Phân tích đột biến mất đoạn 4977 bp của DNA ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC Hoàng Thị Thùy Dung PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 bp CỦA DNA TY THỂ Ở BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG Ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Trịnh Hồng Thái Hà Nội −Năm 2012 BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẤT Viết tắt Viết đầy đủ mtDNA Mitochondrial DNA (AND ty thể) MT− ND Mitochondrial−NADH dehydrogenase MT−CYTb Mitochondrial−Cytochrome b MT−CO Mitochondrial−Cytochrome c oxidase MT−ATP Mitochondrial−ATP synthase CPEO Chronic progressive external ophthalmoplegia KSS Kearn–Sayre syndrome DHPLC Denaturing high performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng biến tình hiệu cao) EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid MRI Magnetic resonance imaging (Chụp cộng hƣởng từ) PBS Phosphate buffered saline (Dung dịch đệm phosphate) PCR Polymerase chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) PET Positron emission tomography (Chụp cắt lớp phát xạ positron) RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism (Đa hính độ dài đoạn cắt giới hạn) SDS Sodium dodecyl sulfate SNP Single nucleotide polymorphism (Đa hính nucleotide đơn) SSCP Single strand conformation polymorphism (Đa hính cấu hính sợi đơn) TBE Tris borate EDTA TNM Tumor− Node − Metastasis DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 13 gen mã hóa cho protein tham gia chuỗi hô hấp tế bào [7] Bảng Các gen mã hóa cho 22 tRNA genome ty thể [7] Bảng Hệ thống phân loại TNM ung thƣ đại trực tràng Bảng Thống kê mẫu sử dụng Bảng Các hóa chất đƣợc sử dụng nghiên cứu Bảng Các thiết bị đƣợc sử dụng nghiên cứu Bảng Các cặp mồi đƣợc sử dụng phản ứng PCR Bảng Thành phần phản ứng PCR với thể tích phản ứng 12,5 µl Bảng 91 Thành phần phản ứng ủ enzyme với thể tích 30 µl Bảng 10 Dải nồng độ gel agarose dùng phân tách acid Nucleic Bảng 11 Sự phân tách DNA gel polyacrylamide không biến tính Bảng 12 Thống kê mẫu tách chiết DNA bênḥ nhân ung thƣ đaịtrƣcc̣ tràng theo đặc điểm bệnh học lâm sàng Bảng 13 Tỷ lệ phần trăm đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo vị trí mô Bảng 14 Thống kê tỷ lệ đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo đặc điểm lâm sàng Bảng 15 Thống kê mức độ heteroplasmy xảy mtDNA DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Cấu tạo bào quan ty thể Hình Sơ đồ cấu tạo mtDNA người Hình Các bệnh liên quan đến rối loạn ty thể Hình Một số bệnh ung thư liên quan đến đột biến ty thể Hình Hình ảnh đại trực tràng Hình Các giai đoạn phát triển ung thư đại trực tràng Hình Đột biến đoạn 4977 bp mtDNA Hình Minh họa bắt cặp hai cặp mồi 4977− 4977− khuôn mtDNA bị đột biến đoạn 4977 bp Hình Minh họa cắt enzyme HaeIII sản phẩm PCR đột biến đoạn 4977 bp Hình 10 Hình ảnh điện di DNA t tách chiết từ mô bệnh nhân ung thư đại trực tràng Hình 11 Ảnh điện di kiểm tra sản phẩm phản ứng PCR mtDNA mẫu u lân cận u Hình 12 Ảnh kết điện di sản phẩm PCR có đối chứng âm mtDNA Hình 13 Ảnh điện di kiểm tra sản phẩm PCR trường hợp có đột biến đoạn 4977 bp mtDNA Hình 14 Ảnh kết xử lý sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 4977–2 với enzyme giới hạn Hình 15 Phần mềm đọc kết giải trình tự bioedit so sánh trình tự mẫu với Hình 16 Biểu đồ thể tỷ lệ phần trăm đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thư đại trực tràng theo vị trí mơ Hình 17 Biểu đồ thể tỷ lệ heteroplasmy xảy mtDNA MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 DNA TY THỂ 1.1.1 Cấu trúc genome ty thể 1.1.2 Cơ chế di truyền hệ gen ty thể 1.1.3 Các rối loạn ty thể [4,53] 1.2 ĐỘT BIẾN DNA TY THỂ (MT DNA) − CHỈ THỊ SINH HỌC TIỀM NĂNG TRONG UNG THƢ 1.2.1 Các đột biến mtDNA 1.2.2 Mối liên hệ đột biến mtDNA với bệnh ung thƣ 11 1.2.3 Mối liên quan đột biến đoạn mtDNA với bệnh ung thƣ thị sinh học tiềm ung thƣ 14 1.3 UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG VÀ MỐI LIÊN HỆ VỚI ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 BP XẢY RA TRONG DNA TY THỂ 17 1.3.1 Ung thƣ đại trực tràng 17 1.3.2 Mối liên hệ đột biến đoạn 4977 bp xảy mtDNA ung thƣ đại trực tràng 23 1.3.3 Các phƣơng pháp nghiên cứu biến đổi gen ung thƣ 24 1.3.4 Tính hính nghiên cứu đột biến mtDNA Việt Nam 29 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 30 2.1 NGUYÊN LIỆU 30 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 30 2.1.2 Hóa chất 31 2.1.3 Thiết bị 31 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.2.1 Tách chiết DNA tổng số từ mô 32 2.2.2 Khuếch đại đột biến đoạn 4977 bp mtDNA PCR .33 2.2.3 Xử lý sản phẩm PCR khuếch đại đột biến đoạn 4977 bp mtDNA enzyme HaeIII 37 2.2.4 Quy trính tinh sản phẩm PCR sƣƣ̉ dungg̣ kit QIAQUICK gel extraction 38 2.2.5 Điện di kiểm tra sản phẩm PCR gel 39 2.2.6 Phƣơng pháp giải trính tự 40 2.2.7 Tình tốn thống kê 41 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 ĐẶC ĐIỂM BỆNH HỌC LÂM SÀNG CỦA CÁC BỆNH NHÂN UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG TRONG NGHIÊN CỨU 42 3.2 KẾT QUẢ TÁCH CHIẾT DNA TỔNG SỐ TỪ MẪU MÔ UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 43 3.3 KẾT QUẢ KHUẾCH ĐẠI ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 bp CỦA DNA TY THỂ BẰNG KỸ THUẬT PCR 44 3.4 KẾT QUẢ XỬ LÝ SẢN PHẨM PCR SỬ DỤNG CẶP MỒI 4977–2 BẰNG ENZYME GIỚI HẠN 47 3.5 KẾT QUẢ GIẢI TRÌNH TỰ SẢN PHẨM PCR CỦA ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 bp CỦA mtDNA 49 ́ ́ ́ 3.6 PHÂN TÍCH MÔI LIÊN QUAN GIƢƢ̃A ĐÔṬ BIÊN MÂT ĐOAN ̉ ̉ ̉ ̀ ́ 4977 bp CUA DNA TY THÊ VA CAC ĐĂCc̣ ĐIÊM BÊNḤ HOCc̣ LÂM SÀNG CỦA BÊNH UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 51 3.6.1 Khảo sát đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo vị trì mô 51 3.6.2 Khảo sát đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo đặc điểm lâm sàng khác 52 3.7 THỐNG KÊ MỨC ĐỘ HETEROPLASMY XẢY RA TRONG DNA TY THỂ 54 KẾT LUẬN 58 KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC I Phụ lục Danh sách bênḥ nhân ung thƣ đaịtrƣcg̣ tràng với đăcg̣ điểm bênḥ hocg̣ lâm sàng đƣơcg̣ sƣƣ̉ dungg̣ nghiên cƣƣ́u i Phụ lục Các dạng đột biến mtDNA loại ung thƣ liên quan x Luận văn thạc sĩ Hoàng Thị Thùy Dung MỞ ĐẦU Ty thể (mitochondria) bào quan phổ biến tế bào nhân chuẩn có lớp màng kép hệ gene riêng Ty thể đƣợc coi trung tâm lượng tế bào ví nơi chuyển hóa chất hữu thành lƣợng tế bào sử dụng đƣợc ATP Ngồi ra, ty thể cịn đóng vai trị quan trọng nhiều q trính chuyển hóa khác nhƣ: Apoptosis, tổn thƣơng tế bào thần kinh thoát chất trung gian glutamate, tăng sinh tế bào, điều hòa trạng thái oxi hóa khử tế bào, tổng hợp nhân heme, tổng hợp steroid, tạo nhiệt giúp giữ ấm cho [12,36] Hệ gen ty thể có chứa hàng trăm đến hàng nghín DNA ty thể (mtDNA), chúng có cấu trúc mạch vịng, kìch thƣớc khoảng 15000 – 17000 bp, chứa 37 gen mã hóa cho protein chuỗi hô hấp, tRNA rRNA Tuy nhiên, ty thể dễ bị tổn thƣơng, có tỷ lệ đột biến cao so với DNA nhân ví lý sau: (1) Ty thể có chứa hệ gen độc lập với gen nhân, kìch thƣớc bé (2) Do vắng mặt protein histone, chế bảo vệ sửa chữa DNA mức độ đơn giản (3) Hệ gen ty thể gần vị trì phát sinh gốc tự (ROS – Reactive Oxygen species) Đây nguyên nhân chình gây nên rối loạn mtDNA gây nên nhiều bệnh khác [18] Các bệnh rối loạn mtDNA đa dạng phát sinh đột biến gen nhân mtDNA, liên quan đến rối loạn trính tổng hợp protein hay đơn đột biến làm thay đổi nucleotide Các rối loạn ảnh hƣởng đến nhiều quan thể với mức độ biểu khác xảy lứa tuổi [17] Trong vài năm trở lại đây, rối loạn ty thể liên quan đến đột biến mtDNA đƣợc xem mục tiêu nghiên cứu di truyền học y học Đặc biệt, hƣớng nghiên cứu sử dụng mtDNA nhƣ thị sinh học cho bệnh chuyển hóa gặp, lão hóa, xác định đặc tình di truyền quần thể sử dụng dấu chuẩn di truyền mẹ [1] Cho đến nay, Trên 150 bệnh rối loạn mtDNA đƣợc thống kê nhƣ: Bệnh thần kinh thị giác di truyền Leber, Bệnh thần kinh- cơ, suy gan, viêm não, liệt mắt tăng tiến mạn tình, đái tháo đƣờng câm Đại học Khoa học Tự nhiên K19− Sinh học Luận văn thạc sĩ Hoàng Thị Thùy Dung điếc…Cịn nhiều bệnh nghi ngờ có liên quan đến rối loạn mtDNA đƣợc nhà khoa học nghiên cứu [17] Đặc biệt nghiên cứu đột biến mtDNA mối liên quan đến bệnh ung thƣ [8,9] Với nhiều công trính khoa học đƣợc cơng bố khoảng hai thập niên qua chứng tỏ đột biến đoạn 4977 bp loại đột biến thƣờng gặp hệ gen ty thể có vai trị định ung thƣ [10] Trên sở khác số DNA ty thể tế bào ung thƣ tế bào bính thƣờng, tiến hành định lƣợng đột biến đoạn mtDNA khối u dịch thể Nhƣ vậy, đột biến đoạn xảy mtDNA thị sinh học tiềm năng, có tình ứng dụng cao chẩn đoán điều trị ung thƣ giai đoạn sớm [23,24] Trong khuôn khổ luận văn này, chúng tơi tiến hành đề tài nghiên cứu: “Phân tích đột biến đoạn 4977 bp DNA ty th ể bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng” với mục đìch:  Xác định đƣơcg̣ t ỷ lệ đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng  Đánh giá mối liên quan giƣƣ̃a t ỷ lệ đột biến đoạn 4977 bp mtDNA với đặc điểm lâm sàng bênḥ ung thƣ đ ại trực tràng ngƣời Việt Nam Đề tài đƣợc thực phòng Proteomics Sinh học cấu trúc thuộc Phịng nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzym Protein, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Đại học Khoa học Tự nhiên K19− Sinh học Luận văn thạc sĩ Hoàng Thị Thùy Dung Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 DNA TY THỂ Ty thể bào quan đƣợc tím thấy gần nhƣ tất tế bào có nhân, bao gồm thực vật, động vật, nấm sinh vật nguyên sinh (Hình 1) [36] Số lƣợng ty thể diện tế bào tùy thuộc vào nhu cầu chuyển hóa tế bào thay đổi từ ty thể lớn đến hàng ngàn ty thể khác Hình Cấu tạo bào quan ty thể [51] tế bào Cấu trúc ty thể: Ty thể đƣợc mô tả lần Altmann vào năm 1890 sau đó, cấu trúc siêu hiển vi ty thể đƣợc nghiên cứu chi tiết Palade (1952) Sjostrand (1953) [18] Đây bào quan có hính trịn hính trụ dài, có kìch thƣớc đƣờng kình 0,2-1 µm, chiều dài 2-5 µm Tồn cấu trúc ty thể đƣợc bao bọc hai lớp màng đƣợc cấu tạo protein lớp phospholipid kép Tuy nhiên, màng có đặc trƣng riêng khác Lớp màng bao trùm, tạo nên ranh giới ty thể, lớp màng tạo thành nếp gấp (mào - cristae) hƣớng vào tâm nơi khu trú enzyme hô hấp Các lớp màng chia ty thể thành hai khoang riêng biệt: khoang chứa chất (matrix) nằm bên ty thể khoang gian màng nằm hai lớp màng Chất tƣơng đối đậm đặc tím thấy sợi DNA, ribosome hạt nhỏ Ty thể mã hóa phần protein chúng chình máy di truyền riêng mính [18] Thành phần hóa học ty thể: protein chiếm khoảng 60 – 70% trọng lƣợng khô tồn dƣới hai dạng khác Một phần tham gia vào thành phần siêu cấu trúc ty thể, phần khác hòa tan matrix, lipid chiếm khoảng 25–30% trọng lƣợng khô, chủ yếu phospholipid phần ìt cholesterol, ARN khoảng 0,5- Đại học Khoa học Tự nhiên K19− Sinh học v 4101 Nguyễn Thị 53 Female 51 Female 71 Male 61 Female 3089 Lê Thị M 80 Female 3161 Đỗ Thị H 36 Female 95 Male 63 Male 42 Male X 4120 Đỗ Thị V 2903 3035 3352 3372 3558 Nguyễn Văn S Nguyễn Thị M Nguyễn Viết Q Nguyễn Khắc Q Nguyễn Hữu Đ vi 3753 Hoàng T X749 Nguyễn Thị Nhài X748 Nguyễn Thị M X783 Thị Đào Công H X782 Nguyễn Thị T 4297 Phạm Văn T 54 Female 64 Female 59 Female 55 Male 60 Female 43 Male Viet-Duc Hospital 4374 4463 Đoàn Thị R Nguyễn Văn 46 Fem 53 Ma 76 Fem M 4475 Nguyễn Thị G vii 4539 Hồng Đính 79 Ma 4595 Trịnh Thị N 51 Fem 4603 Trần Văn V 46 Ma 4620 Ngơ Thị H 35 Fem 4644 Hồng Hữu T 55 Ma 51 Ma 4833 Nguyễn Thị P 59 Fem 4841 Cà Thị V 68 Fem 4942 Nguyễn Thị C 58 Fem 4779 X Nguyễn N Văn viii carcinoma ix Phụ lục Các dạng đột biến mtDNA loại ung thƣ liên quan Bảng 1: Đột biến gen mã hóa tiểu phần phức hệ I hệ gen ty thể loại ung thư liên quan Vùng gen mã hóa Loại ung thƣ Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ phổi, ung thƣ da, ung thƣ buồng trứng, khối u tuyến cận ND1 giáp tuyến, ung thƣ thận, khối u tuyến giáp, ung thƣ tế bào tuyến mang tai, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ vú Ung thƣ vú, ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ phổi, ung thƣ da, ung ND2 thƣ miệng, khối u tuyến cận giáp, ung thƣ tuyến tụy, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ thận, khối u tuyến giáp, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, u thần kinh đệm x Ung thƣ bàng quang, ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ đại tr ND3 ung thƣ phổi, khối u tuyến giáp, khối u tuyến cận giáp, u đƣờng tiêu hóa, ung thƣ thận, ung thƣ miệng Ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ phổ tuyến giáp, ung thƣ phổi, khối u não, ung thƣ da, ung th ND4L trứng, khối u tuyến cận giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung đƣờng tiêu hóa đƣờng tiêu hóa Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ bàng quang, ung thƣ vú, ung tử cung, khối u tuyến cận giáp, ung thƣ đại trực tràng, un ND5 phổi, ung thƣ da, ung thƣ tuyến tụy, ung thƣ tiền liệt thƣ thận, khối u tuyến giáp, ung thƣ thực quản, ung thƣ tiêu hóa, u thần kinh đệm Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ vú, ung thƣ cổ tử cung, khối cận giáp, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ phổi, ung thƣ b ND6 trứng, ung thƣ tuyến tụy, ung thƣ tiền liệt tuyến, khối u giáp, ung thƣ thực quản, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, u thần đệm xi Bảng 2: Đột biến gen mã hóa tiểu phần phức hệ III, IV, V hệ gen ty thể loại ung thư liên quan Vùng gen mã hóa Loại ung thƣ Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ bàng quang, khối ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ phổi, ung thƣ CYT b thƣ tuyến tụy, khối u tuyến cận giáp tuyến, kh ung thƣ da, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đ thƣ biểu mô mũi – họng, khối u tế bào thần ki Ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, khối u não thƣ da, ung thƣ tuyến tụy, khối u tuyến cận gi COI tuyến giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ bu đƣờng tiêu hóa, khối u tế bào thần kinh đệm, Ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ vú, ung thƣ p trứng, khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u COII da, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiê cầu xii Khối u não, ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng thƣ buồng trứng, ung thƣ tuyến tụy, khối u tu COIII khối u tuyến giáp, ung thƣ da, ung thƣ đƣờng miệng Ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ p ATPase khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp ung thƣ bạch cầu Ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ g ATPase tụy, khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến liệt tuyến, ung thƣ buồng trứng, ung thƣ đƣờ xiii Bảng 3: Đột biến vùng điểu khiển D – Loop Vùng Loại ung thƣ Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ bàng quang, un vú, ung thƣ cổ tử cung, ung thƣ đại trực tr ung thƣ niêm mạc tử cung, ung thƣ gan, un phổi,khối u não, ung thƣ da, ung thƣ miện D – Loop khối u tuyến cận giáp, ung thƣ tiền liệt ung thƣ thận, ung thƣ dày, ung thƣ tuyế giáp, ung thƣ buồng trứng, ung thƣ đƣờng hóa khối u 130, khối u tế bào thần kinh đệm khối u xƣơng ác tình, ung thƣ biểu mơ túi xiv Bảng 4: Đột biến gen mã hóa rRNA tRNA hệ gen ty thể Vùng Loại ung thƣ Ung thƣ vú, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ gan, ung thƣ phổi, khối u não, ung thƣ buồng trứng, ung thƣ tuyến tụy, khối u tRNA tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ da, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ biểu mơ mũi – họng, ung thƣ bạch cầu, ung thƣ tế bào lympho Ung thƣ bạch cầu, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ niêm mạc tử 12s rRNA cung, ung thƣ buồng trứng khối u tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ biểu mô mũi – họng, ung thƣ thận xv Ung thƣ bàng quang, khối u não, ung thƣ đại trực tràng, ung thƣ vú, ung thƣ niêm mạc tử cung, ung thƣ buồng trứng, khối u 16s rRNA tuyến cận giáp tuyến, khối u tuyến giáp, ung thƣ tiền liệt tuyến, ung thƣ đƣờng tiêu hóa, ung thƣ bạch cầu, ung thƣ thận Tổng cộng có 56 đột biến đƣợc báo cáo, bao gồm 52 đột biến điểm, đột biến thêm đoạn đột biến đoạn xvi ... THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 51 3.6.1 Khảo sát đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng theo vị trì mô 51 3.6.2 Khảo sát đột biến đoạn 4977 bp mtDNA bệnh nhân ung thƣ đại trực. .. 1.3 UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG VÀ MỐI LIÊN HỆ VỚI ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 BP XẢY RA TRONG DNA TY THỂ 17 1.3.1 Ung thƣ đại trực tràng 17 1.3.2 Mối liên hệ đột biến đoạn 4977 bp xảy mtDNA ung. .. triển ung thư đại trực tràng Hình Đột biến đoạn 4977 bp mtDNA Hình Minh họa bắt cặp hai cặp mồi 4977? ?? 4977? ?? khuôn mtDNA bị đột biến đoạn 4977 bp Hình Minh họa cắt enzyme HaeIII sản phẩm PCR đột biến