Khả năng sử dụng một số vi khuẩn lab phân lập trong khoang miệng ức chế sự tạo thành màng sinh học của lactobacillus fermentum

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP.HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢ NĂNG SỬ DỤNG MỘT SỐ VI KHUẨN LAB PHÂN LẬP TRONG KHOANG MIỆNG ỨC CHẾ SỰ TẠO THÀNH MÀNG SINH HỌC CỦA Lactobacillus fermentum Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Hoài Hương Sinh viên thực hiện: MSSV: 1311100138 Nguyễn Đặng Vân Anh Lớp: 13DSH02 TP.Hồ Chí Minh, 2017 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn TS Nguyễn Hồi Hương Giảng viên Khoa Cơng Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi trường trường Đại Học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Những kết hồn tồn khơng chép từ nghiên cứu khoa học khác hình thức Các số liệu trích dẫn đồ án hồn tồn trung thực Tơi xin chịu trách nhiệm tồn đồ án Tp.HCM, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Đặng Vân Anh i Đồ án tốt nghiệp LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành đồ án “Khả sử dụng số vi khuẩn LAB phân lập khoang miệng ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus fermentum” suốt trình học tập, rèn luyện trau dồi kiến thức em gặp phải khơng lần khó khăn nhờ có quan tâm, giúp đỡ hướng dẫn tận tình TS Nguyễn Hồi Hương, Giảng viên Khoa Công nghệ Sinh học - Thực phẩm Môi trường trường Đại học Công nghệ TPHCM, kiến thức kỹ cần thiết Cô truyền dạy mà em đạt thành ngày hôm Em xin chân thành cảm ơn cô Bên cạnh đó, em xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến Thầy Cô giảng viên Ban lãnh đạo Khoa Công nghệ Sinh học – Thực phẩm – Môi trường trường Đại học Công nghệ TPHCM tạo điều kiện giúp em tiếp cận nhiều nguồn tài liệu để hoàn thành đồ án tốt nghiệp thời gian quy định Dù đồ án hoàn thành khơng tránh khỏi sai sót định khả hiểu biết hạn hẹp thông tin tài liệu khơng khả quan để phục vụ q trình thực đồ án Kính mong nhận góp ý dạy Thầy Cô để em học hỏi thêm kinh nghiệm, tích lũy cho q trình học tập rèn luyện chuẩn bị hành trang bước sang mơi trường làm việc sau Ngồi ra, xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến ba mẹ, gia đình, người bên tạo điều kiện tốt cho trình thực đồ án tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! TP.HCM, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Đặng Vân Anh i i Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CÁM ƠN ii MỤC LỤC iii PHỤ LỤC THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ii DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC HÌNH ẢNH iv MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài .1 Tình hình nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Các kết đạt Kết cấu đồ án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vi khuẩn Lactic (LAB) 1.2 Tổng quan Probiotic 19 1.3 Màng sinh học 31 1.4 Sâu 37 CHƯƠNG II: VẬT 44 LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm nghiên cứu 44 2.2 Thời gian thực 44 2.3 Vật liệu thiết bị 44 2.4 Phương pháp luận 45 Đồ án tốt 2.5 Phương pháp thí nghiệm 47 nghiệp Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN .64 3.1 Kết thử nghiệm sinh lý 64 3.2 Kết thử nghiệm sinh hóa 67 3.3 Kết khả sinh enzyme 71 3.4 Kết khả kháng khuẩn 75 3.5 Kết khả kháng kháng sinh 77 3.6 Kết khảo sát khả ức chế màng sinh học vi khuẩn lactic sau qua xử lý nhiệt 81 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .84 Kết luận 84 Kiến nghị 84 TÀI LIỆU THAM KHẢO 85 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU 94 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC THÀNH PHẦN MƠI TRƯỜNG  Thành phần mơi trường de Man, Rogosa, Sharpe agar (MRS agar):  Tween 80 1ml  Cao thịt  Đồ án tốt nghiệp  MgSO4.7H2O 0.2g 10g  MgSO4.4H2O 0.2g Pepton 5g  K2PO4 2g  Yest Extract 5g  D-glucose 10g   Nước cất Agar 1000ml 2%  Diamonium Citrate 2g  Điều chỉnh pH = 6.5 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường de Man, Rogosa, Sharpe broth (MRS broth):  Tween 80  Diamonium Citrate 2g 1ml  Cao thịt 10g  MgSO4.7H2O 0.2g  Pepton 5g  MgSO4.4H2O 0.2g  Yest Extract 5g  K2PO4 2g  D-glucose 10g  Nước cất 1000ml  Điều chỉnh pH = 6.5 ± 0.2 25oC  Thành phần nước muối sinh lí:  NaCl 9g  Nước cất 1000ml  Thành phần môi trường Glucose Phosphate broth (MR – VP broth):  Peptone 7g  Dextrose 5g  K2HPO4 5g  Nước cất 1000ml  Thành phần môi trường Simmon citrate agar (SCA)  MgSO4.7H2O 0,2g  NH4H2PO4 1g  K2HPO4 1g  Na3C6H5O7 2g  NaCl 5g  Bromothymol blue 0,08g  Agar 15g  Nước cất 1000ml  Điều chỉnh pH = 6.8 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường canh tryptone:  Tryptone 10g  NaCl 5g  Nước cất 1000ml  Điều chỉnh pH = 7.5 ± 0.2 25oC  Thành phần môi trường Triple sugar iron agar (TSI): i i  tra  C ct 5g a 3g  o  Na2S2O3 La 0,3g ct  os Phenol e red 10 0,024g g   15g Su  cr Nước os cất e 1000ml 10  t h ị t g  P e p t o n e g  Y e a s t e x g NaCl Agar Điều chỉnh  D pH = ex 7.0 ± tr 0.2 os 25oC e 1g  Fe SO 0,2 g i i Means with the same letter are D M N NB u e G A 8B 13 B B B B B B B B B B B B B B B 00 16 B 00 21 R2 00 21 B2 00 23 B2 00 26 R1 00 7B 00 23 B1 00 8R Ức chế 12R2 1000C UC CHE 12R2 O 100DO The ANOVA Procedure Cl Le Val as vel ue NB 16 G B Clas L Nu 27 m Nu 27 m UC CHE 12R2 O 100DO So ur Mo del Err or Co rre The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility D S M F Pr F u ea Va > 72 20 04 63 R- C Ro In S o ot hi 2.550202 94 UC CHE 12R2 O 100DO So D AM F Pr ur F nea Val > NB G The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Al ph Err 18 or Err 35 or Nu m Cri 10 10 11 11 11 11 tic .5 .6 Means with the same letter are not Dunc M N NB an e G A 16 26 R1 A B B B B B B A 23 B2 16 B 23 B1 Means with the same letter are not Dunc M N NB an e G B 21 R2 B B B B B B B B 21 B2 7B 8B 0 8R Ức chế 30B2 00C UC CHE 30B2 O 0DO The ANOVA Procedure Cl Le Val as vel ue NB 16 G B UC CHE 30B2 O 0DO So ur Mo de Err or Co rre Clas L Nu 27 m Nu 27 m The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility D Su M F Pr F m ea Va > 12 8< 60 00 4 2 R- C Ro In S o ot hi 15 62.83838 7 So D A M F Pr ur F n e Val > NB 16 8< G 73 00 UC CHE 30B2 O 0DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Al ph Err 18 or Err 24 or Nu m Cri 27 28 29 29 30 30 30 30 tic 7 Means with the same letter are not significantly Duncan M N NB Groupin e G A 92 8B A B A 85 21 B2 B A B A B A B A C B A C B A C 84 21 R2 B C B C C C D D D 79 23 B1 66 7B 60 8R 52 26 R1 23 23 B2 20 16 B Ức chế 30B2 800C UC CHE 30B2 O 80DO The ANOVA Procedure Cl Le Val as vel ue NB 16 G B UC CHE 30B2 O 80DO So ur Mo del Err or Co rre Clas L Nu 27 m Nu 27 m The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility D Su M F Pr F m e Va > 1 < 00 8 6 R- C Ro In S o ot hi 12 62.35440 So D AM F P ur F n e Val r NB 13 1 < G 20 0 UC CHE 30B2 O 80DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Al ph Err 18 or Err or Nu m Cri 21 22 23 23 24 2 24 tic 6 4 .7 Means with the same letter are not significantly Duncan M N NB Groupin e G A 92 8B A A 89 23 B1 A B A 79 21 B2 B A B A 72 21 R2 B C B C 63 7B B C D C D C D B E E D E D E E 57 8R 46 26 R1 35 16 B 24 23 B2 Ức chế 30B2 1000C UC CHE 30B2 O 100DO The ANOVA Procedure Cl Le Val as vel ue NB 16 G B Clas L Nu 27 m Nu 27 m UC CHE 30B2 O 100DO So ur Mo de Err or Co rre The ANOVA Procedure Dependent Variable: InhibitionAbility D Su M F Pr F m ea Va > 11 < 03 00 98 R- C Ro In S o ot hi 11.14779 39 So D AM F Pr ur F nea Val > NB 1 < G 00 UC CHE 30B2 O 100DO The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for InhibitionAbility Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Al ph 05 Err 18 or Err or Nu m Cri 12 13 13 13 14 14 14 14 tic Means with the same letter are not Dunc M N NB an e G A 64 16 B B B C C C C C B 18 26 R1 12 8B 23 B2 7B Đồ án tốt nghiệp Means with the same letter are not Dunc M N NB an e G C C C C C C C C 21 B2 21 R2 23 B1 8R 117 ... 2017 Sinh vi n thực Nguyễn Đặng Vân Anh i Đồ án tốt nghiệp LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành đồ án Khả sử dụng số vi khuẩn LAB phân lập khoang miệng ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus fermentum ... Ngồi ra, vi c phát lồi vi khuẩn có khả ức chế tạo thành màng sinh học vi khuẩn có hại khoang miệng để hạn chế khả gây sâu đồng thời mang tính an tồn chủng vi khuẩn Probiotic nhiều nhà khoa học quan... nghiên cứu Sử dụng chủng vi khuẩn lactic phân lập từ khoang miệng Mục tiêu cuối sau thực thử nghiệm khảo sát xác định xem chúng có khả ức chế tạo thành màng sinh học Lactobacillus fermentum khơng