Bài viết trình bày đánh giá ảnh hưởng của quy trình đông lạnh thủ công tinh trùng người lên chỉ số phân mảnh DNA tinh trùng (DFI). Quy trình đông lạnh thủ công tinh trùng người không ảnh hưởng đến độ phân mảnh DNA tinh trùng khi đánh giá bằng bộ thuốc thử thương mại Halosperm® G2.
PHỤ KHOA – NỘI TIẾT, VÔ SINH NGUYỄN AN KHANG, MÃ PHẠM QUẾ MAI, NGUYỄN TRƯƠNG THÁI HÀ, NGUYỄN MINH TÀI LỘC, NGUYỄN THỤY TRÀ MY, HÀ THANH QUẾ, ĐINH LÊ DUY NHƠN, NGUYỄN ẤN BÌNH ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG CỦA QUY TRÌNH ĐƠNG LẠNH THỦ CƠNG TINH TRÙNG NGƯỜI LÊN CHỈ SỐ PHÂN MẢNH DNA TINH TRÙNG (DFI) Nguyễn An Khang (1), Mã Phạm Quế Mai (2), Nguyễn Trương Thái Hà (2), Nguyễn Minh Tài Lộc (3), Nguyễn Thụy Trà My (4), Hà Thanh Quế (4), Đinh Lê Duy Nhơn (4), Nguyễn Ấn Bình(5) (1) Bệnh viện đa khoa Vạn Hạnh, (2) Bệnh viện Tân Sơn Nhất, (3) Bệnh viện Đa khoa Mỹ Đức, (4) Bệnh viện An Sinh, (5) Khoa Y – ĐHQG-HCM Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Từ khóa: quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng người, số phân mảnh DNA tinh trùng (DFI) Key words: human sperm cryopresevation using manual method, sperm DNA fragmentation index (DFI) 138 Tác giả liên hệ (Corresponding author): Nguyễn An Khang, email: ankhang2490@gmail.com Ngày nhận (received): 08/06/2018 Ngày phản biện đánh giá báo (revised): 25/06/2018 Ngày báo chấp nhận đăng (accepted): 29/06/2018 Tóm tắt Mục tiêu: Đánh giá ảnh hưởng quy trình đơng lạnh thủ công tinh trùng người lên số phân mảnh DNA tinh trùng (DFI) Đối tượng phương pháp: Thiết kế nghiên cứu: nghiên cứu đoàn hệ tiến cứu Cỡ mẫu: 59 mẫu tinh dịch tươi bệnh nhân nam đến xét nghiệm tinh dịch đồ bệnh viện An Sinh Mẫu sau nhận vào nghiên cứu đơng lạnh quy trình thủ cơng rã đơng sau hai tuần Trước đơng lạnh sau rã đông, mẫu đánh giá số: tỷ lệ di động, tỷ lệ sống theo tiêu chuẩn WHO 2010 đánh giá DFI thuốc thử thương mại Halosperm® G2 (Halotech DNA, Tây Ban Nha) Kết thu nhận: DFI trước sau đơng lạnh – rã đơng Kết quả: Quy trình đơng lạnh thủ công đánh giá hiệu dựa độ di động, tỷ lệ sống tinh trùng trước sau rã đơng, hệ số sống sót sau rã đông (CSF- Cryosurvival Factor) Độ di động tinh trùng sau rã đông giảm 21,87% so với trước đông lạnh (48,73% giảm xuống 26,86%; p < 0,0001) Tỷ lệ sống tinh trùng sau rã đông giảm 44,88% so với trước đông lạnh (77,73% giảm xuống 32,85%; p < 0,0001) Chỉ số CSF 53,57% cho thấy ổn định quy trình đơng lạnh sử dụng nghiên cứu Về đánh giá ảnh hưởng quy trình đơng lạnh thủ công tinh trùng người lên số phân mảnh DNA tinh trùng, DFI tinh trùng sau rã đông giảm 0,16% so với ban đầu (11,58% giảm xuống 11,42%) Sự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p = 0,2712 > 0,05) Kết luận: Quy trình đơng lạnh thủ công tinh trùng người không ảnh hưởng đến độ phân mảnh DNA tinh trùng đánh giá thuốc thử thương mại Halosperm® G2 Từ khóa: quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng người, số phân mảnh DNA tinh trùng (DFI) Objective(s): To evaluate the effectiveness of human sperm cryopresevation using manual method to the sperm DNA fragmentation index (DFI) Patient(s) and method Design: Prospective cohort study Patient(s): 59 fresh semen samples of male patients who went to An Sinh hospital to evaluate semen analysis Samples after receiving in the research would be frozen by manual method and thawed two weeks later Before freezing and after thawing, semen samples were evaluated mobility rate, survival rate according to World Health Organization 2010 (WHO 2010) and DFI using Halosperm® G2 (Halotech DNA, Spain) Main outcome measure(s): DFI before freezing and after thawing Result(s): The effectiveness of human sperm cryopresevation using manual method was evaluated by mobility rate, survival rate before freezing and after thawing, and cryosurvival factor (CSF) The mobility rate of sperm after thawing was lower than before freezing (48.73% decreased to 26.86%; p < 0.0001) The survival rate of sperm after thawing was also lower than before freezing (77.73% decreased to 32.85%; p < 0.0001) The CSF was 53.57%, which indicated the stability of the manual method was used in this study Evaluating the effectiveness of human sperm cryopresevation using manual method to the DFI, DFI after thawing decreased 0.16% than before freezing (11.58% to 11.42%) The difference was not statistically significant (p = 0.2712 > 0.05) Conclusion(s): The human sperm cryopresevation using manual method not effect to the DNA fragmentation index Keywords: human sperm cryopresevation using manual method, sperm DNA fragmentation index (DFI) Đặt vấn đề Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Đông lạnh kỹ thuật phát triển với mục đích lưu trữ tế bào, mơ điều kiện nhiệt độ âm sâu, thường -196oC ni-tơ lỏng Ở nhiệt độ này, tất hoạt động chuyển hóa sinh tổng hợp tế bào bị ngừng lại hồn tồn Đơng lạnh nghiên cứu triển khai tinh trùng Với nhiều ứng dụng khác nhau, đông lạnh tinh trùng trở thành kỹ thuật quan trọng thiếu hầu hết trung tâm hỗ trợ sinh sản Trong q trình thay đổi nhiệt độ lúc đơng lạnh - rã đơng, xảy tượng sốc lạnh, khái niệm Milovanov đưa năm 1934 Hiện tượng làm tổn thương màng tế bào tinh trùng, từ đó, hoạt động chức tinh trùng bị ảnh hưởng [1] Tỷ lệ sống di động tinh trùng sau quy trình đông lạnh – rã đông khoảng 50% [2] Theo nghiên cứu giới, tinh trùng sau đông lạnh – rã đông thường bị tổn thương cấu trúc chức màng tế bào, thể cực đầu, đặc biệt cấu trúc DNA tinh trùng, từ làm giảm sức sống khả di động tinh trùng, làm giảm khả thụ thai [3] Nhiều nghiên cứu có kết luận tinh trùng bị phân mảnh DNA, thụ tinh ảnh hưởng đến phát triển phơi, dẫn đến nguy sẩy Tập 14, số 04 Tháng 05-2016 EVALUATING THE EFFECTIVENESS OF HUMAN SPERM CRYOPRESERVATION USING MANUAL METHOD TO THE SPERM DNA FRAGMENTATION INDEX (DFI) TẠP CHÍ PHỤ SẢN - 16(02), 14(01), 138 XX-XX, - 143, 2016 2018 Abstract 139 PHỤ KHOA – NỘI TIẾT, VÔ SINH NGUYỄN AN KHANG, MÃ PHẠM QUẾ MAI, NGUYỄN TRƯƠNG THÁI HÀ, NGUYỄN MINH TÀI LỘC, NGUYỄN THỤY TRÀ MY, HÀ THANH QUẾ, ĐINH LÊ DUY NHƠN, NGUYỄN ẤN BÌNH thai giai đoạn sớm, vấn đề liên quan đến phát triển thai nhi [4; 5] Hiện nay, phương pháp phổ biến để đánh giá phân mảnh DNA tinh trùng sử dụng kit thương mại Halosperm (Halotech DNA, Tây Ban Nha) Fernández giới thiệu vào năm 2005 [6] Phương pháp Halosperm dựa nguyên tắc tinh trùng có DNA nguyên vẹn tạo quầng sáng (vòng halo) quanh lõi nhân sau biến tính acid loại bỏ protein dung dịch ly giải Đông lạnh tinh trùng kỹ thuật thường quy trung tâm hỗ trợ sinh sản giới Việt Nam Trên giới có nhiều nghiên cứu đánh giá phân mảnh DNA tinh trùng (được tính số phân mảnh DNA tinh trùng – DFI) trải qua q trình đơng lạnh [7], chưa có khẳng định thống ảnh hưởng quy trình đơng lạnh đến phân mảnh DNA tinh trùng Hiện nay, Việt Nam, quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng người Nguyễn Hữu Duy cộng xây dựng năm 2011 sử dụng nhiều trung tâm hỗ trợ sinh sản [8] Quy trình đơng lạnh thủ cơng có chất lượng tinh trùng (tỷ lệ di động, tỷ lệ sống số hệ số sống sót sau rã đơng (Cryosurvival Factor - CSF)) bảo quản tương đương với phương pháp đông lạnh máy hạ nhiệt độ chậm tự động [8] Tuy nhiên, quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng người có ảnh hưởng đến phân mảnh DNA tinh trùng hay khơng chưa đánh giá Vì vậy, mục tiêu nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng người lên số phân mảnh DNA tinh trùng Chỉ số phân mảnh DNA tinh trùng đánh giá thuốc thử thương mại Halosperm® G2 Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 140 Thiết kế nghiên cứu Đây nghiên cứu đoàn hệ tiến cứu Thu nhận mẫu tinh dịch từ bệnh nhân Nghiên cứu thu nhận 59 mẫu tinh dịch bệnh nhân nam đến xét nghiệm tinh dịch đồ, thu nhận phương pháp thủ dâm, Đơn vị Hỗ trợ Sinh sản - Bệnh viện Đa khoa An Sinh từ tháng 08/2016 tới tháng 01/2017 Tiêu chuẩn nhận mẫu loại mẫu trình bày bảng Mẫu sau thu nhận vận chuyển trung tâm Nghiên cứu Di truyền Sức khỏe Sinh sản (CGRH) tiến hành bước sau: - Đánh giá tinh dịch đồ mẫu tinh dịch theo tiêu chuẩn WHO 2010 (đánh giá tiêu vi thể: tỷ lệ di động, mật độ, tỷ lệ sống tinh trùng) [9] - Đánh giá phân mảnh DNA tinh trùng trước đông lạnh thuốc thử thương mại Halosperm® G2 - Tiến hành đơng lạnh tinh trùng quy trình đơng lạnh thủ cơng - Tiến hành rã đông tinh trùng đông lạnh sau tuần (2 tuần thời gian đông lạnh tinh trùng trung bình cho chu kỳ hỗ trợ sinh sản) - Đánh giá phân mảnh DNA tinh trùng sau rã đơng thuốc thử thương mại Halosperm® G2 Phân tích số liệu Các liệu thu gồm: - Các số DFI trước đông lạnh sau rã đông tinh trùng - Chỉ số CSF để tiên lượng khả thu nhận tinh trùng sau rã đơng, tính cơng thức: - Tỷ lệ sống sau rã đông: Các liệu thu nghiên cứu phân tích phương pháp t-test, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p ≤ 0.05, sử dụng phần mềm thống kê R (ver 3.2.4) Các số CSF, tỷ lệ di động, tỷ lệ sống sau rã đông để đánh giá hiệu quy trình đơng lạnh thủ cơng sử dụng nghiên cứu Chỉ số DFI trước đông lạnh sau rã đông dùng để đánh giá tác động quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng lên phân mảnh DNA tinh trùng Kết Kết đánh giá hiệu quy trình đơng lạnh thủ công Tổng số 59 mẫu tinh dịch thỏa điều kiện nhận loại mẫu thu nhận vào nghiên cứu Đặc điểm Bảng 2: Đặc điểm mẫu tinh dịch trước q trình trữ lạnh Đặc điểm Tuổi Thể tích (ml) Mật độ (x106 tinh trùng/ml) Độ di động (% PR+NP) Tỷ lệ sống (%) Tiêu chuẩn loại mẫu - Mắc triệu chứng vơ tinh, tinh, trường hợp tinh trùng – yếu – dị dạng thể nặng - Mắc bệnh truyền nhiễm, bệnh hiểm nghèo, bệnh nam khoa "Trung bình ± độ lệch chuẩn" 31,88 ± 5,83 2,90 ± 1,10 71,00 ± 42,98 48,73 ± 9,52 77,73 ± 9,41 Bảng 3: Độ di động, tỷ lệ sống tinh trùng trước sau trình trữ lạnh Thông số khảo sát (%) Trước trữ lạnh Sau rã đông Độ di động (PR+NP) 48,73 ± 9,52 26,86 ± 8,56(*) Tỷ lệ sống 77,73 ± 9,41 32,85 ± 8,75(*) Chỉ số CSF trung bình 55,36 ± 15,50 Giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (SD) Trong hàng, dấu (*) thể sai khác thống kê với p < 0,0001 Biểu đồ 1: Tỷ lệ phân mảnh DNA tinh trùng trước trữ lạnh sau q trình rã đơng DFI tinh trùng sau rã đông giảm 0,16% so với ban đầu (11,58% giảm xuống 11,42%) Sự khác Biểu đồ 1: Tỷ lệ phân mảnh DNA tinh trùng trước trữ lạnh sau trình rã đơng biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p = 0,2712 > 0,05) Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Kết đánh giá hiệu quy trình đông DFI tinh trùng sau rã đông giảm 0,16% so với ban đầu (11,58% giảm xuống 11,42%) Sự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p = 0,2712 > 0,05) lạnh thủ công nghiên cứu phù hợp với áp suất thẩm thấu nguy chung xảy số nghiên cứu báo cáo trước cho suốt q trình đơng lạnh rã đơng Sự hình độ di động, tỷ lệ sống tinh trùng giảm thành tinh thể đá nội bào làm thủng màng tế đáng kể sau q trình đơng lạnh rã đơng Sau bào gây ảnh hưởng đến chức số q trình đơng lạnh, giảm độ di động tỷ bào quan [11] Theo nghiên cứu Petyim cộng lệ sống tinh trùng dao động khoảng năm 2006, hoạt động ty thể có liên quan trực 50% nghiên cứu [10; 11] Điều tiếp đến độ di động tinh trùng [7] Độ di động giải thích khác phương tinh trùng giảm sau rã đơng giải thích pháp đông lạnh, phương pháp rã đông, chất bảo trình đơng lạnh gây phá hủy màng ty thể [11; vệ đông lạnh (Cryoprotectant agent – CPA) sử 12] Năng lượng cần thiết cho di động tinh dụng nghiên cứu [10] trùng trình thụ tinh cung cấp dạng Sốc nhiệt với hình thành tinh thể đá bên ATP - tổng hợp thơng qua q trình phosphoryl bên ngồi tế bào, khử nước giảm đột ngột hóa oxi hóa bên ty thể Để tinh trùng Tập 14, số 04 Tháng 05-2016 Bàn luận Bảng Tiêu chuẩn nhận loại mẫu Tiêu chuẩn nhận mẫu - Trong độ tuổi sinh sản từ 18 – 40 tuổi - Kiêng xuất tinh từ – ngày - Mẫu đạt tiêu đại thể màu sắc, thể tích, độ nhớt, pH, độ ly giải; tiêu vi thể với ngưỡng giá trị tham khảo theo WHO 2010 (thể tích ≥ 1.5 ml, mật độ ≥ 15x106/ ml, tổng số tinh trùng ≥ 39x106/ml, tỷ lệ sống ≥ 58%, tỷ lệ tinh trùng di động tiến tới chỗ ≥ 40%) TẠP CHÍ PHỤ SẢN - 16(02), 14(01), 138 XX-XX, - 143, 2016 2018 mẫu tinh dịch đánh giá tinh dịch đồ trước tiến hành đông lạnh mô tả bảng Hiệu quy trình đơng lạnh đánh giá dựa độ di động tỷ lệ sống tinh trùng trước sau rã đông Sự thay đổi tỷ lệ di động, tỷ lệ sống tinh trùng sau rã đông so với trước đơng lạnh số CSF trình bày bảng Tỷ lệ di động tinh trùng sau rã đông giảm 21,87% so với trước đông lạnh (48,73% giảm xuống 26,86%; p < 0,0001) Tỷ lệ sống tinh trùng sau rã đông giảm 44,88% so với trước đông lạnh (77,73% giảm xuống 32,85%; p < 0,0001) Chỉ số CSF thu nhận 53,57%, kết cho thấy hiệu quy trình đơng lạnh thủ công sử dụng nghiên cứu tương đương với quy trình Nguyễn Hữu Duy cộng xây dựng năm 2011 Các kết cho thấy hiệu ổn định quy trình đông lạnh thủ công thực nghiên cứu Do đó, ảnh hưởng quy trình đơng lạnh đến độ phân mảnh DNA tinh trùng tiếp tục đánh giá Kết đánh giá tỷ lệ phân mảnh DNA tinh trùng thuốc thử thương mại Halosperm® G2 Kết số DFI tinh trùng trước trữ lạnh sau rã đơng trình bày biểu đồ Qua kết biểu đồ cho thấy, DFI tinh trùng sau rã đông giảm 0,16% so với ban đầu (11,58% giảm xuống 11,42%) Sự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p = 0,2712 > 0,05) 141 PHỤ KHOA – NỘI TIẾT, VÔ SINH Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 142 NGUYỄN AN KHANG, MÃ PHẠM QUẾ MAI, NGUYỄN TRƯƠNG THÁI HÀ, NGUYỄN MINH TÀI LỘC, NGUYỄN THỤY TRÀ MY, HÀ THANH QUẾ, ĐINH LÊ DUY NHƠN, NGUYỄN ẤN BÌNH di động, ATP vận chuyển từ màng ty thể đến vi ống [7; 10] Bên cạnh đó, tỷ lệ sống tinh trùng giảm liên quan đến thành phần cấu tạo nên màng tế bào tinh trùng Tế bào tinh trùng diện lượng lớn thành phần lipid chuyên biệt gồm có phospholipid, sterol, axit béo bão hịa axit béo chưa bão hòa Theo nghiên cứu Meseguer cộng năm 2004, màng tế bào tinh trùng nhạy cảm suốt q trình đơng lạnh liên quan đến hàm lượng cholesterol thấp tỷ lệ cao acid béo bão hòa chưa bão hòa [13] Ở nhiệt độ sinh lý, màng tế bào tinh trùng tồn đồng thời hai pha: pha lỏng pha gel [7] Tuy nhiên, q trình đơng lạnh sinh sản lượng lớn gốc oxy tự (OH- H2O2), dẫn đến phá hủy màng tế bào thơng qua phản ứng peroxid hóa lipid màng tế bào Q trình peroxid hóa lipid màng tế bào làm giảm độ lỏng màng tế bào, dẫn đến màng tế bào tinh trùng bị phá hủy làm giảm tỷ lệ sống sót tế bào tinh trùng q trình đơng lạnh [14] Chỉ số CSF thu nhận nghiên cứu 53,57% Kết phù hợp với kết nghiên cứu Nguyễn Hữu Duy cộng năm 2011 (CSF = 42,23%) [8] Bên cạnh đó, nghiên cứu tiến cứu so sánh kết sử dụng hai loại CPA khác báo cáo năm 2000 50 mẫu tinh dịch có chất lượng tốt với mật độ tinh trùng trước đông lạnh > 50x106/ml độ di động > 50%, kết cho thấy số CSF dao động khoảng 51,3% đến 57% [15] Như vậy, từ kết thu tỷ lệ tinh trùng di động, tỷ lệ sống, số CSF, nghiên cứu chứng minh quy trình đơng lạnh thủ cơng thực nghiên cứu có hiệu độ ổn định tương đương với quy trình ban đầu xây dựng Sự thay đổi số DFI trước đông lạnh sau rã đông ý nghĩa thống kê, cho thấy quy trình đơng lạnh thủ công tinh trùng không ảnh hưởng đến phân mảnh DNA tinh trùng Nghiên cứu cho kết tương tự với số nghiên cứu giới công bố [16; 17] Ngược lại, số nghiên cứu khác cho thấy q trình đơng lạnh lại làm tăng tỷ lệ phân mảnh DNA tinh trùng [14; 18; 19; 20] Điều giải thích khác chất lượng mẫu tinh dịch thu nhận nghiên cứu, môi trường bảo quản đông lạnh, quy trình đơng lạnh, quy trình đánh giá phân mảnh DNA quy trình chuẩn bị tinh trùng trước đông lạnh nghiên cứu [10; 12] Bào tương tinh trùng chứa nhiều chất chống oxy hóa hóa superoxide dismutase (SOD) catalase (enzyme có khả loại bỏ gốc tự O2- H2O2) chất khử (albumin taurine), điều giúp DNA tinh trùng có khả chống chịu tác động xấu gây q trình đơng lạnh [18] Một số nghiên cứu cho hàm lượng chất chống oxy hóa có tinh dịch người nam có khả sinh sản bình thường nhiều so với tinh dịch người nam vơ sinh Do đó, mẫu tinh dịch chất lượng tốt có khả chống lại phá hủy gây q trình đơng lạnh cao so với mẫu tinh dịch có chất lượng [18] Tinh trùng trưởng thành thường có DNA cô đặc liên kết với protein protamin thay histone tế bào khác, điều giúp hạn chế tối đa ảnh hưởng tác nhân bên thay đổi nhiệt độ q trình đơng lạnh lên DNA tinh trùng [1] Báo cáo Donnelly năm 2001 cho thấy, người nam bị vơ sinh có tỷ lệ cấu trúc nhiễm sắc chất bất thường cao tính bền nhiễm sắc chất với thay đổi nhiệt độ so với nam có khả sinh sản bình thường [18] Thật vậy, tinh trùng có chất lượng chứa phần nhiễm sắc chất chưa hoàn thiện chức chưa hồn thành thay protamine có DNA bị đứt gãy NST đóng gói chặt chẽ làm giảm khả tiếp xúc enzyme nuclease Vài tác nhân kích thích q trình apoptosis có khả khởi động trình phiên mã gene tiền apoptosis Các protein kích thích mở lỗ bán thấm màng ty thể, làm chất trương lên màng ty thể bị vỡ, đồng thời giải phóng cytochrome c Cytochrome c giải phóng vào bào tương dẫn đến hoạt hóa enzyme caspase tạo enzyme endonuclease, kết làm đứt gãy DNA Ngoài ra, cytochrome c làm tăng hàm lượng ROS ngoại bào dẫn đến DNA đứt gãy [21; 22] Nghiên cứu Paasch năm 2004 cho rằng, q trình đơng lạnh không ảnh hưởng đến DNA tinh trùng mà làm tính bất đối xứng màng tế bào, tượng liên quan đến dịch chuyển phosphatydinserine (PS) từ màng Quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng người không ảnh hưởng đến độ phân mảnh DNA tinh trùng đánh giá thuốc thử thương mại Halosperm® G2 W Comparison of cryopreserved human sperm between ultrarapid freezing and slow programmable freezing: effect on motility, morphology and DNA integrity J Med Assoc Thai 2015 May; 98(4):33-42 13 Meseguer M, Molina N, Garcia-Velasco JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N Sperm cryopreservation in oncological patients: a 14-year follow-up study Fertil Steril 2006 Mar; 85(3):640-5 14 Zribi N, Feki Chakroun N, El Euch H, Gargouri J, Bahloul A, Ammar Keskes L Effects of cryopreservation on human sperm deoxyribonucleic acid interity Fertil Steril 2010 Jan; 93(1):159-66 15 Hồ Mạnh Tường, Nguyễn Thị Mai, Lại Văn Tầm Trữ lạnh tinh trùng người thụ tinh nhân tạo Thời Y Dược học 2000; 5:8-13 16 Duru NK, Morshedi MS, Schuffiner A, Oehninger S CryopreservationThawing of fractionated human spermatozoa is associated with membrane phophotidylserine externalization and not DNA fragmentation J Androl 2001 Jul-Aug; 22(4):646-51 17 Paasch U, Sharma RK, Gupta AK, Grunewald S, Mascha EJ, Thomas AJ, Jr., Glander HJ and Agarwal A Cryopreservation and thawing is associated with varying extend of activation of apoptotic machinery in subsets of ejaculated human spermatozoa Biol of Reprod 2004 Dec; 71(6):1828-37 18 Donnelly ET, McClure N, Lewis SE Cryopreservation of human semen and prepared sperm: effects on motility parameters and DNA integrity Fertil Steril 2001 Nov; 76(5):892-900 19 De Paula TS, Bertolla RP, Spaine DM, Cunha MA, Schor N, Cedenho AP Effect of cryopreservation on sperm apoptotic deoxyribonucleic acid fragmentation in patients with oligozoospermia Fertil Steril 2006 Sep; 86(3):597-600 20 Gandini L, Lombardo F, Lenzi A, Spanò M, Dondero F Cryopreservation and sperm DNA integrity Cell Tissue Bank 2006;7(2):91-8 21 Thomsom LK, Fleming SD, Schulke L, Barone K, Zieschang JA, Clark AM The DNA integrity of cryopreserved spermatozoa separated for use in assisted reproductive technology is unaffected by the type of the fresh separated preparation Fertil Steril 2009 Sep; 92(3):991-1001 22 Aitken RJ, Baker MA Causes and consequences of apoptosis in spermatozoa; contributions to infertility and impacts on development Int J Dev Biol 2013; 57(24):265-72 quantitative assessment”, Hum Reprod, 20(7):1938-43 Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Trương Thị Thanh Bình, Nguyễn Hữu Duy, Đặng Quang Vinh Trữ lạnh tinh trùng Trong: Hồ Mạnh Tường, Đặng Quang Vinh, Vương Thị Ngọc Lan Thụ tinh ống nghiệm Nxb Giáo dục Việt Nam; 2011 tr 409-428 Sadeghi MR It Is Time to Pay More Attention to Sperm Cryopreservation: Now More Than Ever! J Reprod Infertil 2016 Jan-Mar; 17(1):1 Menkveld R Bank your future: Insemination and semen cryopreservation In: Ombelet W, Tournaye H, editors Artifical Insemination: An update Special edition, ESHRE 2009 p 68-73 Evenson D, Jost LK Sperm chromatin structure assay is useful for fertility assessment Methods Cell Sci 2000; 22(2-3):169–189 Sivanarayana T, Ravi Krishna C, Jaya Prakash G, Krishna K, Madan K, Sudhakar G, Rama Raju GA Sperm DNA fragmentation assay by sperm chromatin dispersion (SCD): correlation between DNA fragmentation and outcome of intracytoplasmic sperm injection Reprod Med and Biol; 2013 Sep 1; 13(2):87-94 Fernández JL, Muriel L, Goyanes V, Segrelles E, Gosálvez J, Enciso M, LaFromboise M, De Jonge C Simple determination of human sperm DNA fragmentation with an improved sperm chromatin dispersion test Fertil Steril 2005 Oct; 84(4): 833-842 Petyim S, Choavaratana R Cryodamage on sperm chromatin according to different freezing methods, assessed by AO test J Med Assoc Thai 2006 Mar; 89(3):306-313 Nguyễn Hữu Duy, Nguyễn Thị Mai, Hồ Mạnh Tường, Hoàng Nghĩa Sơn Xây dựng quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng người cryotube, so sánh với đông lạnh máy tự động Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 2011; 9(2):147-154 WHO Laboratory manual for the examination and processing of human semen New York: Cambridge University Press 2010 10 Santo MD, Tarozzi N, Nadalini M, Borini A Human Sperm Cryopreservation: Update on Techniques, Effect on DNA Integrity, and Implications for ART Advances in Urology 2012 p 1-12 11 Oberoi B, Kumar S, Talwar P Study of human motility post cryopreservation Med J Armed Forces India 2014 Oct; 70(4): 349–353 12 Tongdee P, Sukprasert M, Satirapod C, Wongkularb A, Choktanasiri Kết luận Tập 14, số 04 Tháng 05-2016 Tài liệu tham khảo suốt q trình đơng lạnh Tuy nhiên, trước trình làm DNA phân mảnh khởi động enzyme caspase loại bỏ số nhân tố ức chế caspase có CPA Hơn nữa, tác động ROS đến DNA ty thể tinh trùng lớn DNA nhân DNA ty thể không liên kết với histone khơng có chế tự sửa chữa Do đó, tế bào tinh trùng có hàm lượng ROS đủ lớn tác động đến DNA nhân [21; 22] TẠP CHÍ PHỤ SẢN - 16(02), 14(01), 138 XX-XX, - 143, 2016 2018 màng tế bào [17] Kết dịch chuyển PS làm kích hoạt enzyme caspase toàn vẹn điện màng ty thể giảm Tuy nhiên, tùy thuộc vào tương tác mẫu tươi mẫu đông lạnh, tinh trùng trưởng thành hay chưa trưởng thành có hay khơng dịch chuyển PS mà gây tăng hoạt động enzyme caspase (caspase – caspase - 9), hoạt động enzyme caspase nhóm có khác biệt nhỏ gần với ngưỡng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Kết tương tự nhận thấy nghiên cứu Thomson năm 2009, nguyên nhân dẫn đến DNA phân mảnh suốt q trình đơng lạnh phần lớn nồng độ ROS vượt mức trình apoptosis [21] Các tế bào bị tổn thương màng đạt đến giai đoạn kích hoạt enzyme caspase 143 ... đơng lạnh thủ cơng sử dụng nghiên cứu Chỉ số DFI trước đông lạnh sau rã đông dùng để đánh giá tác động quy trình đơng lạnh thủ cơng tinh trùng lên phân mảnh DNA tinh trùng Kết Kết đánh giá hiệu quy. .. giá ảnh hưởng quy trình đơng lạnh thủ công tinh trùng người lên số phân mảnh DNA tinh trùng Chỉ số phân mảnh DNA tinh trùng đánh giá thuốc thử thương mại Halosperm® G2 Tập 16, số 02 Tháng 08-2018... hiệu ổn định quy trình đơng lạnh thủ cơng thực nghiên cứu Do đó, ảnh hưởng quy trình đông lạnh đến độ phân mảnh DNA tinh trùng tiếp tục đánh giá Kết đánh giá tỷ lệ phân mảnh DNA tinh trùng thuốc