Tổng hợp các alkyl cacboxylat của naphthol as as ol as ca làm cơ chất nhuộm esterase đặc hiệu tế bào bạch cầu dòng mono

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN THỊ THANH TÂM TỔNG HỢP CÁC ALKYL CACBOXYLAT CỦA NAPHTHOL AS; AS-OL; AS-CA LÀM CƠ CHẤT NHUỘM ESTERASE ĐẶC HIỆU TẾ BÀO BẠCH CẦU DÒNG MONO LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2019 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu hợp chất Naphtol AS-thế cacboxylat 1.2 Tổng hợp este 3-[(N-phenyl thế)carbamoyl]naphtalen-2-yl cacboxylat 1.3 Tính chất alkyl cacboxylat 3-[(N-phenyl thế)carbamoyl]naphtalen-2- yl cacboxylat 1.3.1 Tính chất vật lý 1.3.2 Tính chất phổ 1.3.3 Tính chất hóa học 1.4 Ứng dụng để nhuộm esteraza bạch cầu ngƣời 10 1.4.1 Bệnh bạch cầu cấp phân loại thể bệnh 10 1.4.2 Giới thiệu esteraza 11 1.4.3 Cơ chất dùng nhuộm esteraza không đặc hiệu bạch cầu ngƣời 16 CHƢƠNG - THỰC NGHIỆM 19 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.3 Hóa chất thiết bị 19 2.3.1 Hóa chất 19 2.3.2 Các dụng cụ thiết bị 19 2.4 Các phần mềm sử dụng 21 2.5 Sơ đồ phản ứng chung quy trình thực nghiệm 21 2.6 Thực nghiệm 22 2.6.1 Tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS, AS-OL AS-CA 22 2.6.2 Quy trình thực nghiệm tối ƣu hóa phản ứng nhuộm enzym 25 3.1 Tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS; AS-OL AS-CA phƣơng pháp truyền thống [5, 7] 29 3.2 Nghiên cứu tối ƣu hóa phản ứng nhuộm esteraza 43 3.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng chất đến kết nhuộm 47 KẾT LUẬN 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC 55 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các hợp 3-( N-phenyl thế)naphtalen-2-yl cacboxylat đƣợc thƣơng mại hóa Bảng 1.2 Bảng phân loại bệnh ung thƣ máu dòng mono theo FAB bổ sung Marker di truyền [8] 14 Bảng 2.1 Kết khảo sát ảnh hƣởng dung môi đến hiệu suất phản ứng 22 Bảng 2.2 Kết khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ chất tham gia phản ứng đến hiệu suất phản ứng 23 Bảng 2.3 Kết khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến hiệu suất phản ứng 23 Bảng 2.4 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian phản ứng đến hiệu suất 24 Bảng 2.5 Các nhân tố mức đƣợc xét mơ hình thực nghiệm 26 Bảng 2.6 Bảng ma trận mơ hình mẫu nhân tố thực nghiệm 27 Bảng 3.1 Bảng kết tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS, AS-OL AS-CA 35 Bảng 3.2 Kết số liệu phổ IR ESI-MS naphtol AS-thế cacboxylat 37 Bảng 3.3 Kết liệu phổ H-NMR 3-(N-thế-cacbamoyl) naphtalen-2-yl cacboxylat 38 Bảng 3.4 Kết nhuộm theo phƣơng pháp nhân tố thực nghiệm 43 Bảng 3.5 Hiệu suất thu đƣợc vùng tối ƣu 45 Bảng 3.6 Độ nhạy độ đặc hiệu chất 3-[(N-phenyl thế) cacbamoyl]naphtalen-2-yl cacboxylat tổng hợp đƣợc 49 Bảng 3.7 Điểm nhuộm naphtol AS cacboxylat 49 DANH MỤC HÌNH Sơ đồ 1.1 Sơ đồ 1.2 Sơ đồ 1.3 Sơ đồ 1.4 Sơ đồ 1.5 Sơ đồ 1.6 Sơ đồ 1.7 Sơ đồ 1.8 Sơ đồ 1.9 Sơ đồ 1.10 .9 Sơ đồ 1.11 10 Sơ đồ 1.12 16 Sơ đồ 1.13 17 Sơ đồ 1.14 17 Sơ đồ 2.1 21 Sơ đồ 3.1 29 Sơ đồ 3.2 30 Sơ đồ 3.3 30 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng chất dung môi đến hiệu suất phản ứng 31 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng tỷ lệ tác nhân tham gia phản ứng đến hiệu suất phản ứng 32 Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng nhiệt độ đến hiệu suất phản ứng 33 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng thời gian phản ứng đến hiệu suất sản phẩm 34 Hình 3.5 Ảnh chụp sắc ký mỏng Naphtol AS-OL butanoat tổng hợp theo phƣơng pháp truyền thống (ảnh trái) phƣơng pháp cải tiến (ảnh phải) 36 Hình 3.6 Phổ IR Naphtol AS-OL butanoat 40 Hình 3.7 Phổ 1H-NMR Naphtol AS-OL butanoat 41 Hình 3.8 Phổ ESI - MS Naphtol AS-OL butanoat 41 Sơ đồ 3.4 Sơ đồ phân mảnh hợp chất Naphtol AS-OL butanoat (3b3) 42 Hình 3.9 Đồ thị Pareto nhân tố ảnh hƣởng đến hiệu suất nhuộm esteraza dòng mono 44 Hình 3.10 Ảnh nhuộm naphtol AS propanoat 50 Hình 3.11 Ảnh nhuộm naphtol AS-CA axetat 50 Hình 3.12 Ảnh nhuộm naphtol AS axetat khơng có chất ức chế NaF 50 Hình 3.13 Ảnh nhuộm naphtol AS axetat có chất ức chế NaF 50 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT c.s Da THF M1 M2 DMF DMSO EC NSE NSE+NaF FAB IUB L1 L2 L3 M0 M3 M4 Cộng Hội nhà Huyết học Anh-Pháp-Mỹ (French-American-British) Hiệp hội Hóa sinh quốc tế (International Union of Biochemistry) Dalton Tetrahydrofuran Dimethylformam ide Dimethyl sulfoxide Uỷ ban Enzym (The enzyme commission ) Nhuộm Esteraza không đặc hiệu (Esteraza) Nhuộm Esteraza không đặc hiệu với chất ức chế NaF Bệnh bạch cầu cấp dịng lympho biệt hóa (Acute lymphoblastic) Bệnh bạch cầu cấp dịng lympho chƣa biệt hóa (Acute lymphoblastic) Bệnh bạch cầu cấp dòng lympho loại Burkitt (Acute lymphoblastic) Bệnh bạch cầu cấp dịng tuỷ biệt hóa tối thiểu (Minimally differentiated acute myeloid) Bệnh bạch cầu cấp dịng tuỷ khơng có tế bào trƣởng thành (Acute myeloblastic without maturation) Bệnh bạch cầu cấp dịng tuỷ có tế bào trƣởng thành (Acute myeloblastic with maturation) Bệnh bạch cầu cấp dòng tiền tuỷ (Acute promyelocytic) Bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ-monoxit (Acute myelomonocytic) Tnc M5 M6 M7 NaOH EGME NaOH NaF NAS NASD NASDCl Ts WHO Sodium hydroxide Bệnh bạch cầu cấp dòng monoxit (Acute monocytic) Bệnh bạch cầu cấp dòng hồng cầu (Erythroleukem ia) Bệnh bạch cầu cấp dòng tiểu cầu (Acute megakaryoblasti c) ethylene glycol monomethyl ether Sodium hydroxid Sodium fluorid Naphtol AS (Naphthol AS) Naphtol AS-D (Naphthol AS-D) Nhuộm esteraza đặc hiệu (Naphthol AS-D chloroaxetat) Nhiệt độ nóng chảy Nhiệt độ sôi Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) Model Summary S * Coded Coefficients Term Constant A B C D E A*B A*C A*D A*E B*C B*D B*E C*D C*E D*E A*B*C A*B*D A*B*E A*C*D A*C*E A*D*E B*C*D B*C*E 81 B*D*E C*D*E A*B*C*D A*B*C*E A*B*D*E A*C*D*E B*C*D*E A*B*C*D*E Regression Equation in Uncoded Units Yield = 61.29 + 7.025 A - 0.7 % - 0.1813 A*D - 0.2438 A*E - 0.02500 B*C - 0.3625 B*D - 0.2500 B*E + 0.1938 C*D + 1.056 C*E - 0.9312 D*E - 0.4813 A*B*C + 0.3312 A*B*D - 0.1438 A*B*E + 0.2000 A*C*D - 0.6500 A*C*E + 1.712 A*D*E - 0.7062 B*C*D + 0.2188 B*C*E + 0.1687 B*D*E - 0.5250 C*D*E + 0.3125 A*B*C*D + 0.2500 A*B*C*E - 0.3000 A*B*D*E 0.4063 A*C*D*E - 0.05000 B*C*D*E + 0.1813 A*B*C*D*E Alias Structure Factor Name AA BB C C D D EE 82 83 ... 22 2.6.1 Tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS, AS- OL AS- CA 22 2.6.2 Quy trình thực nghiệm tối ƣu hóa phản ứng nhuộm enzym 25 3.1 Tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS; AS- OL AS- CA phƣơng... Naphtol AS; AS- OL; AS- CA làm chất nhuộm đặc hiệu dòng monoxit tế bào bạch cầu ngƣời phục vụ việc khám điều trị bệnh ung thƣ máu Nội dung nghiên cứu: Nghiên cứu phƣơng pháp tổng hợp chất alkyl cacboxylat. .. pháp có hiệu kinh tế cao để tổng hợp chất 28 Do tầm quan trọng hợp chất thực tiễn, để tài xây dựng phƣơng pháp để nâng cao hiệu suất tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS; AS- OL AS- CA làm nguyên