Xác định mối liên quan giữa đa hình đơn RS3738423 của gen NPHS2 với chỉ số protein creatinin niệu ở bệnh nhân mắc hội chứng thận hư tiên phát tại bệnh viện nhi trung ương

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐÀM VĂN QUÝ XÁC ĐỊNH MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐA HÌNH ĐƠN RS3738423 CỦA GEN NPHS2 VỚI CHỈ SỐ PROTEIN/CREATININ NIỆU Ở BỆNH NHÂN MẮC HỘ I CHỨNG THẬN HƯ TIÊN PHÁT TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH Y ĐA KHOA HÀ NỘI - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐÀM VĂN QUÝ XÁC ĐỊNH MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐA HÌNH ĐƠN RS3738423 CỦA GEN NPHS2 VỚI CHỈ SỐ PROTEIN/CREATININ NIỆU Ở BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG THẬN HƯ TIÊN PHÁT TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH Y ĐA KHOA Khóa: QH 2013.Y Người hướng dẫn: TS Vũ Thị Thơm ThS BS Vũ Vân Nga HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Vũ Thị Thơm – Giảng viên Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, người th ầy hướng dẫn bảo tận tình, cho tơi nhiều ý kiến nhận xét quý báu truyền đạt cho tinh thần học hỏi, làm việc nghiêm túc q trình tơi thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn ThS.Bs Vũ Vân Nga - Giảng viên Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, người thầy ln tận tâm giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu, tạo điều kiện thuận lợi sẵn sàng giải đáp thắc mắc để hồn thành khóa luận Để thực tốt khóa luận này, tơi trân trọng cảm ơn tài trợ Đại học Quốc gia Hà Nội cho đề tài mã số QG.16.23 Trong trình học tập, làm việc thực khóa luận, tơi nhận giúp đỡ thầy cô bạn sinh viên làm việc thực tập Phòng thí nghiệm Bộ mơn Y dược học sở – Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội Tôi xin chân thành cảm ơn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm khoa, toàn thể thầy cô giáo Khoa Y Dược – Đạ i học Quốc gia Hà Nội cho kiến thức quý báu trình h ọc t ập trường Cuối cùng, xin g ửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè ln bên cạnh, động viên, khích lệ tơi lúc khó khăn q trình thực khóa luận Hà Nội, ngày 06 tháng 05 năm 2019 Đàm Văn Quý bp DNA dNTP EDTA FSGS HCTH HCTHTP MCD NCBI NC KTM KTS Kb OD PCR SNP VPF DANH MỤC CÁC BẢNG Bả ng 2.1 Thành phần chu trình nhiệt PCR nhân dịng exon gen NPHS2 Bảng 3.1 Giới tính nhóm bệnh nhân Bảng 3.2 Tuổi khởi phát trung bình tuổi trung bình Bảng 3.3 Tuổi khởi phát trung bình nhóm bệnh nhân Bảng 3.4 Tỷ lệ kiểu gen, tần số alen rs3738423 (C>T) exon ba nhóm bệnh nhân Bảng 3.5 Phân bố giới theo alen đột biến rs3738423 exon 2 Bảng 3.6 Tuổi khởi phát theo alen đột biến rs3738423 exon Bảng 3.7 Protein máu theo alen đột biến rs3738423 exon Bảng 3.8 Albumin máu theo alen đột biến rs3738423 exon Bảng 3.9 Protein niệu theo alen đột biến rs3738423 exon Bảng 3.10 Protein/creatinin ni ệu theo alen đột biến rs3738423 exon Bảng 3.11 Chỉ số protein máu theo mức độ đáp ứng corticosteroid alen đột biến rs3738423 exon Bảng 3.12 Chỉ số albumin máu theo mức độ đáp ứng corticosteroid alen đột biến rs3738423 exon Bảng 3.13 Chỉ số protein niệu theo mức độ đáp ứng corticosteroid alen đột biến rs3738423 exon Bảng 3.14 Chỉ số protein/creatinin niệu theo mức độ đáp ứng corticosteroid alen đột biến rs3738423 exon 3 3 3 39 40 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Tế bào podocyte bình thường bệnh lý Hình 1.2 Gen NPHS2 vai dài nh Hình 1.3 Cấu trúc màng lọc cầu thậ Hình 1.4 Một số đột biến gen N Hình 3.1 Kết giải trình tự đa hìn DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố bệnh nhân mắc HCTH theo giới Biểu đồ 3.2 Giá trị trung bình protein máu nhóm bệnh nhân t ại thời điểm Biểu đồ 3.3 Giá trị trung bình albumin máu nhóm bệnh nhân thời điểm Biểu đồ 3.4 Giá trị trung bình protein niệu nhóm bệnh nhân thời điểm Biểu đồ 3.5 Giá trị trung bình protein/creatinin niệu nhóm bệnh nhân thời điểm 22 26 27 28 Mục lục ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hội chứng thận hư tiên phát .3 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Đặc điểm dịch tễ 1.1.3 Cơ chế sinh bệnh học HCTHTP 1.1.4 Tiêu chuẩn chẩn đoán HCTHTP HCTHTP kháng corticosteroid 1.1.5 Điều trị HCTHTP 1.1.6 Vai trò số Protein/Creatinin niệu chẩn đoán theo dõi điều trị HCTHTP 10 1.2 Đa hình di truyền NPHS2 11 1.2.1 Vị trí, cấu trúc, vai trị gen NPHS2 11 1.2.2 Đa hình đơn rs3738423 gen NPHS2 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng nghiên cứu .15 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4 Xử lý số liệu .21 2.5 Đạo đức nghiên cứu 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 22 3.1 Đặc điể m chung 22 3.1.1 Giới 22 3.1.2 Tuổi 23 3.2 K ế t cận lâm sàng .25 3.2.1 Chỉ số protein máu 25 3.2.2 Chỉ số albumin máu 26 3.2.3 Chỉ số protein niệu 27 3.2.4 Chỉ số protein/creatinin niệu 28 3.3 Kết tần số phân bố alen tỷ lệ kiểu gen 3.3.1 Tỷ lệ kiểu gen, tần số alen 3.3.2 Liên quan đến giới tính 3.3.3 Liên quan đến tuổi khởi phát 3.3.4 Liên quan đến protein máu 3.3.5 Liên quan đến albumin máu 3.3.6 Liên quan đến protein niệu 3.3.7 Liên quan đến protein/cretinin niệu 3.4 37 Mối liên quan đa hình thái đơn rs3738423 với số sinh hóa 3.4.1 Chỉ số protein máu 3.4.2 Chỉ số albumin máu 3.4.3 Chỉ số protein niệu 3.4.4 Chỉ số protein/cretinin niệu KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC KẾT LUẬN Nghiên cứu thực 149 bệnh nhân HCTHTP có 58 trường hợp nhạy cảm corticoid, 56 trường hợp kháng thuốc sớm, 35 trường hợp kháng thuốc muộn điều trị Bệnh viện Nhi Trung Ương từ 09/2015 đến 03/2017, rút kết luận sau: Đa hình đơn chủ yếu ba nhóm nhạy cảm, kháng thuốc sớm, kháng thuốc muộn CC với tỷ lệ 81,03%, 76,79% 80% Đa hình TT gặp trường hợp, nằm nhóm nhạy cảm kháng thuốc muộn Chính alen C chiếm tỷ lệ cao nhóm với tỷ l ệ alen C/T 0,9/0,1 nhóm nhạy cảm, nhóm kháng thuốc sớm 0,88/0,12 nhóm kháng thuốc muộn 0,89/0,11 Đa hình thái đơn rs3738423 có tác dụng làm giảm số protein/creatinin niệu nhóm bệnh nhạy cảm kháng thuốc muộn, lại làm tăng số nhóm bệnh nhân kháng thuốc sớm 43 KIẾN NGHỊ Trong khuôn khổ đề tài với cỡ mẫu cịn hạn chế chưa thấy rõ ảnh hưởng mối tương quan đa hình di truyền kiểu gen rs3738423 gen NPHS2 lên số sinh hóa bệnh nhân Có thể tiến hành với cỡ mẫu lớn để khẳng định mối liên quan quần thể bệnh nhân nhi mắc hội chứng thận hư tiên phát Ngoài tiến hành phân tích tương tác SNP khác gen NPHS2 với tình trạng kháng corticosteroid Phân tích tương tác HCTH kháng corticosteroid với gen khác NPHS1 , WT1, CD2AP, ACTN4… để xây dựng panel xét nghiệm di truyền hỗ trợ công tác điều trị HCTHTP corticosteroid 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Phạm Văn Đếm, Nguyễn Thị Quỳnh Hương Nguyễn Thu Hương (2015), "Một số yếu tố dịch tễ lâm sàng Hội chứng thận hư Khoa Thận Lọc máu, Bệnh viện Nhi Trung ương năm 2015", Tạp chí Y học Thực hành, 624(45-53 Phạm Thu Hiền, Trịnh Thị Phương Dung, Trần Thị Chi Mai (2012), "Tiện ích số protein/cretinin nước tiểu đánh giá protein niệu hội chứng thận hư trẻ em", Tạp chí nghiên cứu y học, 80(3), 35-39 Phạm Trung Kiên (2016), Giáo trình Nhi khoa, Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Trần Đình Long (2012), Bệnh học thận tiết ni ệu sinh dục lọc máu trẻ em, Nhà xuất Y học Dương Thị Thúy Nga (2011), Nhận xét kết điều trị hội chứng thận hư tiên phát kháng corticosteroid khoa Th ận - Tiết niệu bệnh viện Nhi Trung Ương, Luận văn thạc sỹ y học, Đại học Y Hà Nội Trần Hữu Minh Quân, Loan Huỳnh Thoại Quang Nguyễn Ðức (2014), "Đặc điểm hội chứng thận hư kháng steroid bệnh viện Nhi Đồng I", Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 18(4), 80-86 Nguyễn Ngọc Sáng (1987), Nhận xét đặc điểm lâm sàng sinh học qua 52 trường hợp HCTHTP thể kháng thuốc trẻ em, Luận văn tốt nghiệp bác sĩ nội trú bệnh viện, Đại học Y Hà Nội Nguyễn Ngọc Sáng (1999), Đánh giá hiệu điều trị Methylprednisolon nh ững thay đổi miễn dịch trước sau điều trị hội chứng thận hư tiên phát trẻ em, Luận án tiến sĩ y học, Đại học Y Hà Nội Đoàn Thị Thắm (2012), Nhận xét kết điều trị hội chứng thận hư tiên phát, Luận văn thạc sỹ y học, Đại học Y Hà Nội Tiếng Anh 10 Abitbol Carolyn, Zilleruelo Gaston, Frendlich Michael, et al (1990), "Quantitation of proteinuria with urinary protein/creatinine ratios and random testing with dipsticks in nephrotic children", The Journal of pediatrics, 116(2), 243-247 11 Adamson O, Trachtman H and Tejani A (1986), "Urinary protein electrophoresis patterns in childhood idiopathic nephrotic syndrome", The International journal of pediatric nephrology, 7(4), 181-186 12 Akchurin Oleh and Reidy Kimberly J (2015), "Genetic causes of proteinuria and nephrotic syndrome: impact on podocyte pathobiology", Pediatric Nephrology, 30(2), 221-233 13 Audard Vincent, Larousserie F, Grimbert P, et al (2006), "Minimal change nephrotic syndrome and classical Hodgkin's lymphoma: report of 21 cases and review of the literature", Kidney international, 69(12), 2251-2260 14 Bakker Winston W, Van Dael Catharina Ml, Pierik Leonie Jwm, et al (2005), "Altered activity of plasma hemopexin in patients with minimal change disease in relapse", Pediatric Nephrology, 20(10), 1410-1415 15 Banaszak Beata and Banaszak Paweł (2012), "The increasing incidence of initial steroid resistance in childhood nephrotic syndrome", Pediatric Nephrology, 27(6), 927-932 16 Banh Tonny Hm, Hussain-Shamsy Neesha, Patel Viral, et al (2016), "Ethnic differences in incidence and outcomes of childhood nephrotic syndrome", Clinical Journal of the American Society of Nephrology , 11(10), 1760-1768 17 Bhimma Rajendra, Adhikari Miriam and Asharam Kareshma (2006), "Steroid-resistant nephrotic syndrome: the influence of race on cyclophosphamide sensitivity", Pediatric Nephrology, 21(12), 1847-1853 18 Biswas Arnab, Kumar R, Chaterjee A, et al (2009), "Quantitation of proteinuria in nephrotic syndrome by spot urine protein creatinine ratio estimation in children", Mymensingh medical journal: MMJ, 18(1), 67-71 19 Bouchireb Karim, Boyer Olivia, Gribouval Olivier, et al (2014), "NPHS Mutations in Steroid‐Resistant Nephrotic Syndrome: A Mutation Update and the Associated Phenotypic Spectrum", Human mutation, 35(2), 178-186 20 Boute Nicolas, Gribouval Olivier, Roselli Séverine, et al (2000), "NPHS2, encoding the glomerular protein podocin, is mutated in autosomal recessive steroid-resistant nephrotic syndrome", Nature genetics, 24(4), 349 21 Brenner Barry M, Hostetter Thomas H and Humes H David (1978), "Molecular basis of proteinuria of glomerular origin", New England Journal of Medicine, 298(15), 826-833 22 Caridi Gianluca, Bertelli Roberta, Carrea Alba, et al (2001), "Prevalence, genetics, and clinical features of patients carrying podocin mutations in steroidresistant nonfamilial focal segmental glomerulosclerosis", Journal of the American Society of Nephrology, 12(12), 2742-2746 23 Chang Jei-Wen, Tsai Hsin-Lin, Wang Hsin-Hui, et al (2009), "Clinicopathological features and prognosis of Chinese children with idiopathic nephrotic syndrome between different age groups", European journal of pediatrics, 168(10), 1189-1194 24 Day Clara J, Cockwell Paul, Lipkin Graham W, et al (2002), "Mycophenolate mofetil in the treatment of resistant idiopathic nephrotic syndrome", Nephrology Dialysis Transplantation, 17(11), 2011-2013 25 Ding Wen Y and Saleem Moin A (2012), "Current concepts of the podocyte in nephrotic syndrome", Kidney research and clinical practice, 31(2), 87-93 26 Gbadegesin Rasheed and Smoyer William E (2008), Nephrotic syndrome, Elsevier Inc 27 Glomerulonephritis Kdigo Clinical Practice Guideline For (2012), "Steroid-sensitive nephrotic syndrome in children", Kidney International Supplements 2, chapter 3, 163-171 28 Glomerulonephritis Kdigo Clinical Practice Guideline For (2012), "Steroid-sensitive nephrotic syndrome in children", Kidney International Supplements 2, chapter 4, 162-176 29 Ha Tae-Sun (2013), "Roles of adaptor proteins in podocyte biology", World journal of nephrology, 2(1), 30 Hahn Deirdre, Hodson Elisabeth M, Willis Narelle S, et al (2015), "Corticosteroid therapy for nephrotic syndrome in children", Cochrane Database of Systematic Reviews, 3) 31 Joshi Bhoomi B, Mistry Kinnari N, Gang Sishir, et al (2017), "Characterization of NPHS2 gene polymorphisms associated to steroid resistance nephrotic syndrome in Indian children", Gene, 628(134-140 32 Junli Huang (2012), Genetics of nephrotic syndrome in singapore pediatrics patients, Doctoral dissertation , National University Singapore 33 Kang Hee Gyung and Cheong Hae Il (2015), "Nephrotic syndrome: what's new, what's hot?", Korean journal of pediatrics, 58(8), 275-282 34 Karle Stephanie M, Uetz Barbara, Ronner Vera, et al (2002), "Novel mutations in NPHS2 detected in both familial and sporadic steroid-resistant nephrotic syndrome", Journal of the American Society of Nephrology, 13(2), 388393 35 Koskimies O, Vilska J, Rapola J, et al (1982), "Long-term outcome of primary nephrotic syndrome", Archives of disease in childhood, 57(7), 544-548 36 Lennon Rachel, Singh Anurag, Welsh Gavin I, et al (2008), "Hemopexin induces nephrin-dependent reorganization of the actin cytoskeleton in podocytes", Journal of the American Society of Nephrology, 19(11), 2140-2149 37 Lombel Rebecca M, Gipson Debbie S and Hodson Elisabeth M (2013), "Treatment of steroid-resistant nephrotic syndrome in children: new guidelines from KDIGO", Pediatric Nephrology, 28(3), 409–414 38 Mccarthy Hugh J, Bierzynska Agnieszka, Wherlock Matt, et al (2013), "Simultaneous sequencing of 24 genes associated with steroid-resistant nephrotic syndrome", Clinical Journal of the American Society of Nephrology, 8(4), 637 648 39 Megremis Spyridon, Mitsioni Andromachi, Mitsioni Artemis G, et al (2009), "Nucleotide variations in the NPHS2 gene in Greek children with steroid-resistant nephrotic syndrome", Genetic testing and molecular biomarkers, 13(2), 249-256 40 Mekahli Djalila, Liutkus Aurelia, Ranchin Bruno, et al (2009), "Long-term outcome of idiopathic steroid-resistant nephrotic syndrome: a multicenter study", Pediatric Nephrology, 24(8), 1525-1532 41 Mubarak Muhammed, Lanewala Ali, Kazi Javed Iqbal, et al (2009), "Histopathological spectrum of childhood nephrotic syndrome in Pakistan", Clinical and experimental nephrology, 13(6), 589-593 42 Niaudet Patrick (2004), "Podocin and nephrotic syndrome: implications for the clinician", 15(3), 832-834 43 Pavenstadt Hermann, Kriz Wilhelm and Kretzler Matthias (2003), "Cell biology of the glomerular podocyte", Physiological reviews, 83(1), 253-307 44 Rachmadi Dedi, Melani Ani and Monnens Leo (2015), "NPHS2 gene mutation and polymorphisms in indonesian children with steroid-resistant nephrotic syndrome", Open Journal of Pediatrics, 5(01), 27 45 Reiser Jochen, Von Gersdorff Gero, Loos Martin, et al (2004), "Induction of B7-1 in podocytes is associated with nephrotic syndrome", The Journal of clinical investigation, 113(10), 1390-1397 46 Roy Ranjit Ranjan, Islam Md Rafiqul, Jesmin Tahmina, et al (2013), "Prognostic Value of Biochemical and Hematological Parameters in Children with Nephrotic Syndrome", Journal of Shaheed Suhrawardy Medical College, 5(2), 9598 47 Sadowski Carolin E, Lovric Svjetlana, Ashraf Shazia, et al (2015), "A single-gene cause in 29.5% of cases of steroid-resistant nephrotic syndrome", Journal of the American Society of Nephrology, 26(6), 1279-1289 48 Savin Virginia J, Sharma Ram, Sharma Mukut, et al (1996), "Circulating factor associated with increased glomerular permeability to albumin in recurrent focal segmental glomerulosclerosis", New England Journal of Medicine, 334(14), 878-883 49 Schwarz Karin, Simons Matias, Reiser Jochen, et al (2001), "Podocin, a raft-associated component of the glomerular slit diaphragm, interacts with CD2AP and nephrin", The Journal of clinical investigation, 108(11), 1621-1629 50 Tory Kálmán, Menyhárd Dóra K, Woerner Stéphanie, et al (2014), "Mutation-dependent recessive inheritance of NPHS2-associated steroidresistant nephrotic syndrome", Nature genetics, 46(3), 299 51 Tryggvason Karl, Patrakka Jaakko and Wartiovaara Jorma (2006), "Hereditary proteinuria syndromes and mechanisms of proteinuria", New England Journal of Medicine, 354(13), 1387-1401 52 Wada Takehiko and Nangaku Masaomi (2015), "A circulating permeability factor in focal segmental glomerulosclerosis: the hunt continues", Clinical kidney journal, 8(6), 708-715 53 Weber Stefanie, Gribouval Olivier, Esquivel Ernie L, et al (2004), "NPHS2 mutation analysis shows genetic heterogeneityof steroid-resistant nephrotic syndrome and lowpost-transplant recurrence", Kidney international, 66(2), 571579 54 Weening Jan J (2004), "Role of the immune system in the pathogenesis of idiopathic nephrotic syndrome", Clinical Science, 107(2), 125-136 55 Wharram Bryan L, Goyal Meera, Wiggins Jocelyn E, et al (2005), "Podocyte depletion causes glomerulosclerosis: Diphtheria toxin–induced podocyte depletion in rats expressing human diphtheria toxin receptor transgene", Journal of the American Society of Nephrology , 16(10), 2941-2952 56 Wong William (2007), "Idiopathic nephrotic syndrome in New Zealand children, demographic, clinical features, initial management and outcome after twelve‐month follow‐up: Results of a three‐year national surveillance study", Journal of paediatrics and child health, 43(5), 337-341 57 Wu Mei‐Chen, Wu Jer‐Yuarn, Lee Cheng‐Chun, et al (2001), "A novel polymorphism (c288C> T) of the NPHS2 gene identified in a Taiwan Chinese family", Human mutation, 17(1), 81-82 58 Yu Zihua, Ding Jie, Huang Jianping, et al (2005), "Mutations in NPHS2 in sporadic steroid-resistant nephrotic syndrome in Chinese children", Nephrology Dialysis Transplantation , 20(5), 902-908 59 Zhu Li, Yu Lei, Wang Chen‐Dan, et al (2009), "Genetic effect of the NPHS2 gene variants on proteinuria in minimal change disease and immunoglobulin A nephropathy", Nephrology, 14(8), 728-734 PHỤ LỤC Phụ lục Quy trình tách chiết ADN tổng số sử dụng E.Z.N.A blood DNA Mini Kit Rã đơng mẫu máu đá để hóa chất nhiệt độ phòng Lắc ống máu Chuyển 250 µl mẫu vào ống ly tâm vơ trùng Thêm 25 µl OB Protease Solution 250 µl BL Buffer Vortex 10 giây Ủ 65oC 10 phút Chú ý: Sau ủ phút, vortex 15 giây Thêm 260 µl Ethanol 100%, vortex 20 giây Ly tâm 1000 vòng/ phút 15 giây để đả m bảo mẫu khơng dính thành nắp ống Chèn HiBind ADN Mini Column vào Collection Tube 2ml Chuyển toàn mẫu vào cột (để pipet mức 790 µl) Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 10 Bỏ dịch lọc Collection Tube 11 Lắp HiBind ADN Mini Column vào Collletion Tube 2ml 12 Thêm 500 µl HBC Buffer 13 Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 14 Bỏ dịch lọc sử dụng lại Colletion Tube 15 Thêm 700 µl ADN Wash Buffer 16 Ly tâm phút 10.000g 17 Bỏ dịch lọc sử dụng lại Colletion Tube 18 Lặp lại bước 14 đến 16 cho bước rửa thứ với ADN Wash Buffer 19 Ly tâm HiBind ADN Mini Column 14.000 vòng/ phút phút để làm khô cột 20 Chuyển HiBind ADN Mini Column vào ống ly tâm 2ml 21 Thêm 100 µl Elution Buffer (đã làm ấm đến 65oC) Ủ 65oC phút 22 Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 23 Thêm 50 µl Elution Buffer phút nhiệt độ phòng 24 Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 25 Thu vào bảo quản ADN -20oC Phụ lục Quy trình kiểm tra chất lượng ADN thông qua điện di Bước 1: Chuẩn bị gel agarose Pha Agarose bột đệm TAE 1X để đạt nồng độ dung dịch gel agarose 1,5% Đun lò vi sóng cho agarose tan hồn tồn, sau để nguội đến 50 – 60oC đổ vào khay điện di có cài sẵn lược để tạo giếng nhỏ Sau khoảng 30 phút, gel đông, gỡ lược đặt gel vào bể điện di tư nằm ngang Đổ đệm TAE 1X vào bể điện di ngập cách mặt gel 1- mm Bước 2: Tra mẫu ADN Mẫu ADN trộn với ADN dye 6X (chất chứa hai chất nhuộm màu khác nhau: bromophenol xanh xylene cyanol FF để theo dõi trực quan di chuyển gel điện trường, 5µl ADN mẫ u 5µl ADN thang chuẩn Lambda/Hind III Marker tra vào gi ếng Bước 3: Chạy điện di Quá trình chạy điện di tiến hành hiệu điện 70V 60 phút ADN di chuyển từ cực âm sang cực dương Quan sát di chuyển màu để biết dừng điện di Bản gel lấy nhẹ khỏi khuôn soi ghi hình ánh sáng tử ngoại Phụ lục Danh sách bệnh nhân nghiên cứu STT Họ tên 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 Nguyễn Tường Duy A Hoàng Bá T Hoàng Trường G Nguyễn Thị Thu T Trần Kỳ A Đào Đức N Trần Duy Q Trần Minh K Ngô Mai T Tống Văn Bảo N Lưu Hương G Kiều Thị Hải M Trần Ngọc H Nguyễn Quốc C Nguyễn Vũ Ngọc K LêBáĐ Thái Hữu L Vũ Gia L Đỗ Thị H Linh Minh H Phạm Phát L Vũ Đức S Bàn Phúc T Tô Đức T Phạm Thị T Nguyễn Quang K Trần Thị T Lê Tuyền C Vũ Thị T Bùi Quý T Vũ Văn T Vi Thị L Trần Như Q Ngô Minh H Trần Thị T 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 Nguyễn Đình Q Trần Bích L Phạm Vũ Hoàng A Vương Ngọc Anh Đ Nguyễn Thị Thanh N Nguyễn Ngọc M Vũ Tiến Đ Nguyễn Phương D Lê Chung H Nguyễn Thị Bích D Nguyễn Thị Phương A Đồng Sĩ N Phạm Hoàng A Bùi Thị Mai Ph Nguyễn An K Hoàng Phúc H Nguyễn Vũ Tùng A Đặng Sĩ H Trần Hữu Trung H Phạm Anh V Trần Xuân Q Lù Văn T Ngô Lệ Q Nguyễn Văn Q Nguyễn Thị M Trương Ngọc H Nguyễn Đức A Nguyễn Xuân P Chu Anh Đ Lê Ngọc T Nguyễn Quốc V Bùi Trung H Nguyễn Tuấn D Bùi Trần Trung K Nguyễn Tiến D Phan Hoàng B Nguyễn Trà M Hoàng Ngọc H Lê Hữu T 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 Vũ Đặng Lam A Nguyễn Hoàng H Nguyễn Văn T Đinh Ngọc K Nguyễn Tứ M Hà Hải N Nguyễn Thùy L Nguyễn Thị H Nguyễn Đình Khánh N Đỗ Quang T Đỗ Quang M Nguyễn Hoàng L Hoàng Lê Anh T Trịnh Duy T Nguyễn Anh K Lê Ngọc Minh T Đỗ Quang T Đinh Gia L Ma Văn T Nguyễn Hồng T Nguyễn Thị Vân A Nguyễn Hoàng L Lê Đình H Nguyễn Thu H Nguyễn Văn T Lê Thanh N Phạm Khánh D Hoàng Xuân T Hà Thùy L Nguyễn Hoàng H Nguyễn Nam K Nguyễn Đức T Nguyễn Thu H Lý Tiến V Kiều Quang H Trần Tiến H Hồng Minh Đ Trần Xn Q Ngơ Tuấn H 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 Đỗ Văn H Phạm Thị Bảo C Vũ Văn D Lê Ngọc Minh T Lê Phương N Thạch Phúc T Hứa Xuân T Nguyễn Văn T Tạ Bảo L Phạm Huy Nhật M Trần Khánh G Đặng Duy A Hoàng Hải N Nguyễn Thiên  Đào Yến N Tào Minh Đ Lê Quỳnh A Nguyễn Đức D Trương Quang B Đặng Hải N Nguyễn Nhật T Nguyễn Huy H Hoàng Minh Đ Nguyễn Trường T Nguyễn Gia H Trần Đức T Lê Xuân K Hoàng Thị H Nguyễn Huy H Nguyễn Nhật T Vũ Đức M Ngô Văn D Tran Le Bao H Lê Đình H Trần Lê Trí D Vũ Đăng K ... ĐÀM VĂN QUÝ XÁC ĐỊNH MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐA HÌNH ĐƠN RS3738423 CỦA GEN NPHS2 VỚI CHỈ SỐ PROTEIN/ CREATININ NIỆU Ở BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG THẬN HƯ TIÊN PHÁT TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG KHÓA LUẬN... rs3738423 gen NPHS2 với số protein/ creatinin niệu bệnh nhân mắc hội chứng thận hư tiên phát Bệnh viện Nhi Trung Ương? ?? Mục tiêu: - Xác định tỉ lệ đa hình thái đơn rs3738423 gen NPHS2 bệnh nhân nhi mắc. .. Xác định mối liên quan đa hình thái đơn rs3738423 với số protein/ creatinine niệu bệnh nhân nhi mắc HCTHTP CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hội chứng thận hư tiên phát 1.1.1 Khái niệm Hội chứng thận