Khảo sát khả năng diệt khuẩn của sản phẩm gpc8tm đối với vi khuẩn vibrio parahaemolyticus gây bệnh trên tôm thẻ chân trắng​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG DIỆT KHUẨN CỦA SẢN PHẨM GPC8TM ĐỐI VỚI VI KHUẨN VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS GÂY BỆNH TRÊN TÔM THẺ CHÂN TRẮNG Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : Th.s Võ Minh Sơn Sinh viên thực MSSV: 1151110041 : Nguyễn Thụy Thanh Trúc Lớp: 11DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu kết Đồ án trung thực Mọi thơng tin trích dẫn Đồ án đƣợc ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2015 Sinh viên thực Nguyễn Thụy Thanh Trúc LỜI CẢM ƠN Để hồn thành Khóa luận tốt nghiệ p, ngồi cố gắng thân, tơi cịn nhận đƣợc giúp đỡ r ất nhiề u Thầy Cô giáo, Anh Chị trƣớc, bạn bè gia đình suốt thời gian thực đề tài Nhân tơi xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành đến: Ban giám hiệu Trƣờng Đại học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, tồn thể quý thầy cô Khoa Công Nghệ Sinh Học tận tình giảng dạy truyền đạt nhiều kiến thức bổ ích suốt khóa học để tơi hồn thành tốt đề tài Thầy Phạm Minh Nhựt giáo viên giới thiệ u vào làm Luận văn Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy s ản II Ban Giám Đốc, cô chú, anh chị cán Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Thạc Sĩ Võ Minh Sơn, ngƣời tận tình hƣớng dẫn, dạy bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Đồng thời xin gửi lời cám ơn đến bạn Tr ần Thái Hoàng Quân bạn giúp đỡ, động viên thực đề tài suốt q trình học tập trƣờng Cuối tơi xin cảm ơn gia đình ngƣời thân ủng hộ động viên tôi, tạo điều kiện tốt cho mặt tinh thần vật chất để hồn thành tốt Khóa luận Trong thời gian thực đề tài tốt nghiệ p, cố gắng nhiề u, nhiên thời gian có hạn kiến thức cịn hạn chế nên khơng thể tránh đƣợc sai sót Rất mong nhận đƣợc ý kiến đóng Thầy Cơ để Khóa luận hồn thiện Xin chân thành c ảm ơn! TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Nguyễn Thụy Thanh Trúc Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình ảnh hƣởng c dịch bệnh EMS giới Việt Nam 1.2 Vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus 1.2.1 Phân loại 1.2.2 Đặc điểm hình thái 1.2.3 Đặc điểm sinh hóa 1.2.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến phát triển V parahaemolyticus 1.2.5 Vi khuẩn V parahaemolyticus gây bệ nh EMS 1.3 Một số chất diệt khuẩn sử dụng nuôi trồng thủy s ản (Nguồn: Fishviet.net) 14 1.3.1 Vôi (CaCO3, CaO) 14 1.3.2 Chlorine 14 1.3.3 Formaldehyde (Formalin, Formol) 15 1.3.4 Benzalkonium Chloride (BKC) 15 1.3.5 Iodine (Povidone – Iodine, Polyvinyl Pyrrolidone Iodide) 15 1.3.6 Thuốc tím (Kali Permanganate – KMnO4) 15 i Đồ án tốt nghiệp 1.4 Sản phẩm diệt khuẩn GPC8T M 16 1.4.1 Thành phần 16 1.4.2 Ứng dụng 22 1.5 Tôm thẻ chân trắng 22 1.5.1 Phân loại (Nguồn: Boone, 1931) 22 1.5.2 Đặc điểm 23 1.5.3 Các bệnh thƣờng gặp tôm thẻ chân trắng (Nguồ n: UV Vietnam)… 23 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 30 2.2 Vật liệu nghiên cứu 30 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 33 2.3.1 Khảo sát khả diệt khuẩn s ản phẩm GPC8 điều kiện in vitro… 33 2.3.2 Khảo sát khả diệt khuẩn s ản phẩm GPC8 điều kiện in vivo… 35 2.3.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu 40 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 Kết 41 3.1.1 Kết khảo sát khả diệt khuẩn sản phẩm GPC8 điều kiện in vitro 41 3.1.2 Kết khảo sát khả diệt khuẩn sản phẩm GPC8 điều kiện in vivo 44 3.2 Thảo luận 52 ii Đồ án tốt nghiệp CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 4.1 Kết luận 53 4.2 Kiến nghị 53 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT AHPNS: Acute hepatopancreatic nerosis syndrome EMS: Early mortality syndrome ĐBSCL: Đồng sông Cửu Long IMNV: Infectious myonecrosis virus IHHNV: Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus GAV: Gill-associated virus NT: Nghiệm thức NTĐC: Nghiệm thức đối chứng TCBS: Thiosunphate Citrate Bile Salt Sucrose agar TSA: Tryptic Soya Agar TSB: Tryptic Soya Broth TSV: Taura syndrome virus V parahaemolyticus: Vibrio parahaemolyticus Việ n NCNTTS II: Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II WSSV: White spot syndrome virus YHV: Yellow head virus iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Kho ảng tối ƣu kho ảng chịu đựng c V parahaemolyticus .9 Bảng 1.2 Thành phần hóa học sản phẩm diệt khuẩn GPC8 T M 16 Bảng 1.3 Các sản phẩm thƣơng mại có thành phần Glutaraldehyde đƣợc phép lƣu hành thị trƣờng nuôi trồng thủy s ản (theo Quyết định số 15/2006/QĐ-BTS ngày 8/9/2006 Bộ trƣởng Bộ Thủy s ản) 19 Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm ni chung 34 Bảng 2.2 Bố trí thí nghiệm LC50 36 Bảng 2.3 Bố trí thí nghiệm LD50 38 Bảng 2.4 Bố trí thí nghiệm diệt khuẩn điều kiện in vivo 39 Bảng 3.1 Đƣờng kính vịng diệt khuẩn 42 Bảng 3.2 Tỷ lệ tơm chết (%) tích lũy theo thời gian c thí nghiệm LC50 45 Bảng 3.3 Tỷ lệ tơm chết (%) tích lũy theo thời gian c thí nghiệm LD50 48 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 So sánh sản lƣợng tôm nƣớc năm 2013 so với 2012 Hình 1.2 Hình thái vi khuẩn V parahaemolyticus Hình 1.3 Nhuộm Gram vi khuẩn V parahaemolyticus Hình 1.4 Khuẩn lạc V parahaemolyticus môi trƣờng chọn lọc TCBS .8 Hình 1.5 Cơ chế gây bệnh EMS 10 Hình 1.6 Tôm chết bệnh EMS 11 Hình 1.7 Gan tơm sƣng to, có màu bất thƣờng 12 Hình 1.8 Gan tụy tơm bị bệnh EMS, đƣờng ruột đứt khúc đục 12 Hình 1.9 Tơm bị nhiễm bệ nh EMS tơm bình thƣờng 13 Hình 1.10 Một số tôm sau vƣợt qua bệnh EMS (gọi tơm tre – đốt thể nhƣ đốt tre) tơm sau chết 13 Hình 1.11 Chất diệt khuẩn GPC8T M 16 Hình 1.12 Tơm thẻ chân tr ắng 23 Hình 1.13 Tơm bị bệ nh ho ại tử IMNV 24 Hình 1.14 Tơm bị bệ nh Taura 25 Hình 1.15 Tôm bị bệnh đốm trắng 26 Hình 1.16 Tơm bị bệ nh đầu vàng YHV 27 Hình 1.17 Tơm thẻ chân trắng bệ nh IHHNV với dấu hiệu nhƣ chủy cong quẹo, phần dị hình, biến dạng 28 Hình 2.1 Quy trình nghiên cứu 33 Hình 2.2 Thí nghiệm nuôi chung 35 Hình 2.3 Hệ thống thí nghiệm LC50 37 vi Đồ án tốt nghiệp Hình 2.4 Hệ thống thí nghiệm LD50 38 Hình 2.5 Hệ thống bể kính thí nghiệm 40 Hình 3.1 Kết thí nghiệm giế ng khuếch tán 41 Hình 3.2 Kết kiểm tra mật độ vi khuẩn môi trƣờng TCBS 42 Hình 3.3 Ảnh hƣởng nồng độ chất diệt khuẩn GPC8 đến mật độ Vibrio parahaemolyticus 43 Hình 3.4 Đồ thị tỷ lệ tơm chết (%) theo thời gian thí nghiệm 44 Hình 3.5 So sánh gi ữa tơm khỏe mạnh (A) tôm nhiễm bệnh (B) .46 Hình 3.6 Kiểm tra Vibrio parahaemolyticus tơm bệnh môi trƣờng Compact Dry PI-VP 47 Hình 3.7 Tỷ lệ tơm chết (%) theo ngày thí nghiệm LD5 47 Hình 3.8 Mật độ vi khuẩn thí nghiệm diệt khuẩn điều kiệ n in vivo 49 Hình 3.9 Tỷ lệ tơm sống (%) c thí nghiệm diệt khuẩn điều kiệ n in vivo 51 vii Đồ án tốt nghiệp A3 Thành phần môi trƣờng Thiosunphate Citrate Bile Salt Sucrose agar Thiosunphate Citrate Bile Salt Sucrose agar (g/l) Yeast extract Proteose Peptone Sodium thiosulfate Sodium citrate Ox gall Sodium cholate Sucrose Sodium chloride Ferric citrate Bromothymol blue Thymol blue Agar pH (at 25oC) = 8.8 ± 0,2 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B: KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG DIỆT VI KHUẨN VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS CỦA SẢN PHẨM GPC8TM B.1 Kết đƣờng kính vịng di ệt khuẩn thí nghi ệm giếng khuếch tán Nồng độ GPC8 (ppm) 10000 B2 Kết kiểm tra mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus mơi trƣờng TCBS thí nghiệm nuôi chung Nồng độ chất diệt khuẩn GPC8 (ppm) 0.25 0.5 10 20 Đồ án tốt nghiệp Mật độ vi khuẩn (cfu/ml) 5.107 1.107 6.106 2.106 B.5 Kết mật độ vi khuẩn thí nghiệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo vào lúc gi Nồng độ chất diệt khuẩn GPC8 (ppm) 0.5 10 20 Đồ án tốt nghiệp B.6 Kết mật độ vi khuẩn thí nghiệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo vào lúc gi Nồng độ chất diệt khuẩn GPC8 (ppm) 0.5 10 20 B.7 Kết mật độ vi khuẩn thí nghiệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo vào lúc 24 gi Nồng độ chất diệt khuẩn GPC8 (ppm) 0.5 10 20 Đồ án tốt nghiệp B.8 Kết số lƣợng tơm cịn sống thí nghiệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo thời điểm Nồng độ c diệt khu GPC8 (pp 0.5 10 20 B.9 Kết số lƣợng tơm cịn sống thí nghiệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo thời điểm Nồng độ c diệt khu GPC8 (pp 0.5 10 20 Đồ án tốt nghiệp B.10 Kết số lƣợng tơm cịn sống thí nghi ệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo thời điểm 24 Nồng độ c diệt khu GPC8 (pp 0.5 10 20 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC C: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ C.1 Kết kiểm tra mật độ vi khuẩn V parahaemolyticus mơi trƣờng TCBS thí nghiệm ni chung ANOVA Table for log by Nongdo Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for log by Nongdo Method: 95.0 percent LSD Nongdo 20 10 0.5 0.25 Đồ án tốt nghiệp C2 Kết mật độ vi khuẩn thí nghiệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo vào lúc gi ANOVA Table for H0 by Nong Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for H0 by Nong Do Method: 95.0 percent LSD Nong Do 0.5 20 10 10 Đồ án tốt nghiệp C3 Kết mật độ vi khuẩn thí nghiệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo vào lúc gi ANOVA Table for H6 by Nong Do Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for H6 by Nong Do Method: 95.0 percent LSD Nong Do 20 10 0.5 11 Đồ án tốt nghiệp C4 Kết mật độ vi khuẩn thí nghiệm khảo sát khả diệt khuẩn GPC8 điều kiện in vivo vào lúc 24 ANOVA Table for H24 by Nong Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for H24 by Nong Method: 95.0 percent LSD Nong Do 20 10 0.5 12 ... cứu Chủng vi khuẩn V parahaemolyticus Hoạt hóa , tăng sinh Khảo sát khả diệt khuẩn sản phẩm GPC8 TM điều kiện in vitro Xác định LC50 LD50 điều kiện in vivo Khảo sát khả diệt khuẩn sản phẩm điều... hợp để diệt vi khuẩn V parqhaemolyticus gây bệnh tôm thẻ Nội dung nghiên cứu  Khảo sát khả diệt vi khuẩn V parahaemolyticus gây bệ nh tôm thẻ chân trắng s ản phẩm GPC8 điều kiện in vitro Đồ án... ? ?Khảo sát khả diệt khuẩn sản phẩm GPC8 TM vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus gây bệnh tơm thẻ chân trắng” Mục đích nghiên cứu Thí nghiệm nhằm mục đích tìm nồng độ sản phẩm GPC8T M thích hợp để diệt