Khảo sát tác dụng tăng lực của các chế phẩm từ cây đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms)

Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fruticosa (L.) Harms) thuộc họ Nhân sâm là một trong số những dược liệu đã và đang được ứng dụng rộng rãi trong vấn đề chăm sóc sức khỏe cộng đồng. Bên cạnh những kinh nghiệm chữa trị dân gian, Đinh lăng lá nhỏ cũng đã được nghiên cứu những thành phần hóa học như saponin, polyphenol, các acid amin, các vitamin và một số nguyên tố vi lượng (Võ Xuân Minh và ctv., 1991) cho đến những tác dụng dược lý tương ứng với các hợp chất tự nhiên được tìm thấy như tác dụng tăng lực, tác dụng bảo vệ gan, tác dụng an thần, tăng trí nhớ (Nguyễn Thị Thu Hương và ctv., 2001). Từ những cơ sở khoa học và điều kiện thuận lợi nêu trên, tác dụng tăng lực - chống nhược sức bằng thử nghiệm chuột bơi kiệt sức theo phương pháp Brekhman cải tiến được tiến hành khảo sát trên hai dạng chế phẩm: viên nang cứng Đinh lăng (100 mg cao chiết cồn phối hợp rễ - lá Đinh lăng) và trà túi lọc Đinh lăng (1,5 g bột lá tẩm cao chiết nước từ lá Đinh lăng).

Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 02 - 2017 KHẢO SÁT TÁC DỤNG TĂNG LỰC CỦA CÁC CHẾ PHẨM TỪ CÂY ĐINH LĂNG (Polyscias fruticosa (L.) Harms) Trần Công Luận1*, Trịnh Minh Thiên2, Hà Quang Thanh2, Nguyễn Lĩnh Nhân2 Nguyễn Thị Thu Hương2 Trường Đại học Tây Đô Trung tâm Sâm Dược liệu TP.HCM Ngày nhận: 10/11/2017 Ngày phản biện: 05/12/2017 Ngày duyệt đăng: 15/12/2017 TÓM TẮT Đinh lăng nhỏ (Polyscias fruticosa (L.) Harms) thuộc họ Nhân sâm số dược liệu ứng dụng rộng rãi vấn đề chăm sóc sức khỏe cộng đồng Bên cạnh kinh nghiệm chữa trị dân gian, Đinh lăng nhỏ nghiên cứu thành phần hóa học saponin, polyphenol, acid amin, vitamin số nguyên tố vi lượng (Võ Xuân Minh ctv., 1991) tác dụng dược lý tương ứng với hợp chất tự nhiên tìm thấy tác dụng tăng lực, tác dụng bảo vệ gan, tác dụng an thần, tăng trí nhớ (Nguyễn Thị Thu Hương ctv., 2001) Từ sở khoa học điều kiện thuận lợi nêu trên, tác dụng tăng lực - chống nhược sức thử nghiệm chuột bơi kiệt sức theo phương pháp Brekhman cải tiến tiến hành khảo sát hai dạng chế phẩm: viên nang cứng Đinh lăng (100 mg cao chiết cồn phối hợp rễ - Đinh lăng) trà túi lọc Đinh lăng (1,5 g bột tẩm cao chiết nước từ Đinh lăng) Trước tiến hành thử nghiệm dược lý, hai chế phẩm viên nang Đinh lăng trà Đinh lăng đánh giá độ an toàn thử nghiệm khảo sát độc tính cấp đường uống, kết khảo sát cho thấy hai chế phẩm an tồn, khơng có độc tính cấp đường uống với liều tối đa cho uống mà khơng gây độc tính chuột (Dmax) viên nang Đinh lăng 50 viên/kg trà Đinh lăng 55 gói/kg Về tác dụng tăng lực, viên nang Đinh lăng liều viên/kg viên/kg, trà Đinh lăng liều gói/kg gói/kg thể tác dụng tương đương sau ngày 14 ngày dùng Từ khóa: Polyscias fruticosa (L.) Harms, Đinh lăng, viên nang, trà túi lọc, tăng lực Trích dẫn: Trần Cơng Luận, Trịnh Minh Thiên, Hà Quang Thanh, Nguyễn Lĩnh Nhân Nguyễn Thị Thu Hương, 2017 Khảo sát tác dụng tăng lực chế phẩm từ Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô 02: 110-119 *PGS.TS Trần Công Luận, Hiệu trưởng, Trường Đại học Tây Đô 110 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô GIỚI THIỆU Trong thời đại cơng nghiệp hóa – đại hóa ngày nay, mà kinh tế ngày phát triển mạnh mẽ số vấn đề đáng báo động tình trạng suy nhược thể chất lẫn tinh thần người nhiều ngun nhân nhiễm mơi trường, thói quen sinh hoạt không hợp lý, sức ép từ công việc từ thờ với sức khỏe thân người xung quanh Chính thế, xu hướng chăm sóc sức khỏe cộng đồng ngày hướng đến việc sử dụng loại dược liệu có tác dụng bồi bổ thể, chống nhược sức an toàn sử dụng thời gian dài Và Nhân sâm số vị thuốc bổ với nhiều tác dụng dược lý chứng minh tin dùng toàn giới Tuy nhiên, lại loại dược liệu quý hiếm, giá thành cao, điều kiện chăm trồng khắt khe thời gian thu hoạch lâu Chính vậy, Đinh lăng nhỏ (Polyscias fruticosa (L.) Harms), số dược liệu gần gũi với người dân Việt Nam thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae) có tên Dược điển Việt Nam với nhiều tác dụng dược lý tăng lực - chống nhược sức, chống oxy hóa, bảo vệ tim mạch, chống trầm cảm,… quan tâm nghiên cứu, phát triển ứng dụng Theo nghiên cứu Võ Xuân Minh ctv., (1991) tiến hành khảo sát hàm lượng saponin toàn phần phận Đinh lăng: Rễ (0,49%), Số 02 - 2017 vỏ rễ (1,00%), lõi rễ (0,11%) (0,38%) Bên cạnh đó, Đinh lăng cịn có thành phần alkaloid, glycosid, vitamin B1, B2, B6, vitamin C, phytosterol 20 loại acid amin Năm 1998, Võ Duy Huấn cộng phân lập saponin từ rễ Đinh lăng đặt tên polysciosid A-H saponin biết từ trước: Ladyginosid A, zingibrosid-R1 compound Trong saponin: Ladyginosid A, compound 6, polysciosid A D có rễ Các saponin lại diện zingibrosid-R1, polysciosid G H rễ polysciosid B, C, E F (Vo Duy Huan et al., 1998) Những nghiên cứu khoa học trước Đinh lăng Trung tâm Sâm Dược liệu TP.HCM cho thấy cao Đinh lăng khoảng liều nhỏ 180 mg/kg có tác dụng làm gia tăng vận động tự nhiên thể tác dụng tăng lực – chống nhược sức hai thực nghiệm chuột bơi kiệt sức Brekhman chuột leo dây Cabureb Cao phối hợp rễ Đinh lăng làm gia tăng thể trọng súc vật thử nghiệm, tác dụng phụ gây ảnh hưởng đến chức sinh lý chuột thành phần cấu tạo hệ tạo máu, số protein tồn phần khơng xuất thay đổi bất thường cấu trúc gan, tim thận (Nguyễn Thị Thu Hương ctv., 2001; Nguyen Thi Thu Huong, 2002) Với tác dụng tốt 111 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô nghiên cứu, nhiên thực phẩm chức sản xuất từ Đinh lăng nhỏ hạn chế Từ tảng y học dân tộc, nghiên cứu khoa học toàn diện đặc biệt nguồn dược liệu Đinh lăng nhỏ dồi triển khai trồng vùng Bảy Núi thuộc huyện Tri Tôn, Tịnh Biên, tỉnh An Giang với sản lượng khoảng 100 tấn, đề tài hướng đến mục tiêu nghiên cứu sản xuất thực phẩm chức bào chế từ Đinh lăng nhỏ có tác dụng tăng cường sức lực, bồi bổ thể PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Viên nang cứng Đinh lăng bào chế từ cao chiết cồn phối hợp rễ Đinh lăng phương pháp xát hạt ướt với hàm lượng cao chiết viên nang 100 mg Và, trà túi lọc Đinh lăng bào chế từ cao chiết nước Đinh lăng phương pháp chiết tẩm lại bột dược liệu với khối lượng 1,5 g/ túi Đây dạng cao chiết bán thành phẩm nghiên cứu chiết xuất đánh giá tác dụng dược lý cơng trình khoa học trước đây; đồng thời, khảo sát, đánh giá tiền sản xuất cao bán thành phẩm thực nhằm mục đích tạo dạng bào chế với liều dùng thích hợp, an tồn hiệu Số 02 - 2017 2.1.2 Động vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng đực (chủng Swiss albino, 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 25 g ± g) cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang, chăm sóc điều kiện ổn định chế độ dinh dưỡng vòng ngày trước tiến hành thực nghiệm 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp khảo sát tác dụng độc tính cấp đường uống Nghiên cứu độc tính cấp mẫu thử động vật thí nghiệm, chủ yếu xác định liều chết trung bình có (liều làm chết 50% số vật thí nghiệm, gọi LD50: lethal dose 50%) điều kiện định Biết LD50 xác định số điều trị TI (Therapeutic index) thông số quan trọng để định việc đưa thuốc vào dùng người sở để suy liều để khảo sát tác dụng dược lý động vật thử nghiệm suy liều điều trị người, thường khoảng 1/10 LD50 nhỏ Chỉ số điều trị TI tỉ số liều chết trung bình LD50 liều hữu hiệu trung bình ED50 Nếu số điều trị lớn phạm vi điều trị lớn độc tính thấp TI = LD 50 ED 50 Điều kiện: TI ≥ 10 Chuột nhắt chia thành lô tương tự, chuột lô nhận liều chất khảo sát Thể tích cho chuột uống 0,1 ml/10 g thể trọng 112 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 02 - 2017 chuột Sự đánh giá dựa vào phản ứng toàn ứng hay bất ứng (sống hay chết) nhận thấy chuột nhóm sau 72 Chuột tiếp tục theo dõi sau 14 ngày uống để ghi nhận triệu chứng bất thường (nếu có) dược lý chuột nhắt trắng x 0,085 (= hệ số ngoại suy liều có hiệu tương đương chuột nhắt trắng người) x thể trọng trung bình người trưởng thành, khoảng 50-60 kg (Viện Dược liệu, 2006) Có trường hợp xảy ra: 2.2.2 Phương pháp khảo sát tác dụng tăng lực thực nghiệm Brekhman có cải tiến Nguyên tắc - Trường hợp 1: Sau cho chuột uống mẫu thử, số chuột lơ thử nghiệm bảo tồn, xác định liều cao bơm qua kim mà khơng làm chết chuột Liều ký hiệu Dmax liều tương đối an toàn DS dùng thực nghiệm dược lý 1/5 Dmax lớn 1/5 Dmax - Trường hợp 2: Sau cho chuột uống mẫu thử, tỉ lệ tử vong 100% liều chết tuyệt đối – LD100 Tính tốn gây lô thử nghiệm để tiếp tục xác định liều không làm chết vật – LD0 Từ đó, suy liều LD50 tính theo cơng thức Behrens-Karber - Trường hợp 3: Sau cho uống mẫu thử, phân xuất tử vong thấp 100%, không xác định liều gây chết tuyệt đối Đối với trường hợp này, suy liều LD50, xác định liều tối đa khơng gây chết chuột, gọi liều liều chết – LD0 Liều tương đối an toàn DS dùng cho thực nghiệm dược lý có giá trị 1/5 1/10 LD0 (Đỗ Trung Đàm, 1996) - Liều tương đối an toàn áp dụng người Liều tương đối an toàn người ngoại suy từ liều chuột nhắt trắng theo cách tính sau: Liều thử nghiệm Tác động tăng lực, gia tăng sức bền, chống nhược sức tiêu chuẩn để đánh giá tác dụng bổ khí, trị suy nhược thể chống stress (tác dụng sinh thích nghi-adaptogen) thuốc thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae) hay thuốc có tác dụng bổ tương tự Nhân sâm Nghiệm pháp chuột bơi kiệt sức Brekhman (Swimming test, cải tiến để áp dụng chuột nhắt trắng) thường chọn lựa để khảo sát tác dụng tăng lực chế phẩm từ dược liệu (Brekhman II, Dardymov IV, 1969; Viện Dược liệu, 2006) Phương pháp chuột bơi thuận tiện, đơn giản giúp đánh giá tình trạng chống mệt mỏi, phục hồi sức lực động vật thử nghiệm sau liều uống mẫu thử hay đánh giá tác dụng tăng lực sau 7-14 liều uống liên tục mẫu thử Tiến hành thí nghiệm Chuột mang vào đuôi gia trọng 5% thể trọng, cho chuột bơi thùng nước có dung tích 20 lít, đường kính 30 cm, chiều cao cột nước 25 cm, nhiệt độ 29  1oC 113 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Chuột cho bơi lần 1, thời gian bơi tính từ chuột thả vào thùng nước, bơi đến chìm khỏi mặt nước 20 giây khơng trồi lên nữa, lúc vớt chuột lau khơ Ghi nhận thời gian bơi lần (T0) Cho chuột nghỉ phút, chia ngẫu nhiên lơ thí nghiệm (mỗi lô 10 con) sau: Lô đối chứng 1: cho uống nước cất Lô thử 1: cho uống viên nang Đinh lăng liều viên/kg Lô thử 2: cho uống viên nang Đinh lăng liều viên/ kg Lô đối chứng 2: cho uống nước cất Lô thử 3: cho uống trà Đinh lăng liều 1gói/kg Lơ thử 4: cho uống trà Đinh lăng liều gói/kg Một sau cho chuột uống mẫu thử nghiệm, ghi nhận thời gian bơi lần (T60 phút) Chuột cho uống nước cất, viên nang Đinh lăng trà Đinh lăng liên tục (mỗi ngày vào định) đến ngày thứ ngày thứ 14 tiến hành cho chuột bơi lần (T7 ngày) lần (T14ngày) Thể tích cho chuột uống 0,1 ml/ 10 g thể trọng chuột Chuẩn bị mẫu thử Viên nang Đinh lăng: bột thuốc viên nang phân tán vào nước cất theo liều thích hợp (1 – viên pha thành 10 ml) Khuấy trước cho chuột uống Trà túi lọc Đinh lăng: túi trà ngâm nước nóng khoảng 60 oC vịng 15 phút theo liều thích hợp (1 – gói pha thành 10 ml) Để nguội Số 02 - 2017 trước cho chuột uống Mẫu thử pha cho ngày uống, không trữ qua đêm dùng lại Đánh giá kết Đánh giá tác dụng tăng lực so sánh tỉ lệ phần trăm thời gian bơi lô thử so với lô đối chứng sau dùng liều uống nhất, sau liều uống sau 14 liều uống Trong khơng tính theo thời gian bơi tuyệt đối chuột mà tính tỷ lệ % thời gian bơi chuột sau uống viên nang Đinh lănghoặc trà Đinh lăng (lô thử) nước cất (lô chứng) (T60 phút, T7 ngày, T14 ngày) gọi chung Tt so với thời gian bơi lần (T0) theo cơng thức: X% = (Tt/T0) × 100 T60 phút / T0 (%) lô thử lớn T60 phút / T0 (%) lô chứng: viên Đinh lăng trà Đinh lăng thử nghiệm có tác động tăng lực tức thời (Tác dụng hồi phục sức) T7 ngày / T0 (%) lô uống viên nang Đinh lăng trà Đinh lăng lớn T7 ngày / T0 (%) lô chứng: viên nang Đinh lăng trà Đinh lăng thử nghiệm có tác động tăng lực sau ngày T14 ngày / T0 (%) lô uống viên nang Đinh lăng trà Đinh lăng lớn T14 ngày / T0 (%) lô chứng: viên nang Đinh lăng trà Đinh lăng thử nghiệm có tác động tăng lực sau 14 ngày 2.2.3 Phân tích số liệu Số liệu thu thập biểu thị trị số trung bình: M ± SEM (Standard Error of the Mean – sai số chuẩn giá trị 114 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đơ trung bình) xử lý thống kê dựa vào phép kiểm One–Way ANOVA t test hay Dunnett test (phần mềm SigmaStat3.5) Kết thử nghiệm đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% P < 0,05 so với lô đối chứng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết độc tính cấp đường uống Số 02 - 2017 3.1.1 Viên nang Đinh lăng Với liều 50 viên/ kg thể trọng chuột liều cao bơm qua kim mà khơng làm chết chuột, cịn gọi Dmax, có nghĩa là, viên nang Đinh lăng khơng có độc tính cấp đường uống, an toàn sử dụng lần với liều đậm đặc Bảng Kết độc tính cấp đường uống viên nang Đinh lăng Lần thử nghiệm Số viên thử nghiệm (viên) Tổng thể tích cho uống (ml) Liều cho uống (viên/kg) Số chuột thử nghiệm Số chuột tử vong sau 72 Số chuột tử vong sau 14 ngày Dmax (viên/kg) I 10 4,1 48,78 0 II 10 4,0 50,00 0 50 Theo dõi chuột thử nghiệm vòng 72 sau cho uống, kết ghi nhận chuột khơng có biểu hành vi bất thường, sinh hoạt bình thường Sau 14 ngày tiếp tục theo dõi, thể trạng chuột phát triển bình thường, hành vi sinh lý khơng có biểu bất thường 3.1.2 Trà Đinh lăng Với liều dùng 55 gói/ kg thể trọng chuột liều cao bơm qua kim mà khơng làm chết chuột, cịn gọi Dmax, có nghĩa là, trà Đinh lăng an tồn, khơng có độc tính cấp đường uống Bảng Kết độc tính cấp đường uống trà Đinh lăng Lần thử nghiệm Số gói trà thử nghiệm (gói) Tổng thể tích cho uống (ml) Liều cho uống (gói /kg) Số chuột thử nghiệm Số chuột tử vong sau 72 Số chuột tử vong sau 14 ngày Dmax (gói/kg) I 10 3,65 54,79 0 II 10 3,6 55,56 0 55 115 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 02 - 2017 Qua theo dõi chuột thử nghiệm vòng 72 sau cho uống, cho thấy tỷ lệ sống sót 100%, không nhận thấy dấu hiệu bất thường hành vi so với trước dùng mẫu thử nghiệm Sau 14 ngày tiếp tục theo dõi, thể trạng chuột phát triển bình thường, hành vi sinh lý khơng có biểu bất thường Sau ngày thử nghiệm, bốn lô cho uống viên nang Đinh lăng liều viên/kg, liều viên/kg trà Đinh lăng liều gói/kg, gói/kg có thời gian bơi tăng so với lô đối chứng so với thời điểm bơi lần (T0), khác biệt có ý nghĩa thống kê; đồng thời, lơ thử nghiệm khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê 3.2 Kết tác dụng tăng lực – chống nhược sức Sau 14 ngày thử nghiệm, thời gian bơi bốn lô cho uống viên nang Đinh lăng liều viên/kg, liều viên/kg trà Đinh lăng liều gói/kg, gói/kg có thời gian bơi tăng đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứngvà so với thời điểm bơi lần (T0); đồng thời, nghiệm thức thử nghiệm khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê Kết trình bày Bảng cho thấy sau liều uống nhất, bốn lô thử nghiệm cho uống viên nang Đinh lăng liều viên/kg, liều viên/kg trà Đinh lăng liều gói/kg, gói/kg có thời gian bơi T60 phút khơng khác biệt đạt có ý nghĩa thống kê so với lơ đối chứng Bảng Thời gian bơi chuột (phút) thời điểm lô thử nghiệm Lô (n = 10) Liều (gói/kg) T0 T60 phút T7 ngày T14 ngày Đối chứng - 33,20 ±3,49 21,80 ± 3,14 27,40 ± 4,30 24,50 ± 4,43 Viên nang Đinh lăng 30,30±3,14 21,30±3,16 116,00 ± 26,15*# 104,22± 24,44*# 33,70 ± 3,92 26,80 ± 7,83 88,22± 23,37*# 92,67± 27,67*# Đối chứng - 31,20 ± 2,68 22,30 ± 3,02 25,10 ± 1,40 27,50 ± 2,00 Trà Đinh lăng 30,30 ± 3,67 28,20 ± 5,66 91,60 ± 13,72*# 90,8 ± 17,27*# 33,60 ± 2,65 21,20 ± 3,28 85,20 ± 14,60*# 90,10 ± 14,18*# *: p < 0,05 so với lô đối chứng thời điểm # : p