Nghiên cứ phát hiện và định lượng một số đột biến gen ty thể phổ biến bằng real time PCR

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  - - Phùng Bảo Khánh NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN TY THỂ PHỔ BIẾN BẰNG REAL-TIME PCR LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội, 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  - - Phùng Bảo Khánh NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN TY THỂ PHỔ BIẾN BẰNG REAL-TIME PCR Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS PHAN TUẤN NGHĨA Hà Nội, 2017 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến GS.TS Phan Tuấn Nghĩa, ngƣời thầy tận tình hƣớng dẫn, dành nhiều thời gian trao đổi, định hƣớng nghiên cứu tạo điều kiện tốt cho suốt trình học tập, nghiên cứu khoa học thực luận văn Tôi xin bày tỏ cảm ơn chân thành đến TS Nguyễn Thị Hồng Loan, ngƣời giúp đỡ tƣ vấn cho nhiều q trình học tập làm việc Tơi xin chân thành cảm ơn đến tồn thể q thầy, Bộ mơn Sinh lý thực vật Hóa sinh nhƣ quý thầy, cô Khoa Sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban Lãnh đạo Khoa Sinh học, Phòng Sau đại học, thành viên nhóm nghiên cứu Phịng Protein tái tổ hợp thuộc Phịng thí nghiệm trọng điểm Công nghê ̣Enzym vàProtein , Trƣờng Đaị hoc ̣ Khoa hoc ̣ Tƣ ̣nhiên đa ̃giúp đỡ taọ điều kiêṇ cho tơi hồn thành chƣơng trình h ọc tập thực luận văn Luận văn đƣợc thực với tài trợ kinh phí đề tài KLEPT.16.03 thân đƣợc hỗ trợ kính phí làm thực nghiệm với tƣ cách học viên cao học đề tài Cuối cùng, xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình, ngƣời thân bạn bè, ngƣời đơng ̣ viên vàtạo điều kiêṇ thuâṇ lơị cho có thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luâṇvăn Hà Nội, Ngày 20 tháng 11 năm 2017 Học viên cao học Phùng Bảo Khánh i DAN APS Amm BFQ Blac Bp Base CPEO Chro opht ddH2O Deio dNTP Deox EDTA Ethy EtBr Ethid KSS Kear LB Luria LHON Lebe LNA Lock MELAS Mito lactic MERRF Myo red f MGB Mino MRI Mag mtDNA Mito NARP Neur pigm OD Opti ii PCR Poly RFLP Rest poly ROS Rea TAE Tris TE Tris TEMED N, N Ethy Tm Mel Urac UNG iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung ty thể 1.1.1.Cấu trúc chức ty thể 1.1.2.Hệ gen ty thể 1.2 Đột biến gen ty thể bệnh hội chứng liên quan .11 1.2.1.Đột biến gen ty thể 11 1.2.2 Một số bệnh hội chứng đột biến gen ty thể 12 1.3 Các phƣơng pháp phát đột biến gen ty thể 21 1.3.1 PCR-RFLP 22 1.3.2.Giải trình tự gen 23 1.3.3.Real-time PCR 23 1.3.4.Các phƣơng pháp khác 24 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 27 2.1 Nguyên liệu 27 2.1.1 Mẫu bệnh phẩm 27 2.1.2 Các hóa chất, nguyên liệu khác 27 2.1.3 Máy móc trang thiết bị 27 2.2 Phƣơng pháp 28 2.2.1 Biến nạp nuôi cấy tế bào E coli chứa plasmid mang đoạn gen có khơng có đột biến gen ty thể 28 2.2.2.Tách chiết định lƣợng DNA 28 2.2.3.Kỹ thuật đa hình phân cắt đoạn giới hạn kết hợp với PCR (PCR-RFLP) 30 iv 2.2.4.Điện di gel agarose gel polyacylamide 31 2.2.5.Kỹ thuật real-time PCR sử dụng mẫu dò huỳnh quang dạng khóa cầu acid nucleic (LNA) 32 2.2.6 Phƣơng pháp thống kê 34 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Tạo mẫu đối chứng cho real-time PCR phát định lƣợng đột biến gen ty thể phổ biến A3243G, G3380A, A8344G, T8993C, T8993G, G11778A 36 3.1.1 Định lƣợng kiểm tra độ tinh plasmid quang phổ kế điện di gel agarose 36 3.1.2 Kiểm tra có mặt đoạn gen chèn plasmid tái tổ hợp PCR- RFLP 37 3.2 Tạo hỗn hợp phản ứng master mix cho real -time PCR 39 3.2.1 Tạo hỗn hợp phản ứng master mix cho real-time PCR 39 3.2.2 Xác định thành phần thích hợp master mix 43 3.2.3 Đánh giá độ đặc hiệu master mix 45 3.2.4 Đánh giá độ nhạy master mix 48 3.2.5 Xác định thời gian bảo quản master mix 49 3.2 Điều tra định lƣợng số đột biến gen ty thể phổ biến real-time PCR 51 3.2.1 Điều tra có mặt đột biến A3243G, G3380A, A8344G, G11778A, T8993G, T8993C bệnh nhân nghi bị bệnh ty thể 51 3.3.2 Phân tích đột biến A3243G thành viên gia đình bệnh nhân MELAS 53 KẾT LUẬN 58 KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình dạng bình thƣờng (trái) dạng biến đổi (phải) ty thể .3 Hình 1.2 Cấu trúc ty thể Hình 1.3 Cấu trúc màng ty thể Hình 1.4 Ty thể trình trao đổi lƣợng tế bào Hình 1.5 Hệ gen ty thể Hình 1.6 Thuyết cổ chai di truyền 11 Hình 3.1 Kết điện di plasmid tinh 37 Hình 3.2 Kiểm tra sản phẩm PCR đoạn gen ty thể điện di agarose 2% 38 Hình 3.3 Điện di sản phẩm cắt enzyme giới hạn kiểm tra đoạn gen đích .39 Hình 3.4 Biểu đồ tƣơng quan tuyến tính chu kì ngƣỡng số ban đầu đột biến 42 Hình 3.5 Biểu đồ tƣơng quan tuyến tính chu kì ngƣỡng số ban đầu đột biến sau đƣợc xác định điều kiện thích hợp 44 Hình 3.6 Đƣờng cong khuếch đại phản ứng real time PCR mẫu bệnh phẩm không mang đột biến 46 Hình 3.7 Đƣờng cong khuếch đại phản ứng real time PCR trƣờng hợp dƣơng tính với A3243G đoạn gen khác hệ gen ty thể 48 Hình 3.8 Biểu đồ đƣờng cong khuếch đại phản ứng realtime PCR sử dụng khuôn 1% đột biến 49 Hình 3.9 Biểu đồ đƣờng cong khuếch đại phản ứng real time PCR đột biến o quan tâm sử dụng master mix bảo quản 25 C sau ngày 50 Hình 3.10 Biểu đồ đƣờng cong khuếch đại phản ứng real time PCR đột o biến quan tâm sử dụng master mix bảo quản C sau 20 ngày 51 Hình 3.11 Đƣờng cong khuếch đại đột biến A3243G bệnh nhân BN3, BN4, BN, BN5, BN10, BN11, BN12 52 Hình 3.12 Biểu đồ đƣờng cong khuếch đại biểu đồ thể tƣơng quan chu kì ngƣỡng số ban đầu thành viên gia đình bệnh nhân MELAS 55 vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Triệu chứng lâm sàng quan bệnh ty thể 13 Bảng 2.1 Trình tự mồi chu trình nhiệt kích thƣớc sản phẩm PCR 31 Bảng 2.2 Trình tự mồi mẫu dị cho real-time PCR 35 Bảng 3.1 Kết định lƣợng plasmid tinh máy đo quang phổ 36 Bảng 3.2 Thành phần cắt enzyme giới hạn 38 Bảng 3.3 Hiệu suất PCR giá trị tƣơng quan tuyến tính đƣờng chuẩn đột biến A3243G, G3380A, A8344G, T8993C, T8993G, G11778A 42 Bảng 3.4 Hiệu suất real-time PCR giá trị tƣơng quan tuyến tính đƣờng chuẩn đột biến A3243G, G3380A, A8344G, T8993C, T8993G, G11778A sau đƣợc xác định điều kiện thích hợp 45 Bảng 3.5 Triệu chứng lâm sàng tỷ lệ đột biến A3243G bệnh nhân thành viên gia đình bệnh nhân 56 vii viii TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Anh Alston C L., Rocha M C., Lax N Z., Turnbull D M., Taylor R W (2017), “The genetics and pathology of mitochondrial disease”, J Pathol., 241, pp 236- 250 Anderson S., Bankier A T., Barrell B G., Bruijin M H., Coulson A R., Drouin J., Eperon I C., Nierlich D P., Rose B A., Sanger F., Schreier P H., Smith A J H., Staden R., Young I G (1981), “Sequence and organization of the human mitochondrial genome”, Nature, 290, pp 457-465 Andreyev A Y., Kushnareva Y E., Starkov A A (2005), “Mitochondrial metabolism of reactive oxygen species”, Biochem Biokhim., 70, pp 200-– 214 N., Ayed I B., Chamkha I., Mkaouar-Rebai E., Kammoun T., Mezghani Chabchoub I., Aloulou H., Hachicha M., Fakhfakh F (2011), “A Tunisian patient with Pearson syndrome harboring the 4.977 kb common deletion associated to two novel large-scale mitochondrial deletions”, Biochem Biophys Res Commun., 411, pp 381-386 Bai R K., Wong L C (2004), “Detection and quantification of heteroplasmic mutant mitochondrial DNA by real-timeamplification refractory mutation system quantitative PCR analysis: A single-step approach”, Clin Chem., 50(6) pp 996-1001 Baracca A., Sgarbi G., Mattiazzi M., Casalena G., Pagnotta E., Valentino M L., Moggio M., Lenaz G., Carelli V., Solaini G (2007), “Biochemical phenotypes associated with the mitochondrial ATP6 gene mutations at nt8993”, Biochim Biophys Acta, 1767(7), pp 913-919 P., Li Cao Y., Ma Y., Zhang Y., Li Y., Fang F., Wang S., Bu D., Xu Y., Pei L., Xiao Y., Wua H, Yang Y., Zou L., Qi Y (2010), “Detection of eight 59 frequently encountered point mutations in mitochondria in Chinese patients suggestive of mitochondrial encephalomyopathies”, Mitochondrion 10, pp 330-334 Chae J H., Hwang H., Lim B C., Cheong H I., Hwang Y S., Kim K J (2004), “Clinical features of A3243G mitochondrial tRNA mutation”, Brain Dev., 26(7), pp 459-62 Chen X J., Butow R A., (2005), “The organization and inheritance of the mitochondrial genome”, Nat Rev Genet 6, pp 815-–825 10 Chinnery P F (2002), “Inheritance of mitochondrial disorders”,Mitochondrion 2, pp 149-155 11 Chinnery P F., Brown D T., Andrews R M., Singh-Kler R., Riordan-Eva P., Lindley J., Applegarth D A., Turnbull D M., Howell N (2001), “The mitochondrial ND6 gene is a hot spot for mutations that cause Leber’s hereditary optic neuropathy”, Brain, 124, pp 209-218 12 Chinnery P F., Elliott H R., Hudson G., Samuels D C., Relton C L (2012), “Epigenetics, epidemiology and mitochondrial DNA diseases” Int J Epidemol., 41, pp 177–187 13 Chow J., Rahman J., Achermann J C., Dattani M T., Rahman S (2017), “Mitochondrial disease and endocrine dysfunction”, Nat Rev Endocrinol., 13(2), pp 92-104 14 Davison J E., Rahman S (2017), “Recognition, investigation and management of mitochondrial disease”, Arch Dis Child, 0, pp 1-9 15 Fawcett D.W (1981), “The Cell”, WB Saunders Company, NewYork, (2), pp 415-419 16 Frey T G., Mannella C A (2000), “The internal structure of mitochondria”, Trends Biochem Sci., 25(7), pp 319-324 17 Gal A., Komlosi K., Maasz A., Pentelenyi P., Remenyi V., Ovary C., Valikovics A., Dioszeghy P., Bereczki1 D., Melegh B., Molnár M J 60 (2010), “Analysis of mtDNA A3243G mutation frequency in Hungary”, Cent Eur J Med., 5(3), pp 322-328 18 Gorman G S., Schaefer A M., Ng Y., Gomez N., Blakely E L., Alston C L., Feeney C., Horvath R., Yu-Wai-Man P., Chinnery P F., Taylor R W., Turnbull D M., McFarland R (2015), “Prevalence of nuclear and mitochondrial DNA mutations related to adult mitochondrial disease”, Ann Neurol., 77(5), pp 753-759 19 Gropman A L (2001), “Diagnosis and treatment of childhood mitochondrial diseases”, Curr Neurol Neurosc Rep., 1(2), pp 185-94 20 Gropman A L (2004), “The neurological presentations of childhood and adult mitochondrial disease: established syndromes and phenotypic variations, Mitochondrion 4, pp 503-520 21 A., Hammans S R., Sweeney M G., Brockington M., Morgan-Hughes J Harding A E (1991) “Mitochondrial encephalopathies: molecular genetic diagnosis from blood samples”, Lancet, 1, 337(8753), pp 1311-1323, 22 Hirano M., Ricci E., Koenigsberger M R., Defendini R., Pavlakis S M.,DeVivo D C.,DiMauro S., Rowland L P (1992), “MELAS: an original case and clinical criteria for diagnosis, Neuromuscul Disor., 2, pp 125-135 23 Kirkman M A (2009) “Gene environment interactions in Leber hereditary optic neuropathy”, Brain, 132, pp 2317-2326 24 Leigh D (1951), “Subacute necrotizing encephalomyelopathy in an infant”, J Neurol Neurosurg Psych., 14(3), pp 216-221 25 Lim K S., Naviaux R K., Haas R H (2007), “Quantitative mitochondrial DNA mutation analysis by denaturing HPLC”, Clin Chem, pp 1046-1052 26 Lorenzoni P J., Scola R H., Kay C S., Silvado C E., Werneck L C (2014), “When should MERRF (myoclonus epilepsy associated with raggedred fibers) be the diagnosis”, Arq Neuropsiquiatr., 72(10), pp 803-811 61 27 Ma Y., Fang F., Cao Y., Yang Y., Zou L., Zhang Y., Wang S., Zhu S., Xu Y., Pei P., Qi Y (2010), “Clinical features of mitochondrial DNA m.3243A>G mutation in 47 Chinese families”, J Neurol Sci., 291(1-2), pp 17-21 28 Man P., Griffiths P., Brown D (2003), “The epidemiology of Leber hereditary optic neu-ropathy in the North East of England”, Am J Hum Genet., 72, pp 333-339 29 Man P Y W., Turnbull D M., Chinnery.P F (2002), “Leber hereditary optic neuropathy”, J Med Genet 2002, 39, pp 162-169 30 Mancuso M., Orsucci D., Angelini C., Bertini E., Carelli V., Comi G P., Donati M A., Federico A., Minetti C., Moggio M., et al (2015), “Redefining phenotypes associated with mitochondrial DNA single deletion”, J Neurol., 262(5), pp 1301-1309 31 Marotta R J., Chin J A., Quigley S., Katsabani S R., Kapsa E., Byrne S C (2004), “Diagnostic screening of mitochondrial DNA mutations in Australian adults 1990–2001”, Int Med J., 34, pp 10-19 32 Mishra P., Chan D C., (2014), “Mitochondrial dynamics and inheritance during cell division, development and disease”, Nat Rev Mol Cell Biol., 15(10), pp 634-646 33 Moslemia A R., Tuliniusb M., E Holmec, Oldforsa A (1998), “Threshold expression of the tRNALys A8344G mutation in single muscle fibres”, Neuromusc Disor., 8, pp 345-349 Murphy M P (2009), “How mitochondria produce reactive oxygen species”, 34 Biochem J 417, pp 1–13 35 Nagata H., Kumahara K., Tomemori T., Arimoto Y., Isoyama K., Yoshida K., Konno A (2001), “Frequency and clinical features of patients with sensorineural hearing loss associated with the A3243G mutation of the mitochondrial DNA in otorhinolaryngic clinics”, J Hum Genet., 46(10), pp 595-9 62 36 Park H., Davidson E., King M P., (2003), “The pathogenic A3243G mutation in human mitochondrial tRNA Leu(UUR) decreases the efficiency of aminoacylation” Biochemistry, 42 (4), pp 958-964 37 Pavlakis S G., Phillips P C.,Dimauro S.,Devivo D C.,Rowland L P (1984),“Mitochondrialmyopathy, encephalopathy, lactic acidosis, and strokelike episodes: a distinctiveclinical syndrome, Ann Neurol, 16, pp 481488 38 Poulton J., Macaulay V., Marchington D R (1998), “Mitochondrial Genetics 98 is the bottleneck cracked’, Am J Hum Genet, 62, pp 752-757 Rossignol R., Faustin B., Rocher C., Malgat M., Mazat J P., Letellier T 39 (2003), “Mitochondrial threshold effects”, Biochem J., 15, 370, pp 751-762 40 Ruhoy L S., Saneto R P (2014), “The genetics of Leigh syndrome and its implications for clinical practice and risk management”, Appl Clin Genet., 7, pp 221-234 Sallevelt S C., Die-Smulders C E., Hendrickx A T., Hellebrekers D 41 M., Coo I F., Alston C L., Knowles C., Taylor R W., McFarland R., Smeets H J.(2017), “De novo mtDNA point mutations are common and have a low recurrence risk” J Med Genet., 54(2), pp 73-83 42 Shanskea S., Wong L J C (2004),“Molecular analysis for mitochondrial DNA disorders”, Mitochondrion 4, pp 403-415 43 Singh R., Ellard S., Hattersley A., Harries L W (2006), “Rapid and sensitive real-time polymerase chain reaction method for detection and quantification of 3243A>G mitochondrial point mutation”, J Mol Diagn., 8(2), pp 225-30 44 Sofronova J K., Ilinsky Y Y., Orishchenko K E., Chupakhin E G., Lunev E A., Mazunin I O (2016), “Detection of mutations in mitochondrial DNA by droplet digital PCR”, Biochemistry, 81(10), 10, pp 1031-1037 45 Sproule D M., Kaufmann P (2008), “Mitochondrial encephalopathy, lactic acidosis, and strokelike episodes: basic concepts, clinical phenotype, and 63 therapeutic management of MELAS syndrome”, Ann NY Acad Sci.1142, pp 133-158 46 Spruijt L (2006), “Influence of mutation type on clinical expression of Leber here-ditary optic neuropathy”, Am J Ophthalmol., 141, pp 676682 47 Strand H., Ingebretsen O C., Nilssen O (2008), “Real-time detection and quantification of mitochondrial mutations with oligonucleotide primers containing locked nucleic acid”, Clin Chim Acta, 390(1-2), pp 126133 Szuhai K., Jody M., Ouweland V., Dirks R W., Lemtre M., Truffert J C., 48 Janssen G.M., Tanke H J., Holme E., Maassen J A., RaapA K (2001), “ Simultaneous A8344G heteroplasmy and mitochondrial DNA copy number quantification in Myoclonus Epilepsy and Ragged-Red Fibers (MERRF) syndrome by a multiplex Molecular Beacon based real-time fluorescence PCR” Nucleic Acids Res., 29(3), pp e13 49 Tajima H., Sueoka K., Moon S Y., Nakabayashi A., Sakurai Y., Murakoshi Y., Watanabe H., Iwata S., Hashiba T., Kato S Goto Y I., Yoshimura Y (2007), “The development of novel quantification assay for mitochondrial DNA heteroplasmy aimed at preimplantation genetic diagnosis of Leigh encephalopathy”, J Assist Reprod Genet., 24, pp 227-232 50 Taylor R W., Morris A A M., Hutchinson M., Turnbull D M (2002), “Leigh disease associated with a novel mitochondrial DNA ND5 mutation”, Eur J Hum Genet, 10, pp 141-144 51 Taylor R W., Turnbull D M (2005),“Mitochondrial DNA mutations in human disease”,Nature Genet.,6, pp 389-402 52 Truong T H, Nguyen T.V A., Nguyen T H L., Pham V A., Phan T N (2014s), “Sensitive quantitation of mitochoncirial mutation using new Taqman probes”, Cent Eur J Med., 9(6), pp 839-848 53 N Truong T H., Nguyen T V A., Nguyen V L., Pham V A., Phan T (2014), “Screening of common point-mutations and discovery of new T14727C change in mitochondrial genome of Vietnamese 64 encephalomyopathy patients”, Mitochondrial DNA ,27(1), pp 441-448 Tuppen H A., Blakely E L., Turnbull D M., Taylor R W 54 (2010), “Mitochondrial DNA mutations and human disease”, 1797(2), pp 113-128 55 Wallace D (1988), “Mitochondrial DNA mutation associated with Leber’s heredi-tary optic neuropathy, Science, 242, pp 1427–1430 Wang J Y., Gu Y S., Wang J., Tong Y., Wang Y., Shao J B., Qi M 56 (2008), “MGB probe assay for rapid detection of mtDNA11778 mutation in the Chinese LHON patients by real-time PCR”, J Zhejiang Univ Sci B, 9(8), pp 610-615 57 White H E., Durtonand V J., Seller A (2005), “Accurate detection and quantitation ofheteroplasmic mitochondrial point mutations by pyrosequencing”, Genet.Test, 9(3), pp 190-199 Wilson C J., Wood N W., Leonard J V., Surtees R., Rahman S 58 (2000), “Mitochondrial DNA point mutation T9176C in Leigh syndrome”, J Child Neurol., 15(12), pp 830-833 59 Wong L J (2007), “Pathogenic mitochondrial DNA mutations in protein-coding genes”,Muscle Nerve, 36, pp 279-293 60 Wong, L J C., Senadheera D (1997), “Direct detection of multiple point mutations in mitochondrial DNA”, Clin Chem., 43(10), pp 1857-61 61 Yu Q., Zhang Y., Wang Z., Yang Y., Yuan Y., Niu S., Pei P., Wang S, Ma Y., Bu D., Zou L., Fang F., Xiao J., Sun F., Zhang Y., Wu Y., Wang S., Xiong H., Wu X (2007), “Screening of common mitochondrial mutations in Chinese patients with mitochondrial encephalomyopathies’, Mitochondrion 7, pp 147-150 62 L., Zhou X., Zhang H., Zhao F., Ji Y., Tong Y., Zhang J., Zhang Y., Yang Qian Y., Lu F., Qu J., Guan M X (2010), “Very high penetrance and occurrence of Leber’s hereditary optic neuropathy in a large Han Chinese pedigree carrying the ND4 G11778A mutation”, Mol Genet Metab, 100, pp 379-384 65 Tài liệu tham khảo trang web 63 http://dnagdansk.com/media/ProductFiles/specifications_pcr_kits.pdf 66 ... Xác định tính đồng hay khơng đồng hệ gen ty thể có giá trị việc nghiên cứu bệnh/hội chứng đột biến gen ty thể Một số đột biến gen ty thể tồn tất ty thể tế bào đƣợc gọi đột biến dạng đồng Trong số. .. chức ty thể 1.1.2.Hệ gen ty thể 1.2 Đột biến gen ty thể bệnh hội chứng liên quan .11 1.2.1 .Đột biến gen ty thể 11 1.2.2 Một số bệnh hội chứng đột biến gen ty thể. .. phép phát đột biến tỷ lệ 0,01% [51] Đã có nhiều nghiên cứu sử dụng real- time PCR để định lƣợng đột biến gen ty thể 36 bệnh nhân đƣợc phân tích đột biến A3243G real- time PCR [5] Một phƣơng pháp real- time