Xây dựng phương pháp định lượng một số hoạt chất kháng HIV trong thuốc bằng phương pháp điện di mao quản

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ THÙY LINH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ HOẠT CHẤT KHÁNG HIV TRONG THUỐC BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – Năm 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ THÙY LINH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ HOẠT CHẤT KHÁNG HIV TRONG THUỐC BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 604429 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS NGUYỄN VĂN RI Hà Nội – Năm 2012 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu thuốc điều trị HIV 1.2 Tình hình sử dụng thuốc HIV Việt Nam giới 1.3 Các phƣơng pháp phân tích định lƣợng thuốc HIV 1.3.1.Các phƣơng pháp sắc ký 1.3.2.Phƣơng pháp điện di mao quản (Capillary electrophoresis-CE) 1.4 Giới thiệu chung phƣơng pháp điện di mao quản 1.4.1 Nguyên tắc phƣơng pháp điện di mao quản 1.4.2 Thiết bị phƣơng pháp điện di mao quản 10 1.4.3 Các trình xảy mao quản 11 1.4.4 Sự phân loại hay kiểu (mode) phƣơng pháp điện di mao quản 12 1.4.5 Điện di mao quản vùng (CZE) 12 1.4.6 Phƣơng pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) 13 1.4.7 Phân tích định lƣợng theo điện di mao quản 23 CHƢƠNG - ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 24 2.1.1 Điều kiện nghiên cứu 24 2.1.2 Đối tƣợng nghiên cứu 25 2.2 Nội dung phƣơng pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 26 2.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 26 CHƢƠNG - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Nghiên cứu khảo sát tối ƣu điều kiện tách 3TC,NVP AZT 29 3.1.1 Chọn bƣớc sóng phát chất 29 3.1.2 Mao quản xử lý mao quản 31 3.1.3 Chọn phƣơng pháp bơm mẫu 32 3.1.4 Độ điện di độ điện di hiệu dụng 33 3.1.5 Lựa chọn chế tách 34 3.1.6 Ảnh hƣởng pH dung dịch đệm điện di 36 3.1.7 Ảnh hƣởng thành phần dung dịch đệm 39 3.1.8 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ chất tạo mixen SDS 39 3.1.9 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ đệm 41 3.1.10 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian bơm mẫu 43 3.1.11 Khảo sát ảnh hƣởng điện di 45 3.1.12 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ mao quản 46 3.1.13.Tổng kết điều kiện tối ƣu 47 3.1.14 Định tính 3TC, AZT NVP điều kiện điện di thiết lập 47 3.2 Đánh giá phƣơng pháp phân tích 50 3.2.1 Khảo sát tính tƣơng thích hệ thống 50 3.2.2 Tính đặc hiệu 50 3.2.3 Khảo sát khoảng tuyến tính lập đƣờng chuẩn 52 3.2.4 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) .56 3.2.5 Độ lặp lại phƣơng pháp 57 3.2.6 Độ phƣơng pháp 58 3.2.7 Kết định lƣợng chế phẩm 61 3.3 Ƣu nhƣợc điểm phƣơng pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) 63 3.4 Hƣớng phát triển đề tài 64 KẾT LUẬN 65 STT bảng 1.1 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 STT 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 3.15 3.16 3.17 3.18 3.19 3.20 3.21 DANH MỤC VIẾT TẮT HIV AIDS ARV USP CE CEC CGE CZE DAD EOF HPLC MEKC Spic tm SD RSD % STT AZT LOD LOQ NVP D4T 3TC Bảng 3.8 Kết xác định độ lặp lại phương pháp MEKC định lượng AZT Lần tiêm mẫu S pic trung bình RSD (%) Bảng 3.9 Kết xác định độ lặp lại phương pháp MEKC định lượng NVP Lần tiêm mẫu S pic trung bình RSD (%) Nhận xét: Từ bảng kết cho thấy mức nồng độ thấp, trung bình cao khoảng nồng độ tuyến tính Lamivudin, Zidovudin Nevirapin có RSD