Khả năng sử dụng một số vi khuẩn lab phân lập trong khoang miệng ức chế sự tạo thành màng sinh học của lactobacillus fermentum​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP.HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢ NĂNG SỬ DỤNG MỘT SỐ VI KHUẨN LAB PHÂN LẬP TRONG KHOANG MIỆNG ỨC CHẾ SỰ TẠO THÀNH MÀNG SINH HỌC CỦA Lactobacillus fermentum Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Hoài Hương Sinh viên thực hiện: MSSV: 1311100138 Nguyễn Đặng Vân Anh Lớp: 13DSH02 TP.Hồ Chí Minh, 2017 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn TS Nguyễn Hồi Hương Giảng viên Khoa Cơng Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi trường trường Đại Học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Những kết hồn tồn khơng chép từ nghiên cứu khoa học khác hình thức Các số liệu trích dẫn đồ án hồn tồn trung thực Tơi xin chịu trách nhiệm tồn đồ án Tp.HCM, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Đặng Vân Anh i Đồ án tốt nghiệp LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành đồ án “Khả sử dụng số vi khuẩn LAB phân lập khoang miệng ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus fermentum” suốt trình học tập, rèn luyện trau dồi kiến thức em gặp phải khơng lần khó khăn nhờ có quan tâm, giúp đỡ hướng dẫn tận tình TS Nguyễn Hồi Hương, Giảng viên Khoa Công nghệ Sinh học - Thực phẩm Môi trường trường Đại học Công nghệ TPHCM, kiến thức kỹ cần thiết Cô truyền dạy mà em đạt thành ngày hôm Em xin chân thành cảm ơn cô Bên cạnh đó, em xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến Thầy Cô giảng viên Ban lãnh đạo Khoa Công nghệ Sinh học – Thực phẩm – Môi trường trường Đại học Công nghệ TPHCM tạo điều kiện giúp em tiếp cận nhiều nguồn tài liệu để hoàn thành đồ án tốt nghiệp thời gian quy định Dù đồ án hoàn thành khơng tránh khỏi sai sót định khả hiểu biết hạn hẹp thông tin tài liệu khơng khả quan để phục vụ q trình thực đồ án Kính mong nhận góp ý dạy Thầy Cô để em học hỏi thêm kinh nghiệm, tích lũy cho q trình học tập rèn luyện chuẩn bị hành trang bước sang mơi trường làm việc sau Ngồi ra, xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến ba mẹ, gia đình, người bên tạo điều kiện tốt cho trình thực đồ án tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! TP.HCM, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Đặng Vân Anh ii Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CÁM ƠN MỤC LỤC PHỤ LỤC THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU 1.Tính cấp thiết đề tài 2.Tình hình nghiên cứu 3.Mục tiêu nghiên cứu 4.Nhiệm vụ nghiên cứu 5.Phương pháp nghiên cứu 6.Các kết đạt 7.Kết cấu đồ án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan vi khuẩn Lactic (LA 1.2.Tổng quan Probiotic 1.3.Màng sinh học 1.4.Sâu CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1.Địa điểm nghiên cứu 2.2.Thời gian thực 2.3.Vật liệu thiết bị 2.4.Phương pháp luận 2.5.Phương pháp thí nghiệm iii Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1.Kết thử nghiệm sinh lý 3.2.Kết thử nghiệm sinh hóa 3.3.Kết khả sinh enzyme 3.4.Kết khả kháng khuẩn 3.5.Kết khả kháng kháng sin 3.6.Kết khảo sát khả ức chế qua xử lý nhiệt CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1.Kết luận 2.Kiến nghị TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU iv Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG  Thành phần môi trường de Man, Rogosa, Sharpe agar (MRS agar): Tween 80 Cao thịt Pepton Yest Extract D-glucose Diamonium Citrate 2g Điều chỉnh pH = 6.5 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường de Man, Rogosa, Sharpe broth (MRS broth): Tween 80 Cao thịt Pepton Yest Extract D-glucose Điều chỉnh pH = 6.5 ± 0.2 25oC  Thành phần nước muối sinh lí: NaCl Nước cất  Thành phần môi trường Glucose Phosphate broth (MR – VP broth): Peptone Dextrose K2HPO4 Nước cất v Đồ án tốt nghiệp  Thành phần môi trường Simmon citrate agar (SCA) MgSO4.7H2O NH4H2PO4 K2HPO4 Na3C6H5O7 NaCl Bromothymol blue 0,08g Agar Nước cất Điều chỉnh pH = 6.8 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường canh tryptone: Tryptone NaCl Nước cất Điều chỉnh pH = 7.5 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường Triple sugar iron agar (TSI): Cao thịt Peptone Yeast extract Lactose Sucrose Dextrose FeSO4 ii Đồ án tốt nghiệp  Thành phần môi trường Blood agar: Beef heart infusion 500g Tryptose NaCl Agar Máu cừu Nước cất Điều chỉnh pH = 7.3 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường Skim milk agar: Bột sữa gầy Casein enzymic hydrolysate Cao nấm men Dextrose Agar Điều chỉnh pH = 7.0 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường Lactobacillus biofilm medium (LBM): Peptone Cao nấm men K2HPO4 (NH4)3C6H5O7 Dextrose Cao thịt Tween 80 Điều chỉnh pH = 7.0 ± 0.2 25oC ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT LAB Lactic acid bacteria /Lactobacillales MRS de Man, Rogosa and Sharpe SCA Simmon citrate agar SAS Statistical Analysis Systems TSI Triple sugar iron TN Thí nghiệm VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng Tổng hợp nghiên cứu khảo sát số chủng probiotic việc bảo vệ miệng Bảng 1.1 Đặc điểm sinh lý số chủng vi khuẩn lactic 11 Bảng 1.2 Khả đối kháng sản phẩm biến dưỡng vi khuẩn LAB .19 Bảng 2.1 Phân loại khả kháng kháng sinh dựa vào đường kính vịng kháng 62 Bảng 3.1 Kết thử nghiệm sinh lý 64 Bảng 3.2 Kết thử nghiệm sinh hóa 67 Bảng 3.3 Kết thử nghiệm lên men carbohydrate 69 Bảng 3.4 Kết khả sinh enzyme chủng lactic 71 Bảng 3.5 Tỉ lệ kháng khuẩn chủng lactic (%) 76 Bảng 3.6 Kết kháng kháng sinh chủng lactic 77 Bảng 3.7 Kết ức chế khả tạo màng sinh học vi khuẩn lactic sau xử lý nhiệt 82 iii Đồ án tốt nghiệp Ức chế 1B 80 C UC CHE 1B O 80DO UC CHE 1B O 80DO Source Model Error Corrected Total UC CHE 1B O 80DO Note:This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the Number of Means Critical Range 104 Đồ án tốt nghiệp Ức chế 1B 100 C UC CHE 1B O 100DO 105 Đồ án tốt nghiệp UC CHE 1B O 100DO The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility Source Model Error Corrected Total R-Square 0.323811 Source NBG UC CHE 1B O 100DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note:This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Number of Means Critical Range Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping A A A A A A A A A 106 Đồ án tốt nghiệp Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N NBG A A A A A A A A Ức chế 12R2 C UC CHE 12R2 O 0DO The ANOVA Procedure Class Level Information Class NBG UC CHE 12R2 O 0DO The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility Source Model Error Corrected Total R-Square 0.299941 Source NBG 107 Đồ án tốt nghiệp UC CHE 12R2 O 0DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note:This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Number of Means Critical Range 108 Đồ án tốt nghiệp Ức chế 12R2 80 C UC CHE 12R2 O 80DO The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels NBG UC CHE 12R2 O 80DO The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility Source Model Error Corrected Total R-Square 0.471198 Source NBG UC CHE 12R2 O 80DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note:This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Number of Means Critical Range 109 Đồ án tốt nghiệp Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping A B B B B B B B B B B B B B B B Ức chế 12R2 100 C UC CHE 12R2 O 100DO The ANOVA Procedure Class Level Information Class NBG 110 Đồ án tốt nghiệp UC CHE 12R2 O 100DO The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility Source Model Error Corrected Total UC CHE 12R2 O 100DO Note:This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the Number of Means Critical Range 111 Đồ án tốt nghiệp Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping B B B B B B B B B Ức chế 30B2 C UC CHE 30B2 O 0DO The ANOVA Procedure Class Level Information Class NBG UC CHE 30B2 O 0DO The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility Source Model Error Corrected Total R-Square 0.789680 Source NBG 112 Đồ án tốt nghiệp UC CHE 30B2 O 0DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note:This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Number of Means Critical Range 113 Đồ án tốt nghiệp Ức chế 30B2 80 C UC CHE 30B2 O 80DO The ANOVA Procedure Class Level Information Class NBG UC CHE 30B2 O 80DO The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility Source Model Error Corrected Total R-Square 0.822005 Source NBG UC CHE 30B2 O 80DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note:This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Number of Means Critical Range 114 Đồ án tốt nghiệp Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping B B B B B B B E E E E E Ức chế 30B2 100 C UC CHE 30B2 O 100DO The ANOVA Procedure Class Level Information Class NBG 115 Đồ án tốt nghiệp UC CHE 30B2 O 100DO The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility Source Model Error Corrected Total R-Square 0.914693 Source NBG UC CHE 30B2 O 100DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note:This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Number of Means Critical Range A 64.243 16B B 18.488 26R1 B C B12.146 8B C C C C 116 Đồ án tốt nghiệp Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping C C C C C C C C 117 ... tháng năm 2017 Sinh vi? ?n thực Nguyễn Đặng Vân Anh i Đồ án tốt nghiệp LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành đồ án ? ?Khả sử dụng số vi khuẩn LAB phân lập khoang miệng ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus. .. thư Ngoài ra, vi? ??c phát lồi vi khuẩn có khả ức chế tạo thành màng sinh học vi khuẩn có hại khoang miệng để hạn chế khả gây sâu đồng thời mang Đồ án tốt nghiệp tính an tồn chủng vi khuẩn Probiotic... nghiên cứu Sử dụng chủng vi khuẩn lactic phân lập từ khoang miệng Mục tiêu cuối sau thực thử nghiệm khảo sát xác định xem chúng có khả Đồ án tốt nghiệp ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus