gen chịu hạn [32] Hình 1.4 Các nhóm protein tham gia vào trình đáp ứng gặp hạn [28] Hình 2.1 Phương pháp tạo vector biểu mang gen ZmDREB2.7tv Hình 3.1 Điện di đồ kiểm tra DNA tổng số từ ba mẫu ngô Tẻ vàng Hình 3.2 Điện di đồ plasmid tách từ khuẩn lạc tái tổ hợp pJET1.2/ZmDREB2.7tv Hình 3.3 Điện di đồ sản phẩm xử lý plasmid pJET1.2/ZmDREB2.7tv enzyme giới hạn BglII Hình 3.4 Kết so sánh trình tự ZmDREB2tv phân lập từ giống ngơ Tẻ vàng trình tự tham chiếu ngơ B73 công cụ BioEdit Hình 3.5 Điện di đồ sản phẩm PCR khuếch đại vùng mã hóa gen ZmDREB2.7tv Hình 3.6 Điện di đồ plasmid tách từ khuẩn lạc tái tổ hợp pRTL2/ rd29A: :ZmDREB2.7tv Hình 3.7 Kết kiểm tra plasmid pRTL2/rd29A::ZmDREB2.7tv Hình 3.8 Điện di đồ plasmid tách từ khuẩn lạc tái tổ hợp pCAMBIA1300/ rd29A::ZmDREB2.7tv Hình 3.9 Kết tạo plasmid pCAMBIA1300/rd29A::ZmDREB2.7tv Hình 3.10 Điện di đồ sản phẩm PCR kiểm tra vi khuẩn A tumefaciens EHA105 mang vector chuyển gen thực vật pCAMBIA1300/rd29A::ZmDREB2.7::polyA Hình 3.11 Q trình chuyển gen vào ngơ trung gian qua vi khuẩn Agrobacterium Hình 3.12 Điện di đồ DNA tổng số tách từ chuyển gen ZmDREB2.7tv hệ T0 Hình 3.13 Điện di đồ sản phẩm PCR kiểm tra có mặt đoạn rd29A::ZmDREB2.7tv chuyển gen hệ T0 iv Hình 3.14 Điện di đồ sản phẩm PCR kiểm tra có mặt gen HygR chuyển gen hệ T0 49 Hình 3.16 Điện di đồ sản phẩm kiểm tra có mặt gen quan tâm chuyển gen ZmDREB2.7tv hệ T2 54 Hình 3.17 Kết đánh giá mức độ biểu tương đối gen ZmDREB2.7 chuyển gen gặp hạn 54 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách cặp mồi sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 2.2 Thành phần môi trường sử dụng nghiên cứu .17 Bảng 3.1 Kết chuyển gen ZmDREB2.7tv vào ngô 46 Bảng 3.2: Kết phân ly gen ZmDREB2tv chuyển gen hệ T1 50 Bảng 3.3 Đường chuẩn khuếch đại hai gen ZmDREB2.7tv Glb-1 52 Bảng 3.4 Giá trị Ct số lượng gen ZmDREB2.7tv chuyển gen hệ T1 53 vi Actin-1 AP2/ERF2 AS CBF DNA DREB Glb-1 HygR ISAAA KL MS PCR rd29A RNA USDA ZmDREB2.7tv vii Bảng 3.3 Đường chuẩn khuếch đại hai gen ZmDREB2.7tv Glb-1 Thơng số Hệ số góc (S) Hiệu suất phản ứng Error Hệ số tương đương (R ) Số chu kì bão hịa (Y-intercept (I) Glb-1 gen quản gia (house-keeping gene) cây, mã hóa cho protein globulin-1 kiểm tra sở liệu maizegdb.org có ngơ Do đó, gen Glb-1 sử dụng để làm gen nội chuẩn cho thí nghiệm Cặp mồi nhân đặc hiệu đoạn gen Glb-1 thiết kế kiểm tra công cụ primer-BLAST để đảm bảo không khuếch đại đoạn không đặc hiệu ngô dẫn đến kết ước lượng sai Cặp mồi nhân đoạn gen ZmDREB2.7tv gồm mồi ngược nhận biết vị trí gen mồi xi nhận biết vị trí promoter rd29A Điều giúp phản ứng real-time PCR không khuếch đại gen ZmDREB2.7 nội sinh ngơ K7 ảnh hưởng đến kết thí nghiệm Do dịng K7 sử dụng thí nghiệm chuyển gen dòng thuần, gen Glb-1 coi nằm locus trạng thái đồng hợp, tức mang hai gen hệ gen chuyển gen Như vậy, từ tỷ lệ Z 0/G0 ước lượng số gen ZmDREB2.7tv chuyển gen hệ T1 52 Bảng 3.4 Giá trị Ct số lượng gen ZmDREB2.7tv chuyển gen hệ T1 Cây T1 D5.1 D5.4 D5.5 D5.8 D5.9 D5.10 Trong số T1 dương tính với có mặt gen ZmDREB2.7tv, mang gen ZmDREB2.7tv, điều hiểu gen ZmDREB2.7tv sát nhập vị trí hệ gen trạng thái dị hợp (Bảng 3.4) Cây T1 lại - D5.8 cho tỷ lệ Z 0/G0 xấp xỉ nên cho có hai gen ZmDREB2.7tv Với kết phân tích phân ly mục 3.3.4 kết real-time PCR định lượng T1 nói trên, cho T1 D5.8 mang gen ZmDREB2.7tv locus hệ gen trạng thái đồng hợp tử 3.3.5 Đánh giá biểu tương đối gen ZmDREB2.7tv chuyển gen hệ T2 Mức độ biểu tương đối gen ZmDREB2.7 đánh giá chuyển gen hệ T2 mức độ phiên mã hai điều kiện thí nghiệm: bình thường hạn Các hạt T2 có nguồn gốc từ T1 D5.8 gieo kiểm tra có mặt gen ZmDREB2.7tv thí nghiệm PCR trước tiến hành đánh giá biểu gen quan tâm (Hình 3.16) Giá t 53 Hình 3.16 Điện di đồ sản phẩm kiểm tra có mặt gen quan tâm chuyển gen ZmDREB2.7tv hệ T2 1: Sản phẩm PCR với khuôn plasmid pCAMBIA1300/rd29A::ZmDREB2.7::polyA; 2: Sản phẩm PCR với khuôn DNA tổng số không chuyển gen;3-4: Sản phẩm PCR với khuôn DNA tổng số chuyển gen hệ T2 T1 D5.8 Như mô tả phần phương pháp, không chuyển gen chuyển gen ZmDREB2.7tv dương tính với có mặt gen quan tâm gây hạn nhân tạo dung dịch PEG6000 20% Lá thu để đánh giá mức độ biểu gen ZmDREB2.7 ngô giai đoạn trước xử lý (0h) sau xử lý hạn (6h) Hình 3.17 Kết đánh giá mức độ biểu tương đối gen ZmDREB2.7 chuyển gen gặp hạn 54 Do cặp mồi thiết kế nằm vùng trình tự mã hóa gen ZmDREB2.7tv, sản phẩm gen ZmDREB2.7 nội sinh khuếch đại Vì vậy, kết phản ứng real-time PCR định lượng thể mức độ biểu tương đối gen ZmDREB2.7 nói chung (Hình 3.17) Trước xử lý hạn (điều kiện bình thường), biểu gen ZmDREB2.7 tương đương không chuyển gen không chuyển gen gen ZmDREB2.7tv điều khiển promoter cảm ứng rd29A Tuy nhiên, sau xử lý hạn, mức độ biểu gen ZmDREB2.7 tăng lên đáng kể tất thí nghiệm Trong đó, hai chuyển gen có mức độ biểu gen ZmDREB2.7 cao so với khơng chuyển gen Điều giải thích bên cạnh gen ZmDREB2.7 nội sinh, chuyển gen có thêm gen ZmDREB2.7tv số lượng sản phẩm phiên mã tăng lên Như vậy, chuyển gen hệ T2 có biểu cấu trúc chuyển gen ZmDREB2.7tv mức độ phiên mã đáp ứng với điều kiện thiếu nước 55 KẾT LUẬN Đã phân lập xác định trình tự nucleotide đoạn mang gen DREB2.7 từ giống ngô địa phương chịu hạn Tẻ vàng Gen ZmDREB2.7tv có độ tương đồng 98% so với gen ZmDREB2.7 ngô tham chiếu B73 Protein suy diễn ZmDREB2.7tv có vài thay đổi trình tự amino acid nhiên vùng bám DNA bảo toàn Đã thiết kế vector trung gian vector chuyển gen thực vật mang đoạn trình tự mã hóa gen ZmDREB2.7tv, đó, đoạn gen ZmDREB2.7tv điều hòa promoter cảm ứng với hạn rd29A Đồng thời, tạo chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens EHA105 mang vector chuyển gen thực vật pCAMBIA1300/rd29A::ZmDREB2.7tv::polyA Đã tạo ngô chuyển gen ZmDREB2.7tv với hiệu suất chuyển gen đạt 0,99% Cây chuyển gen kiểm chứng thí nghiệm sinh học phân tử để đánh giá có mặt, ước lượng số lượng đánh giá biểu cấu trúc rd29A::ZmDREB2.7tv mức độ phiên mã Cây chuyển gen hệ T2 thuộc dòng D5.8 mang gen ZmDREB2.7tv cho thấy tăng cường biểu gen thí nghiệm xử lý hạn nhân tạo 56 KIẾN NGHỊ Thực thí nghiệm để kiểm tra ảnh hưởng gen ZmDREB2.7tv lên gen khác liên quan đến đường chống chịu hạn Thực thí nghiệm đánh giá sinh lý, sinh hóa chuyển gen Thực thí nghiệm đánh giá tính trạng chịu hạn chuyển gen nhà lưới giai đoạn khác 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2017), Báo cáo kết thực kế hoạch tháng 12 năm 2017 Ngành Nông nghiệp Phát triển nông thôn https://www.mard.gov.vn/ThongKe/Lists/BaoCaoThongKe/Attachments/132 /Baocao_T12_2017.pdf Nguyễn Văn Đồng, Nguyễn Hữu Kiên (2013), ‖Thiết kế vector biểu gen chịu hạn NTCB-ZmNF-YB2 ngơ‖ Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn, 7, tr 31-37 Nguyễn Văn Đồng, Nguyễn Anh Vũ, Nguyễn Hữu Kiên, Dương Tuấn Bảo (2013), ‖Nghiên cứu biến nạp gen liên quan đến khả kháng hạn thuốc trừ cỏ vào giống đậu tương ĐT22‖ Tạp chí Khoa học công nghệ, 11, tr.3-9 Nguyễn Văn Đồng, Phạm Thị Lý Thu, Lê Thị Mai Hương, Phạm Thị Hương, Lê Thị Lan, Nguyễn Chiến Hữu, Nguyễn Hữu Kiên, Trần Duy Hưng, Lê Huy Hàm (2015), ‖Nghiên cứu chuyển gen chịu hạn NF-YB2 vào số dịng ngơ Việt Nam‖ Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thôn, 7, e.3530 Huỳnh Thị Thu Huệ, Nguyễn Văn Trường, Bùi Mạnh Minh, Đồn Thị Bích THảo, Nguyễn Xn Thắng, Nông Văn Hải, Bùi Mạnh Cường (2014), ‖Thiết kế vector biểu mang gen modiCspB chuyển gen vào ngơ‖ Tạp chí cơng nghệ sinh học, 12(1), tr 125 – 132 Tài liệu Tiếng Anh Ashraf, M., & Akram, N A (2009), ―Improving salinity tolerance of plants through conventional breeding and genetic engineering: an analytical comparison‖ Biotechnology advances, 27(6), pp 744-752 Brookes, G., Barfoot, P (2017), ―Farm income and production impacts of using GM crop technology 1996–2015‖ GM crops & food, 8(3), pp 156-193 Chapman, S C., Edmeades, G O (1999), ―Selection improves drought tolerance in tropical maize populations: II Direct and correlated responses among secondary traits‖ Crop Science, 39(5), pp 1315-1324 58 Chaves, M M., Maroco, J P., & Pereira, J S (2003), ―Understanding plant responses to drought—from genes to the whole plant‖ Functional plant biology, 30(3), pp 239-264 10 Chen, J Q., Meng, X P., Zhang, Y., Xia, M., & Wang, X P (2008), ―Over-expression of OsDREB genes lead to enhanced drought tolerance in rice‖ Biotechnology letters, 30(12), pp 2191-2198 11 Chen, J., Xia, X., & Yin, W (2009) ―Expression profiling and functional characterization of a DREB2-type gene from Populus euphratica” Biochemical and Biophysical Research Communications, 378(3), pp.483- 487 12 Claassen, M M., & Shaw, R H (1970), ―Water deficit effects on corn I Grain components‖ Agronomy journal, 62(5), pp 652-655 13 Edmeades, G.O., Bolaños, J J., Elings, A., Ribaut, J-M., Bänziger, M., Westgate., M E (2000), The role and regulation of the anthesis-silking interval in maize pp 43-73 In: M.E Westgate and K.J Boote (eds.) Physiology and modeling kernel set in maize CSSA Special Publication No 29 CSSA, Madison, WI 14 Frame, B., Warnberg, K., Main, M., Wang., K (2015), Maize (Zea mays L.) In Wang K, eds Agrobacterium Protocols Methods in Molecular Biology, vol 1223 Springer, New York, NY 15 Fromm, M E., Morrish, F., Armstrong, C., Williams, R., Thomas, J., Klein, T M (1990), ―Inheritance and expression of chimeric genes in the progeny of transgenic maize plants‖ Nature Biotechnology, 8(9), pp.833-839 16 Haake, V., Cook, D., Riechmann, J., Pineda, O., Thomashow, M F., & Zhang, J Z (2002), ―Transcription factor CBF4 is a regulator of drought adaptation in Arabidopsis‖ Plant physiology, 130(2), pp 639-648 17 Hu, H., Xiong, L (2014), ―Genetic engineering and breeding of drought-resistant crops‖ Annual review of plant biology, 65, pp 715-741 18 ISAAA 2016 Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops: 2016 ISAAA Brief No 52 ISAAA: Ithaca, NY 19 ISAAA 2017 Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops in 2017: Biotech Crop Adoption Surges as Economic Benefits Accumulate in 22 Years ISAAA Brief No 53 ISAAA: Ithaca, NY 59 20 Kasuga, M., Miura, S., Shinozaki, K., & Yamaguchi-Shinozaki, K (2004), ―A combination of the Arabidopsis DREB1A gene and stressinducible rd29A promoter improved drought-and low-temperature stress tolerance in tobacco by gene transfer‖ Plant and Cell Physiology, 45(3), pp.346-350 21 Liu, Q., Kasuga, M., Sakuma, Y., Abe, H., Miura, S., YamaguchiShinozaki, K., & Shinozaki, K (1998), ―Two transcription factors, DREB1 and DREB2, with an EREBP/AP2 DNA binding domain separate two cellular signal transduction pathways in drought-and low-temperature-responsive gene expression, respectively, in Arabidopsis‖ The Plant Cell, 10(8), pp 1391-1406 22 Liu, S., Wang, X., Wang, H., Xin, H., Yang, X., Yan, J., & Qin, F (2013), ―Genome-wide analysis of ZmDREB genes and their association with natural variation in drought tolerance at seedling stage of Zea mays L‖ PLoS genetics, 9(9), e1003790 23 Novillo, F., Alonso, J M., Ecker, J R., & Salinas, J (2004), ―CBF2/DREB1C is a negative regulator of CBF1/DREB1B and CBF3/DREB1A expression and plays a central role in stress tolerance in Arabidopsis” Proceedings of the National Academy of Sciences, 101(11), pp 3985-3990 24 Ohme-Takagi, M., Shinshi, H (1995), ―Ethylene-inducible DNA binding proteins that interact with an ethylene-responsive element‖ Plant Cell, 7, pp 173–182 25 Rogers, S O., & Bendich, A J (1989), ―Extraction of DNA from plant tissues‖ In Plant molecular biology manual, pp 73-83 Springer, Dordrecht 26 Sakuma, Y., Maruyama, K., Osakabe, Y., Qin, F., Seki, M., Shinozaki, K., & Yamaguchi-Shinozaki, K (2006), ―Functional analysis of an Arabidopsis transcription factor, DREB2A, involved in droughtresponsive gene expression‖ The Plant Cell, 18(5), pp 1292-1309 27 Sambrook, J., Fritsch, E F., & Maniatis, T (1989), Molecular cloning: a laboratory manual (No Ed 2) Cold spring harbor laboratory press 28 Wang, H., & Qin, F (2017), ―Genome-wide association study reveals natural variations contributing to drought resistance in crops‖ Frontiers in plant science, 8, pp 1110 29 Weng, H., Pan, A., Yang, L., Zhang, C., Liu, Z., & Zhang, D (2004), ―Estimating number of transgene copies in transgenic rapeseed by real-time 60 PCR assay withHMG I/Y as an endogenous reference gene‖ Plant Molecular Biology Reporter, 22(3), pp.289-300 30 Yoshida, T., Mogami, J., & Yamaguchi-Shinozaki, K (2014), ―ABAdependent and ABA-independent signaling in response to osmotic stress in plants‖ Current opinion in plant biology, 21, pp 133-139 Trang web 31 FAO, http://www.fao.org/faostat/en/#data/QC, cập nhật ngày 28/05/2018 USDA,https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/biotechnology/pe rmits-notifications-petitions/sapermits/ctstatus, cập nhật ngày 19/11/2018 32 USDA (2018) ―World Agricultural Production, Circular Series WAP 11-18‖ Released 08/11/2018 https://usda.library.cornell.edu/concern/publications/-5q47rn72z?locale=en 33 61 ... việc tạo giống ngô biến đổi gen có khả chịu hạn, luận văn thạc sĩ tiến hành với nội dung: ? ?Nghiên cứu tạo ngơ chuyển gen DREB2. 7 liên quan đến tính chịu hạn‖ Mục tiêu nghiên cứu phân lập gen DREB2. 7. .. .42 3.3.1 Chuyển gen ZmDREB2.7tv vào ngô hệ T0 42 3.3.2 Đánh giá chuyển gen hệ T0 47 3.3.3 Tạo đánh giá chuyển gen hệ T1 50 3.3.4 Ước lượng số gen ZmDREB2.7tv chuyển gen hệ T1... đổi gen chịu hạn 1.2.1 Tình hình nghiên cứu tạo giống ngơ biến đổi gen giới 1.2.2 Tình hình nghiên cứu tạo giông ngô biến đổi gen chịu hạn giới 1.2.3 Tình hình nghiên cứu ngô biến đổi gen