TÓM TẮT LUẬN ÁN BẢN TIẾNG VIỆT

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - TẠ THỊ BÌNH NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ XÂY DỰNG KỸ THUẬT SẢN XUẤT GIỐNG CÁ CHUỐI HOA Channa maculata (Lacepède, 1801) Chuyên ngành: Động vật học Mã số: 42 01 03 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SỸ SINH HỌC HÀ NỘI – 2020 Cơng trình đƣợc hồn thành tại: Học viện Khoa học Cơng nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Ngƣời hƣớng dẫn khoa học 1: PGS TS Nguyễn Hữu Dực Ngƣời hƣớng dẫn khoa học 2: TS Đỗ Văn Tứ Phản biện 1: PGS.TS Nguyễn Lân Hùng Sơn Phản biện 2: PGS.TS Kim Văn Vạn Phản biện 3: TS Nguyễn Thành Nam Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi 00’, ngày 18 tháng 06 năm 2020 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam MỞ ĐẦU Giới thiệu Trong loài cá nước ngọt, loài thuộc họ cá Channidae (Anabantiformes) nhà nghiên cứu nước quan tâm chúng có kích thước lớn, thịt ngon sức sống cao Nhiều loài nghiên cứu đầy đủ đặc điểm sinh học, sản xuất giống phát triển thành đối tượng nuôi quan trọng nước khu vực Việt Nam, Thái Lan, Campuchia, Phillipines, Ấn Độ Malaysia (Muntaziana et al., 2013) Ở Việt Nam, họ cá có giống Channa thuộc họ gồm có 12 lồi phân bố khắp miền với nhiều tên gọi khác theo tiếng địa phương Trong đó, cá lóc đen (C striata) cá lóc bơng (C micropeltes) nghiên cứu nhiều phát triển nghề ni chúng có kích cỡ lớn giá trị kinh tế cao (Nguyễn Huấn Dương Nhựt Long, 2008) Gần đây, cá dày (C lucius) nghiên cứu đặc điểm sinh học sản xuất giống (Tiền Hải Lý, 2016) Cá chành dục (C gachua) kích thước nhỏ nghiên cứu đặc điểm sinh học sản xuất giống (Hồ Mỹ Hạnh, 2017) Trong cá chuối hoa (C maculata) đối tượng ni có tiềm lại chưa ý nghiên cứu nhiều Hiện nay, nghiên cứu cá chuối hoa nước có số cơng trình nghiên cứu đặc điểm phân loại, số đặc điểm sinh học nghiên cứu sơ sản xuất giống nhân tạo (Nguyễn Thái Tự, 1983; Mai Đình Yên, 1978; Nguyễn Văn Hảo, 2005; Nguyễn Đình Vinh nnk., 2015; Tạ Thị Bình nnk., 2015) Vì vậy, việc nghiên cứu số đặc điểm sinh học làm sở cho việc cho đẻ nhân tạo, xây dựng kỹ thuật sản xuất cá giống đưa vào ni lồi cá cần thiết nhằm góp phần đa dạng hóa đối tượng ni, trì phát triển nguồn lợi, bảo vệ quỹ gen, bảo tồn đa dạng sinh học Tuy nhiên, theo Pravdin (1973) muốn hóa đưa vào ni lồi cá có hiệu phải hiểu biết đặc điểm sinh học chúng Chính vậy, đề tài “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học xây dựng kỹ thuật sản xuất giống cá chuối hoa Channa maculata (Lacepède, 1801) ” thực Mục tiêu đề tài Xác định đặc điểm đặc điểm dinh dưỡng, sinh sản cá chuối hoa tự nhiên làm sở khoa học cho việc xây dựng kỹ thuật sản xuất giống ương ni lồi cá Xây dựng số thông số kỹ thuật sản xuất giống cá chuối hoa điều kiện nhân tạo Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu số đặc điểm sinh học cá chuối hoa tự nhiên - Nghiên cứu đặc điểm dinh dưỡng - Nghiên cứu đặc điểm sinh sản Xây dựng kỹ thuật sản xuất giống cá chuối hoa điều kiện nhân tạo - Nghiên cứu kỹ thuật nuôi vỗ cá bố mẹ - Nghiên cứu kỹ thuật kích thích sinh sản - Nghiên cứu kỹ thuật ương cá bột lên cá hương - Nghiên cứu kỹ thuật ương cá hương lên cá giống CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại cá Chuối hoa Theo hệ thống phân loại Eschmeyer (2018) cá chuối hoa Channa maculata (Lacepède, 1801) xác định sau: Giới: Động vật - Animalia Ngành: Dây sống - Chordata Lớp: Vây tia - Actinopteri Bộ: Cá Rô - Anabantiformes Phân bộ: Cá - Channoidei Họ: Cá - Channidae Giống: Cá - Channa Loài: Cá chuối hoa - Channa maculata (Lacepède, 1801) 1.2 Tình hình nghiên cứu cá chuối hoa giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình nghiên cứu cá chuối hoa giới Trên giới có nghiên cứu vùng phân bố cá chuối hoa nhà nghiên cứu phát lồi có nước nhiệt đới cận nhiệt đới Trung Quốc, Đài Loan, Philippines Bắc Việt Nam; ngồi chúng cịn di nhập vào Nhật Bản, Hawai Madagascar (Water & James, 2004) Fang Fang et al.,(2002) cho biết cá chuối hoa lồi cá ni quan trọng thứ hai nuôi tập trung chủ yếu tỉnh Quảng Đông Hiện nay, cá chuối hoa coi nguồn cung cấp thực phẩm Đài Loan; Nara, Hyogo, Hiroshima (Nhật Bản) Philippines (Okada, 1960; Liang et al., 1962; Hay Hodgkiss, 1981; Uyeno Akai, 1984 trích theo Water and James, 2004) Theo Yamamoto & Tagawa (2000) cá chuối hoa lồi cá ăn thịt Chen (2012) tiến hành nghiên cứu phân lập vi khuẩn Aeromonas schubertii cá chuối hoa Channa maculata bị bệnh Ju & Woof (1987) nghiên cứu khả trao đổi chất cá chuối hoa điều kiện thiếu oxy Zhao et al.(2016) nghiên cứu để đánh giá ảnh hưởng nồng độ lipid chế độ cho ăn đến tăng trưởng, oxy hóa gan chất chuyển hóa huyết cá giống lai Channa argus x Channa maculata Chen (1976) mô tả sơ kỹ thuật sản xuất nhân tạo loài Channa maculata Đài Loan 1.2.2 Tình hình nghiên cứu cá chuối hoa Việt Nam Hiện nay, cơng trình nghiên cứu cá chuối hoa nước có số nghiên cứu đặc điểm phân loại, số đặc điểm sinh học nghiên cứu sơ sản xuất giống nhân tạo Theo Mai Đình Yên (1978), miền Bắc Việt Nam có lồi thuộc giống cá Quả, bao gồm: Channa orientalis, C striata, C maculata C asiatica Nguyễn Văn Hảo (2005), Mai Đình n (1978) mơ tả hình thái cá Chuối hoa Nguyễn Thái Tự (1983); Mai Đình Yên (1978; Nguyễn Văn Hảo (2005) mơ tả mơi trường, tập tính sống, đặc điểm dinh dưỡng, sinh trưởng sinh sản cá chuối hoa Nguyễn Đình Vinh & Tạ Thị Bình (2015), tiến hành nghiên cứu số đặc điểm sinh học sinh sản cá chuối hoa khu vực Bắc Trung Bộ Tạ Thị Bình nnk.,(2015), bước đầu tiến hành thử nghiệm sinh sản cá chuối hoa (Channa maculata) điều kiện nhân tạo Như vậy, kết nghiên cứu cá chuối hoa đạt hạn chế, cần phải tiếp tục nghiên cứu đặc điểm dinh dưỡng, sinh học sinh sản đặc biệt nghiên cứu nên tập trung vào việc kích thích sinh sản phát triển ương ni cá bột lên cá giống nhằm góp phần ổn định quy trình sản xuất giống cá chuối hoa thời gian tới CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu - Nghiên cứu thực từ tháng 01/2016 đến 6/2019 - Địa điểm nghiên cứu: Mẫu cá chuối hoa thu địa điểm thuộc huyện Hà Trung, Vĩnh Lộc, Hậu Lộc, Nga Sơn, Hoằng Hóa - tỉnh Thanh Hóa phân tích phịng thí nghiệm sở Thủy sản - Viện Nơng nghiệp Tài nguyên - Trường Đại học Vinh Hình 2.1 Sơ đồ vị trí điểm thu mẫu cá chuối hoa 2.2 Vật liệu nghiên cứu 2.2.1 Mẫu vật 2.2.1.1 Mẫu vật dùng cho nghiên cứu đặc điểm sinh học Mẫu cá chuối hoa dùng cho nghiên cứu đặc điểm sinh học thu trực tiếp, mua từ ngư dân đánh bắt thuỷ vực tự nhiên địa điểm thuộc huyện Hà Trung, Vĩnh Lộc, Hậu Lộc, Nga Sơn, Hoằng Hóa - tỉnh Thanh Hóa Tổng số mẫu 820, thu từ tháng 1/2016 - 6/2018 2.2.1.2 Mẫu vật dùng cho nghiên cứu sản xuất giống - Nguồn cá bố mẹ: Được tuyển chọn từ mẫu thu thủy vực thuộc địa bàn tỉnh Thanh Hóa, khối lượng >500 g, đưa dưỡng nuôi vỗ Trại NTTS Hưng nguyên- Đại học Vinh với số lượng 96 cặp - Nguồn cá bột: Từ trình sản xuất giống nhân tạo - Thức ăn: Cá tạp, thức ăn viên chìm, thức ăn tự chế 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Sơ đồ khối nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu đặc điểm sinh học Xây dựng kỹ thuật sản xuất giống - Kỹ thuật nuôi vỗ cá bố mẹ - Kỹ thuật kích thích sinh sản - Kỹ thuật ương cá - Đặc điểm điểm dinh dưỡng - Đặc điểm sinh sản KT nuôi vỗ cá bố mẹ Xác định loại thức ăn phù hợp Xác định phần phù hợp Kỹ thuật ương cá KT kích thích sinh sản Xác định thời điểm tiêm cá đực Xác định thời điểm tiêm cá Kích Kích thích thích sinh sinh sản sản bằng não loại thùy Hormone Ương cá bột lên cá hương Xác định loại thức ăn phù hợp Kết luận kiến nghị Hình 2.2 Sơ đồ nghiên cứu đề tài Ương cá hương lên cá giống Xác Xác định định TĐ tập mật độ chuyển ương đổi thức ăn phù hợp Xác định KP ăn phù hợp 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu số đặc điểm sinh học cá chuối hoa tự nhiên 2.3.3.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm dinh dưỡng Chỉ số tương quan chiều dài ruột chiều dài tính tốn theo cơng thức Al-Hussainy (1949) Tiến hành phân loại thành phần thức ăn theo Đặng Ngọc Thanh CS (1980) Mai Đình Yên CS (1979) Shirota (1966) Phổ dinh dưỡng cá chuối hoa trưởng thành xác định theo phương pháp tần xuất xuất phương pháp khối lượng Biswas (1993) Xác định khối lượng khô mẫu loại thức ăn theo phương pháp phân tích AOAC (2000) 2.3.3.2 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh sản Các giai đoạn phát triển tuyến sinh dục mẫu cá chuối hoa xác định dựa sở quan sát hình dạng, kích cỡ màu sắc tuyến sinh dục theo thang phân chia bậc Xakun Buskaia (1968) Tiêu mô học tuyến sinh dục thực theo phương pháp cắt mẫu vùi parafin nhuộm với Haematoxyline Eosin Drury Wallington (1967) Xác định hệ số thành thục theo công thức Biswas (1993) Sức sinh sản xác định khối lượng trứng cá có tuyến sinh dục giai đoạn IV tính số lượng tế bào trứng theo công thức Banegal (1967): 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu sản xuất giống cá chuối hoa điều kiện nhân tạo 2.3.3.1 Phương pháp nuôi vỗ cá bố mẹ a/ Ảnh hưởng loại thức ăn cá bố mẹ lên khả sinh sản, chất lượng trứng cá bột Cá chuối hoa bố mẹ trước đưa vào thí nghiệm ni thức ăn cá tạp với phần ăn 5-7% khối lượng thân thời gian tháng Cá bố mẹ có khối lượng trung bình 0,85kg (từ 0,65 - 0,97 kg) bố trí ni giai lưới có kích thước (chiều dài x rộng x cao: m x m x 2m), ao diện tích 1000 m2 với mật độ thả 24 con/giai (tương đương con/m2, con/m3), tỷ lệ đực: 1: 1,5; giai nuôi cá bố mẹ tương ứng nghiệm thức (NT): NT1 cho ăn 100% cá tạp; NT2 cho ăn 50% cá tạp : 50% thức ăn viên công nghiệp (TAVCN); NT3 cho ăn 100% thức ăn công nghiệp b/ Ảnh hưởng phần ăn cá bố mẹ lên khả sinh sản, chất lượng trứng cá bột Cá bố mẹ có khối lượng trung bình 0,65 kg (từ 0,55 - 0,71), điều kiện nuôi, số lượng cá nghiệm thức, mật độ cá nuôi, phương pháp cho đẻ xác định tiêu thí nghiệm tương tự thí nghiệm Mỗi nghiệm thức cho đẻ lặp lại lần, lần cách 30-35 ngày Thức ăn cho cá bố mẹ cá tạp cho ăn với phần sau: - NT1: cho ăn với phần 5% khối lượng thân - NT2: cho ăn với phần 7% khối lượng thân - NT3: cho ăn với phần 9% khối lượng thân - NT4: cho ăn với phần 11 % khối lượng thân 2.3.3.2 Phương pháp kích thích sinh sản a Thí nghiệm Xác định thời điểm tiêm kích dục tố phù hợp cho cá đực đưa vào sinh sản Thí nghiệm gồm nghiệm thức, nghiệm thức lặp lại lần bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn: + NT 1: đực tiêm thời điểm tiêm liều định với (0h) + NT 2: đực tiêm trước thời điểm tiêm liều định 8h + NT3:con đực tiêm trước thời điểm tiêm tiêm liều định 16h + NT4: đực tiêm trước thời điểm tiêm liều định 24h b Thí nghiệm Xác định thời điểm tiêm kích dục tố liều định phù hợp cá Thí nghiệm gồm nghiệm thức, nghiệm thức lặp lại lần bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hồn toàn: + Nghiệm thức : Liều định cách liều sơ 6h + Nghiệm thức : Liều định cách liều sơ bộ12h + Nghiệm thức : Liều định cách liều sơ bộ18h + Nghiệm thức 4: Liều định cách liều sơ 24h c Thí nghiệm Kích thích cá chuối hoa sinh sản não thùy Thí nghiệm gồm có nghiệm thức bố trí hồn tồn ngẫu nhiên nghiệm thức có cặp cá bố mẹ + Nghiệm thức : mg/kg cá + Nghiệm thức : 10 mg/kg cá + Nghiệm thức : 11 mg/kg cá + Nghiệm thức 4: 12 mg/kg cá + Nghiệm thức 5: 13 mg/kg cá d Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng loại hormone sử dụng để kích thích sinh sản cá chuối hoa lên chất lượng trứng ấu trùng Thí nghiệm gồm có nghiệm thức bố trí hồn tồn ngẫu nhiên nghiệm thức có cặp cá bố mẹ + Nghiệm thức 1: 3500 IU HCG/kg cá + Nghiệm thức 2: 60µg LRHa + 15mg DOM/kg cá cái) + Nghiệm thức 3: 12 µg Não thùy thể /kg cá + Nghiệm thức 4: Tiêm nước muối sinh lý liều lượng 0,5 ml/kg 2.3.3.3 Phương pháp nghiên cứu ương cá a Ảnh hưởng loại thức ăn lên sinh trưởng, tỷ lệ sống hệ số phân đàn cá giai đoạn cá bột lên cá hương Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với nghiệm thức, nghiệm thức lặp lại 3lần NT1: Moina + Thức ăn công nghiệp NT2: Moina + Giun (trùn chỉ) NT3: Moina + Moi (tép biển) b/ Ảnh hưởng chế độ tập chuyển đổi thức ăn lên sinh trưởng, tỷ lệ sống hệ số phân đàn cá giai đoạn cá bột lên cá hương Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với nghiệm thức tập chuyển đổi thức ăn tươi sống sang TACB thời điểm, nghiệm thức lặp lại lần NT1: Chuyển đổi TACB từ ngày thứ sau ương; NT2: Chuyển đổi TACB từ ngày thứ sau ương; NT3: Chuyển đổi TACB từ ngày thứ 11 sau ương; NT4: chuyển đổi TACB từ ngày 13 sau ương; NT5: chuyển đổi TACB từ ngày 15 sau ương NT6: chuyển đổi TACB từ ngày 17 sau ương c Ảnh hưởng mật độ ương lên sinh trưởng, tỷ lệ sống hệ số phân đàn cá giai đoạn cá hương lên cá giống Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên nghiệm thức lần lặp lại gồm có nghiệm thức ương mật độ ương 1con/lít; 1,5 con/lít, con/lít 2,5 con/lít d Ảnh hưởng phần ăn lên sinh trưởng, tỷ lệ sống hệ số phân đàn cá giai đoạn cá hương lên cá giống Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với nghiệm thức tương ứng với phần 3, 6, 9, 12 15 % khối lượng thân/ngày Mỗi nghiệm thức lặp lại lần 2.3.3.4 Phương pháp đánh giá tiêu a/ Phương pháp thu đánh giá tiêu sinh sản Các tiêu sinh sản, chất lượng trứng, cá bột xác định tính tốn dựa theo theo phương pháp Bromage (1995) Như: Tỷ lệ thành thục; Xác định số lượng cá đẻ trứng;Thời gian tái phát dục (ngày; Sức sinh sản tương đối: Tỷ lệ trứng nổi; Tỷ lệ thụ tinh ;Tỷ lệ nở (%); Tỷ lệ dị hình cá nở (%; Tỷ lệ sống cá bột sau ngày tuổi (%); Xác định số lượng cá bột, kích thước trứng, giọt dầu, cá bột: b/ Phương pháp thu đánh giá tiêu môi trường Các tiêu môi trường như: Nhiệt độ, pH, DO đo lần/ngày, vào lúc 5-6 h sáng 13-14 h c/ Phương pháp thu đánh giá số sinh trưởng Đánh giá tốc độ tăng trưởng cá: xác định định kỳ ngày/lần, 30 cá thể thu ngẫu nhiên, đo chiều dài chuẩn (SL) thước kẹp chia vạch có độ xác đến 0,1 mm khối lượng (W) tồn thân cá cân điện tử TANITA có độ xác đến 0,01 g 2.4 Phƣơng pháp xử lý phân tích số liệu Tồn số liệu thu tính tốn vẽ đồ thị phần mềm excell 2010 Số liệu thí nghiệm phân tích phương sai phần mềm SPSS 16.0 for window Sử dụng hàm phân tích phương sai nhân tố (oneway – ANOVA) Ducan test để kiểm định khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) thông số biến nghiệm thức thí nghiệm Cũng phần khác ống tiêu hóa, thành ruột cá chuối hoa gồm có lớp niêm mạc, lớp niêm mạc, lớp màng bao bên ngồi ruột.(Hình 3.8, Hình 3.9) Hình 3.8 Lát cắt ngang ruột cá chuối hoa Hình 3.9 Cấu trúc thành ruột cá a Thành ruột; b Lớp niêm mạc; a.Niêm mạc; b Lớp niêm mạc c Lớp niêm mạc c Lớp trơn; d Màng ngoài; e nếp gấp 3.1.1.2 Tỉ lệ chiều dài ruột chiều dài thân (Li/Lc) Kết xác định tỷ lệ chiều dài ruột chiều dài thân (RLG) cá chuối hoa trình bày Bảng 3.1 Bảng 3.1 Giá trị RLG theo nhóm kích cỡ Chiều dài tồn thân Trung Bình Giá trị nhỏ Giá trị lớn Số mẫu (mm) (Li/Lt) (Li/Lt) (Li/Lt) (n=344) 600 15 746,00 ± 79.59 7.283 ± 654 9.799± 701 3.1.2.6 Đường kính trứng Bảng 3.5 Biến động đường kính trứng theo kích cỡ cá chuối hoa Khối lƣợng Khối lƣợng cá thể Đƣờng kính trứng Số mẫu (con) thân cá (g) (g/con) (mm) < 300 12 252,50 ± 35,33 1,17 ± 0,01 301 - 400 10 347,20± 22,44 1,19 ± 0,01 401-500 15 454,80 ± 26,78 1,23 ± 0,02 501- 600 14 555,07 ± 22,46 1,24 ± 0,01 > 600 755,20 ± 80,48 1,25 ± 0,01 Như vậy, phạm vi nghiên cứu đề tài, nhận thấy cá chuối hoa đẻ rải rác từ tháng đến tháng 10, tập trung vào tháng đến tháng Vì vậy, nhận định mùa vụ sinh sản cá chuối hoa từ tháng đến tháng hàng 14 năm sức sinh sản tuyệt đối dao động từ 3.985-7.283 trứng/con sức sinh sản tương đối dao động từ 9,799-15.261 trứng/kg cá 3.2 Kết xây dựng kỹ thuật sản xuất giống cá chuối hoa 3.2.1 Nuôi vỗ cá bố mẹ 3.2.1.1 Ảnh hưởng loại thức ăn cho cá bố mẹ lên khả sinh sản, chất lượng trứng cá bột Bảng 3.7 Tỷ lệ thành thục, sức sinh sản, chất lượng trứng cá bột cá chuối hoa bố mẹ cho ăn thức ăn khác NT1 (cá tạp) Chỉ tiêu nghiên cứu Tỷ lệ thành thục (%) Sức sinh sản (trứng/kg cá cái) Kích thước trứng (mm) Kích thước giọt dầu (mm) Kích thước nỗn hồng (mm) Tỷ lệ thụ tinh (%) Tỷ lệ nở %) Kích thước cá bột (mm) Tỷ lệ dị hình(%) Tỷ lệ sống cá bột (%) 82,26 ± 5,23a 45.346 ± 5.009b 1,21 ± 0,006 0,27 ± 0,00 1,13 ± 0,015b 80,43 ± 2,32b 81,87± 1,49b 2,57± 0,025b 2,54± 0,04a 62,50± 3,69a NT2 Cá tạp kết hợp TAVCN 81,76 ± 6,35a 46.776 ± 5.526b 1,23 ± 0,015 0,28 ± 0,006 1,16 ± 0,015b 82,54 ± 3,21b 83,54 ± 1,46b 2,61 ± 0,030b 2,73 ± 0,12a 65,7 ± 5,45a NT3 TAVCN 65,76 ± 3,97b 32.645 ± 3.821a 1,22± 0,010 0,27 ± 0,006 1,08 ± 0,020a 72,51 ± 3,12a 78,30 ± 1,18a 2,42 ± 0,030a 4,34 ± 0,66b 66,61 ± 2,70a Trong hàng, giá trị trung bình kèm với chữ khác thể khác biệt có ý nghĩa thống kê (p