Bước đầu nghiên cứu thu nhận chitosanase từ aspergillus spp ​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP HCM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THU NHẬN CHITOSANASE TỪ ASPERGILLUS SPP Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGÔ ĐẠI NGHIỆP Sinh viên thực MSSV: 0851110196 : PHẠM MINH SANG Lớp: 08DSH6 TP Hồ Chí Minh, 2012 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ ix DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ Error! Bookmark not defined DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ix MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đại cương chitin chitosan 1.1.1 Lịch sử phát 1.1.2 Phân bố đặc điểm sinh hóa 1.1.2.1 Phân bố 1.1.2.2 Đặc điểm sinh hóa 1.1.3 Phương pháp thu nhận Chitosan oligomer từ Chitin 10 1.1.4 Ứng dụng Chitosan dẫn xuất thủy phân từ Chitosan .13 1.2 Đại cương hệ enzyme Chitosanase 16 1.2.1 Định nghĩa 16 1.2.2 Nguồn gốc phân loại 16 1.2.3 Các đặc tính hệ enzyme chitosanase 19 1.2.3.1 Trọng lượng phân tử 19 1.2.3.2 Tính đặc hiệu chất 19 1.2.3.3 Đặc tính thủy phân 20 1.2.3.4 Đặc tính động học 21 i Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp 1.2.3.5 Ảnh hưởng pH nhiệt độ lên hoạt động chitosanase 22 1.2.3.6 Chất hoạt hóa chất ức chế 24 1.2.4 Cảm ứng tổng hợp, tinh chế xác định hoạt tính chitosanase 24 1.2.4.1 Cảm ứng sinh tổng hợp chitosanase 24 1.2.4.2 Tinh chế chitosanase 25 1.2.4.3 Phương pháp xác định hoạt tính chitosanase 26 1.2.5 Ứng dụng chitosanase 26 1.2.6 Tình hình nghiên cứu chitosanase Thế giới Việt Nam 27 1.2.6.1 Tình hình nghiên cứu chitosanase giới 27 1.2.6.2 Tình hình nghiên cứu chitosanase Việt Nam .28 1.3 Khái quát lên men bán rắn 29 1.3.1 Định nghĩa lên men 29 1.3.2 Lên men bán rắn 29 1.3.3 So sánh lên men bán rắn với lên men chìm 30 1.4 Khái quát Aspergillus spp 32 1.4.1 Giới thiệu Aspergillus spp 32 1.4.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa Aspergillus spp 33 1.4.3 Một số ứng dụng Aspergillus spp 34 1.5 Khái quát nguồn nguyên liệu cám gạo vỏ trấu nước 35 1.5.1 Nguồn cám gạo nước 35 1.5.2 Nguồn vỏ trấu nước 36 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu 38 2.1.1 Chủng giống 38 ii Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp 2.1.2 Cơ chất cảm ứng 38 2.1.3 Cơ chất nuôi cấy 38 2.1.4 Hóa chất thiết bị 38 2.1.4.1 Hóa chất 38 2.1.4.2 Thiết bị 39 2.1.5 Môi trường 39 2.1.5.1 Môi trường giữ giống 39 2.1.5.2 Môi trường nhân giống 39 2.1.5.3 Mơi trường kiểm tra hoạt tính enzyme 40 2.1.5.4 Môi trường lên men bán rắn 41 2.2 Phương pháp 41 2.2.1 Phương pháp xác định độ ẩm nguyên liệu 41 2.2.2 Phương pháp xác định trực tiếp số lượng bào tử 42 2.2.2.1 Cấy nhân sinh khối 42 2.2.2.2 Xác định số lượng bào tử phương pháp đếm buồng đếm hồng cầu …………………………………………………………………… 42 2.2.3 Phương pháp cấy điểm mơi trường thạch đĩa chọn chủng nấm mốc có hoạt tính chitosanase cao 43 2.2.3.1 Nguyên tắc 43 2.2.3.2 Tiến hành 43 2.2.4 Phương pháp khuếch tán thạch đĩa 44 2.2.5 Phương pháp mơ tả hình thái vi sinh vật 44 2.2.5.1 Quan sát đại thể 44 2.2.5.2 Quan sát vi thể 44 iii Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp 2.2.6 Phương pháp nuôi cấy môi trường bán rắn 44 2.2.7 Phương pháp so màu với thuốc thử DNS (acid 3,5 – dinitrosalicylic) xác định hoạt tính chitosanase 45 2.2.7.1 Nguyên tắc 45 2.2.7.2 Tiến hành 45 2.2.8 Phương pháp Bradford – xác định hàm lượng protein 47 2.2.8.1 Nguyên tắc 47 2.2.8.2 Tiến hành 47 2.2.9 Phương pháp trích ly enzyme chitosanase 48 2.2.10 Phương pháp bố trí thí nghiệm xử lý thống kê 49 2.2.10.1 Bố trí thí nghiệm 49 2.2.10.2 Xử lý thống kê 49 2.2.11 Bố trí thí nghiệm 49 2.2.11.1 Thí nghiệm khảo sát chọn chủng nấm mốc sinh tổng hợp chitosanase cao…………………………………………………………………………… 49 2.2.11.2 Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ chất cảm ứng 49 2.2.11.3 Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng độ thống khí 50 2.2.11.4 Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng độ ẩm môi trường 50 2.2.11.5 Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ cấy giống 50 2.2.11.6 Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi cấy 51 2.2.11.7 Nuôi cấy thu enzyme chitosanase 51 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - BIỆN LUẬN 3.1 Khả sinh tổng hợp chitosanase từ năm chủng nấm mốc khảo sát 52 3.1.1 Định tính khả sinh tổng hợp chitosanase 52 iv Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp 3.1.2 Định lượng khả sinh tổng hợp chitosanase .53 3.2 Hình thái đại thể vi thể chủng O2 54 3.2.1 Hình thái đại thể 54 3.2.2 Hình thái vi thể 55 3.3 Ảnh hưởng nồng độ chất cảm ứng đến khả sinh tổng hợp chitosanase 55 3.4 Ảnh hưởng độ thống khí đến khả sinh tổng hợp chitosanase 58 3.5 Ảnh hưởng độ ẩm môi trường đến khả sinh tổng hợp chitosanase 61 3.6 Ảnh hưởng tỷ lệ cấy giống đến khả sinh tổng hợp chitosanase 64 3.7 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp chitosanase 67 3.8 Kết lên men bán rắn thu nhận enzyme 70 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận 71 4.2 Kiến nghị 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 PHỤ LỤC .1 v Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CMC Carboxy Methyl Cellulose GlcN Glucosamine GlcNAc N – acetyl glucosamine kDa Kilo Dalton O1 Aspergillus oryzae – O2 Aspergillus oryzae – N1 Aspergillus niger – N3 Aspergillus niger – N7 Aspergillus niger – NADH Nicotinamide adenine dinucleotide PGA Potato Glucose Agar LSF Liquid state fermentation SSF Solid state fermentation vi Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp DANH MỤC CÁC BẢNG TT Bảng 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 10 11 12 1.6 1.7 1.8 1.9 2.1 2.2 2.3 13 2.4 14 3.1 15 3.2 16 3.3 17 3.4 18 3.5 19 3.6 20 3.7 21 3.8 22 3.9 23 3.10 24 3.11 25 3.12 26 3.13 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp DANH MỤC CÁC HÌNH TT Hình 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 3.1 3.2 3.3 10 11 12 PL1 PL2 PL3 PL4 viii Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp 4.1 Kết luận Trên sở kết nghiên cứu thu được, người thực đề tài đến số kết luận: Chủng giống nấm Aspergillus oryzae – tơ có dạng bơng, cịn non khuẩn lạc có màu trắng, tiếp tục phát triển, khuẩn lạc chuyển thành vàng hoa cau Khuẩn lạc mọc lan khắp mặt thạch theo hình trịn khơng tiết sắc tố vào môi trường Chủng giống nấm Aspergillus oryzae – nghiên cứu có khả sinh tổng hợp chitosanase có hoạt tính 0,1632 (UI/g) Điều kiện ni cấy tối ưu cho mẫu giống nấm Aspergillus oryzae – tỷ lệ cám gạo : trấu : chitosan = 45 : 15 : 40 (tính theo % khối lượng), độ ẩm 60%, tỷ lệ cấy giống ml dịch huyền phù bào tử có mật độ 4,6 10 bào tử/ml, thời gian lên men 40 tính từ thời điểm bắt đầu cấy giống Với điều kiện ni cấy này, enzyme thu có hoạt tính trung bình 1,11 (UI/g) 4.2 Kiến nghị Do thời gian thực đề tài có hạn, người thực đề tài đạt số kết Vì vậy, người thực đề tài xin đề nghị cần nghiên cứu thêm số vấn đề sau: Thực tủa phân đoạn enzyme thu tiến hành nuôi cấy điều kiện tối ưu nêu loại dung môi tủa khác nhằm chọn phân xuất tủa tối ưu với dung môi chọn dung môi ưu việt Cần tiến hành nghiên cứu việc cải thiện giống nhằm tăng cao khả sinh tổng hợp chitosanase Xác định điều kiện hoạt động tối ưu cho enzyme chitosanase hoạt động như: thời gian phản ứng, nhiệt độ phản ứng, pH thích hợp cho phản ứng, tỷ lệ enzyme – chất… 71 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp Tài Liệu Tham Khảo Tài Liệu Tiếng Việt [1] Phạm Lê Dũng, Trịnh Bình, Lại Thu Hiền cộng (1997), Vật liệu sinh học từ chitin, Viện Hóa học – Viện Cơng nghệ sinh học, Trung tâm Khoa học Công nghệ Quốc gia Hà Nội [2] Trần Cảnh Đình, Nguyễn Lan Anh, Vũ Thị Quyên (2012), Nghiên cứu tuyển chọn chủng giống vi sinh vật có khả sinh enzyme chitosanase để sản xuất glucosamine, Bản tin Viện nghiên cứu hải sản – Bộ Nông nghiệp phát triển Nông thôn, số 23 (1/2012) [3] Đinh Minh Hiệp (2001), Nghiên cứu đặc tính enzyme chitinase thu nhận từ nấm mật Coprinus fimentarius số ứng dụng, Luận văn thạc sĩ sinh học, Đại học Quốc gia Thành Phố Hồ Chí Minh – Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Thành phố Hồ Chí Minh [4] Châu Văn Minh (1996), Sử dụng chitosan làm chất bảo quản tươi, Tạp chí Khoa học, 4, 34 [5] Trần Thạnh Phong (2004), Khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme cellulase từ Tricoderma reesei Aspergilllus niger môi trường lên men bán rắn, Luận văn thạc sĩ khoa học sinh học, Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên – Đại Học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh [6] Đỗ Hữu Phước (2004), Đặc san khoa học kỹ thuật chăn nuôi, số [7] Bùi Thanh Trung (2011), Sản xuất chitin – chitosan từ vỏ tôm ứng dụng làm màng bảo quản cà chua, Đồ án tốt nghiệp, Trường đại học Kỹ Thuật Cơng Nghệ Thành phố Hồ Chí Minh, Thành phố Hồ Chí Minh [8] Đỗ Anh Tuấn (2004), Nghiên cứu ảnh hưởng pH lên cấu trúc phân tử enzyme chitosanase từ vi khuẩn Bacillus circulans MH – K1, Luận văn thạc sĩ sinh học, Đại học Quốc gia Thành Phố Hồ Chí Minh – Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Thành phố Hồ Chí Minh [9] Lâm Ngọc Tuyết (2004), Biểu xác định số đặc tính chitosanase tái tổ hợp từ vi khuẩn Bacillus circulans MH – K1, Luận văn thạc sĩ sinh học, 72 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh – Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Thành phố Hồ Chí Minh Tài liệu tiếng Anh [10] Akikazu Ando, Kayo N., Miyoko Y., Hirofumi S., Yasuo K., Hajime H., Minuro Y., Takaaki F (1992), Primary structure of chitosanase produced by Bacillus circulans MH – K1, J Gen Appl Microbiol, 38, 135 – 144 [11] Akira Ohtakara, Masato I., Masaru M (1988), Action of microbiol chitinase on chitosan with different degrees of deacetylation, Agric Biol Chem., 52 (12), 3181 – 3182 [12] Alonso M J., Sanchez A (2003), The potential of chitosan in ocular drug delivery, J Pharm Pharmacol., 55 (11), 145 – 163 [13] Aruchami M., Gowri N., Sundara – Rajuhu G (1986), Chitin in nature and technology, Edited by R A A Muzzarelli, C Jeuniaux, G W Gooday, Plenum Press, Newyork, 263 – 265 [14] Boucher I., Dupuy A., Vidal P., Neugebauer W A and Brzezinski R (1992), Purification and characterization of chitosanase from Streptomyces N 174, App Microbiol Biotechnol, 38, 188 – 193 [15] Chen A S., Taguchi T., Sakai K., Kikuchi K., Wang M W., Miwa I (2003), Antioxidant activities of chitobiose and chitotriose, Biol Pharm Bull., 26 (9), 13, 26 – 30 [16] Chitosanase assay (1986), Chiang Mai University, Thailand [17] Cuero R G., Osuji G (1991), Chitosanase bioinduction by two strains of Bacillus sp and chitosan in peanut: an effective biocontrol of pathogenic and toxigenic fungi, Meded Fac Landbouwwet, Rijksuniv Gent., 56, 1415 – 1425 [18] Daris B., Eveleigh D E (1984), Chitosanase: occurrence, production and immobilization in chitin chitosan and related enzyme, ed J D ZiKakis, Academic Press, FL, 164 – 179 [19] Domard A., Rinaudo M (1984), Gel permeation chromatography of cationic polymer on cationic porous silicagels, Polym Commun., 25, 55 – 58 73 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp [20] Domardd A., Cartier N (1989), Glucosamin oligomers: Reparation and characterization, Int J Biol Macromol., 11, 297 – 302 [21] Dumas – Gaudot E., Grenier J., Furlan V., and Asselin A (1992), Chitinase, Chitosan and β – 1,3 glucanase activities in Allium and Pisum roots colonized by Glomus species, Plant Sci, 84, 17 – 24 [22] Edward M M., Arthur F M., Stephen R E., Ryszard N., Jon D R (1996), X – ray structure of anti – fungal chitosanase from Streptomyces N 174, Nature Structure Biology, (2), 155 – 162 [23] El Quaktaoui S., Asselin A (1992), Diversity of chitosanase activity in cucumber, Plant Science, 85, 33 – 41 [24] Fenton D M., Everleigh D E (1981), Purification and mode of action of a chitosanase from Penicillium islandicum, J Gen Microbiol., 126, 151 – 165 [25] Fukamizo T., Ohkawa T., Tkeda Y., Goto S (1994), Specificity of chitosanase from Bacillus pumilus, Biochem Biophys: Acta, 1205, 183 – 188 [26] Grenier J., Benhamous N., Asselin A (1991), Colloidal gold – complexed chitosanase a new probe for ultra structure localization of chitosan in fungi, J Gen Microbiol., 137, 2007 – 2010 [27] Hedges A R., Wolfe S (1974), Extracallular enzyme from Myxobacter AL – that exhibits both β – 1, – glucanase and chitosanase activities, J Bacteriol, 120, 844 – 853 [28] Ho – Geun Yoon, Hee – Yun K., Young – Hee L., Hye – Kyung K., Dong – Hoon S., Bum – Shik H., Hong – Yon Cho (2000), Thermostable chitosanase from Bacillus sp strain CK4: cloning and expression of the gene and characterization of the enzyme, Applied and Environmental Microbiology, 66 (9),3727 – 3734 [29] Horowitz ST, Roseman S., Blumental HJ (1975), The preparation of glucosamine oligosaccharide, Separation J Am Chem Soc.,79, 5046 – 5049 74 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp [30] Hugo Trembley, Josse B., Ryszard B (2000), A common molecular signature unifies the chitosanase belonging to families 46 and 80 of glycoside hydrolase, Can J Mcribiol, 46, 952 – 955 [31] Jun – ichi Saito, Akiko Kita, Yoshiki Higuchi, Yoshiho Nagata, Akikazu Ando, Kunio Miki (1999), Crystal structure of chitosanase from Bacillus circulans MH – K1 at 1,6 Å Resolution and Its Subtrate Recognition Mechanism, J Biol Chem., 30818 – 30825 [32] Machida M., Gomi K (2010), Aspergillus Molecular Biology and Genomics An Over view ISBN: 978 – – 904455 – 53 – [33] Majeti N V., Ravi Kumar (2000), A review of chitin and chitosan applications, Reactive & Functional Polymers, 46, – 27 [34] Maurice Raimbault (1988), General and microbiological aspects of solid subtrate fermentation, EJB Electronic Journal of Biotechnology ISSN: 0717 – [35] Mihara S (1961), Change in glucosamines in content of Chlorella cells during the course of their life cycle, Plant Cell Physiol, 2, 15 – 29 [36] Minoru Yabuki, Akika Uchiyama, Kukino Suzuki, Akikazu Ando, Takaaki Fujii (1988), Purification and properties of chitosanase from Bacillus circulans MH – K1, J Gen Appl Microbiol., 34, 255 – 270 [37] Monaghan R L D E., Tewari R P (1973), Chitosanase a novel enzyme, [38] Nagai T., Sawayanagi Y., Nambu N (1984), Application of chitin and chitosan to pharmacential preparations, In chitin, chitosan and Related enzymes (J Zikakis Ed.), Academic Press, New York, 21 – 39 [39] Nelson P E., Toussoun T A & Cook R J (1981), Fusarium: deseases, biology and taxonomy, Penn State Univ Press, University Part, PA, 142 – 146 [40] Ohtakara A., Ogata H., Takenomi Y & Mitsutomi M (1984), Purification and characterisation of chitosanase from Streptomyces griceus In chitin, chitosan 75 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp and Related Enzyme, ed J P Zikakis Academic Press, Orlando, FL, 147 – 159 [41] and Okajima S., A Ando, H Shimoyama, T Fujii (1994), Purification characterization of an extracellular chitosanase produced by Amycolatopsis sp CsO J Ferment, Bioeng., 77, 617 – 620 [42] Palapura S., Kohn J (1992), Trends indevelopment of bioresorbable polymers for medical applications, J Biomaterial Applications, 6, 216 – 250 [43] Reyes F., Lahoz R., Martinez M J., Alfonso C (1985), Chitosanase in autolysis of Mocor rouxii, Mycopathologia, 89, 181 – 187 [44] Rondle C J M & Morgan W T J (1995), The determination of glucosamin and galactosamine, Biochem J., 61, 586 – 589 [45] Seino H., Tsukuda K., and Shimasue V (1991), Properties and action pattern of a chitosanase from Bacilus sp PI – 7S, Agric Biol Chem., 55, 2421 – 2432 [46] Shimosaka M., Kumehara M., Zhang X – Y, Nogawa M., Okazaki M (1996), Cloning and cheraterization of a chitosanase gene from the plant pathogenic fungus Fusarium solani, Journal of Fermentation and Bioengineering, 82, 426 – 431 [47] Somashekar D., Richard Joseph (1995), Chitosanase properties and applications: A review, Bioresourse Technology, 55, 35 – 45 [48] Synowiecki J., Al – Khateeb N A (2003), Production, Properties, and some new applications of chitin and its derivatives, Crit Rev Food Sci Nutr., 43 (2), 71, 145 [49] Tanabe T., Morinaga K., Fukamizo T., Mitsutomi M (2003), Novel chitosanase from Streptomyces griceus HUT 6037 with transglucosylation activity, Biosci Biotechnol and Biochem., 67, 354 – 364 [50] Valérie Dodane, Vinod D Vilivalam (1998), Pharmaceutical applications of chitosan, PSTT, (6), 246 – 253 76 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp [51] Ward O P Qin, W M Dhanjoon, J Ye J (2005), Physiology and biotechnology of Aspergillus, Biotechnol, 49, 39 – 44 [52] Wei Gu, Tingting W., Jiang Z., Yunyu S., Haiyan Liu (2003), Molecular dynamics simulation of the unfolding of the human prion protein domain under low pH and high temperature conditions, Biophysical Chemistry, 104, 79 – 94 [53] Inc William J Hennen, Ph D (1996), Chitosan, Woodlan Publishing [54] Yoshihiro S., Saburo M (1995), Application of chitin and chitosan for biomaterials, Biotechnol and Gene Eng Rev., Vol 13, 383 – 420 [55] Zhao Q., Agger M P., Fitzpatrick M., Anderson J M., Hilter A., Stockes K., Urbanski P (1990), Cellular interactions with biomaterials: invivo cracking of pre – stressed Pelletthane 2363 – 80 Å, J Biomed and Material Res., 24, 621 – 637 77 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp PHỤ LỤC Phụ lục 1: Khuẩn lạc đường kính vành khuyên phân giải Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp Phụ lục 2: Bình nhân giống mơi trường lúa chủng O2 Phụ lục 3: vịng thủy phân chitosan – kết kiểm tra định tính phương pháp đục lỗ thạch P 0.14 0.12 ∆OD 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 ∆OD ... tài ? ?Bước đầu nghiên cứu thu nhận chitosanase từ Aspergillus spp. ” khóa luận tốt nghiệp Tình hình nghiên cứu Trong nước: + Bước đầu nghiên cứu thu nhận chế phẩm enzyme chitosanase kỹ thu? ??t từ Streptomyces... 3.13 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp DANH MỤC CÁC HÌNH TT Hình 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 3.1 3.2 3.3 10 11 12 PL1 PL2 PL3 PL4 viii Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ. .. cho ứng dụng nhiều SSF 31 Bước đầu nghiên cứu thu nhận Chitosanase từ Aspergillus spp 1.4 Khái quát Aspergillus spp 1.4.1 Giới thiệu Aspergillus spp Aspergillus spp thu? ??c: Giới: Fungi Ngành: