Chương 1 nhóm XOẮN KHUẨN

Chương Nhóm xoắn khuẩn • Spirochaetaceae (2/4giống: Serpulina, Borelia) Leptospiraceae (Leptospira) Lịch sử -phân bố: - 1800 Sông Nil - 1918 Leptospira -1967 (WHO) Leptospira bệnh chung - 1982 chia 170 serovar thuộc 19 serogroup (nay >200 serovar, 23 serogroup) - Việt Nam, 1921 (người) : “sốt ruộng lúa” - Phát nhiều loài vât khác ghi nhận nhóm heo rối loạn sinh sản có tỷ lệ nhiễm cao Phân bố rộng, lây lan qua tiêu hố, da, niêm mạc Gan chó Sơ đồ truyền lây Thú hoang, loài gậm nhấm (nước tiểu) Nứơc, đất nhiễm Người Gia súc LEPTOSPIRA • Phân loại Lớp: Schizomycetes Bộ: Spirochaetales Họ: Leptospiraceae loài - Lep interrogans (gây bệnh) - Lep biflexa (sống hoại sinh) Phân biệt lồi LEPTOSPIRA ( Hình thái) – Cấu trúc dạng xoắn, số vòng xoắn nhiều, mảnh sát (C,S.) – Di động cấu tạo – Không bắt màu Gram (Gram âm) – Nhuộm đặc biệt: Romanopski, Fontana-tribondeau Leptospira (cấu tạo) • • • • • • Vỏ (protein, lipits, LPS) bao quanh Thành tế bào (peptidoglycan) Hai tiên mao vỏ thành tế bào Kích thước (10-20 µm chiều dài; 0,1 µm ngang) Kính hiển vi tụ quang đen đối pha Kính hiển vi quang học (nếu khơng nhuộm) LEPTOSPIRA (Ni cấy) - Hiếu khí bắt buộc - Nhiệt độ: 27-30 o C - pH: 7,2-7,6 - Axit béo chuỗi dài (tween) : nguồn carbon - muối ammonium : aminoaxit - Vit nhóm B (B1, B12), Fe, Ca, Mg… - Leptospira : lỏng, bán lỏng (0,1-0,2% agar), đặc (0,8-1% agar) - Huyết thỏ (8-10%)? - Môi trường chọn lọc chứa kháng sinh Leptospira (ni cấy) • EMJH : Elling hausen McCullough (1965) Johnson Harris (1967) EMJH + 1% huyết thỏ tươi tween 80/40 - Môi trường lỏng: đục, xuất hạt nhỏ lắng xuống - Bán lỏng: nhiều vòng phát triển dày đặc vài mm bề mặt - Đặc: kích thước khuẩn lạc – nồng độ agar Khuẩn lạc Leptospira / thạch máu Leptospira (Sức đề kháng) • Leptospira chết nhanh/ khơ, ánh sáng mặt trời, pH;axit, • • • chất sát trùng thông thường Vài giờ/ nước tiểu trung tính, kiềm nhẹ Thịt: thời gian ngắn Thịt đơng lạnh: 1-2 tuần • Tồn nhiệt độ thấp (nitơ lỏng) • Trong mơi trường hàng tháng (ẩm, nhiệt độ thấp, pH trung tính, kiềm nhẹ) Leptospira (Kháng nguyên-độc tố) • Kháng nguyên bề mặt: Protein, lipid, LPS Không chịu nhiệt, chứa (epitop) Serogroup, serovar (> 200 serovar thuộc 23 serogroup) • • • • • • Kháng nguyên thân: Mỗi serovar – kết hợp vật chủ chuyên biệt Mỗi vật chủ nhiễm nhiều serovar Một serovar diện nhiều vật chủ Vùng địa lý khác serovar khác Độc tố tiêu huyết • • • Không lên men đường Miễn dịch với serovar nhiễm Gây bệnh Lepto cho động vật máu nóng lạnh (sốt, hoàng đản, sảy thai, tiểu máu ) Leptospira: sống nhân lên thận (vật hữu nhũ) Trâu, bị: haemoglobin niệu, khơng triệu chứng, sốt nhẹ viêm vú, sữa (giảm sản lượng sữa), sảy thai, đẻ non,bê yếu Heo: Sảy thai, chết sau sinh, con, heo yếu Chó: Hồng đản, viêm thận Ngựa: nhẹ, mãn Leptosipra (chẩn đốn) • Phát Leptospira Nước tiểu Mô bệnh ly tâm quan sát, FAT tiêm thú máu nuôi cấy MAT xử lý nuôi cấy MAT Quan sát FAT PCR (polymerase chain reaction) ELISA Phản ứng FAT (fluorescence antibody test) Leptospira (chẩn đốn ) • Phát kháng thể (MAT: Microscopic agglutination test ) Mức độ ngưng kết đánh giá - +: tất xoắn khuẩn tụ lại, khơng cịn xoắn khuẩn tự - 3+ : xuất 75% ngưng kết - 2+ : với 50% ngưng kết - 1+ : với 25% ngưng kết Khơng ngưng kết : âm tính 2ml dung dịch đệm PBS Phản ứng MAT (vi ngưng kết) Pha loãng KN … 1ml KN chuẩn 4,9ml dung dịch đệm PBS 0,1 ml HT … Pha loãng HT O O O OOO Quan sát kính hiển vi đen … … Mỗi giếng cho 50µl dung dịch PBS 50µl Mẫu huyết pha lỗng 1/50 50µl 50µl 50µl …… 1/100 1/200 1/400 1/800 …… Quan sát kính hiển vi đen XÁC ĐỊNH HIỆU GIÁ NGƯNG KẾT ... Lịch sử -phân bố: - 18 00 Sông Nil - 19 18 Leptospira -19 67 (WHO) Leptospira bệnh chung - 19 82 chia 17 0 serovar thuộc 19 serogroup (nay >200 serovar, 23 serogroup) - Việt Nam, 19 21 (người) : “sốt... carbon - muối ammonium : aminoaxit - Vit nhóm B (B1, B12), Fe, Ca, Mg… - Leptospira : lỏng, bán lỏng (0 ,1- 0,2% agar), đặc (0,8 -1% agar) - Huyết thỏ (8 -10 %)? - Môi trường chọn lọc chứa kháng sinh... … 1ml KN chuẩn 4,9ml dung dịch đệm PBS 0 ,1 ml HT … Pha loãng HT O O O OOO Quan sát kính hiển vi đen … … Mỗi giếng cho 50µl dung dịch PBS 50µl Mẫu huyết pha lỗng 1/ 50 50µl 50µl 50µl …… 1/ 100 1/ 200