Phân lập và xác định cấu trúc một số hợp chất lanostan triterpen từ phân đoạn dicloromethan của nấm cổ cò ganoderma flexipes pat , họ ganodermataceae thu hái tại tây nguyên

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG THỊ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT LANOSTAN TRITERPEN TỪ PHÂN ĐOẠN DICLOROMETHAN CỦA NẤM CỔ CÒ - GANODERMA FLEXIPES PAT., HỌ GANODERMATACEAE THU HÁI TẠI TÂY NGUYÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG THỊ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT LANOSTAN TRITERPEN TỪ PHÂN ĐOẠN DICLOROMETHAN CỦA NẤM CỔ CÒ - GANODERMA FLEXIPES PAT., HỌ GANODERMATACEAE THU HÁI TẠI TÂY NGUYÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa : QH.2014.Y Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Duyên TS Nguyễn Hữu Tùng Hà Nội - 2019 LỜI CẢM ƠN Đề tài “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất lanostan triterpen từ phân đoạn diclomethan Nấm cổ cò - Ganoderma flexipes Pat., họ Ganodermataceae thu hái Tây Nguyên” kết cho qúa trình học tập, rèn luyện em Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội q trình nghiên cứu, thực tập Khoa Hóa Thực vật, Viện Dược liệu Trong thời gian thực khóa luận tốt nghiệp này, em nhận giúp đỡ tận tình q thầy cơ, gia đình bạn bè Qua em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: TS Nguyễn Thị Duyên - Khoa Hóa Thực Vật - Viện Dược liệu, TS Nguyễn Hữu Tùng - Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, trực tiếp bảo, hướng dẫn em hoàn thành đề tài khóa luận Lãnh đạo, thầy công tác Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ, hướng dẫn, tạo điều kiện để em học tập, nghiên cứu Khoa suốt năm học qua Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Dược liệu, đặc biệt cán bộ, nhân viên khoa Hóa Thực vật giúp đỡ em trình thực đề tài Gia đình, bạn bè, người ln quan tâm, giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện cho em suốt thời gian học tập, nghiên cứu vừa qua Dù nhận hướng dẫn giúp đỡ từ nhiều nguồn kiến thức thời gian cịn hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận thơng cảm ý kiến đóng góp q thầy cơ, bạn bè để khóa luận em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Đặng Thị Quỳnh DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN Các phương pháp sắc ký CC HPLC TLC Các phương pháp phổ H-NMR 13 C-NMR DEPT ESI-MS HMBC HSQC MS UV-Vis Các loại dung môi, phân đoạn dịch chiết DCM DL/DM DNCC ENCC EtOAc MeOH WNCC Các ký hiệu sinh học AChE AD AIDS CAT DNA ED50 ERK FGFR GPx HBV HIV HSV IC50 NPC Nrf2 RNA ROS SOD Các ký hiệu viết tắt khác m/z Mp STT TLTK v/v VKH&CNVN DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Bảng 1.1 Bảng 1.2 Bảng 1.3 Bảng 1.4 Bảng 1.5 Bảng DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Ganoderma 1.1.1 Vài nét thực vật chi Ganoderma 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.2.1.Triterpen/ Triterpenoid 1.1.2.2.Sterol 1.1.2.3.Polysaccharit 1.1.3 Tác dụng sinh học 10 1.1.3.1.Tác dụng gây độc tế bào chống ung thư 10 1.1.3.2.Tác dụng chống oxi hóa, bảo vệ gan 12 1.1.3.3.Tác dụng kháng virut 13 1.1.3.4.Tác dụng kháng vi khuẩn, kháng nấm 13 1.1.3.5.Tác dụng hệ thần kinh 14 1.1.3.6.Tác dụng khác 15 1.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu - Nấm Cổ cò 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.2 Hóa chất, thiết bị 19 2.2.1 Hóa chất, dung mơi 19 2.2.2 Thiết bị 19 2.3 Phương pháp chiết xuất phân lập xác định cấu trúc hợp chất tinh khiết 20 2.3.1 Phương pháp chiết xuất phân lập 20 2.3.2 Phương pháp xác định nhận dạng cấu trúc 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Chiết phân đoạn nấm Cổ cò phân lập hợp chất từ cao phân đoạn diclomethan 24 3.1.1 Kết chiết phân đoạn nấm Cổ cò 24 3.1.2 Kết phân lập hợp chất tinh khiết từ cao phân đoạn diclomethan nấm Cổ cò 26 3.1.3 Kết kiểm tra độ tinh khiết 27 3.2 Biện luận cấu trúc hợp chất NCC03 NCC06 28 3.2.1 Hợp chất NCC03 28 3.2.2 Hợp chất NCC06 30 3.3 Bàn luận 32 3.3.1 Về chiết xuất 32 3.3.2 Về phân lập, tinh chế nhận dạng cấu trúc hợp chất 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 Kết luận 35 Kiến nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với tiến khoa học – kỹ thuật, xu hướng quay với thiên nhiên, tìm phương thuốc truyền thống dân gian ngày quan tâm, phát triển Dược thảo thiên nhiên ngày đóng vai trò quan trọng phòng, chữa bệnh nâng cao sức khoẻ Trong đó, việc tìm loại dược liệu có nguồn gốc thiên nhiên để chữa bệnh hiểm nghèo sở khoa học có ý nghĩa vô to lớn [10] Nấm Linh chi loại dược liệu quý y học cổ truyền Với thành phần hóa học có chứa polysaccharit (giàu β-glucan), triterpenoid, steroid, saponin…, nấm Linh chi ghi nhận có tác dụng phòng chống ung thư, tăng cường hệ miễn dịch, giải độc gan, hỗ trợ điều trị tiểu đường, giảm cholesterol máu… Chính thế, nhu cầu sử dụng nấm Linh chi phòng ngừa điều trị bệnh lớn, khơng Việt Nam, mà cịn nhiều nơi giới Nhật Bản, Trung Quốc, Hàn Quốc, Đài Loan, Malaysia, Thái Lan,…[9] Theo Nấm linh chi - Tài nguyên dược liệu quý Việt Nam Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, nước ta có khoảng 80 lồi nấm Linh chi, chiếm khoảng 1/3 số loài giới với khơng lồi mới, đặc hữu [7] Riêng Vườn Quốc gia Kon Ka Kinh thuộc khu vực Tây Nguyên, chi Ganoderma có 25 lồi, 10 lồi có tác dụng dược liệu Ganoderma tornatum, Ganoderma amboinense, Ganoderma lobatum, Ganoderma Ganoderma gibbosum, Ganoderma capense, applanatum, Ganoderma lucidum, Ganoderma flexipes, Ganoderma tropicum, Ganoderma cochlear, loài cịn lại chưa biết rõ ý nghĩa [6] Do đó, nghiên cứu tài nguyên nấm Linh chi Việt Nam cơng trình có ý nghĩa mang lại hiệu to lớn cho người trồng nấm Tuy nhiên, hầu hết nghiên cứu (cả nước) chi Ganoderma dừng lại đối tượng Ganoderma lucidum Trong công bố số 10 lồi có tác dụng dược liệu Vườn Quốc gia Kon Ka Kinh, nấm Cổ cò - Ganoderma flexipes lại chưa nghiên cứu thành phần hóa học giá trị sử dụng Vì vậy, để góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học Ganoderma flexipes, em thực đề tài “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất lanostan triterpen từ phân đoạn dicloromethan nấm Cổ cò PHỤ LỤC BỘ PHỔ CỦA HỢP CHẤT NCC03 Cấu trúc hóa học hợp chất NCC03 (3β-Acetoxyl- lanosta-7,9(11),24-triene-26-ol) Phổ khối ESI-MS hợp chất NCC03 Phổ H-NMR hợp chất NCC03 Phổ 13 C-NMR hợp chất NCC03 Phổ DEPT hợp chất NCC03 Phổ HMBC hợp chất NCC03 Phổ HSQC hợp chất NCC03 PHỤ LỤC BỘ DỮ LIỆU KHỐI PHỔ CỦA HỢP CHẤT NCC06 Cấu trúc hóa học hợp chất NCC06 (lanostan-7,9(11),24-triene-3β,26-diol, ganodermadiol) Phổ khối ESI-MS hợp chất NCC06 Phổ H-NMR hợp chất NCC06 Phổ 13 C-NMR hợp chất NCC06 Phổ DEPT hợp chất NCC06 ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG THỊ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT LANOSTAN TRITERPEN TỪ PHÂN ĐOẠN DICLOROMETHAN CỦA NẤM CỔ CÒ - GANODERMA FLEXIPES PAT. , HỌ GANODERMATACEAE. .. dicloromethan nấm Cổ cò Ganoderma flexipes Pat. , họ Ganodermataceae thu hái Tây Nguyên? ?? với mục tiêu cần đạt được: Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn dicloromethan Xác định nhận dạng cấu trúc chất. .. singlet δH 0,5 7, 1,0 1, 0,8 8, 0,9 9, 0,8 8 1,6 7; tín hiệu douplet δH 0,9 2 (d, J = 6,5 Hz); ba tín hiệu prtoton olefin δH 5,4 7 (1H, d, J = 6,0 Hz ), 5,3 2 (1H, d, J = 6,0 Hz ), 5,4 0 (1H, t, J = 7,0 Hz);